CC BY
39
Таблица. Уровень хромосомной изменчивости у свиней
Показатель Группа
WAP/hGH контроль
Поколение 6 6
Q 3 4
Уровень хромосомной
изменчивости в % 19,50±4,0 3,12±5,4
ток содержал 38 хромосом, соответствующих видовой норме (рис. 1).
Однако в части клеток встречались различные хромосомные аберрации. Подавляющее число нарушений, обнаруженных у контрольных животных было связано с хроматидными разрывами (рис. 2).
У трансгенных особей встречались как разрывы, так и более сложные перестройки, представленные транслокациями различных хромосом (на рис. 3).
Обследованные группы животных различались по уровню хромосомных аберраций (см. табл.). Меньше всего нарушений генома отмечено у контрольных хряков. Доля аберрантных клеток у их трансгенных сибсов была более чем в 6 раз выше и достоверно превышала фоновый уровень (р<0,001). Около 25 % аберраций в последнем случае представлено транслокациями, тогда как в контроле их не обнаружено. Кроме того, у трансгенных животных с частотой 1,4 % наблюдалась фрагментация хромосом (рис. 4).
Рис. 4. Метафаза с фрагментацией хромосом, выявленная у трансгенного по WAP/hGH хряка 049.
Результаты проведенных исследований позволяют предположить, что уровень нестабильности хромосом у обследованных животных зависит от взаимодействия их генотипа и внешних факторов, характер которого изменяется в присутствии экзогена. Его интеграция в геном организма-хозяина оказывает дестабилизирующее влияние на хромосомный набор, что необходимо учитывать при сохранении и размножении трансгенных животных.
Литература.
1. Волкова Л.А., Ларионова П.В., Кленовицкий П.М., Волкова Н.А., Зиновьева И.А. Методические вопросы цитогенетики птицы. — Дубровицы — 2004. — 22 с.
2. Кленовицкий П. М., Некрасов А. А. Мутационные изменения у трансгенных животных // Актуальные проблемы развития животноводства. / Труды ВИЖа. — 1998. — Вып. 57. — Ч.4. — С.-184-191.
3. Эрнст Л.К., Кононов В.П., Багиров В.А. и др. Трансгенные поросята от спермы, хранившейся в течении десяти лет / Свиноводство. — 2002. - №3. - С.23-24.
4. Bagirov V.A., Klenovilsky P.M., Zinoveva N.A. Analysis of chromosome aberrations in transgenic pigs and rabbits / Book of Abstracts of the 54th Annual Meeting of the European Association for Animal Production. Animal Genetics — Rome, Italy. — Wageningen Academic Rublissher. — 2003. — P. 14.
5. Brem G. Transgenic animals// Biotechnology. — 1993. — V. 2. — P. 745-832.
6. MarxJ.L. Making mutant mice by gene transfer/Science. — 1985. -V. 228. — P.1516-1517.
7. Zinoveva N., Klenovitsky P., DozevA., GladirE., Ernst L., Brem. G. Comparative study of chromosomal status in transgenic and nontrangenic rabbits / International conference — Actual problems ofDNA- Technologies and Cell Engineering of Agricultural Animals, Dubrovitzy.- 2001, P. 125-126.
ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНИЗМЕ ТЕЛЯТ ПОД ВЛИЯНИЕМ КОМПОЗИЦИЙ ФИТОПРОБИОТИКОВ И ПОЛИСОЛЕЙ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ
А.В. АНДРЕЕВА, доктор биологических наук О.Н. НИКОЛАЕВА, аспирант Башкирский ГАУ
На современном этапе ведения животноводства получение и выращивание здорового молодняка — одна из наиболее сложных проблем ветеринарных специалистов. Исследования отечественных и зарубежных ученых свидетельствуют, что с самого рождения организм животного испытывает воздействие экологических и антропогенных факторов, вызыва-
ющих мобилизацию его защитных реакций. Это обеспечивает поддержание гомеостаза или адаптацию к действию неблагоприятных факторов внешней среды, что приводит к нарушению функций жизненно важных систем, и, как следствие, к снижению резистентности и появлению различных заболеваний, особенно у новорожденных животных [1]. Поэтому разработка средств и способов повышения иммунобиологических факторов неспецифической резистентности организма молодняка — весьма актуальная задача ветеринарной науки и практики. С учетом мировых тенденций максимального ограни-
чения применения синтетических фармакологических препаратов, включая антибиотики, восстановление нарушенного гомеостаза организма с помощью биологически активных веществ (про- и син-биотиков), становится необходимым элементом современного производства. Сложившаяся ситуация заставляет пересмотреть многие методологические подходы к профилактике и лечению заболеваний животных постнатального периода и признать необходимость разработки нового поколения экологически безопасных препаратов, способных занять свое место в системе мероприятий по обеспечению биологической защиты животных [3].
Таким требованиям могут отвечать фитопробиотики и полисоли микроэлементов. Фитопробиотики — это комплексные препараты на основе пробиотика лактобактерина (Ь. р1ап1агит 8Р-А) и пре-биотиков (водные извлечения травянистой части таких растений, как чистотел большой, барбарис обыкновенный, люцерна посевная, стабилизированные в питательной среде на основе молочной сыворотки). Полисоли микроэлементов — это комплекс сернокислой меди и сернокислого цинка. Вопросы их совместного влияния на формирование устойчивого микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и иммунобиологические показатели в раннем постнатальном онтогенезе молодняка сельскохозяйственных животных остаются неизученными. Поэтому целью нашей работы стало определение изменения иммунобиологических показателей новорожденных телят под действием нового поколения пробиотических препаратов — фитопробиотиков и полисолей микроэлементов.
Для решения поставленной задачи в ГУСП совхоз-завод «Дмитриевский» Уфимского района Республики Башкортостан были проведены опыты на новорожденных телятах черно-пестрой породы, которые по принципу аналогов были разделены на 7 групп (контрольная и шесть опытных). Молодняк контрольной группы содержали в условиях общепринятой технологии; животные первой опытной группы получали с кормом полисоли микроэлементов; второй опытной группы — живую массу лактобактерий; особи третьей опытной группы — полисоли микроэлементов и живую массу лактобактерий, выращенных на питательной среде с добавлением 2 % люцерны, четвертой опытной группы — полисоли микроэлементов и живую массу лактобактерий, выращенных на питательной среде с добавлением 3 % чистотела; пятой опытной группы — полисоли микроэлементов и живую массу лакгобактерий, выращенных на питательной среде с добавлением 4 % барбариса; шестой опытной группы — полисоли микроэлементов и живую массу лактобактерий, выращенных на питательной среде с добавлением 2 % барбариса и 1 % люцерны. Полисоли микроэлементов давали в расчете 50 мг на голову в течение 30 дней, живую массу лакгобактерий — в два этапа ежедневно по 20 мл в течение 10 дней с интервалом в 10 дней.
До начала опыта, а затем через 10, 20 и 30 дней проводилось взятие крови для гематологических, биохимических и иммунологических исследований, а также фекалий для микробиологических исследований. Биометрическую обработку результатов исследований осуществляли с использованием прикладных программ на персональном компьютере, степень достоверности определяли по критерию Стьюдента.
Качественное и количественное исследования микрофлоры кишечника выполняли по методике, разработанной в НИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. Анаэробные бифидобактерии выделяли посевом на среду Блаурокка, лактобактерии — на среде МРС. Грамотрицательные палочки высевали на дифференциальные среды Эндо, Фогес-Плоскауэра. Гемолитические свойства выделенных культур изучали на 5 %-ном кровяном агаре. Для определения стафилококков использовали желточно-солевой агар, энтерококков — ДИФ-3, анаэробных спорообразующих бактерий — плотную среду Вильсона-Блера. Дрожжеподобные грибки выделяли на среде Сабура, Pseudomonas aeruginosa — на среде Рессела с мочевиной и индикатором (тимоловый синий + кислый фуксин). Патогенность культур изучали на белых мышах по общепринятой методике.
Кровь для исследования брали в пробирки с гепарином. Количество гемоглобина определяли ге-миглобинцианидным методом; эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и гематокрит — на анализаторе «Гемоскрин -13»; лейкоцитарную формулу — с помощью светового микроскопа на окрашенных препаратах.
Биохимические исследования крови проводили по общепринятым методам. Иммуноглобулины А, М и G определяли методом одномерной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле (Манчини, 1965), тест бактериального фагоцитоза нейтрофи-лов — с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus — № 209 Р (И.В. Нестерова и др., 1996).
Микробиологические исследования фекалий показали, что у всех новорожденных телят в содержимом кишечника преобладали бактерии группы кишечной палочки. При чем более 90 % Е. coli образовывали зону гемолиза на 5 %-ном кровяном агаре, но не вызывали гибели белых мышей. Титр лактобактерий и бифидобактерий был снижен. Кроме того, у всех животных была выделена синегнойная палочка. Такую ситуацию можно охарактеризовать как синегнойный дисбактериоз, что связано, по-видимому, с нарушениями в содержании и кормлении стельных коров.
На 10-й день исследований у особей контрольной группы и телят, получавших с кормом полисоли микроэлементов, достоверных изменений в динамике микробиоценоза не наблюдалось. У животных третьей и пятой опытных групп, которым давали композиции фитопробиотиков, число лак-
то- и бифидобактерий увеличилось, по сравнению с контролем, соответственно в 1,7 и 1,2 раза, четвертой и шестой — в 1,8 и 1,3 раза. Количество гемолитической кишечной палочки, стафилококков и клостридий достоверно снижалось. Наибольшее уменьшение численности синегнойной палочки отмечено у телят шестой опытной группы (в 2,7 раза, по сравнению с контролем).
Тенденция к преобладанию микроорганизмов группы кишечной палочки у всех животных сохранялась и в начале 20 дня опытного периода групп. По-видимому, это связано с развитием второго возрастного иммунодефицита, а также с частичным изменением рациона (с двухнедельного возраста телята начинают получать комбикорма). Однако доля лакто- и бифидобактерий продолжала стабильно повышаться. Наибольшее их количество отмечено у телят четвертой и шестой опытной групп (соответственно в 2,1 и 1,4 раза и в 2,2 и 1,4 раза выше, чем в контроле). Кроме того, лактобактерии, входящие в состав фитопробиотиков, обладая антагонистической активностью по типу бактерицидного действия, подавляли рост и развитие синегнойной палочки. Причем самый значительный эффект наблюдался в случае их использования в комплексе с лекарственными травами (синегнойная палочка не выделялась).
На завершающих стадиях эксперимента установлено, что включение композиций фитопробиотиков и полисолей микроэлементов в рацион телят позволило провести коррекцию микробиоценоза желудочно-кишечного тракта в сторону преобладания бифидо- и молочнокислых бактерий (до 8,5+0,18 1§ КОЕ/г и 9,63+0,18 1§ КОЕ/г соответственно). Также отмечено значительное снижение количества стафилококков, энтерококков, дрожжеподобных грибов и клостридий.
Исследования показали, что применение композиций фитопробиотиков и полисолей микроэлементов
существенно влияет на количество форменных элементов крови, лейкоцитарную формулу и концентрацию гемоглобина (см. табл.). Наибольшее увеличение числа эритроцитов наблюдалось у животных четвертой и шестой опытных групп. К 30-му дню исследований оно превысило контрольные значения в 1,6 и 1,9 раза соответственно. В этих же группах отмечен самый низкий показатель гематокрита. К концу исследований он был меньше, чем в контроле соответственно в 1,1 и 1,2 раза. Кроме того, у особей шестой опытной группы зафиксировано самое высокое количество гемоглобина, лейкоцитов и тромбоцитов. К концу опытного периода величины этих показателей превышали контроль соответственно в 1,3,1,4 и 1,3 раза.
В лейкоцитарной формуле телят опытных групп, получавших композиции фитопробиотиков и полисолей микроэлементов, установлено достоверное увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов, по сравнению с контролем, коррелирующее с ростом количества лимфоцитов к 30-му дню исследований. Среди других показателей лейкоцитарного ряда крови животных опытных групп следует выделить эозинофилы, число которых достоверно снижалось до десятого дня исследования и вновь возрастало к 30-м суткам. Количество палочкоядерных нейтрофилов плавно снижалось по отношению к фоновым показателям при рождении. Перед завершением эксперименту телят, получавших композиции фитопробиотиков и полисолей микроэлементов оно было в 2,1-2,5 раз меньше.
Поскольку белковые молекулы участвуют практически во всех звеньях гомеостаза, немаловажное значение имеет такой параметр, как содержание общего белка и его фракций. Мы установили достоверное увеличение этих показателей. К месячному возрасту, по сравнению с первыми сутками, у телят, получавших композиции фитопробиотиков и полисолей микроэлементов содержание альбуминов в кро-
Таблица. Изменение гематологических, биохимических и иммунологических показателей телят под влияни ем композиций фитопробиотиков и полисолей микроэлементов (М±ш)
Показатель Контроль Гр уппа
1 опытная 2 опытная 3 опытная 4 опытная 5 опытная 6 опытная
Эритроциты, 1012/л 5,9±0,3 6,0±0,2*** 8,2±0,2“* 8,2±0,19** 8,6±0,23*** 8,5±0,15*** 6,8±0,14***
Лейкоциты, 109/л 8,4±0,39 8,3+0,4*** 9,8±0,8*** 9,81 ±0,83*** 10,0±0,3** 9,9±0,3** 10,2±0,2**
Тромбоциты, 109/л 514,3±1,3 515,3+2,0*** 518,7+1,2*** 520,4±1,2*** 524,3±1,07** 521,4±1,07* 526,6±0,7*
Гемоглобин, г/л 87,3±1,4 83,8±2,0*‘ 101,1 ±1,5*** 100,6±1,8*** 107,384±1,2*** 103,5+1,3** 111,5+1,8***
Гематокрит, % 37,4±0,3 37,3±1,1* 37,6±0,2 37,5+0,4** 36,6±0,8*** 36,8±0,5*** 36,5±0,9**
Общий белок, г/л 58,8+1,19 58,9±17*** 58,9±1,1 *** 61,2+1,1*** 63,3±1,3*** 61,7+1,5*** 63,3±1,03***
Альбумины, г/л 31,1+1,1 33,4±1,08*** 34,6±1,4*‘* 34,9±0,90*** 35,3±1,15*** 34,8±1,15*** 35,4+1,56***
Глобулины, г/л альфа 7,4+0,4 5,2±0,2* 3,3±0,1* 3,8±0,1 *** 4,2±0,2*** 4,0±0,2*** 4,8±0,1***
бета 8,1±0,2 8,2±0,2** 9,2±0,3** 9,3±0,3*** 9,8±0,383‘* 9,5±0,2* 10,0±0,3**
гамма 12,2±0,1 12,1+0,3** 11,8+0,3** 13,2+0,2* 13,7+0,2* 13,6+0,3** 14,1 ±0,2*
1д А, мг/мл 0,4+0,05 0,5±0,06*** 0,6+0,07** 0,6±0,04**‘ 0,55±0,06“* 0,63+0,05*** 0,64±0,05***
1д М, мг/мл 1,7+0,05 1,7+0,02*** 1,75+0,04** 1,82+0,02*** 1,91+0,01** 1,88+0,01“* 2,0+0,04***
1д в, мг/мл 8,8+0,13 14,7+0,06** 13,8±0,11*** 14,8±0,06*** 15,4±0,11 15,2±0,11*** 15,6±0,17**
Фагоцитарная активность нейтрофилов, % 40,9±1,34 41,9+1,49 44,3+1,72*** 52,6±1,58*** 55,0+1,57*** 53,5±1,94*** 56,1 ±0,90***
Примечание: *-Р< 0,05; ** - Р < 0,01; ***-Р< 0,001 38 --------------------------------------------------- Достижения науки и техники АПК, N94-2008
ви возрастало в 1,4-1,5 раза, у-глобулинов в 3,5-3,8 раз, /3-глобулинов — в 2,0-2,2 раза, а «-глобулинов — снижалась в 1,06-1,12 раза, тогда как в контроле достоверных изменений не было. Полученные данные свидетельствуют о пластичности внутренней среды организмов телят, а также активизации приспособительных и компенсаторных механизмов, позволяющих обеспечить высокую жизнеспособность их организмов в постнатальный период развития.
Результаты проведенных иммунологических исследований свидетельствуют о весьма выраженной динамике изменений показателей гуморального и клеточного иммунитета в различные опытные периоды. Так, к 30-му дню эксперимента у животных, получавших композиции фитопробиотиков и полисоли микроэлементов наблюдалось достоверное увеличение фагоцитарной активности нейтрофи-лов, по сравнению с контролем (в 1,3-1,4 раза). К месячному возрасту у телят отмечалось значительное повышение содержания иммуноглобулинов всех изучаемых классов. Самые высокие показате-
ли зафиксированы у животных шестой опытной группы. Их величины превысили контроль в 1,5 (1§ А), 1,8 (I% С) и 1,2 М) раза. Возрастание активности фагоцитоза, увеличение количества иммуноглобулинов А, М, в свидетельствует о повышении естественной реактивности организма и более пластичном приспособлении к постнатальному периоду жизни [2].
Таким образом, применение композиций фитопробиотиков и полисолей микроэлементов обеспечивает ингибирование условно-патогенной микрофлоры энтеробиоценоза, способствует поддержанию оптимального микробного баланса пищеварительного тракта, оказывает положительное влияние на эритрогемопоэз, способствуя увеличению содержания в крови лейкоцитов, которые могут осуществлять фагоцитоз, и лимфоцитов, регулирующих иммунный ответ, что повышает неспецифическую резистентность организма и оказывает профилактический эффект при заболеваниях животных в ранний постнатальный период.
Литература.
1. Аверенкова М.Г. Оптимизация микробиоценоза кишечника новорожденных телят и репродукторных помещений молочных ферм пробиотиком широкого спектра действия :автореферат дис.... кандидата ветеринарных наук: 16.00.03/Всерос. науч.-исслед. ин-т ветеринар, санитарии, гигиены и экологии РАСХН. — 2007. — 21 с.
2. Доми И.А. Роль иммуноглобулинов в формировании естественной резистентности у новорожденных телят /ИА. Доми //Экологические проблемы современности: VIIМеждунар. науч.-практич. конф. — Майкоп, 2006. — С. 288—289.
3. Тимербаева Р.Х., Назырова Н.Р., Туйгунов М.М. Оценка влияния водных извлечений лекарственных растений на биологические свойства лактобактерий //Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий: Материалы IV Международной научной конференции. — Томск, 2006. — Т. 2,- С. 436—438.
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА ВЕЛТОЛЕН ПРИ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИИ ПТИЦЕВОДЧЕСКИХ ПОМЕЩЕНИЙ
Е.Б. ИВАНОВА
Научно-производственное объединение «ВЕЛТ»
Т.Н. ГРЯЗНЕВА
С.А. ЧЕКМАРЕВ
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина
Эпизоотическая ситуация в России сегодня характеризуется тенденцией к развитию инфекционных заболеваний животных и птиц с респираторным и пероральным механизмами передачи возбудителей. В значительной мере это связано как с несоблюдением ветеринарно-санитарных мер, так и с недостаточной эффективностью используемых средств профилактики инфекционных болезней [3].
В системе мероприятий, обеспечивающих благополучие объектов ветеринарного надзора по инфекционным заболеваниям животных и птиц, одно из важнейших мест занимает дезинфекция [1].
Проанализировав публикации отечественных и
зарубежных авторов, а также проведя собственные исследования, мы пришли к выводу, что на сегодняшний день наиболее перспективные биоциды — это средства на основе четвертичных аммониевых соединений, выгодно отличающиеся от всех известных отечественных и импортируемых в страну дезинфектантов по спектру антимикробной активности, наличию моющего и антикоррозионного действия, дешевизне, безвредности для человека, животных и птиц, стабильности при хранении.
Целью наших исследований было определение эффективности средства Велтолен при профилактической обработке поверхностей помещений инкубатория и птицецехов, производственного оборудования и уборочного инвентаря.
Работу проводили на базе ОАО «Птицеводческая агрофирма «КУРС» и кафедры микробиологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина.
Велтолен — дезинфицирующее средство из группы катионных поверхностно-активных веществ, со-
