CC BY
11
(Щ) Check for updates
Влияние гиперкалорийного рациона и кверцетина на полнотранскриптомный профиль ткани печени крыс линии Zucker-LEPRfa
© Н.В. Трусов1, С.А. Апрятин1*, А.Ю. Горбачев1, В.А. Наумов2, К.В. Мжельская1, И.В. Гмошинский1
'ФГБУН «Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи», Москва, Россия;
2ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова»
Минздрава России, Москва, Россия
Обоснование. Пептидный гормон лептин (Lep) занимает центральное место в контроле энергетического гомеостаза и массы тела. Удобной моделью для изучения роли нарушенной рецепции Lep являются крысы Zucker-LEPRfa, несущие в гомозиготе мутацию гена LEPR. В качестве одного из перспективных биологически активных веществ, корригирующих нарушения обмена веществ при ожирении и метаболическом синдроме, в настоящее время рассматривается кверцетин (Q; 3,3',4',5,7-пентагидроксифлавон).
Цель исследования — изучить экспрессию генов в ткани печени крыс с нарушенной рецепцией Lep под влиянием высокожирового и высокоуглеводного рациона (ВУВЖД) и/или добавки к рациону кверцетина.
Материал и методы. Использовали четыре группы крыс самцов линии Zucker-LEPRfa. В течение 61-х суток животные 1-й группы (контроль) получали сбалансированный полусинтетический рацион, 2-й группы — такой же рацион с добавкой Q в дозе 50 мг/кг массы тела, 3-й группы — ВУВЖД (30% жиров по массе сухих веществ и 20% фруктозы вместо воды), 4-й группы — такой же рацион и добавку Q. Полнотранскриптомное профилирование ткани печени выполняли на микрочипах из набора Gene Expression Hybridization Kit («Agilent Technologies»). Полимеразную цепную реакцию в «реальном времени», совмещенную с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), выполняли для содержащихся в ткани печени транскриптов генов Crot, FTO, NpY, Prdxl, Prom1, Ugt2b37 и GAPDH.
Результаты. Потребление Q и/или ВУВЖД крысами Zucker-LEPRfa приводит к значимым изменениям в уровне транскрипции 1604 генов в ткани печени, из которых эффект собственно Q проявляется для 1396 генов. Изменения в транскрипто-ме ткани печени, вызываемые ВУВЖД, более выражены, чем обусловленные добавкой Q на фоне стандартного рациона. Q оказывал влияние на экспрессию генов, отвечающих за процессы детоксикации ксенобиотиков (UGT2b37), редокс-го-меостаз (Prdxl), бета-окисления жирных кислот (Crot) и центральные механизмы, воздействующие на чувство голода и насыщения (NpY), а также потенцировал либо отменял эффекты ВУВЖД в отношении ряда других функционально значимых генов. Биоинформатический анализ выявил влияние потребления ВУВЖД и/или Q на 23 метаболических пути (KEGGS), из которых 7 [метаболизм стероидов, арахидоновой и линолевой кислот, ретиноидов, лекарственных препаратов и ксенобиотиков (под действием цитохрома Р-450), секреции желчи] были затронуты во всех опытных группах. Заключение. Изменения в транскриптоме печени крыс Zucker-LEPRfa, вызванные потреблением ВУВЖД и/или Q, согласовались с экспериментальными данными об изменении показателей краткосрочной памяти, тревожности и минерального обмена у этих животных.
Ключевые слова: транскриптом, печень, крысы, лептин, ожирение, метаболические пути.
The effect of hypercaloric diet and Quercetin on the full-transcriptome liver tissue profile of Zucker-LEPRfa rats
Nikita V. Trusov1, Sergey A. Apryatin1*, Aleksey Yu. Gorbachev1, Vladimir A. Naumov2, Kristina V. Mzhelskaya1, Ivan V. Gmoshinski1
'Federal Centre of Nutrition, Biotechnology and Food Safety, Moscow, Russia;
2National Medical Research Center of Obstetrics, Gynecology and Perinatology, Moscow, Russia
BACKGROUND: The peptidic hormone leptin (Lep) occupies a central place in the control of energy homeostasis and body weight in mammals. A convenient model for studying the role of impaired Lep reception is the Zucker-LEPRfa rats, which carry a mutation in the homozygote of the LEPR gene. Quercetin (Q; 3.3 ', 4', 5.7-pentahydroxyflavone) is currently being considered as one of the promising biologically active substances, which allows to correct metabolic disorders in obesity and metabolic syndrome.
AIM: to study changes in the expression of genes in liver tissue of rats with impaired receptivity of Lep under the influence of high-fat and high-carbohydrate diet (HFCR) or/and Q supplementation.
MATERIAL AND METHODS. 4 groups of six male Zucker-LEPRfa male rats were used in experiment. Within 61 days the animals of the 1st group (control) received a balanced semi-synthetic diet, the second group received the same diet with the addition of quercetin in a dose of 50 mg/kg of body weight, the third group — the HFCR (30% fat by dry weight and 20% fructose instead of water), the 4th group is the same diet and supplement of quercetin. Full transcriptional profiling of liver tissue was performed on microchips from the Gene Expression Hybridization Kit (Agilent Technologies), a real-time polymerase chain reaction combined with reverse transcription (RT-PCR) was performed for liver transcripts of Crot, FTO, NpY, Prdxl, Prom1, Ugt2b37 and GAPDH genes contained in liver tissue.
RESULTS. It was shown that feeding of Zucker-LEPRfa rats with Q and/or HFCR led to significant changes in the level of transcription of 1604 genes in liver tissue, from which the effect of quercetin proper was manifested for 1396 genes. Changes were more pronounced in the transcriptome of liver tissue caused by HFCR, than caused by the addition of Q against the background of a standard diet. Q influenced the expression of genes responsible for xenobiotic detoxification processes (UGT2b37), redox homeo-
Copyright © 2018 by the MediaSphere
Licensee: CC BY-NC-ND Проблемы эндокринологии 2018. — Т. 64. — №6. — doi: 10.14341/probl9936 Problems of Endocrinology 2018;64(6):371-382
stasis (Prdx1), beta-oxidation of fatty acids (Crot), and central mechanisms affecting hunger and satiety (NpY), and potentiated, or abolished the effects of HFCR against a number of other functionally important genes. Bioinformatic analysis revealed the influence of HFCR and/or Q on 23 metabolic pathways (KEGGS), of which 7 (the metabolism of steroids, arachidonic and linoleic acids, retinoids, drugs and xenobiotics (due to cytochrome P-450), bile secretion) were affected in all experimental groups. CONCLUSIONS. Changes in the transcriptome of the liver of Zucker-LEPRfa rats, caused by consumption of HFCR and/or Q, were consistent with experimental data on changes in short-term memory, anxiety and mineral metabolism in these animals.
Keywords: transcriptome, liver, rats, leptin, obesity, metabolic networks and pathways.
Обоснование
Поддержание гомеостаза энергии у человека и млекопитающих в условиях разнообразного питания осуществляется при участии нейрогуморальной регуляции потребления пищи со стороны центральной нервной системы (ЦНС). В литературе рассматриваются два контура такой регуляции, включая «гомео-статический», опосредуемый реакцией нейронов дугообразных ядер гипоталамуса на поступающие от периферических тканей гормональные сигналы, такие, как адипокины — лептин (Lep) и грелин [1, 2], и «гедонистический», сосредоточенный в высших отделах головного мозга, непосредственно связанных со вкусовым анализатором, и реализуемый при участии кан-набиноидных и опиоидных рецепторов, а также их эндогенных лигандов [3]. Поломки этих регуляторных механизмов могут вызвать дисрегуляцию чувства голода и насыщения, приводящую к развитию алиментарного ожирения и метаболического синдрома. Взаимодействие обоих регуляторных контуров имеет сложный характер, в частности, важную роль в нем может играть развитие системного воспаления [4].
Lep, секретируемый адипоцитами белой жировой ткани, занимает центральное место в контроле энергетического гомеостаза и массы тела. Гематоэнцефали-ческий барьер частично проницаем для Lep, что приводит к его поступлению в гипоталамус и связыванию с его специфическим рецептором ЬЕРЯ [5] с последующей активацией сигнального каскада SOCS3 [6]. По мере накопления жировых запасов уровень циркулирующего Ьер повышается, он проникает в гипоталамус в большем количестве, стимулируя РОМС-нейроны и ингибируя NPY/AgRP-нейроны [1]. В норме Lep у млекопитающих оказывает анорексигенное, катабо-лическое, липолитическое и гипогликемическое действие, благодаря которому формируется механизм отрицательной обратной связи. При ожирении действие Lep нарушается вследствие ослабления его нормального переноса через ГЭБ, или связывания с циркулирующей в крови формой рецептора [7].
Удобной моделью для изучения роли нарушенной рецепции Lep при ожирении являются крысы Zucker-ZEPR/',, несущие в гомозиготе мутацию гена ЬЕРЯ, делающую соответствующий рецептор нефункциональным. В результате у этих животных, с одной стороны, отсутствует влияние запасов жира на объем потребляемой пищи, что приводит к быстрому развитию ожирения даже при потреблении
стандартного сбалансированного рациона. С другой стороны, нарушение процессов рецепции и интер-нализации Lep клетками ослабляет его клиренс, что приводит к резкому повышению уровня этого гормона в крови и развитию не свойственных ему в норме иммунотропных эффектов, обусловленных частичной гомологией структуры Lep и ряда цитокинов и хемокинов [8, 9]. В органах и тканях таких животных меняется экспрессия большого числа генов, отвечающих за функционирование разнообразных метаболических путей, определяющих гомеостаз организма. Эти изменения в значительной степени соответствуют таковым у больных с алиментарным ожирением.
В качестве перспективных средств, позволяющих осуществлять коррекцию указанных нарушений, в настоящее время рассматриваются минорные биологически активные вещества, принадлежащие к группе биофлавоноидов, в частности кверцетин (Q; 3,3',4',5,7-пентагидроксифлавон). Согласно ряду экспериментальных данных [10, 11] и клинических наблюдений [12], Q в дозах, характерных для его содержания в пищевых продуктах, смягчает проявления метаболического синдрома, вызванного потреблением избытка легкоусвояемых углеводов. Предполагается, что действие Q связано с активацией транскрипционных факторов PPAR-y, SREBP1 и AMPk [13]. Эффективность Q в плане коррекции ожирения и побочных иммунотропных влияний при нарушенной рецепции Lep исследована недостаточно.
Цель исследования — изучить изменения в экспрессии генов в ткани печени крыс Zucker-LEPRfa под влиянием рациона с избыточной энергетической ценностью и/или добавки к рациону Q методами анализа полнотранскриптомного профиля на мультива-лентных ДНК-микрочипах с биоинформатическим анализом получаемых данных в среде «R», а также методом от-ПЦР в «реальном времени».
Материал и методы
Исследования проведены на 24 самцах крыс (возраст 8—10 нед, средняя исходная масса тела 176±7 г) линии Zucker-LEPRfa, полученных из питомника «Charles River», Италия. Правила работы с животными соответствовали Приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации №193 н от 01.04.16 «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики». Экспериментальный дизайн был рассмотрен и одобрен Комитетом по этике ФГБУН «ФИЦ
питания и биотехнологии» (протокол №4 от 20.04.17). Животные были разделены на четыре группы равной численности (n=6). В течение 61-х суток животные 1-й группы (контроль) получали сбалансированный рацион по AIN93M, 2-й группы — такой же рацион с добавкой Q в дозе 50 мг/кг массы тела, 3-й группы — высокожировой рацион (30% жиров по массе сухих веществ) и 20% фруктозы вместо воды (ВУВЖД), 4-й группы — такой же рацион с добавкой Q. Рацион и питьевые жидкости предоставляли животным в режиме неограниченного свободного доступа. Крыс содержали по 2 особи в клетках из поликарбоната при 12/12 часовом режиме освещенности и температуре воздуха 22±1 °С. Ежедневно фиксировали количество съеденного корма и выпитой жидкости и рассчитывали потребленную энергетическую ценность рациона. Массу тела определяли еженедельно на электронных весах с точностью ±1 г.
Выведение животных из эксперимента осуществляли на 62-е сутки путем декапитации под эфирной анестезией. Кровь собирали в пробирки с 1,0% раствором гепарина в 0,15 М NaCl (1:10 по объему), плазму отделяли центрифугированием и проводили исследование биохимических показателей на анализаторе Konelab 20i (Финляндия). Печень отбирали стерильными хирургическими инструментами из нержавеющей стали, немедленно охлаждали на льду до температуры 0—2 °С, взвешивали с точностью ±0,01 г и хранили до исследования при —80 °С.
мРНК из ткани печени выделяли с использованием набора Agilent Total RNA Isolation Mini Kit («Agilent Technologies», США). Навеску 20 мг замороженной ткани печени быстро гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе Поттера—Эдельвейма в 500 мм3 лизирующего буфера (с добавлением 5 мм3 ß-меркаптоэтанола на 500 мм3 буфера) при температуре 0—2 °С. Дальнейшие процедуры проводили в соответствии со стандартным протоколом [14]. Полученную общую РНК дополнительно обрабатывали ДНК-азой I для удаления следов геномной ДНК. Концентрацию РНК определяли на спектрофотометре NanoDrop 1000, после чего разбавляли ее водой без нуклеаз до концентрации 200 нг/мм3 и проводили анализ степени фрагментации на Agilent Bioanalyzer 2100 с определением показателя RIN (RNA Integrity Number показатель целостности РНК). РНК хранили в воде, свободной от нуклеаз, или в виде изопропа-нольных осадков при —80 °С. кДНК на основе тотальной мРНК синтезировали с помощью набора Agilent AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kit («Agilent Technologies», США), согласно протоколу производителя.
Полнотранскриптомное профилирование ткани печени выполняли на микрочипах из набора Gene Expression Hybridization Kit («Agilent Technologies»), по протоколу Agilent One-Color Microarray-Based Gene Expression Analysis Low Input Quick Amp Labeling, version 6.8 [15]. Сканирование микрочипов вы-
полняли на приборе SureScan Microarray Scaner, производства «Agilent Technologies». Величину экспрессии выражали в виде логарифма по основанию 2 (logFC) возрастания или убывания флуоресценции по сравнению с контрольной группой. Всего для каждого образца кДНК были получены данные для дифференциальной экспрессии 30 003 генов, представленных на микрочипе.
Полимеразную цепную реакцию в «реальном времени», совмещенную с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) для содержащихся в ткани печени транс-криптов генов Ст^ FTO, NpY, Prdx1, Prom1, Ugt2b37 и GAPDH, проводили на приборе CFX96 («Bio-Rad», США) в объеме 25 мкл реакционной смеси, включавшей следующие компоненты: 10х буфер для TaqPol Додержит 2 мМ MgCl2; «Евроген», Россия) — 2,5 мкл; (R+F) праймеры (10 мкМ; «ДНК-Синтез», Россия) — 1 мкл; зонд (10 мкМ; «ДНК-Синтез», Россия) — 0,5 мкл; смесь dNTPs (5 мМ; «СИбЭнзим», Россия) -0,5 мкл; вода без ДНКаз и РНКаз «TermoScientific», США) — 18,5 мкл; Taq-полимераза (5 ед/мкл; «Евро-ген», Россия) — 0,5 мкл и кДНК (400 нг/мкл) — 1 мкл. На первом этапе Taq-полимеразу активировали 3 мин при 95 °С, затем проводили 45 циклов амплификации (95 °С — 15 с, 60 °С — 1 мин). Величину экспрессии выражали в единицах логарифма по основанию 2-го отношения к количеству мРНК конститутивного гена ß-актин.
Статистическую обработку результатов выполняли согласно непараметрическому ранговому критерию Манна—Уитни. Достоверность изменения диф-ференициальной экспрессии генов оценивали путем анализа логарифмов интенсивности флуоресценции, нормализованных по внутренним контролям (SpikeIn), с использованием Т-теста с множественной коррекцией Benjamini—Hochberg [16]. Для расчетов применяли пакет статистических программ SPSS 16.0.
Результаты
Как показало полнотранскриптомное профилирование, из общего числа генов, представленных на микрочипе, более чем 1,41-кратная по модулю дифференциальная экспрессия (|log2FC| >0,5) по сравнению с показателем для 1-й группы, вызванная потреблением Q или/и ВУВЖД, во 2, 3 и 4-й группах животных выявлена в общей сложности для 1604 генов (5,35% от общего количества). Во 2-й группе (потребление контрольного рациона с добавкой Q) выявлено 117 (7,3%) уникальных (свойственных только этой группе) генов из общего числа 1396 дифференциально экспрессированных генов, в 3-й группе (потребление ВУВЖД) — 393 (24,5%) гена, в 4-й группе (потребление ВУВЖД и Q) — 391 (24,4%) ген. Одновременно только во 2-й и 3-й группах отмечалась дифференциальная экспрессия 34 (2,1%) генов, во 2-й и 4-й группах — 29 (1,8%) генов, в 3-й и 4-й группах —
Рис. 1. Диаграммы Венна.
а — распределения дифференциально экспрессированных ((|log2FC| > 0,5) генов в опытных группах крыс Zucker-LEPRf 2, 3 и 4-й в сравнении с 1-й группой; б — распределения генов, дифференциально экспрессированных ((|log2FC| > 0,5) в ответ на потребление кверцетина у крыс вышеуказанной линии, в 4-й группе в сравнении с группами 1-й и 3-й и во 2-й группе в сравнении с 1-й группой.
539 (33,6%) генов (рис. 1, а). Сразу во всех трех экспериментальных группах животных дифференциально экспрессированным в сравнении с 1-й группой был 101 (6,3%) ген. В табл. 1 приведен перечень кратких международных символов генов, для которых выявлена наибольшая положительная дифференциальная экспрессия, а в табл. 2 — тех, для которых дифференциальная экспрессия была отрицательной.
Представляло интерес также установление генов, отвечающих дифференциальной экспрессией на потребление собственно Q при различных пищевых режимах. Для этого была дополнительно просчитана дифференциальная экспрессия генов в 4-й группе в сравнении с 3-й группой, и полученное множество соотнесено с множествами генов, дифференциально экспрессированных в 4-й группе и во 2-й группе в сравнении с 1-й группой. Общее число таких генов составило 1396 (см. рис. 1, б). При этом число генов, ответивших на потребление Q во всех случаях (т.е. независимо от потребления ВУВЖД, либо контрольного рациона), составило 15.
На рис. 2 на цв. вклейке представлены диаграммы рассеяния («volcano plots») в координатах: логарифм дифференциальной экспрессии гена (log2FC); минус логарифм вероятности (-lg(p) нуль-гипотезы данного эффекта для всех изученных генов, качественно демонстрирующие степень влияния применяемых экспериментальных рационов на транскриптом. Потребление ВУВЖД животными 3-й и 4-й групп сопровождается наибольшей дисперсией (в сторону как положительной, так и отрицательной дифференциальной экспрессии) транскриптома, тогда как эф-
К+kü ВУВЖЛ+КВ
ВУ вжд
Рис. 3. Диаграмма Венна распределения по группам крыс Zucker-LEPRfa метаболических путей, являющихся мишенями применявшихся диетических воздействий.
фект Q на стандартном рационе оказывается значительно менее выраженным.
Анализ профилей дифференциальной экспрессии генов по отдельным группам животных в среде позволил выявить наборы метаболических путей, являющихся мишенями применяемых рационов. Распределение (в виде диаграммы Венна) по группам животных метаболических путей, изменившихся в зависимости от всех опытных пищевых режимов, при сравнении с 1-й группой, приведено на рис. 3.
Таблица 1. Список генов с наибольшей положительной дифференциальной экспрессией, вызванной потреблением опытных рационов при уровне значимости р<0,05 для крыс 2, 3 и 4-й групп (в сравнении с 1-й группой, получавшей сбалансированный полусинтетический рацион)*
Экспрессия, |log2FC|
1 lllJLd, +>1 +0,7-1 +0,5-0,7
2-я LOC102549203 Sult1c3 Defbl7
Car3 LOC102556574 Isgl5
Nat8 Tsku LOCl02549099
Cml2 Socs2 Pkib
Zswim5 Rgs3 Tac3
Slc25a30 Onecutl LOCl03693809
LOC102548450 Perl Crygd
Grin3a Sultlel Kcnipl Ctgf Cryl LOCl0254722l LOCl00909643
3-я Cyp2c11 Ppp1r3b Ltbp2
Gfral Ip6k2 Rup2
LOC100912658 LOCl03690477 Cth
Slfn4 Heph Arhgap22
Slc6a6 Nipal2 Nmt2
Comp Myzap Gria3
Dcn Acsm3 Zbtbl6
LOC102551151 Cd274 LOCl02555870
Sppl Ch25h Hnrnpa2bl
Ccdc68 LOC102552977 Cystml
4-я Ubd Dcn Itga4
Btnl5 Hmgbl Faml80a
Abcblb LOC685067 Trim30
G6pc Cldn23 Ube2c
RT1-CE5 Rhoc Tspo2
Rbm25 Zswim5 Flvcr2
Lpl Usp2 Slpil3
Nol3 Cox6a2 Faml05a
Rrm2 Comp LOCl0255l574
A2m Ddit4l2 Ppplr3b
Гены с положительной 2-й и 3-й Onecutl, Gck, Defb17, LOC102549099, Cryl, MGC108823, Gcnt4, Apol9a,
экспрессией, общие LOC102552977, Slc6a7
для групп: 2-й и 4-й Pcdh19, Zswim5, Grin3a, Lzts3, A2m, Lhfpl4, Bicc, LOC103690085, Pkib,
LOC102547637
3-й и 4-й Tsx, Sds, Sdr16c6, Scd2, Stac3, Cyp2c12, LOC100366030, Cyp2c24, Aldhlbl,
LOC102549932
2-й, 3-й и 4-й LOC102555663, Cdh17, Oasl, LOC103693974, Cox6a2, Cyp7b1,
LOC102552001, Sult1c3, Tsku, Smoc2
Примечание. * — В каждой группе представлено до 10 генов с наибольшей дифференциальной экспрессией.
Из числа выявленных, 7 метаболических путей были затронуты во всех трех опытных группах животных. Это были такие метаболические пути, как:
— rno00830 Retinol metabolism (метаболизм производных ретинола);
— rno00140 Steroid hormone biosynthesis (биосинтез стероидных гормонов);
— rno00591 Linoleic acid metabolism (метаболизм линолевой кислоты);
— rno04976 Bile secretion (секреция желчи);
— rno00982 Drug metabolism — cytochrome P450 (метаболизм лекарственных препаратов системой ци-тохромов Р450);
— rno00590 Arachidonic acid metabolism (метаболизм арахидоновой кислоты);
— rno00980 Metabolism of xenobiotics by cytochrome P450 (метаболизм ксенобиотиков системой цитохро-мов Р450).
Помимо этого, общими для 3-й и 4-й групп, получавших ВУВЖД, были 10 изменившихся метаболических путей. Только в 3-й группе (ВУВЖД) модифицировался один, а в 4-й группе (ВУВЖД+Q) — 5 метаболических путей.
Анализ изменений в 7 общих для всех пищевых режимов метаболических путей крыс Zucker-LEPW" показал, что эти изменения под действием ВУВЖД
Таблица 2. Список генов с наибольшей (по модулю) отрицательной дифференциальной экспрессией, вызванной потреблением опытных рационов при уровне значимости р<0,05 для крыс 2, 3 и 4-й групп (в сравнении с 1-й группой, получавшей сбалансированный полусинтетический рацион)*
Экспрессия, |log2FC|
Группа
<—1 (—1)—(—0,7) (—0,5)—(—0,7)
2-я Olr292 Rgs4 Slc7a2
Wfdcll Lhx8
Kcnj15 Hsd3b5 Ppef2
Nucb2 Kcnk5
LOC103690608 LOC103694173 LOC100360128
LOC102552001 LOC691485
Slc39a5 Trpm8 Ccnb2
Olr1353 Zfp90
Upp2 RGD1309540 Tmem179
RGD1561517 AdcylO
3-я Fmol Rgs4 Pdhb
Samd15 Wfdcll Slc13a5
Tmem179 Hsd3b5 LOC102555010
Bmp7 Nucb2 Slc16a11
Slc2a5 LOC103694173 Agpat3
Taslrl Trpm8 LOC103692524
LOC691485 Olr1353 LOC108348296
Rgs12 LOC102552001 Appl2
Cacnb4 RGD1309540 Cyp26a1
RGD1561517 LOC103692812
4-я LOC103692325 Dnajc5b Lipe
Olr1583 Bmp7 Galt
Prtg Lamb3 Srd5a1
Col9a2 LOC501346 Mcpt8
Ppef2 LOC102551647 Tp53i13
LOC102552469 RGD1564786 Pdzd7
Cib2 LOC102552306 Fpr1
Mt1 LOC102551879 Taf1d
Acotl LOC691485 Slc25a47
LOC10255627 Cacnb4 Retnlg
Гены с отрицательной 2-й и 3-й LOC108349355, Ptprs, LOC100911949, Plekha6, Fnip2, Slc25a29, Derl2,
экспрессией, общие LOC103690779, Lpal2, LOC102547508
Для ipynrn 2-й и 4-й Ino80. LOC100911891, Nr0b2, LOC102550442, LOC103694148, Slc7a2,
Shank2, RGD1564786
3-й и 4-й Hfe2, Olr1583, Afgll, LOC102551374, LOC102547136, Lpar2, Rhobtb3,
Palm, Sh3d21, Coq10a
2-й, 3-й и 4-й Cptla, Fut8, Zfp266, Scgblal, Dtxl, Mrnip, Agfg2, Cpeb3, Sdr42e1, Wwox
Примечание. * — В каждой группе представлено до Ю генов с наибольшей дифференциальной экспрессией.
и/или Q различаются. Пример этих изменений для метаболического пути Steroid hormone biosynthesis (rno00140) представлен на рис. 4 на цв. вклейке (см. раздел Дополнительная информация).
Модификации метаболического пути Retinol metabolism (rno00830) включали такие эффекты, как угнетение транскрипции DHRS4 (Dehydrogenase/ reductase SDR family member 4) и RDH (retinol dehydrogenase) при потреблении ВУВЖД. Q (4-я группа) частично отменял первый из этих эффектов. Изменения в метаболическом пути Drug metabolism — cytochrome P450 (rno00982) под действием при-
менявшихся диетических режимов заключались в увеличении под действием Q экспрессии моно-аминооксидазы (КФ 1.4.3.4.), снижении глутатион-8-трансферазы (КФ 2.5.1.18), причем эти эффекты были в основном противоположными наблюдаемым при действии ВУВЖД.
Особо следует также отметить, что, в отличие от крыс 2-й группы, потребление ВУВЖД крысами 3-й и 4-й групп приводило к модификации PPAR-сигнального (то 03320) пути в сравнении с 1-й группой. При этом добавка Q на фоне ВУВЖД (4-я группа) возвращала показатели дифференциальной экс-
К статье Н.В. Трусова и соавт. «Влияние гиперкалорийного рациона и кверцетина на полнотранскриптомный профиль ткани печени крыс линии Zucker-LEPRfa»
1TH4FC [TltopFC iTStogFC
а б в
Рис. 2. Диаграммы рассеяния «Volcano plots» дифференциальной экспрессии генов в группах животных 2 (а), 3 (б) и 4 (в) в сравнении с 1-й группой.
Ось абсцисс — двоичный логарифм дифференциальной экспрессии гена (FC), ось ординат — минус десятичный логарифм статистической значимости эффекта (p). Заливкой (цветом) выделены гены, находящиеся в квадрантах |log2FC|>1; —lg(p) >1,301 (p<0,05).
англа_ _
Рис. 4. Сравнительные изменения в метаболическом пути STEROID HORMONE BIOSYNTHESIS у крыс Zucker-i£PRfa группы 2 (а), 3 (б) и 4 (в) в сравнении с 1-й группой.
Рис. 5. Уровни общего кальция и фосфора в плазме крови крыс Zucker-^fPRfa 1-4-й групп при выведении из эксперимента.
прессии ряда ферментов этих метаболических путей (КФ 2.1.1.245, КФ 4.2.3.140, PGAR, PDK1, faBP, AQP1, MRP4, PKA, ABCG8) к нейтральному уровню.
Как следует из данных, представленных на рис. 5, у крыс линии Zucker-LEPRfa, получавших ВУВЖД, отмечалось значимое (¿><0,05) повышение уровня общего кальция и фосфора в плазме по сравнению с животными, получавшими контрольный сбалансированный рацион, независимо от присутствия Q в составе диеты.
Анализ относительной экспрессии 7 генов методом ОТ-ПЦР в реальном времени (рис. 6) выявил различные воздействия со стороны применявшихся рационов. Однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA и/или критерий Краскелла—Уоллиса) для 1-4-й групп показал, что повышенная квота жира и фруктозы в рационе животных значимо (¿<0,05) влияла на уровни мРНК Proml, GAPDH и FTO, тогда как добавка Q — на UGT2b37и Prdxl. Кроме того, для генов NpY и Crot было выявлено совместное влияние ВУВЖД и Q. Усиление под влиянием ВУВЖД экспрессии Proml, GAPDH и FTO наблюдалось только у крыс, не получавших Q.
Обсуждение
Анализ изменений, наблюдавшихся у крыс в метаболическом пути Steroid hormone biosynthesis (rno00140), показал, что во 2-й группе (потребление Q на фоне сбалансированного рациона) отме-
чается значительное подавление экспрессии гена иОТ2Б7, (УДФ-глюкуронозилтрансфераза, КФ 2.4.1.17). Функцией этого фермента является присоединение остатка глюкуроновой кислоты к стероидным гормонам (и другим гидрофобным метаболитам), что способствует их экскреции с мочой. В результате этого возможно возрастание в циркуляции концентраций тестостерона, 2-метокси-и 2-гидроксиэстрадиола-17р-эстрона, 2-метокси-эстрона и др. В отличие от этого, у животных 3-й группы экспрессия иОТ2Б7 значительно повышена (1о§^С>2), а в 4-й группе эти эффекты, по-видимому, взаимно нейтрализуются. Другим геном, затронутым в рамках данного метаболического пути, является СТР17Л1 (стероид-17а-монооксигеназа, КФ 1.14.14.19). Этот фермент системы цитохромов Р-450 осуществляет 17а-гидроксилирование стероидов. Из данных, приведенных на рис. 4, видно, что Q на фоне стандартного рациона значимо не влияет на его экспрессию. ВУВЖД значительно подавляет экспрессию данного фермента, что не отменяется добавкой Q (4-я группа). Биологические последствия этого эффекта могут состоять в том, что вследствие метаболического блока взаимопревращения кортизола и его неактивного предшественника кортикостерона возможно опосредованное влияние на минеральный обмен, в частности, на уровни Са и Р. Действительно, у крыс 3-й и 4-й групп были повышены уровни кальция и фосфора в плазме в сравнении с 1-й группой, причем Q значимым образом не влиял на изменения этих показателей (см. рис. 5). Одновременно крысы 4-й группы, получавшие ВУВЖД и Q, характеризовались меньшим уровнем краткосрочной памяти и повышенной тревожностью в тесте условного рефлекса пассивного избегания, в сравнении с 1-й контрольной группой [17], что может быть объяснено усилением стресса у этих животных, вызванным нарушениями в метаболизме кортизола.
Экспрессия изозима 2 11р-дегидрогеназы корти-костероидов (КФ:1.1.1.145) значимо не менялась под действием р на контрольном рационе. ВУВЖД вызывал значительное усиление экспрессии (1о§^С>1) независимо от потребления р. Последствиями этого эффекта может быть метаболический блок, приводящий к накоплению 11-дегидрокортикостерона и далее За, 20а,21а-тригидро-5р-прегнан-11,20-диона.
Экспрессия катехол-О-метилтрансферазы (КФ 2.1.1.6) выраженно подавляется р (1о§^С<—1), тогда как эффект ВУВЖД отсутствует. Снижение экспрессии этого многофункционального фермента, переносящего метильную группу от S-аденозилметио-нина на различные субстраты (катехол, адреналин, норадреналин, стероиды), приводит к блокаде образования 2-метоксиэстрадиола-17р, а также, возможно, снижает уровень активных форм катехоламинов, что может быть соотнесено с выявленным ранее снижением показателя подвижности (локомоторной ак-
Рис. 6. Изменения в экспрессии генов Ст^ FTO, NpY, Prdx1, Prom1, Ugt2b37, GAPDH в печени крыс Zucker-Z.EPRfi, по данным ОТ ПЦР.
Ось абсцисс — группы животных (см. легенду к рисунку), ось ординат — логарифм по основанию 2 экспрессии, нормированный на уровень мРНК [3-актина. Стрелки — различие между группами достоверно ^<0,05; непараметрический и-тест Манна—Уитни.
тивности) крыс Тпскег-ЬЕРН" под действием р в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» [17].
Экспрессия гена СУР11Б1, кодирующего стероидную 11р-монооксигеназу (КФ 1.4.15.4), аналогично некоторым другим генам семейства цитохрома Р-450 значимо подавляется при потреблении ВУВЖД (что соответствует данным литературы [18]), тогда как р (4-я группа) ослабляет эффект только частич-
но. Это может усиливать блокаду образования кор-тикостерона с соответствующими влияниями на минеральный обмен (см. рис. 5). Важно отметить также, что данный фермент является ключевым фактором, обеспечивающим связь обмена глюкокортикоидов (взаимопревращения кортизола и кортизона) с уровнями цитокинов и Lep [19], нарушенная рецепция которого является главной чертой фенотипа крыс
Zucker-LEPRfa. Активность CYP11B1 в печени отрицательно коррелировала с уровнем циркулирующего Lep и его растворимого рецептора [20].
Следствием изменений в метаболическом пути Retinol metabolism (rno00830) у крыс подопытных групп может быть развивающийся при ожирении метаболический блок образования 9-цис-ретиноевой кислоты, сопровождаемый активацией множественных ядерных транскрипционных факторов. Изменение экспрессии UGT2B7 в контексте метаболизма ретиноидов должно было приводить к усилению глю-куронирования (и клиренса) all-trans ретиноевой кислоты. Q и ВУВЖД оказывали противоположное действие и на экспрессию лецитин-ретинол ацилтранс-феразы (КФ 2.3.1.135), следствием чего могло быть увеличение уровней эфира ретинола за счет его свободной формы при потреблении ВУВЖД, частично отменяемое Q. При ожирении данный эффект может снижать действие витамина А даже при его нормальном поступлении с пищей. Между ожирением, уровнем Lep и нарушениями метаболизма ретинола и его производных существует прямая связь [21].
В рамках данного метаболического пути меняется и экспрессия ряда ферментов системы цитохрома Р-450 (CYP3A, CYP4A1 и др.), причем эффекты ВУВЖД и Q на эти звенья метаболизма ретиноидов в большинстве случаев противоположны. Активизация экспрессии CYP3A, наблюдаемая при потреблении ВУВЖД у крыс Zucker-LEPRfa, согласуется с известными данными о повышении активности этой изоформы P450 при ожирении [22].
Изменения экспрессии ряда ключевых генов углеводно-энергетического обмена, системы деток-сикации ксенобиотиков, поддержания редокс-гомео-стаза были выявлены у крыс Zucker-LEPRfa, получавших ВУВЖД и его комбинацию с Q при использовании таргетной ПЦР-ОТ отдельных нуклеотидных последовательностей. В числе этих дифференциально экспрессированных генов идентифицирован GAPDH, отвечающий за обратимое окислительное фосфорилирование глицеральдегид-3-фосфата в присутствии неорганического фосфата и NAD [23]. Ген Proml кодирует рецептор CD133 (проминин), являющийся маркером гематопоэтических клеток [24]. Потребление ВУВЖД также потенцирует экспрессию «гена ожирения» FTO (а-кетоглутаратзависимой деметилазы нуклеиновых кислот), участвующего в эпигенетической регуляции метаболических процессов [25].
Отрицательная дифференциальная экспрессия гена Ugt2b37 (изоформа УДФ-глюкуронозилтранс-феразы) под действием Q во 2-й и 4-й группах может свидетельствовать о снижении функции детоксика-ции эндогенных гидрофобных метаболитов, включая липиды, гиперпродукция которых может протекать на фоне жировой дегенерации печени [26]. Важно отметить, что данный результат качествен-
но согласуется с данными полнотранскриптомного профилирования.
Пероксиредоксин, кодируемый геном Prdxl (ти-олзависимой пероксидазы, регулятора внутриклеточного Red/Ox гомеостаза), участвует в окислительно-восстановительной регуляции клетки и играет важную роль в устранении пероксидов, образующихся в процессах метаболизма, регулируя внутриклеточные концентрации H2O2. Также белок может разрушать внутримолекулярную дисульфидную связь в GDPD5 (глицерофосфодиэфирный фосфодиэстеразный домен 5), которая обеспечивает способность GDPD5 управлять дифференцировкой постмитотических моторных нейронов [27]. Уровень экспрессии гена Prdxl у крыс, получавших Q на фоне ВУВЖД, был повышен в 2 раза в сравнении с контролем. Таким образом, можно предположить прямое влияние Q на экспрессию гена, кодирующего пероксиредоксин, при повышенном количестве пероксидов, образующихся в ходе перекисного окисления липидов на фоне потребления насыщенного жирами ВУВЖД.
Экспрессия гена орексигенного нейропептида NpY, отвечающего у грызунов за гиперфагию и развитие ожирения [28], достоверно подавляется при потреблении ВУВЖД, а Q, по-видимому, отменяет этот эффект. Причем в отличие, например, от гипоталамуса, подобный эффект дифференциальной транскрипции гена NpY в ткани печени был обнаружен впервые. Экспрессия гена NpY у крыс, склонных к развитию алиментарного ожирения, находится под контролем эпигенетических факторов [29].
Фермент карнитин-октаноилтрансфераза, кодируемый геном Crot, катализирует обратимый перенос ацильных групп жирных кислот между коэнзимом А и карнитином, что обеспечивает транспортировку средне- и длинноцепочечных молекул ацил-CoA из пероксисом в цитозоль и митохондрии [30]. Повышение уровня экспрессии этого гена в 3-й и 4-й группах позволяет предположить сопряженную с циклом Кребса активацию процессов р-окисления жирных кислот в митохондриях под действием избыточных количеств экзогенных жиров, получаемых с ВУВЖД.
Заключение
На модели крыс самцов Zucker-LEPRfa, генетически склонных к развитию ожирения вследствие нарушенной рецепции лептина, показано, что Q или/и ВУВЖД значимо меняют уровни транскрипции 1604 генов в ткани печени, из которых эффект собственно Q проявляется для 1396 генов. Изменения в транс-криптоме ткани печени, вызываемые ВУВЖД, выражены значительнее, чем обусловленные добавкой Q на фоне стандартного рациона. С помощью количественной ПЦР-ОТ установлено, что Q влияет на экспрессию генов, отвечающих за процессы деток-сикации ксенобиотиков (UGT2b37), редокс-гомео-
стаз (РгаХ1), бета-окисления жирных кислот (Сгог) и центральные механизмы регуляции чувств голода и насыщения (ЛрТ), а также потенцирует, либо отменяет эффекты ВУВЖД в отношении ряда других функционально значимых генов. Биоинформатический анализ выявил влияние потребления ВУВЖД и/или р на 23 метаболических пути (KEGGS), из которых 7 [метаболизм стероидов, арахидоновой и линоле-вой кислот, ретиноидов, лекарственных препаратов и ксенобиотиков (под действием цитохрома Р-450), секреции желчи] были затронуты во всех подопытных группах. Изменения в транскриптоме печени крыс Хискех-ЬЕРИа, вызванные потреблением ВУВЖД
и/или р, согласуются с экспериментальными данными об изменении показателей краткосрочной памяти, тревожности и минерального обмена у этих животных. Выявленные при анализе дифференциальной экспрессии генов ключевые маркеры путей метаболизма стероидов, арахидоновой и линолевой кислот, ретиноидов, лекарственных препаратов и ксенобиотиков (под действием цитохрома Р-450), и секреции желчи могут быть использованы при доклинических испытаниях фармакологических препаратов и специализированных функциональных пищевых продуктов, предназначенных для коррекции обменных нарушений при ожирении.
Дополнительная информация
Дополнительные материалы к статье Рис. 2. Диаграммы рассеяния «Volcano plots» дифференциальной экспрессии генов в группах животных 2-й (а), 3-й (б) и 4-й (в) в сравнении с 1-й группой.
Доступен на цветной вклейке и в сети Интернет: https://doi.org/10.14341/probl9936-3229.
Рис. 4. Сравнительные изменения в метаболическом пути STEROID HORMONE BIOSYNTHESIS у крыс Zucker-LEPRa 2-й группы (а), 3-й (б) и 4-й (в) в сравнении с 1-й группой.
Доступен на цветной вклейке и в сети Интернет:
а — https://doi.org/10.14341/probl9936-3231
б — https://doi.org/10.14341/probl9936-3421
в — https://doi.org/10.14341/probl9936-3422
Источник финансирования. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант РНФ № 17-16-01043).
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи. Участие авторов: полнотранскриптомный анализ на микрочипе — Н.В. Трусов; разработка дизайна эксперимента, проведение ПЦР в режиме реального времени, написание статьи (разделы «Методы», «Результаты») — С.А. Апрятин; проведение биоинформатиче-ского анализа — А.Ю. Горбачев, В.А Наумов.; работа с животными, выделение мРНК из ткани печени, проведение обратной транскрипции — К.В. Мжель-ская; разработка общей концепции исследования, сбор и анализ данных литературы, статистическая обработка и интерпретация данных, написание статьи (разделы «Введение», «Обсуждение», «Заключение») — Гмошинский И.В. Все авторы внесли значимый вклад в проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию статьи перед публикацией.
Благодарности. Авторы благодарят к.м.н., главного специалиста ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» Хорхе Селада Сото за предоставленные данные биохимического исследования плазмы крови.
AMTEPATYPA
1. Deck CA, Honeycutt JL, Cheung E, et al. Assessing the functional role of leptin in energy homeostasis and the stress response in vertebrates. Front Endocrinol (Lausanne). 2017;8:63.
doi: https://doi.org/10.3389/fendo.2017.00063
2. Hsu TM, Hahn JD, Konanur VR, et al. Hippocampus ghrelin signaling mediates appetite through lateral hypothalamic orexin pathways. Elife. 2015;4.
doi: https://doi.org/10.7554/elife.11190
3. Bojanowska E, Ciosek J. Can we selectively reduce appetite for energy-dense foods? An overview of pharmacological strategies for modification of food preference behavior. Curr Neuropharmacol. 2016;14(2):118-142.
doi: https://doi.org/10.2174/1570159x14666151109103147
4. Ouchi N, Parker Jl, Lugus Jj, Walsh K. Adipokines in inflammation and metabolic disease. Nat Rev Immunol. 2011;11(2):85-97.
doi: https://doi.org/10.1038/nri2921
REFERENCES
5. Londraville RL, Prokop JW, DuffRJ, et al. On the molecular evolution of leptin, leptin receptor, and endospanin. Front Endocrinol (Lausanne). 2017;8:58.
doi: https://doi.org/10.3389/fendo.2017.00058
6. Pedroso JA, Silveira MA, Lima LB, et al. Changes in leptin signaling by Socs3 modulate fasting-induced hyperphagia and weight regain in mice. Endocrinology. 2016;157(10):3901-3914.
doi: https://doi.org/10.1210/en.2016-1038
7. Schaab M, Kratzsch J. The soluble leptin receptor. Best Pract Res Clin EndocrinolMetab. 2015;29(5):661-670.
doi: https://doi.org/10.1016/j.beem.2015.08.002
8. Lopez-Jaramillo P, Gomez-Arbelaez D, Lopez-Lopez J, et al. The role of leptin/adiponectin ratio in metabolic syndrome and diabetes. Horm Mol Biol Clin Investig. 2014;18(1):37-45.
doi: https://doi.org/10.1515/hmbci-2013-0053
9. Perez-Perez A, Vilarino-Garcia T, Fernandez-Riejos P, et al. Role of leptin as a link between metabolism and the immune system. Cytokine Growth Factor Rev. 2017;35:71-84.
doi: https://doi.org/10.1016Zi.cytogfr.2017.03.001
10. Kobori M, Masumoto S, Akimoto Y, Oike H. Chronic dietary intake of quercetin alleviates hepatic fat accumulation associated with consumption of a western-style diet in C57/Bl6J mice. Mol Nutr Food Res. 2011;55(4):530-540.
doi: https://doi.org/10.1002/mnfr.201000392
11. Panchal SK, Poudyal H, Brown L. Quercetin ameliorates cardiovascular, hepatic, and metabolic changes in diet-induced metabolic syndrome in rats. J Nutr. 2012;142(6):1026-1032.
doi: https://doi.org/10.3945/jn.111.157263
12. Edwards RL, Lyon T, Litwin SE, et al. Quercetin reduces blood pressure in hypertensive subjects. J Nutr. 2007;137(11):2405-2411. doi: https://doi.org/10.1093/jn/137.11.2405
13. Castrejon-Tellez V, Rodriguez-Perez JM, Perez-Torres I, et al. The effect of resveratrol and quercetin treatment on PPAR mediated uncoupling protein (UCP-) 1, 2, and 3 expression in visceral white adipose tissue from metabolic syndrome rats. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi: https://doi.org/10.3390/yms17071069
14. Agilent Total Rna Isolation Mini Kit Protocol. 5th Ed. 2015.
15. One-Color Microarray-Based Gene Expression Analysis Low Input Quick Amp Labeling. 2015.
16. Benjamini Y, Hochberg Y. Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing. J R Statist Soc B. 1995;57(1):289-300.
17. Mzhel'skaya KV, Shipelin VA, Shumakova AA, et al. Effects of quercetin on neuromotor function and behavioral responses of the Zucker rats on a high-fat and highcarbohydrate diet. In: Proceedings of the 25th multidisciplinary international neuroscience and biological psychiatry conference «Stress, Brain and Behavior». Saint-Petersburg, 16—18 May 2018. Saint-Petersburg. 2018;41.
18. Tomankova V, Anzenbacher P, Anzenbacherova E. Effects of obesity on liver cytochromes P450 in various animal models. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 2017;161(2):144-151. doi: https://doi.org/10.5507/bp.2017.026
19. Mattsson C, Rask E, Carlstrom K, et al. Gender-specific links between hepatic 11beta reduction of cortisone and adipokines. Obesity (Silver Spring). 2007;15(4):887-894.
doi: https://doi.org/10.1038/oby.2007.587
20. Tomlinson JW, Stewart PM. The functional consequences of 11be-ta-hydroxysteroid dehydrogenase expression in adipose tissue. Horm Metab Res. 2002;34(11-12):746-751.
doi: https://doi.org/10.1055/s-2002-38242
21. Jeyakumar SM, Vajreswari A. Vitamin A as a key regulator of obesity and its associated disorders: evidences from an obese rat model. Indian J Med Res. 2015;141(3):275-284.
doi: https://doi.org/10.4103/0971-5916.156554
22. Chen HW, Tsai CW, Yang JJ, et al. The combined effects of garlic oil and fish oil on the hepatic antioxidant and drug-metabolizing enzymes of rats. Br J Nutr. 2003;89(2):189-200.
doi: https://doi.org/10.1079/bjn2002766
23. Burke JR, Enghild JJ, Martin ME, et al. Huntingtin and DRPLA proteins selectively interact with the enzyme GAPDH. Nat Med. 1996;2(3):347-350.
doi: https://doi.org/10.1038/nm0396-347
24. Torrente Y, Belicchi M, Sampaolesi M, et al. Human circulating AC133(+) stem cells restore dystrophin expression and ameliorate function in dystrophic skeletal muscle. J Clin Invest. 2004; 114(2):182-195. doi: https://doi.org/10.1172/jci20325
25. Boissel S, Reish O, Proulx K, et al. Loss-of-function mutation in the dioxygenase-encoding FTO gene causes severe growth retardation and multiple malformations. Am J Hum Genet. 2009;85(1):106-111. doi: https://doi.org/10.1016/j.ajhg.2009.06.002
26. Beaulieu M, Levesque E, Hum DW, Belanger A. Isolation and characterization of a novel CDNA encoding a human UDP-glucuro-nosyltransferase active on C19 steroids. J Biol Chem. 1996;271(37): 22855-22862. doi: https://doi.org/10.1074/jbc.271.37.22855
27. Hirotsu S, Abe Y, Okada K, et al. Crystal structure of a multifunctional 2-Cys peroxiredoxin heme-binding protein 23 KDA/ Proliferation-associated gene product. Proc Natl Acad Sci USA. 1999;96(22):12333-12338.
doi: https://doi.org/10.1073/pnas.96.22.12333
28. Vahatalo LH, Ruohonen ST, Ailanen L, Savontaus E. Neuropeptide Y in noradrenergic neurons induces obesity in transgenic mouse models. Neuropeptides. 2016;55:31-37.
doi: https://doi.org/10.1016/j.npep.2015.11.088
29. Kim YJ, Bi S. Knockdown of neuropeptide Y in the dorsomedial hypothalamus reverses high-fat diet-induced obesity and impaired glucose tolerance in rats. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2016;310(2):R134-R142.
doi: https://doi.org/10.1152/ajpregu.00174.2015
30. Ferdinandusse S, Mulders J, L IJ, et al. Molecular cloning and expression of human carnitine octanoyltransferase: evidence for its role in the peroxisomal beta-oxidation of branched-chain fatty acids. Biochem BiophysRes Commun. 1999;263(1):213-218.
doi: https://doi.org/10.1006/bbrc.1999.1340
Рукопись получена: 08.10.18 Одобрена к публикации: 30.11.2018
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
*Апрятин Сергей Алексеевич — к.б.н. [Sergey A. Apryatin, PhD]; адрес: 109240 Москва, Устьинский проезд, д. 2/14 [address: 2/4, Ustyinsky proyezd, Moscow, Russia 109240]; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6543-7495; elibrary SPIN-код: 4250-2758; e-mail: [email protected] Трусов Никита Вячеславович [Nikita V. Trusov]; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-1919-9297; elibrary SPIN-код: 5182-2665; e-mail: [email protected]
Горбачев Алексей Юрьевич — к.б.н. [Aleksey Yu. Gorbachev, PhD]; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2743-5835; elibrary SPIN-код: 36309218; e-mail: [email protected]
Наумов Владимир Александрович [Vladimir A. Naumov]; elibrary SPIN-код: 9218-7997; e-mail: [email protected];
Мжельская Кристина Владимировна [Kristina V. Mzhelskaya]; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0723-5860; elibrary SPIN-код: 8608-1400;
e-mail: [email protected];
Гмошинский Иван Всеволодович — д.б.н. [Ivan V. Gmoshinski, PhD]; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3671-6508; elibrary SPIN-код: 4501-9387; e-mail: [email protected]
КАК ЦИТИРОВАТЬ:
Трусов Н.В., Апрятин С.А., Горбачев А.Ю., Наумов В.А., Мжельская К.В., Гмошинский И.В. Влияние гиперкалорийного рациона и кверцетина на полнотранскриптомный профиль ткани печени крыс линии Zucker-LEPRfa. // Проблемы эндокринологии. — 2018. — Т. 64. — № 6. — С. 371-382. doi: https://doi.org/10.14341/probl9936
TO CITE THIS ARTICLE:
Trusov NV, Apryatin SA, Gorbachev AY, Naumov VA, Mzhelskaya KV, Gmoshinski IV. The effect of hypercaloric diet and Quercetin on the full-transcriptome liver tissue profile of Zucker-LEPRfarats. Problems of Endocrinology. 2018;64(6):371-382. doi: https://doi.org/10.14341/probl9936
