CC BY
20
© Коллектив авторов, 2019. УДК 616-001.26+582.272.119
DOI: 10.5281/zenodo.3262062
Л.А. Иванушко1, О.С. Маляренко2, А.Л. Шутикова1, Е.Л. Чайкина2, С.П. Ермакова2. ВЛИЯНИЕ ФУКОИДАНА НА ПОКАЗАТЕЛИ КРОВЕТВОРЕНИЯ СУБЛЕТАЛЬНО ОБЛУЧЕННЫХ МЫШЕЙ
1НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова, Владивосток;
2Тихоокеанский институт биоорганической химии имени Г.Б. Елякова ДВО РАН, Владивосток.
Фукоидан представляет собой сульфатированный полисахарид, выделенный из бурой водоросли. Fucus evanescens обладает различными биологическими эффектами, включая антикоагулянтную, антивирусную, анти-оксидантную, иммуномодулирующую и противоопухолевую активность. Целью данной работы является определение способности фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens (FeF) восстанавливать пролифера-тивную функцию кроветворных органов и восстанавливать кроветворную систему сублетально облученных мышей. Было показано, что профилактические и терапевтические схемы лечения FeF (100 мг/кг массы тела) способствуют более раннему восстановлению пролиферативной функции кроветворных органов за счет значительного увеличения количества макроколоний селезенки, массы селезенки и клеточность тимуса на 9 сутки после рентгеновского облучения. Фукоидан, вводимый подкожно через час после облучения, в значительной степени способствует более раннему и полному восстановлению кроветворения у мышей, подвергшихся облучению с летальным исходом. Сульфатированный полисахарид водорослей может быть перспективным соединением в качестве средства раннего лечения острой лучевой болезни.
Ключевые слова: бурые водоросли; фукоидан; острая лучевая болезнь; эндогенные колонии; кроветворные показатели; кроветворение.
Для цитирования: Иванушко Л.А., Маляренко О.С. Шутикова А.Л., Чайкина Е.Л., Ермакова С.П. Влияние фукоидана на показатели кроветворения сублетально облученных мышей // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2019; 2(78): 45-50. DOI: 10.5281/zenodo.3262062
Для корреспонденции: Иванушко Людмила Алексеевна, e-mail: l.iva_57@mail.ru.
Поступила 22.06.19 Принята 05.07.19
L.A. Ivanushko1, O.S. Malyarenko2, A.L. Shutikova1, E.L. Chaikina2, S.P. Ermakova2
THE EFFECT OF FUCOIDAN ON HEMATOPOIETIC CELLS OF SUBLETHAL IRRADIATED MICE
1G.P. Somova Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Vladivostok, Russia;
2G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Far East Branch of Russian Academy of Sciences, Vladivostok, Russia.
Fucoidan is a sulfated polysaccharide isolated from brown alga Fucus evanescens, has a variety of biological effects including anticoagulant, antivirus, antioxidant, immunomodulating, and anticancer activities. The aim of this work is to determine the ability of fucoidan from brown alga Fucus evanescens to restore of the proliferative function of the blood-forming organs and recover of the hematopoietic system of sub-lethally irradiated mice. It was shown that preventive and therapeutic schemes of treatment by FeF (100 mg/kg of body weight) promotes an earlier restoration of the proliferative function of the blood-forming organs through a significant increase in the number of macrocolonies of the spleens, spleen mass, and thymus cellularity on 9th day after X-ray irradiation. Fucoidan subcutaneously administered in hour after irradiation greatly contribute to an earlier and complete recovery of blood formation in sub-lethally irradiated mice. Algal sulfated polysaccharide might be promising compound as a means of early treatment of acute radiation sickness.
Key words: brown algae; fucoidan; acute radiation sickness; endogenous colonies; hematopoietic indicators; blood formation.
For citation: Ivanushko L.A., Malyarenko O.S, Shutikova A.L, Chaikina E.L., Ermakova S.P. The effect of fukoidan on hematopoetic cells of sublethal irradiated mice. Health. Medical ecology. Science. 2019; 2 (78): 45-50. DOI: 10.5281/zenodo.3262062
For correspondence: Ivanushko L.A., e-mail: l.iva_57@mail.ru.
Conflict of interests. The authors are declaring absence of conflict of interests.
Financing. This work was supported by the grant of the Russian Science Foundation No 16-14-10131 «Development of unique radioprotectors based on substance from aquatic organism of the seas of the Russian Far East».
Received 22.06.19 Accepted 05.07.19
Введение
Основное направление исследований в радиационной медицине в настоящее время направлено на поиск средств ускорения и усиления процессов пострадиационного восстановления, прежде всего в кроветворной и иммунной системе [1]. Обоснованием для выбора фукоидана послужили ранее проведенные исследования, в ходе которых было установлено, что сульфатированные полисахариды имеют низкую токсичность и обладают иммуномо-дулирующими, антиопухолевыми и антиинфекционными свойствами [2]. Радиопротекторное действие фукоиданов последнее время исследуется достаточно интенсивно. Показано, что фукоиданы обладают ярко выраженным радиопротекторным действием [3].
Ранее Tawfik et al показали, что профилактическое введение per os крысам фукоидана (в течении 10 дней до облучения) оказывает защитное действие на клетки кроветворной и иммунной системы после облучения, что связано с подавлением радиационно-индуцирован-ного апоптоза в популяции эритроидных, лимфоидных и миелоидных клеток [4]. Также фукоидан подавляет свободно-радикальное окисление, индуцированное облучением [4] и, являясь антиоксидантом, защищает внешние оболочки иммунных клеток и клеток крови [5]. Однако в исследованиях часто используются фу-коиданы с неустановленной структурой, что снижает значимость полученных авторами результатов изучения их биологического действия.
Целью данного исследования является изучение влияние структурно-охарактеризованного фукоидана из F. evanescens на восстановления радиационно-ин-дуцированной гемопоэтической супрессии в постлучевом периоде у облученных мышей.
Материалы и методы
Исследуемые препараты
В работе использовали фукоидан с молекулярной массой 130-430 кДа, выделенный из бурой водоросли Fucus evanescens (FeF). Структура FeF была установлена в ТИБОХ ДВО РАН после интерпретации 1D и 2D спектров 1Н и 13С-ЯМР продуктов его десульфа-тирования, дезацетилирования и метилирования. Фукоидан из бурой водоросли Fucus evanescens состоит из 1—и 1—4-связанных остатков a-L-фукозы. Полисахарид сульфатирован главным образом по С2 и в меньшей степени по С4. Ацетильные группы занимают свободное положение при С4. Фукоидан содержит минорные остатки моносахаридов, такие как галактоза и ксилоза, молярное соотношение которых составило
Fuc:Gal:Xyl:0SOïS°3 1:0,03:0,01:1,2 соответственно
[2, 6, 7].
Животные
Эксперименты проводились на мышах-самцах линии C57BL/6 массой 18-20 г, содержавшихся в стандартных условиях вивария на стандартном рационе. Работа выполнена с соблюдением правил и международных рекомендаций Европейской конвенции «О защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 1986). Все животные путем случайной выборки были разделены на 4 группы. В каждой экспериментальной группе было по 6 животных. Перед опытами мыши находились на карантине в течение 2 недель.
Необлученным животным вводили только физиологический раствор (физраствор) однократно подкожно - 1 группа; животным контроля облучения вводили физраствор однократно подкожно - 2 группа. Животным опытных групп вводили однократно подкожно FeF в дозе 100 мг/кг в 0,5 мл физраствора за 24 часа до облучения (профилактическая схема) - 3 группа или через 1 час после облучения (лечебная схема) - 4 группа.
Облучение животных
Мышей облучали однократно рентгеновским излучением в дозе 7 Гр с использованием системы для рентгеновского облучения XPERT 80 (KUB Technologies, Inc, Milford, CT, USA) при мощности дозы 0,36 Гр/мин, напряжении 50 кВ, силе тока 1 мА.
Определение количества эндогенных колоние-образующих единиц в селезенке (КОЕс).
С этой целью применяли метод J. Till и E.A. McCulloch эндогенных селезеночных колоний [8]. Мышей линии C57BL/6 облучали однократно в дозе 7 Гр. Мышам опытных групп FeF вводили за 24 часа до облучения или через 1 час после облучения однократно подкожно в дозе 100 мг/кг. На 9 сутки после облучения животных выводили из опыта с использованием эфирного наркоза, извлекали селезёнки, фиксировали в растворе Карнуа без хлороформа: спирт (96%) - 3 части и ледяная уксусная кислота - 1 часть, а затем подсчитывали число макроскопически видимых на поверхности селезёнки колоний. Параллельно подсчитывали количество лейкоцитов периферической крови, измеряли массу селезенки и тимуса, определяли количество ядросодержащих (ЯСК) клеток тимуса во всех экспериментальных группах. Для этого селезенку и тимус извлекали, взвешивали, затем гомогенизировали в физиологическом растворе, фильтровали через капроновый фильтр и подсчитывали количество ядросодер-жащих клеток (ЯСК) в камере Горяева.
Определение влияние FeF на динамику восстановления показателей гемопоэза при ОЛБ
Мышей линии C57BL/6 облучали однократно в дозе 7 Гр, через 1 час после облучения животным опытных групп вводили FeF однократно подкожно в дозе 100 мг/ кг в 0,5 мл физраствора. Мыши контрольной группы получали только эквивалентное количество физраствора. Животных умерщвляли на 1, 5, 15, 23 и 30 сутки после облучения, подсчитывали количество лейкоцитов периферической крови, содержание ЯСК тимуса и параллельно исследовали действие FeF на динамику массы и клеточности лимфоидных органов (тимуса и селезенки). Для этого селезенку и тимус извлекали, взвешивали, затем гомогенизировали, фильтровали через капроновый фильтр и подсчитывали количество ядросодержащих клеток (ЯСК) в камере Горяева.
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программы «Statistica-10». Для всех данных были подсчитаны средние арифметические значения и их стандартные отклонения (M±m). Для определения значимости межгрупповых различий был использован односторонний анализ дисперсии (ANOVA). Уровень статистической значимости был установлен при p<0,05.
Представленные результаты свидетельствуют о том, что FeF при профилактическом и лечебном применении способствует более раннему восстановлению про-лиферативной функции кроветворных органов, что подтверждается на 9 сутки значительным увеличением числа макроколоний на селезенках, массы селезенки, клеточности тимуса. Более высокую противолучевую активность по показателям эндогенного колониеобра-зования и количества лейкоцитов периферической крови FeF показал при лечебной схеме применения.
В следующей серии экспериментов проведено изучение влияния FeF, как средства раннего лечения, на пострадиационную динамику восстановления количества лейкоцитов периферической крови, массы и клеточности лимфоидных органов мышей.
Полученные результаты
На табл. 1 показано, что в условии профилактического введения FeF (за 24 ч до радиационного воздействия) количество эндогенных КОЕс в 3,9 раза превышало показатели контрольной группы. При введении через 1 час после облучения (лечебная схема) FeF предотвращал снижение количества эндогенных КОЕс-С9 в 5,8 раза. Масса селезенки во всех группах облучения на 9 сутки статистически значимо не отличалась от этого показателя у необлученных мышей, но как при профилактической, так и при лечебной схеме введения FeF достоверно превышала таковую в группе контроля облучения. Масса тимуса во всех исследуемых группах на 9 сутки оставалась на уровне интактного контроля. Количество тимоцитов в группе животных, облученных в дозе 7 Гр и не получивших FeF было значимо ниже необлученного контроля (1,5 раза). Профилактическое и лечебное применение приводило к статистически значимому восстановлению клеточности тимуса в сравнении с облученным контролем. Общее количество лейкоцитов периферической крови на 9 сутки после облучения во всех опытных группах было ниже необлученного контроля в 2,3-5 раза. Только при лечебной схеме применения FeF общее количество лейкоцитов было в 2 раза выше облученного контроля.
Таблица 1
Через сутки после облучения отмечалось выраженное снижение общего количества лейкоцитов периферической крови у облученных мышей в сравнении с необлученным контролем (табл. 2). При этом выраженность лейкопении у мышей контрольной группы была большей (до 5.2%), чем у животных, леченых FeF через 1 час после облучения (до 10%). На 5 сутки после облучения наблюдался незначительный подъем количества лейкоцитов периферической крови мышей как в контроле облучения, так и в группе облученных и получивших FeF. На 15 сутки количество лейкоцитов в контрольной группе восстанавливалось до 26%, в группе животных, получивших FeF - до 38,5% (р < 0,05). На 23 сутки после облучения общее количество лейкоцитов периферической крови в группе мышей,
Влияние FeF на показатели кроветворения мышей, облученных в дозе 7 Гр на 9 сутки после облучения
Показатель Условия эксперимента
Необлученные контроль (1 гр.) Контроль облучения (2 гр.) FеF за 24 ч до облучения (3 гр.) FеF через 1 ч после облучения (4 гр.)
Эндогенные КОЕс 5,4±1,5 21±5,6* 36,1±6,6*
Масса селезенки (мг) 77,6±8,5 62,2±6,5 84,4±4,9* 86,2±8,6*
Масса тимуса (мг) 56,6±7,2 50,2±3,3 47,4±5,3 47,2±7,1
Клеточность тимуса (106) 106,5±19,4 71,25±6,3# 95,5±12,1* 88,5±8*
Кол-во L периферической крови (109/л ) 4,5±1,5 0,9±0,2# 1,1±0,1# 2,0±0,62*#
Примечание: *р<0,05 в сравнении с облученным контролем; #р<0,05 в сравнении с необлученным контролем
получавших FeF восстанавливалось до уровня не-облученного контроля и оставалось на этом уровне до окончания наблюдения (30 сут.), в то время как в контроле облучения на 23 сутки сохранялась лейкопения на уровне 32% от исходных показателей. К 30 суткам
наблюдения количество лейкоцитов периферической крови облученных и не получавших FeF животных значительно возросло (до 168%), что может быть отражением развития инфекционных осложнений в данной группе животных (табл. 2).
Таблица 2
Динамика восстановления общего числа лейкоцитов (Л) в периферической крови мышей, подвергнувшихся однократному рентгеновскому облучению в дозе 7 Гр при лечебном (через 1 ч) применении FeF в дозе 100 мг/кг
Условия эксперимента Сроки исследования, сутки
1 5 15 23 30
Необлученный контроль, Л х 109/л 5,81±1,16
Контроль облучения, Л х 109/л 0,3± 0,05# 0,675 ±0,14# 1,5 ±0,25# 1,85± 0,83# 9,75± 2,44#
Облучение + FeF 0,53± 0,15*# 0,65 ±0,177# 2,0± 0,3*# 5,07± 2,76* 5,69± 2,49*
Примечание: *р<0,05 в сравнении с облученным контролем; #р<0,05 в сравнении с необлученным контролем
Как показано в табл. 3, через сутки после облучения масса селезенки мышей в контроле облучения и группе облученных и леченых FeF уменьшалась незначительно (до 69,4% и 70% соответственно). На 5-е сутки у облученных мышей масса органа уменьшилась до 48%,
мышей, получивших FeF - до 62,3% (р<0,05 табл. 3). В последующие сроки исследования - на 15, 23 и 30 сутки - во всех группах наблюдалось восстановление массы органа, более выраженное у животных, леченых FeF (табл. 3).
Таблица 3
Динамика восстановления массы селезенки (мг) мышей, подвернувшихся однократному рентгеновскому облучению в дозе 7 Гр при лечебном (через 1 ч) применении FeF в дозе 100 мг/кг
Условия эксперимента Сроки исследования (сутки)
1 5 15 23 30
Необлученный контроль 60,4±6,86
Контроль облучения 39,2± 6,24# 29± 1,26# 75 ±9,2 74,1 ±14,66 82.5±12.2
Облучение+ FeF 42,2± 9,11# 37 ±3,35*# 85,2 ±3,7* 119,4 ±36,2*# 122,0± 29,3*#
Примечание: *р<0,05 в сравнении с облученным контролем; #р<0,05 в сравнении с необлученным контролем
Содержание спленоцитов у облученных мышей через сутки после облучения значительно уменьшалось - до 30,3% от исходного уровня, у животных, получивших FeF это значение было несколько выше (39,4%). На 5-и сутки количество ЯСК селезенки в группе облученного контроля составило - 28,8%, в группе животных, лече-
ных FeF - 29,8% от исходных величин (табл.4). В последующие сроки исследования - на 15, 23 и 30 сутки - отмечалось восстановление клеточности селезенки во всех группах, однако, у животных опытных групп эти значения статистически значимо преобладали над аналогичными в контрольной группе (табл.4).
Таблица 4
Динамика восстановления клеточности селезенки (106) мышей, подвернувшихся однократному рентгеновскому облучению в дозе 7 Гр при лечебном (через 1 ч) применении FeF в дозе 100 мг/кг
Условия эксперимента Сроки исследования (сутки)
1 5 15 23 30
Необлученный контроль 139 ±10,47
Контроль облучения 42,125±8,2# 40± 6,89# 126,87 ±11,7 132,5± 48,21 129,7±31,4
Облучение+ FeF 54,75 ±10,4 *# 41,37± 16,55# 131± 7,9 195,6±29,26*# 189,3±41,2*#
Примечание: *р0<,05 в сравнении с облученным контролем; #р<0,05 в сравнении с необлученным контролем
Как видно из табл. 5, через сутки после облучения масса тимуса снижалась у мышей контрольной группы до 65,9%, в опытной группе наблюдалось незначительное снижение массы тимуса (до 82,5%). Восстановление массы тимуса регистрировалось на 15 сутки. На
23 сут наблюдалось снижение массы тимуса в обеих группах с последующей тенденцией к восстановлению к 30 сут. Показатели у животных опытной группы эти значения статистически значимо преобладали над аналогичными в контрольной группе (табл.5).
Таблица 5
Динамика восстановления массы тимуса (мг) мышей, подвернувшихся однократному рентгеновскому облучению в дозе
7 Гр при лечебном (через 1 ч) применении FeF в дозе 100 мг/кг
Условия эксперимента Сроки исследования (сутки)
1 5 15 23 30
Необлученный контроль 51± 5,4
Контроль облучения 33,6 ±5,85# 36,6± 4,5# 43 ±7,28 14,2± 2,31# 18,68± 2,71#
Облучение+ FeF 45± 4,77* 32,6± 3,14# 65,2± 4,5*# 23,4 ±7,86*# 46± 2,18*
Примечание: *р0<,05 в сравнении с облученным контролем; #р<0,05 в сравнении с необлученным контролем
В табл. 6 показано, что уже в первые сутки после облучения отмечалось резкое снижение количества тимоцитов как в группе контроля облучения, так и в группе мышей, облученных и леченых FeF по сравнению с необлученным контролем (до 20,9% и 40,3% соответственно, р<0,05). Клеточность тимуса в группе контроля облучения на 5 сутки не изменялась в сравнении с предыдущим показателем, в опытной группе количество тимоцитов снизилось до 24%.
Восстановление количества тимоцитов у животных получивших FeF отмечено к 15 суткам наблюдения, в то время как у мышей контрольной группы этот показатель составил 50.8%. На 23 сутки отмечалось снижение количества тимоцитов в обеих группах, с последующим повышением к 30 суткам. Количество ЯСК в течение всех сроков наблюдения в опытной группе превышало таковые показатели контрольной группы (табл. 6).
Таблица 6
Динамика восстановления клеточности тимуса (106) у мышей, подвернувшихся однократному рентгеновскому облучению в дозе 7 Гр при лечебном (через 1 ч) применении FeF в дозе 100 мг/кг
Условия эксперимента Сроки исследования (сутки)
1 5 15 23 30
Необлученный контроль 107,5± 22,15
Контроль облучения 22,5 ±4,37# 22,75± 7,61# 54,62 ±21,82# 12,07± 2,54# 28,9±6,4#
Облучение+ FeF 43,37± 13,24*# 25,25 ±7,61# 155,5±39,47* 30,62± 6,65*# 60,62± 6,65*#
Примечание: *р<0,05 в сравнении с облученным контролем; #р0<,05 в сравнении с необлученным контролем
Обсуждение
Зависимость тяжести и исхода острой лучевой болезни связана с характером лучевого поражения стволовых клеточных популяций критических тканей и систем организма. Ближайшим последствием радиационных повреждений является клеточное опустошение критических органов. Гемопоэтические стволовые клетки и самые ранние коммитированные предшественники гемопоэза отличаются максимальной радиочувствительностью и гибнут в первые часы и сутки после облучения [9]. Известно, что лейкопения, тром-боцитопения и эритропения развиваются у животных в результате облучения, что приводит к смерти. Решающим моментом для положительного исхода лучевой
болезни является скорость восстановления супресси-рованного кроветворения, зависящая от глубины первичного опустошения указанных популяций и выбора эффективного лечения, направленного на восстановление процессов постлучевой репарации.
Установлено, что у животных, получавших фукои-дан до облучения, показатели кроветворной системы улучшались. Авторы предполагают, что это возможно в результате проявления антиоксидантных свойств фукоидана. Другие группы исследователей также приходят к выводу, что фукоидан, являясь антиоксидантом, защищает внешнюю мембрану иммунных клеток и клеток крови от свободнорадикального окисления, вызванного облучением [4,5].
Заключение
Представленные результаты свидетельствуют о том, что фукоидан, выделенный из бурой водоросли Fucus evanescens с установленной структурой при профилактическом и лечебном применении способствует более раннему восстановлению пролиферативной функции кроветворных органов, что подтверждается на 9 сутки значительным увеличением числа макроколоний на селезенках; FeF введенный однократно подкожно через 1 час после облучения в дозе 100 мг/кг, способствует более раннему и полному восстановлению кроветворения у сублетально облученных мышей и, является перспективным препаратом в плане дальнейшего изучения его как средства раннего лечения острой лучевой болезни (ОЛБ).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 16-14-10131 «Разработка уникальных радиопротекторов на основе веществ из гидробионтов морей Дальнего востока России».
ЛИТЕРАТУРА
1. Баранов А.Е., Рождественский Л.М. Аналитический обзор схем лечения острой лучевой болезни, используемых в эксперименте и клинике. Радиационная биология. Радиоэкология. 2008; 48(3); 287-302.
2. Беседнова Н.Н., Звягинцева Т.Н. Фукоиданы -сульфатированные полисахариды бурых водорослей. Структура, ферментативная трансформация и биоло-
гические свойства. Владивосток: Дальнаука; 2014; 380 с.
3. Lee J., Kim J., Moon C., Kim S., Hyun J., Park J., Shin T. Radioprotective effects of fucoidan in mice treated with total body irradiation. Phytother. Res. 2008; 22; 16771681. DOI: 10.1002/ptr.2562.
4. Tawfik S.S., Salama S.F., Salama S.F.. Preventive Efficacy of Fucoidan in Rats Exposed to y-Rays. J of Radiat Res andAppl Scien, 2011; 4 (1В):233-244.
5. Kim H.J.,Kim M.H., Byon Y.Y., et al. Radioprotective effects of an acidic polysaccharide of Panax ginseng on bone marrow cells. J Vet Sci, 2007; 8: 39-44. DOI: 10.4142/ jvs.2007.8.1.39.
6. Anastyuk S.D., Shevchenko N.M., Dmitrenok P.S., Zvyagintseva T.N. Structural similarities of fucoidans from brown algae Silvetia babingtonii and Fucus evanescens, determined by tandem MALDI-TOF mass spectrometry. Carbohydr Res. 2012; 358: 78-81. DOI: 10.1016/j. carres.2012.06.015.
7. Anastyuk S.D., Shevchenko N.M., Nazarenko E.L, Dmitrenok P.S., Zvyagintseva T.N. Structural analysis of a fucoidan from the brown alga Fucus evanescens by MALDI-TOF and tandem ESI mass spectrometry. Carbohydr Res. 2009; 344(6): 779-787. DOI: 10.1016/j. carres.2009.01.023.
8. Till J.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells. Radiat Res. 1961; 14: 213-222.
9. Коноплянников А.Г. Радиобиология стволовых клеток. - М: Энергоатомиздат; 1984; 119.
Сведения об авторах
Иванушко Людмила Александровна, к.м.н., старший научный сотрудник лаборатории иммунологии НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П.Сомова, 690087; г. Владивосток, ул. Сельская, 1; e-mail: l.iva_57@mail.ru;
Маляренко Олеся Сергеевна, к.х.н., научный сотрудник; Тихоокеанский институт биоорганической химии им Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук; 690022, проспект 100 лет Владивостока, 159; malyarenko.os@gmail.com;
Шутикова Анна Леонидовна, к.м.н., научный сотрудник лаборатории клещевого энцефалита НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П.Сомова, г. Владивосток, ул. Сельская, 1;
Чайкина Елена Леонидовна, научный сотрудник; Тихоокеанский институт биоорганической химии им Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук; 690022, проспект 100 лет Владивостока, 159; chaykina@list.ru;
Ермакова Светлана Павловна, Svetlana P. Ermakova, д.х.н., ведущий научный сотрудник; Тихоокеанский институт биоорганической химии им Г.Б. Елякова ДВО РАН; 690022, проспект 100-летия Владивостока, 159; e-mail: ermakova@pivoc.dvo.ru
