CC BY
34
(И02,0±0,2), что дает основание предполагать, что ДНК преимущественно модулирует иммунный ответ по Т-клеточному типу.
Выводы
1. ДНК дозозависимо, в основном --10 и 100 мг/мл, умеренно стимулирует как спонтанную, так и митоге-ниндуцироваппую РБТЛ.
2. ДНК оказывает стимулирующее влияние на реакцию гиперчувствителыюсти замедленного типа. Наибольшая эффективность исследуемого вещества наблюдалась при введении за 3 сут и сутки до сенсибилизации мышей в дозе 10 мг/кг.
3. ДНК модулирует продукцию цитокинов клетками крови доноров in vitro: исходно низкая продукция цитокинов усиливается, исходно высокая ослабляется. В большей степени ДНК стимулирует продукцию IFNy(H02,6+0,7), нежели IL-10 (ИС=2,0±0,2), что даст основание предполагать, что препарат способствует развитию клеточного иммунного ответа.
4. Действие ДНК на Т-систему иммунитета обеспечивает се противоопухолевое действие в эксперименте при введении в соответствии с профилактической схемой в дозе 10 мг/кг и лечебной в дозе 100 мг/кг.
Литература
1. Барышников A.IO. // Практическая онкология. 2004. №3. С. 127-130.
2. Беседнова I I.H, Эпштейн Л.М. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок рыб: перспективы
клинического применения (в помощь практическому врачу). Владивосток: ТИНРО-ценгр, 2002. 38 с.
3. Каплина Э.Н., Вайнберг Ю.П. Деринат - природный иммуномодулятор для детей и взрослых. М.: Научная книга, 2005. 216 с.
4. Касьяпенко Ю.И., Эпштейн Л.М., Гажа А.К. и др.// Изв. ТИНРО. 1999. Т. 125. С. 139-146.
5. Пашук Л.К., Апрышко Е.М., Трещалина. // Хим. фарм. журн, 1995. Т. 29, №6. С. 61-64.
6. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М. и др. М.: Фармакол. комитет, 1984.
7. Рыкова Е.Ю., Лактионов П.П., Власов В.В. // Успехи современной биологии. 2001. Т. 121, №2. С. 160-171.
8. Серебрянная Н.Б., Новик А.А. // Медицинская иммунология. 2001. Т.З, № 1. С. 27-34.
9. Софьина З.П. // Вопр. онкологии. 1976. Т. 22, №4. С. 82-96.
10. Федянина Л.Н., Потапова В.В., Иванушко Л.А. и др. // Здоровье и образование: Мат-лы Междунар. науч.-практ. конф. Пермь, 2003. С. 281-283.
11. Фрешни Р. Культура животных клеток. Методы. М.: Мир, 1989. С. 319.
12. De Groote D., Zangerle P.P., Gevaert Y. et al. // Cytokine. 1992. Vol. 4. P. 239-248.
13. Haugland R.P. Handbook of fluorescence probes and research chemicals. Sixth edition. Ed. Spence M.T.Z. Molecular Probes, Inc. 1996. P. 307.
14. Lagrannge P.H., Mackaness J.B., Miller T.E. // Exp. Med. 1974.V. 139. P. 528-542.
□ □□
УДК 617.161 - 03 :616.33 - 08]: 615.038]: 616.092.9 Е.Н. Романова, Л.П. Малежик
ВЛИЯНИЕ ЭПИТАЛОНА НА ТЕЧЕНИЕ ОЖОГОВОЙ БОЛЕЗНИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Читинская государственная медицинская академия, г. Чита
Понятие “ожоговая болезнь” включает как местное поражение обожженной кожи, так и сложный комплекс вторичных общих преобразований. Очень важно, что изменения органов, вторичные по своему существу, часто приобретают самостоятельное значение, определяя течение и исход термического повреждения. Известно, что одним из наиболее тяжелых осложнений ожоговой травмы являются эрозивно-язвенные поражения желудочно-кишечного тракта (язвы Курлинга), часто сопровождающиеся кровоте-
чениями, приводящими к высокой летальности. Благодаря исследованиям Г. Селье (1953), была установлена патогенетическая общность поражений слизистой ЖКТ при различных травмах и операциях, и связано их происхождение с действием стресса различной природы [2].
Исходя из этого, необходима комплексная многокомпонентная терапия ожоговой болезни с включением препаратов, повышающих адаптационные возможности организма. С этой целью был использован
нейрогуморальный регулятор эпиталон (Ala-Glu-Asp-Glu), который сконструирован и синтезирован на основе пептидного препаратаэпиталамина, выделенного из эпифиза мозга животных [4].
Основная задача настоящего исследования заключалась в изучении влияния эпиталона на состояние слизистой желудка, показатели иммунитета и гемостаза при экспериментальной ожоговой травме у крыс.
Материалы и методы
Опыты выполнены на 102 белых беспородных крысах обоего пола весом 180-210 г. Под эфирным наркозом проводили деэпиляцию участка кожи на спине размером 5 3 см и контактный ожог этого участка. Термическое повреждение осуществляли с помощью нагре того металла с экспозицией 10 сек. У всех животных регистрировали ожоги 10-12% поверхности тела ШБ-IV ст., что подтверждали гистологическими исследованиями.
Крыс разделили на три группы ио 34 животных. Контролем служила 1 группа, крысам вводили физиологический раствор в дозе 1,0 мл. Во 2 и 3 группе применяли эпиталон в дозе 5 и 15 мкг/кг соответственно. Все препараты вводились внутримышечно 1 раз в сут в утрен н ие часы в течение 5 дн. Состояние животных оценивали на 2; 6 и 11 сут после нанесения ожога. О тяжести термического поражения судили по количеству острых эрозий слизистой желудка, состоянию системы гемокоагуляции и иммунитета.
Оценивали следующие параметры коагулограммы: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время, тромбиновое время, уровень фибриногена, содержание растворимых фиб-рин-мономерных комплексов (РФМК),эуглобулино-вый фибринолиз [1].
Иммунный статус экспериментальных животных оценивали на 5 сут первичного иммунного ответа путем определения титра антител к ксеногенным эритроцитам в реакциях гемагглютинации и гемолиза, подсчета числа антителообразующих клеток (АОК) селезенки [3J. В мазках периферической крови, окрашенных но Романовскому-Гимза, подсчитывали лейкоцитарную формулу.
Статистическую обрабо тку результатов осуществляли с использованием программы “Microsoft Excel” и “Биостат” (Москва).
Результаты и обсуждение
При макроскопическом исследовании желудка выявлены общие и местные изменения слизистой оболочки желудка на всех этапах эксперимента. На 2 сут после термического повреждения отмечен выраженный отек, гиперемия слизистой, точечные кровоизлияния на всем протяжении слизистой. Количество эрозий у животных, получавших эпиталон и физиологический раствор, практически не отличались. На б сут отек и гиперемия слизистой сохранялись, выраженность кровоизлияний уменьшилась. У животных, получавших эпиталон, число эрозивных поражений было меньше, с увеличением дозы тетрапептида положительный эффект возрастал. На 11 день уменьшилась выраженность общих и местных изменений, особенно у крыс 2 и 3 групп (рис.).
Резюме
Проведено исследование по изучению влияния нейрогуморального регулятора эпиталона (Ala-Glu-Asp-Glu) на состояние слизистой желудка, показатели иммунитета и гемостаза при экспериментальной ожоговой травме у крыс. Тетрапептид применяли в дозе 5 и 15 мкг/кг 1 раз в сутки в течение пяти дней. Выявлено, что эпиталон способен ограничивать стрессорное повреждение слизистой желудка, оказывает иммуностимулирующий эффект, способствует положительной динамике показателей коагулограммы, с увеличением дозы препарата эффекты выражены в большей степени.
E.N. Romanova, L.P. Malezhik
THE INFLUENCE OF EPITHALON ON THE COURSE OF BURN DISEASE DURING THE EXPERIMENT
Medical Academy, Chita Summary
The investigation on the study of influence of the neu-rohumoral regulator epithalon (Ala-Glu-Asp-Glu) on the state of stomach mucous indexes of immunity, hemostasis during the experimental thermic trauma of rats was held. Tetrapeptide was used in the dozens of 5 mcg/kg and 15 mcg/kg once a day for 5 days. It was determined, that epithalon can confine the stress injury of stomach mucous, provides immunostimulative effect, makes for the positive dynamics of the coagulogram's index. The effects are expressed in greater degree with increasing of the dozen of the preparation.
Таким образом, анализ макроскопической картины показал, что у крыс, леченных эпиталоном, патологические изменения в желудке были значительно менее выражены по сравнению с контрольной группой. С увеличением дозы тетрапептида положительный эффект возрастал, особенно на 6 сут.
В экспериментах на крысах, иммунизированных внутрибрюшинным введением эритроцитов барана, выявлено угнетение иммунного ответа, что было патогенетически обусловлено.
На 2 сут количество АОК в селезенке, титр гемаг-лютининов и гемолизинов, относительное содержание лимфоцитов было снижено у всех животных с незначительными отличиями между группами.
На 6 сут эксперимента зарегистрировано наиболее выраженное снижение показателей иммунитета в
. крысы, получавшие Щ физ.раствор
■ крысы, получавшие эпиталон а дозе 1 мкг
□ крысы, получавшие эпиталон в дозе 3 мкг
2 сут 6 сут 11 сут
Количество острых эрозий слизистой оболочки желудка у крыс н различные сроки после ожоговой травмы (р<0,05)
Состояние системы гемостаза крыс на б сут после термической травмы (М±ш)
Исследуемый показатель Интактные крысы Группы исследований
1 2 3
АЧТВ, сек 41,2+1,9 30,5+1,2* 33,8+0,9* Р! <0,05 34± 1,1* р,<0,05; р2>0,05
Протромбиновое время, сек 14,5±0,8 7,9±0,8* 10+0,6* р,<0,05 10,2±0,7* р.<0,05; р2>0,05
Тромбиновое время, сек 36,6±1,4 10,9+1,5* 25,5+1,6* р,<0,001 29,4±1,8* р,<0,001; р2>0,05
Фибриноген, сек 1,8±0,1 4±0,2* 3±0,2* Р,<0,01 2,8+0,3* р <0,01; р2>0,05
РФМК, мг/100 мл - 22+1,3* 18±1,3* р<0,05 10±1,5* р <0,001,• р2<0,001
Эуглобулиновый фибринолиз, мин 60±6, более 240* 240±30* р,<0,05 200±25* р <0,05; р2>0,05
Примечания. * — достоверные различия по сравнению с интакт-ными крысами; р, — показатель достоверности различий крыс, получавших физиологический раствор (1 группа) и эпиталон (2 и 3 группа); р2 — показатель достоверности различий между 2 и 3 группами.
группе животных, получавшей физиологический раствор, — снижение АОК на 70,8%, гемаглютининов на 54,5%, гемолизинов на 51,6%. Во 2 и 3 группах крыс изменения выражены в меньшей степени — снижение АОК на 59,7 и 53,9%, уменьшение титра гемаглю-тииинов на 40 и 18,2%, титра гемолизинов на 34,4 и 14,4%. Наблюдается увеличение процентного содержания лимфоцитов во всех группах, но наиболее выраженное у животных, получавших тетрапептид.
На 11 сут после ожога сохраняется снижение АОК в 1 группе на 67,5%, титра гемаглютининов на 43,6%, 'Титра гемолизинов на 39,1%. Во 2 группе содержание АОК меньше на 52,6%, титр гемаглютининов — на 23,7%, титр гемолизинов — на 29,1%. В 3 группе снижение АОК на 50,6%, титра гемаглютининов на 7,3% и титра гемолизинов на 4,7%. Содержание лимфоцитов во 2 и 3 группе приближено к норме, в то время как в 1 группе — лимфопения.
Все представленные данные подтверждают то, что при ожоговой травме развиваются значительные нарушения в системе иммунитета [5]. При введении эпиталона изменения со стороны показателей иммунного ответа были выражены в значительно меньшей степени, причем с увеличением дозы тетрапептида иммуностимулирующий эффект был более выражен.
Нарушение функции системы гемостаза и внутри-сосудистое свертывание крови являются компонентами патогенеза ожоговой болезни. Внутрисосудистое тромбообразование ведет к нарушению реологических свойств крови, микроциркуляции, что может быть триггером в механизме возникновений дистрофий и некрозов, как в области раны, так и в отдаленных от нее органах (желудочно-кишечный тракт, легкие, печень, почки) [2,5]. В наших экспериментах также вы-, явлены признаки хронической формы ДВС-синдрома.
Уже на 2 сут после ожоговой травмы зарегистрированы явления гиперкоагуляции, выразившиеся в
укорочении АЧТВ, тромбинового и протромбиново-го времени, удлинении тотального эуглобулинового фибринолиза, увеличении концентрации фибриногена, растворимых комплексов фибрин-мономеров. Показатели коагулограммы почти не отличаются у животных всех групп.
На 6 сут эксперимента выявлены самые глубокие расстройства в системе гемостаза у животных, получавших физиологический раствор: наряду с выраженной гиперкоагуляцией наблюдалось резкое торможение фибринолиза. Сократились АЧТВ на 26 %, протромбиновое время на 45,5%, тромбиновое — на 70,4%. Увеличилась концентрация фибриногена в 2,2 раза, продолжала нарастать концентрация РФМК, значительно затормозился эуглобулиновый фибри-нолиз — более чем в 5 раз. У животных, получавших эпиталон, изменения показателей гемостаза были выражены в меньшей степени, чем в контрольной группе. Наблюдалось сокращение АЧТВ на 17,5%, уменьшение протромбинового времени на 31,1 и 29,7%, тромбинового — на 30,2 и 19,7%, увеличение концентрации фибриногена в 1,6 и 1,5 раза, времени фибринолиза в 4 и 3,3 раза во 2 и 3 группах соответственно (таблица).
На 11 сут по сравнению с 6-ми явления гиперкоагуляции были выражены в меньшей степени, снизилась концентрация фибриногена, РФМК, сократилось время фибринолиза. Причем у животных, получавших лечение эпиталоном, все показатели улучшились в большей степени. В 1 группе экспериментальных животных отмечалось уменьшение АЧТВ на 22,9%, протромбинового времени на 41,4%, тромбинового — на 27,4%, концентрация фибриногена увеличена в 1,6 раза. Количество РФМК — 14±1,2 мг/100 мл.; замедление фибринолиза в 2,2 раза от исходного. Во 2 и 3 группах АЧТВ сократилось на 13,4 и 12,7%, протромбиновое время — на 31,8 и 30,4%, тромбиновое — на 19,7 и 18,1 %, увеличение концентрации фибриногена в 1,2 и 1,1 раза. Концентрация РФМК — 11+0,8 мг/100 мл; замедление фибринолиза в 2 раза от исходного уровня.
Сравнивая показатели гемостаза у животных на различных этапах, можно отметить, что на 6 сут после ожога выявлялись наиболее глубокие расстройства, особенно у животных, получавших физиологический раствор. У животных, леченных эпиталоном, на всех сроках эксперимента проявления ДВС-синд-рома были выражены в меньшей степени, причем с увеличением дозы положительный эффект возрастал.
Выводы
1. Нейрогуморальный регулятор эпиталон способен ограничивать стрессорное повреждение слизистой желудка, оказывает иммуностимулирующий эффект, способствует положительной динамике показателей системы гемостаза при ожоговой травме в эксперименте.
2. С увеличением дозы тетрапептида все вышеперечисленные эффекты выражены в большей степени.
Л итература
1. Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. М.: Нью-диамед, 2001. 285 с.
2. Вихрнев B.C. Ос трые хирургические заболевания органов пищеварения у обожженных. Л., 1985.160 с.
3. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фри-меля. М.: Медицина, 1987.
4. Кузпик Б.И., Морозов В.Г., Хавипсон В. X. Ци-
томедины (25-летиий опыт экспериментальных и клинических исследований). СПб.: Паука, 1998.310 с.
5. Сизоненко В.А., Варфоломеев А.Р. Биорегулирующая терапия при термической травме. Чита, 1999. 156 с.
□ □□
—
УДК 615.270.2. И.03:614.876
Г.И. Чубснко, В.А. Доровских, В.II. Гордиенко, О.В. Бубинец
КОРРЕКЦИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА ПРОИЗВОДНЫМИ ПИРИМИДИНА (ТВ-103) ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛУЧЕВОМ ВОЗДЕЙСТВИИ
Амурская государственная медицинская академия, г. Благовещенск
В условиях нормального функционирования организма антиоксидантная система обеспечивает сбалансированное протекание окислительных и антиокис-лителыгых процессов. При действии неблагоприятных факторов и избыточной активации эндогенных механизмов образования активных форм кислорода интенсивность окислительных реакций в организме повышается. Усиление свободнорадикальных реакций вызывает истощение механизмов антиоксидант -ной защи ты.
По данным литературы известно, что общее облучение сопровождается не только активацией свободнорадикальных реакций, но и усилением расходования эндогенных антиоксидантов, а также снижением активности антиоксидантных фермен тов (10.0. Те-селкин, 1999; Е.Р. Немцова, 2003).
Иммунная система является одной из наиболее чувствительных физиологических систем к острым и хроническим лучевым воздействиям. В связи с этим исследование влияния различных антиоксидантов на иммунологический статус в условиях хронического лучевого воздействия имеет существенное практическое и теоретическое значение.
Материалы и методы
Экспериментальные исследования были проведены на белых беспородных крысах, которые находились в стандартных условиях вивария. Животных ежедневно в течение 10 дней подвергали однократному тотальному у-облучению в дозе 0,1 г, суммарная доза составила 1,0 г. Исследовали группы животных по окончании облучения через 3, 15, 30 сут и облу-
Резюме
Проведены экспериментальные исследования, посвященные проблеме разработки и совершенствования лекарственных препаратов с антиоксидантным действием. Отмечены особенности иммунологического статуса у животных при хроническом лучевом воздействии и при применении антиоксидантного препарата (ТВ-103). Зарегистрирован положительный иммуномодулирующий эффект препарата. Исследования открывают перспективы использования антиоксиданта для защиты организма от реакций свободнорадикального окисления как при широком спектре заболеваний, так и при неблагоприятных воздействиях окружающей среды.
G.I. Chubenko, V.A. Dorovskikh, V.P. Gordienko, O.V. Bubinets
CORRECTION OF IMMUNOLOGICAL STATUS TROUGH THE CHRONICALLY EXPOSURE TO RADIATION BY PIRIMIDINE DERIVATIVES (TB-103)
Amur state medical academy, Blagoveshchensk Summary
There were experimental tests about the problem of ex-sploration and betterment remedies with antioxidantal affect. After the using antioxidantal remedy (TB-103) and influence of rays appeared the symptoms animal s immune status. The results of experiment arc positive . These investigations give us the perspectives to use antioxidant for protection organism from free-radical oxidation in a wide sphere of diseases and negative influence of environment.
