CC BY
18
Система дендритных клеток и ее роль в регуляции функциональной активности Т- и В- лимфоцитов человека
Ка.тдуе»а И.А., Мопсееико 11.М., Хппсоп К.II.
////// онкологии им.И.П.Петрова, Клинический центр пе/п’Ооаы.х медицинских технологий Санкт-Петербург, Россия
Дендритные клоки (ДК) - система специализированных клеток, которые распушают и предегаиляюган-ппены Т- и В-лнмфоцптам в ассоциации с антигенами главного комплекса гнстосовмесгнмос тп, костнмулиру-ющнмп молекулами и цптокинами для индукции иммунного ответа на чужеродные антигены или создания толерантности к собственным антнгенам.
В каких случаях и о твег на антиген ДК индуцируют иммунный ответ, а в каких обеспечивают иммунную толерантное! I,, еще предстоит выяснить. Вместе с тем, известно, что лимфоидные ДК (долгоживущие клетки) экспрессируют очень высокие уровни МНС-собственных пептидных комплексов и, вероятно, Т-клегки становятся энергичными или погибают в ответ на многочисленные нсрсистнрующие антигены. Кроме того, считается, что отдельные популяции ДК имеют разные функциональные задачи: оседлые лимфоидные ДК индуцируют собственную толерантность, мигрирующие миелоидпые ДК (включая клетки Лангерганса) активируются чужеродными антигенами на периферии и мигрирую'г в периферические лимфоидные органы для инициации иммунного ответа (81юптаи К. А. нсоавт., 1997). В то же время, не исключено, что эти же ДК индуцируюттоле-рантность, но качественно отличную, и, вероя тно, -экспрессируют “молекулы смерти” подобно Рая-лиганду.
Кроме того, недавно полученные данные “рисуют” парадоксальную картину, в которой ДК, вместо индукции ре-зистентпостн орг анизма, обеспечивают идеальные условия обитания для нескольких вирусов. ДК могут быть местом персистенцин цитомегаловирусной инфекции, а вирус Капоши (К5НУ) может подобным же образом получить “прибежище” в организме у пациентов с мнеломноП болезнью. Взаимодс1'1стине ДК, инфицированных вирусом иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1) или вирусом кори, с Т-клетками памяти или активированными Т-клетками поддерживает “производство” вирусных частнц(Ри»!ег-Утет I. и соавг., 1997). При этом зрелые ДК способствуют распространению инфекции, передавая ВИЧ-1 Т-клеткам. Как предполагают, фолликулярные ДК в В-клсточной области лимфоидной ткани не инфицированы ВИЧ-1, но мо1уг играть двойную роль: представлять вирусные частицы с антителами В-клеткам и способствовать иммунному ответу на вирус, в особенности за счетактивации В-клеток памяти. Они могут быть долгосрочными внеклеточными "резервуарами” потенциально инфекционных вирусов.
Роль ДК для создания вакцинных препаратов нового поколения еще предстоит определить, так как ДК могут с одинаковой легкостью активировать Т-хелперы и Т-
киллеры, вызывать продукцию антител и секре тировать интерлейкин-12 (ИЛ-12), оказывать воздействие на слизистые оболочки, где необходима ранняя зашита при многих инфекциях. В противоположность этому, многие существующие вакцины и адъюванты слабо стимулируют какТ-клеточный, так и В-клеточнып иммунный ответ. Создается впечатление, что некоторые субпопуляции ДК снижают эффективность вакцин, особенно в тех случаях, где сами являются мишенью. Однако эта их способность может быть использована для индукции толерантности, например, к аллергенам.
Как стало ясно в последнее время, ДК играют- важную роль в процессе опухолевой прогрессии. Установлено, что по причине отсутствия ДК в опухоли пли слабой экспрессии молекул МНС класса I и класса II, а также CD80 nCD86 костпмулирующих молекул на ДК, инфильтрирующих опухоль, не создается ус тойчивый антиген-специфнческпй Т-клеточнып ответ. По мнению ряда авторов (Gabrilovich D.I. и соавт., 1997; S.A.Luykx-de Bakker и соавг., 1999), это может быть следствием продукции злокачественной опухолью факторов (ИЛ-10, трансформирующий фактор роста-бета, фактор роста эндотелия и др.), угнетающих дпфференцпровку, созревание и функциональную активность периферическихДК.
Наибольшей способностью к представлению специфического опухолевого антигена Т-лпмфонптам у экспериментальных животных с опухолью или у пациентов с установленным раком оказались аутологичные костно-мозговые предшественники ДК. выращенные в соответствующих условиях in vitro, а также сингенные или аллогенные ДК из периферической крови здоровых индивидуумов, активированные опухоль-ассоциированны-мн антигенами. Для этого функционально активные ДК инкубируют с антигенами, специфичными для опухоли. В последующем ДК, “нагруженные” антигеном, вводят больному. Противоопухолевый эффект достигается повторными процедурами "обработки” и введением ДК в режиме вакцинотерапии (Fields R.C. и соавг., 1998).
Установлено, что у животных эта страт егия ведет к защите против опухолей и уменьшает размеры существующих опухолей, у человека - к уменьшению размеров опухоли, стабилизации опухолевого процесса и. как следствие, - к увеличению продолжительности жизни.
Влияние экзогенного IgG на кинетические параметры комплемент-опосредованного гемолиза in vitro
Бельтюков П.П., Симкина Н.Б., Тарасова IO.B.
Санкт-Петербургский государственный медицинский унииерситет имени акад. И.Г1. Павлова
Препараты человеческого IgG, применяемые в клинической практике для профилактики некоторых инфекционных заболеваний, а также при иммунодефицитных
1999, Т. I, № 3-4
Иммунорегулщия
состояниях, не проявляют, как правило, спонтанной анти-комплементарной активности при внутривенном введении. Однако известно, что нормальный 1цО человека связывает фрагмент СЗЬ, образующийся н процессе активации системы комплемента. Связывание с экзогенным иммуноглобулином приводит к снижению концентрации образующегося СЗЬ, что должно приводить к снижению защитных возможностей системы комплемента.
С целыо выявления возможностей регуляции взаимодействия ДО с фрагментом СЗЬ в наших экспериментах были исследованы функциональные последствия воздействия гомологичного на комплемепт-опосредо-
нанный гемолиз эритроцит ов кролика (альтернативный путь активации комплемента— АПК) и сенсибилизированных эритроцитов барана (классический пуп. —КГ 1К).
Исследовано влияние в концентрациях от б до
37,5 мкг/мл на кинетические параметры комплемент-опосредованного гемолиза по АПК и КПК в смешанной сыворотке крови, полученной от здоровых доноров обоего пола в возрасте от 20 до 43 лет. Содержание сыворотки в инкубационной смеси сос тавляло 12,5-25%.
Добавление ДО до концентрации от 6 до 37,5 мкг/мл в этих опытах приводило к снижению скорости гемолиза по КПК, в среднем, соответственно на 15-31%. При этом практически не удавалось выявить изменений 1ац-перио-да, предшествующего началу гемолиза. При исследовании гемолиза по А11К в присутствии ЭГ'ГА было показано, что добавление ^0 в максимальной из использованных концентраций (37,5 мкг/мл) приводит к снижению скорости гемолиза, в среднем, на 18-20%. Тогда как величина 1а”-периода достигает 120% от исходного значения.
С целыо повышения чувствительности анализа влияния ДО на АПК проведена серия экспериментов, в которых, в качестве источника комплемента, использовался реагент ЛСЗ, полученный путем обработки сыворотки крови монометиламином. Реконструкция комплемента достигалась путем добавления очищенного препарата СЗ к этому реагенту. В этих опытах было установлено, ч то изменение скорости комплемент-опосредованного гемолиза эритроци тов кролика по АПК может рассматриваться как функция от концентрации ДО лишь до концентраций, не превышающих 10 мкг/мл. Дальнейшее увеличение концентрации ДО не ведет к снижению скорости гемолиза, но ^-период при этом продолжает увеличиваться. В этих условиях величина 1ац-периода в присутствии ДО в концентрации 0,45 мг/мл достигает270%. В аналогичных экспериментах по анализу влияния на КПК величина 1ац-периода не превышала 135% от исходной.
Искусственное увеличение концентрации фактора СЗ путем введения очищенного СЗ в смешанную сыворотку крови в присутствии приводит к снижению его угнетающего влияния на способность сыворотки вызывать гемолиз эритроцитов как по АПК, так и по КПК и полностью восстанавливает способность сыворотки к комплемент-опосредованному гемолизу. При этом и скорость гемолиза, и величина ^-периода возвращаются к значениям, близким к исходным в отсутствие ДО.
Таким образом, влияние IgG человека в концентрациях, близких к терапевтическим дозам, на активность системы комплемента может быть выявлена при оценке кинетических параметров комилемент-шюередованно-10 гемолиза эритроцитов. Воздействие IgG на систему комплемента прямо связано с содержанием СЗ в исследуемой сыворотке крови.
Антигемолитическая активность С-реактивного белка и фактора некроза опухолей-а в отношении фосфолипаз различного происхождения
Б утюгов А., Назаров П., Любимов Ю.
Институт экспериментальной медицины РА МН, Институт токсикологии, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Некоторые токсические шоковые состояния сопровождаются повышением концентрации в сыворотке различных типов фосфолипаз, что может рассматриваться как важный патогенетический фактор. При подобной патологии ключевую роль в развитии системного иммунного ответа играют провоспалительные ци-токины и реактанты острой фазы воспаления, в числе которых фактор некроза опухолей-а (ФНО-а) и С-реактив-ный белок (СРБ) опосредуют реакции специфического и неспецифического звена противоинфекционной защиты.
Цели и задачи. Целыо данного исследования было изучение способности человеческого СРБ и рекомбинантного человеческого ФНО-а влиять на гемолитическую активность фосфолимазы С (ФЛ-С) из Cl.perfringens и фосфолииазы АП (PLA1I) из яда Apis nielli/eruL
Материалы и методы. С целыо изучения гемолитических характеристик ФЛ-С и ФЛ-А11 было проведено определение их гемолитического тигра. Лиофилизиро-ванные препараты фосфолипаз растворяли в 0,9% растворе NaCl, затем готовили ряд2-кратпых разведений в объеме 50 мкл, начиная от исходной концентрации 500 мг/мл, к которым добавляли по 20 мкл суспензии эритроцитов человека (ЭЧ). Затем серийные разведения СРБ и ФНО-а инкубировали с минимальными концентрациями ФЛ-С и ФЛАИ, обеспечивавшими 100% гемолиз в течение 30 мин. при 37иС. Учет гемолиза вели спектрофотометрически при длине волны 405 нм.
Результаты. Полученные результаты показали, что СРБ ингибирует гемолитическую активность фосфолипаз, с константой ингибирования К-233 мкг/мл и 132,3 мкг/мл для ФЛ-АН и ФЛ-С соответственно. ФНО-а продемонстрировал способность влиять на гемолитическую активность ФЛ-АП, однако его эффект находился в зависимости от концентрации: усиление лизиса (ЭЧ) наблюдалось в диапазоне от450 Ед/мл и выше, в то время как подавление гемолитической активности ФЛ-АП происходило при более низких концентрациях ФНО-а. Было проведено изучение кинетических и лигандиых характе-
