CC BY
7
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 81
Д.А. Церковский, Т.П. Артемьева, Н.А. Петровская, Ю.Б. Черных1, А.К. Голенков1, Т.А. Митина1, А.Н. Мазуренко Е.В. Трифонова1, Е.В. Катаева1, Л.Л. Высоцкая1, ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ К.А. Белоусов1, С.Г. Захаров1, Е.Ф. Клинушкина1, В КЛИНИЧЕСКОЙ ОНКОЛОГИИ. ОПЫТ Е.Ю. Рыбалкина2, С.С. Шушанов2 ОТДЕЛЕНИЯ ГИПЕРТЕРМИИ ВЛИЯНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА LRP И ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ РНПЦ ОМР НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ОПУХОЛЕВЫХ ИМ. Н.Н. АЛЕКСАНДРОВА ПЛАЗМОЦИТОВ К БОРТЕЗОМИБУ IN VIVO РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова, а/г. Лесной, Минский И IN VITRO район, Минская область, Беларусь 1ГБУЗ МО «МОНИКИ им М.Ф. Владимирского», Цель исследования. Обобщение клинического опыта Москва, Россия; применения метода фотодинамической терапии (ФДТ) 2ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава и его безопасности и противоопухолевой эффективности России, Москва, Россия у пациентов с предопухолевыми заболеваниями, доброка- Введение. Множественная лекарственная устойчи-чественными и злокачественными новоообразованиями вость, обусловленная активностью белков-транспортеров, в РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова. развивается за счет активации генов, кодирующих эти бел-Материалы и методы. На базе отделения гипертермии ки. Гиперэкспрессия генов, ассоциированных с развитием и ФДТ в период с 2001 по 2017 г. было пролечено 1040 па- множественной лекарственной устойчивости, рассматри-циентов с цервикальной интраэпителиальной неоплазией вается как один из факторов, способствующих развитию (ЦИН) I—III степени (n = 500), базально-клеточным раком резистентности опухолевых плазмоцитов к воздействию кожи (БКРК, n = 140), меланомой хориоидеи больших раз- бортезомиба — базового препарата для лечения множест-меров (n = 120), внутрикожными метастазами меланомы венной миеломы (ММ) в первой линии. кожи (n = 70), лейкоплакией полости рта (n = 80), дистро- Цель исследования. Определение влияния экспрессии фическими заболеваниями вульвы (n = 60), поверхност- гена LRP на чувствительность к бортезомибу опухолевых ным раком мочевого пузыря (n = 70). Системная ФДТ плазмоцитов, полученных из аспирата костного мозга па-проведена более чем у 100 пациентов с распространенными циентов с ММ III стадии и в клеточных линиях ММ чело-новообразованиями шейки матки, яичников, меланомой века. кожи и др. В качестве фотосенсибилизатора применяли Материалы и методы. Интенсивность экспрессии гена фотолон (РУП «Белмедпрепараты», Минск, Беларусь), LRP исследовали методом полимеразной цепной реакции вводимый в дозах от 1 до 2,5 мг/кг. В качестве источников с обратной транскрипцией в мононуклеарной фракции ас-лазерного излучения использовали полупроводниковые пиратов костного мозга 15 пациентов с впервые диагности-лазеры «УПЛ ФДТ лазер» (ЛЭМТ Беларусь, X = 665 ± 5 нм), рованной ММ III стадии по классификации Дьюри—Сал-PDT diode laser (ЛЭМТ, Беларусь, X = 660 ± 5 нм). Экспо- мон и в клеточных линиях ММ человека RPMI8226 и IM9. зиционные дозы фотооблучения варьировали в широких Чувствительность опухолевых плазмоцитов к бортезомибу диапазонах (от 10 до 600 Дж/см2) в зависимости от нозоло- in vivo оценивали по проценту снижения абсолютного гической формы новообразования, его клинической фор- количества парапротеина после 6 курсов бортезомибсо-мы, степени распространенности, глубины инвазии. Без- держащего лечения, а также по показателю общей вы-опасность и переносимость сеансов ФДТ оценивали живаемости (ОВ). ОВ анализировали по методу Капла-на основании анализа частоты и выраженности нежела- на—Мейера, с применением критерия Кокса—Мантела. тельных реакций и явлений (CTCAE v. 3.0, 4.0). Методами Различия считали статистически значимыми прир <0,05. оценки противоопухолевой эффективности были клини- В клеточных линиях ММ экспрессию гена LRP исследова-ческий и морфологический. ли до и после продолжительного культивирования клеток Результаты. Нежелательные реакции I—II степени бы- на среде, содержащей бортезомиб. ли выявлены не более, чем в 3 % наблюдений и соответст- Результаты. Экспрессия гена LRP выявлена у 10 (67 %) вовали I—II степени. Частота полных регрессий патологи- из 15 больных до начала цитостатической терапии. Интен-ческих очагов составила у пациентов с ЦИН — 94 %, сивность экспрессии гена была неоднородной. Нами вы-с БКРК — 91 %, с меланомой хориоидеи — более чем 70 %, делены 2 подгруппы пациентов: подгруппа пациентов с вы-с лейкоплакией полости рта — 95 %, с дистрофическими сокой экспрессией гена LRP и подгруппа пациентов заболеваниями вульвы — более чем 90 % случаев. с низкой интенсивностью/отсутствием экспрессии гена. Заключение. ФДТ является современной и высокоэф- В подгруппах не выявлено достоверного снижения коли-фективной опцией в лечении широкого спектра опухоле- чества парапротеина до и после индукционного лечения вых и предопухолевых заболеваний. Метод отличается бортезомибсодержащими программами полихимиотера-от традиционных своей простотой в применении, безопас- пии. Анализ ОВ в подгруппах показал, что высокая экс-ностью, относительной дешевизной, возможностью по- прессия гена LRP ассоциирована с короткой медианой ОВ вторного применения (при необходимости), отсутствием больных на бортезомибсодержащем лечении (17 мес про-развития резистентности и минимальным риском возник- тив 62 мес при низкой экспрессии гена, p <0,05). In vitro новения серьезных нежелательных реакций. клетки IM9, слабо экспрессирующие LRP, более чувствительны к бортезомибу, чем клетки КРМК226, в которых экспрессия гена LRP выражена умеренно (IC50 — 0,8 ± 0,3 х 10—8 и 2,7 ± 0,6 х 10—8 М соответственно). Культивация
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
82 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
клеточных линий на среде, содержащей бортезомиб, в те- в 6 раз (0,7 против 4,8) по сравнению с клетками HCC1937. чение 90 дней сопровождалась повышением 1С50 бортезо- Не выявлено высоких показателей экспрессии виментина миба, а также повышением интенсивности экспрессии в клетках MCF-7 и T-47D: уровень составил 8 и 20 %, ин-гена LRP в 2 клеточных линиях ММ человека. тенсивность — 1,1 и 1,3, индекс — 0,2 и 0,4. В клетках Заключение. Совокупность сведений об отрицательном SCOV-3 и HBL-100 показатели экспрессии оказались в раз-влиянии высокой экспрессии гена LRP на ОВ больных ной степени высокими: уровень — 51 и 75 %, интенсив-с ММ на бортезомибсодержащем лечении и повышении ность — 3,6 и 6,8, индекс — 1,9 и 5,1. интенсивности экспрессии гена LRP при формировании Заключение. При использовании виментина в качест-резистентности к бортезомибу позволяет сделать предпо- ве маркера ЭМП показано, что фенотип опухоли в орга-ложение о влиянии высокой интенсивности экспрессии низме не всегда предопределяет фенотип опухолевых кле-гена LRP на развитие устойчивости опухолевых плазмоци- ток, адаптированных к росту in vitro. Полученные тов к бортезомибу. результаты согласуются с данными литературы о пластичности молекулярного фенотипа опухолевых клеток и де-М.Р. Четыркина1, С.А. Калюжный2, Т.А. Богуш2, монстрируют необходимость контроля «сохранности» М.А. Ястребова1, А.М. Щербаков2, И.А. Мамичев2, эпителиального фенотипа клеточных культур при разного А.А. Каменский1 рода исследованиях эпителиальных клеток. пластичность молекулярного фенотипа Работа поддержана грантами РФФИ клЕток эпителиальных оПУХолЕй человека № 18-015-00422, 16-04-00347. при адаптации к росту в культуре 1МГУим. М.В. Ломоносова, Москва, Россия; Г.З. Чкадуа, О.С. Бурова, В.А. Мисюрин, А.А. Вартанян, 2ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава А.А. Солодовник, Т. Т. Кондратьева, М.А. Барышникова России, Москва, Россия клЕТки мЕлАномы MEL A052 как источник введение. Важнейшей характеристикой опухолевых оПУХолЕвыХ АнТиГЕнов для СоЗдАниЯ клеток, связанной с агрессивностью течения заболевания дЕндритноклЕточных вакцин и эффективностью химиотерапии, является эпителиально- ФГБУ «НМИЦонкологии им Н.Н. Блохина» Минздрава мезенхимальный переход (ЭМП). При исследовании рака России, Москва, Россия яичников (РЯ) мы показали ассоциацию ЭМП при гене- введение. Диссеминированная меланома кожи явля-рализации процесса по брюшине и ростом опухолевых ется высокоагрессивным заболеванием с низкой 5-летней клеток в асцитической жидкости по сравнению с первич- выживаемостью. После удаления метастазов вакцинотера-ной солидной опухолью. Учитывая, что источником кле- пия дендритными клетками в адъювантном режиме дает точных культур, широко используемых в исследованиях, возможность пациентам с III и IV стадией меланомы до-являются не только солидные опухоли, но и экстрацеллю- стигать стойкой многолетней ремиссии. лярные жидкости, представляется важной оценка «сохран- Цель исследования. Получение клеточной линии, ко-ности» эпителиального фенотипа при адаптации клеток торая может служить источником опухолевых антигенов к росту in vitro. для создания дендритноклеточных противоопухолевых Цель исследования. Количественно оценить уровень, вакцин. интенсивность и интегральный индекс экспрессии важ- материалы и методы. В работе были использованы ме-нейшего маркера ЭМП — виментина в клетках культур, тоды культивирования клеток, проточная цитофлуориме-полученных из эпителиальных опухолей, различающихся трия, RT-PCR, морфологическое исследование, метод по форме роста в организме. стандартной цитогенетики. материалы и методы. Исследованы клеточные линии, результаты. Клетки Mel A052 получали стандартными полученные из плевральной жидкости (MCF-7, T-47D), мо- методами из опухолевого материала метастаза в лимфати-лозива (HBL-100), солидного узла (BT-474, HCC1937) боль- ческий узел пациентки с IV стадией меланомы. После дис-ных раком молочной железы и асцитической жидкости социации клетки культивировали при 37 °С в атмосфере (SCOV-3) пациентки с РЯ. Проведен иммунофлуоресцент- 5 % СО2 в среде RPMI-1640 с 2 % сывороткой крови чело-ный анализ, ассоциированный с проточной цитофлуориме- века. Клеточная линия Mel A052 имела полусуспензион-трией. Использованы первичные антитела к виментину ный характер роста. Цитологическое исследование пока-(SP20, BIOCARE) и вторичные — конъюгированные с краси- зало, что линия Mel A052 представлена клетками телем DyLight650 (Abcam). Критерием Колмогорова—Смир- с выраженным полиморфизмом, наряду с округлыми ненова определены уровень экспрессии — число специфиче- правильной полигональной формы встречаются клетки ски флуоресцирующих клеток в % по отношению звездчатой и веретенообразной формы с длинными отрост-к контролю; интенсивность (усл. ед.) — отношение средней ками. Исследование экспрессии поверхностных антигенов специфической интенсивности флуоресценции к аналогич- выявило полное отсутствие главного комплекса гистосов-ному показателю в контроле; интегральный индекс — произ- местимости I и II классов. Более 90 % клеток экспресси-ведение доли клеток, экспрессирующих виментин, и интен- ровали CD54 — молекулы адгезии, и CD117 или c-kit, сивности. что предполагает высокозлокачественный фенотип клеток результаты. В клетках BT-474 уровень экспрессии был Mel A052. В клетках Mel A052 мы наблюдали практически ниже более чем в 2 раза (29 % против 71 %), интенсив- нулевую экспрессию 8 самых распространенных раково-ность — в 3 раза (2,1 против 6,4), а индекс — более чем тестикулярных генов. В 100 % клеток обнаружена
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
