CC BY
83
Влияние донатора N0 нитрозотиола глутатиона на уровень окислов азота и малонового диальдегида в крови крыс
Л.Ю.Каминская, А.А.Жлоба, Л.А.Александрова, О.М.Моисеева, В.Л.Эмануэль, Е.В.Шляхто Санк-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова; Институт кардиологии им. акад. В.А.Алмазова, Санкт-Петербург
Резюме. Оксид азота (NO) представляет собой парамагнитную молекулу, т е свободный радикал, и при неблагоприятных условиях метаболизма способен вызвать, так называемый нитрозилирующий стресс В работе проведено изучение нарастания продукта ПОЛ малонового диальдегида методом ВЭЖХ-анализа при введении экспериментальным крысам донора NO нитрозоглутатиона Хроматографический анализ проводили на жидкостном хроматографе Agilent-1100 ("Agilent Technologies ', Германия) Эффект нитрозоглутатиона сравнивали с влиянием вводимой животным смеси нитрилоацетата железа с гомоцистином в качестве прооксиданта Под влиянием экспериментального оксидативного стресса после введения нитрилоацетата железа с гомоцистином (40 мкмоль/кг по содержанию железа) содержание малонового диальдегида в сыворотке крови крыс возрастало примерно в 20 раз по сравнению с этим показателем в контрольной группе животных При нитрозотиоловом оксидативном статусе (после введения нитрозоглутатиона в дозе 200 мкмоль/кг) у крыс выявлена активация образования малонового диальдегида в 4 раза Сделан вывод о том, что доноры NO способны вызывать оксидатив-ный стресс При использовании доноров NO в длительной терапии необходимо контролировать оксидативный статус организма
Effect of the NO donator nitrosothiol glutathione on the rat blood levels of nitric oxides and malonic dialdehyde L.Yu. Kaminskaya, A.A. Zhloba, L.A. Aleksandrova, O.M. Moiseyeva, V.L. Emanuel, Ye.V. Shlyakhto
Summary. Nitric oxide (NO) is a paramagnetic molecule, i e a free radical, and, under poor metabolic conditions, can induce the so-called nitrosylating stress HPLC was used to study an increase of the lipid peroxidation (LPO) product malonic dialdehyde when the NO donor nitrosoglutathione was administered to experimental rats Chromatographic analysis was made on an Agilent-1100 liquid chromatograph (Agilent Technologies, Germany) The effect of nitrosogluthatione was compared with that of a mixture of ferrous mtnle acetate and homocystine given to the animals as a prooxidant Under experimental oxidative stress after administration of ferrous mtnle and homocystine (40 mkmole/kg, calculated with reference to iron), the rat blood serum level of malonic dialdehyde increased by approximately 20 times as compared to that in the control group of animals Four-fold activation of malonic dialdehyde formation was revealed in rats under nitrosothiol oxidation (after administration of nitrosogluthatione in a dose of 200 mkmole/kg) It is concluded that NO donors are able to induce oxidative stress When NO donors are used in long-term therapy, it is necessary to control the body's oxidative status
Принятые сокращения
МДА - малоновый диальдегид ПОЛ - перекисное окисление липидов АФК - активные формы кислорода, термин шире, чем СР, так как включает кроме радикалов перекись водорода, синглетный кислород, гипохлориты, гидроперекиси РАВ - реактивные азотистые вещества (пероксинитрит ОГЧОО , нитрозоний N0+ нитроксил N0 ) СОД - супероксиддисмутаза °С - температура в градусах Цельсия О2 - супероксид анион
N0 или N0 - монооксид азота, оксид азота, в отличие от высших окислов азота, обнаруживаемых в организме в виде анионов N02" и N03-, имеет важное физиологическое значение в качестве аллостерического модулятора гуанилатциклаз
ОЖЮ~ - пероксинитрит ИЗН - тиоловые соединения Г^ГТО - нитрозотиолы
Под влиянием оксида азота (N0) наблюдается окисление тиолов с образованием нитрозотио-лов [1-4] В плазме крови обнаруживаются нитрозотиолы цистеина, альбумина, а в клетках - нитрозотиолы глутатиона, цистеинилглицина, различных белков, включая очень важные для регуляции пролифера-тивной активности клеток и их апоптоза [5] N0 - свободный радикал, вызывающий эндотелийзависимую ва-зодилатацию (другое название - эндотелиальный фактор релаксации), ингибирующий агрегацию тромбоцитов, адгезию лейкоцитов к эндотелию и пролиферацию гладкомышечных клеток сосудистой стенки [6, 7] Другие гладкомышечные клеаки, например бронхиальные, также чувствительны к N0 N0 после конъюгации с су-пероксиданионом направляется по различным путям преобразования пероксинитрита, включая нитрование белков, образование нитрозотиолов, в том числе нитро-зотиолов гомоцистеина Часть этих продуктов приводит
к усилению оксидативного стресса и свертываемости крови, тромбообразованию В условиях нарастающего оксидативного стресса за счет генерации активных форм кислорода чаще наблюдается снижение активности эндотелиальной ]МЮ-синтазы и глутатион-перокси-даз [8] Это вызывает оправданное стремление использовать доноры N0 в терапевтических целях при недостаточной выработке данного медиатора эндотелиальны-ми клетками Однако это не всегда представляется целесообразным, в связи хотя бы с тем, что субэндотели-альные макрофаги также являются источником значительных количеств N0 Кроме того, сам N0 представляет парамагнитную молекулу, те свободный радикал, и при неблагоприятных условиях метаболизма способен вызвать так называемый нитрозилирующий стресс
Экзогенные донатор N0, исключая субстрат ГЧО-син-таз, аминокислоту аргинин, высвобождают N0, по-видимому, без участия специально синтезируемых энзимов К подобным донорам N0 относятся такие лекарственные препараты, как нитросорбит, эринит и нитроглицерин, а также нитропруссид натрия, известные в фармакологии как нитраты, нитриты, к которым относятся амилнитрит, соли азотистой кислоты - М02 Эти вещества с участием эндогенных окислительно-восстановительных систем способны генерировать монооксид азота (N0) Монооксид азота накапливается в виде нитрозотиолов, транспортируется и взаимодействует с молекулами-мишенями, в частности геминовыми белками [9] К нитрозотиолам относятся нитрозоглутатион, нит-розоцистеин, нитрозо-834-альбумин, Э-нитрозо-М-аце-тилпеницилламин и др Из нитрозотиолов самым лучшим, с точки зрения малой токсичности, является Э-ни-трозоглутатион
Одной из основных целей данной работы было изучение нарастания продукта ПОЛ малонового диальдегида при введении донора N0 нитрозоглутатиона экспериментальным животным
Рис. 1. ВЭЖХ-анализ ТБК-активных продуктов в образце плазмы крови с использованием спектрофотометрического и флюорометрического детектирования на колонке КготавН КЯЮО 3,5-С8 4,6 х 100 мм, подвижная фаза - буфер 0,1М калий фосфатный, рН 3,75 с ацетонитрилом в объемном соотношении 8:2, скорость элюции 0,8 мл/мин, температура в колоночном отделении 25°С. Нанесено 10 мкл образца, а - на колонку нанесен стандартный образец 7,6 мкМ МДА, б - дериват плазмы крови. Сплошная линия - данные флюоресценции элюата, возбуждение при 530 нм, испускание при 552 нм, пунктирная - светопоглощение в Миллиединицах абсорбции при длине волны 530 нм.
H
-У— 1
-{
I - -У
I ч
~1 г
! I
□ FID1A & IM &f'jSÎ WCIVbMÜA о, g KJOODSLIW ШВ С? "VIMM Ч лп &CJ1IU 530 II (KFOICSlUrw WI D КЮИСЧ Jlia К j. В
1- s i i* ^
# I1 Г ! i
- ill 1 1 г IF ul _________. _ JvUtU 1 L.
1 11 ................ J.1.........1.1.....................
Материалы и методы
Опыты проведены на крысах-самцах линии Вистар 250-330 г. Животных получали из селекционной станции Рапполово (Санкт-Петербург). Крыс размещали по 8 особей в стандартных клетках, и животные привыкали к условиям лаборатории в течение минимум 1 нед - неограниченный доступ к пище (гранулированный корм) и воде в виварии с температурой 22+ГС и влажностью 60%.
Подвижность животного ограничивали и соответствующий раствор вводили в течение 2-3 мин. Животным контрольной группы вводили изотонический раствор NaCl в том же объеме. Количество животных в группе менее 8 объясняется отбраковыванием при неудовлетворительном заборе материала. В каждой серии для каждой дозы использованы также по 2 резервных животных. Для анализа ВЭЖХ-методом включали материал 8 животных. Всего в экспериментах использовали 164 животных. Из них отбраковано 12.
По истечении времени экспозиции введенной дозы животных обездвиживали приемом дислокации и после декапитации забирали материал на анализ. Спустя 30 мин после забора крови производили центрифугирование при 3000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре. Сыворотку крови отбирали, помещали в пластиковые пробирки и хранили при t=-20°C до процедуры пробоподготовки.
Животным в проведенных экспериментах вводили прооксидант и нитрозоглутатион.
Оборудование и реактивы. Хроматографический анализ проводили на жидкостном хроматографе Agilent-1100 ("Agilent Technologies", Германия). Анализ образцов осуществляли с помощью VWD-спектрофотоме-трического и флюоресцентного детекторов. Для хрома-тографического разделения использовали колонку Кго-masil KR100 3,5-С8 4,6 х 100 мм (4,6 х 150 мм). Все реагенты, которые использовались в экспериментальной работе, были особо чистые (ОСЧ) и химически чистые (ХЧ). Для приготовления подвижных фаз использовались ацетонитирил ОСЧ сорт 0 (НПК "Криохром", Россия), гидрат окиси калия ("Сигма", США), фосфорная кислота с концентрацией 87% (Россия).
Прооксидант представлял собой смесь нитрилотриа-цетата железа и гомоцистина (дисульфидная форма аминотиола). Нитрилотриацетат железа готовят из ди-натриевой соли нитрилотриуксусной кислоты (Sigma, Chemical Со, St Louis МО USA) в количестве 94 мг и железо аммониевой соли лимонной кислоты в количестве 40 мг. Навески растворяют в 10 мл 5 мМ раствора гомоцистина на 1% альбумине и получают раствор прооксидан-та с конечной концентрацией 20 мМ по иону железа.
Рис. 2. Влияние прооксиданта в дозах 10 (группа 1), 20 (группа 2) и 40 мкмоль (группа 3) по содержанию железа на 1 кг массы тела на содержание МДА в сыворотке крови крыс.
——-—,—--j _Â_ j
; \ t
Ïtïyi
УМУ :
- -Лд - У ; Г S' -'/y/y
<j.r ... i -■У',,* i i у
■as. Ш ! /А ifty '-¿У?. ш i—..............j
Контроль Группа 1 Группа 2 Группа 3
Достоверность различий в уровне МДА группы 1 к контрольной, р=1,14365Е-06,
Достоверность различий в уровне МДА второй и первой группы, р= 1.22208Е-05
Достоверность различий в уровне МДА группы 3 и 2, р=0,003162.
При анализе накопления ТБК-активных продуктов и МДА у экспериментальных крыс под влиянием увеличения дозы прооксиданта показано, что уровень МДА в первой группе нарастает по сравнению с контролем более чем в 2,5 раза и в группе 2 по сравнению с группой 1 более чем в 3 раза, тогда как при дальнейшем значительном повышении дозы прооксиданта - только на 18%.
Животные получали препарат, обозначенный нами как прооксидант, в 3 дозах однократно: 0,5; 1 и 2 мл на 1 кг массы тела животного.
Для синтеза нитрозоглутатиона использовали коммерческий препарат глутатиона восстановленного и нитрит натрия (NaN02) [4]. На ледяной бане смешивали по 2,2 мл эквимолярные растворы (220 мкМ) глутатиона восстановленного и нитрита натрия. При постоянном перемешивании постепенно приливали 250 мкл 4,0 М HCl. Смесь инкубировали при 4°С в темноте в течение 40 мин и нейтрализовали, добавляя 250 мкл 4,0 М NaOH. Кристаллический нитрозоглутатион получали осаждением ацетоном на холоду. Высушенные кристаллы использовали для приготовления рабочих растворов нитрозоглутатиона.
Конечную концентрацию нитрозотиола глутатиона определяли, используя коэффициент молярной экс-тинкции 767 М"1 см"1 при измерении светопоглощения
Рис 3. Влияние парентерального введения нитрозоглута-тиона в дозе 200 мкмоль на 1 кг массы тела на суммарное содержание окислов азота в сыворотке крови крыс контрольной группы и через 20, 40 и 60 мин после введения препарата.
30 * 28 > M
24 20 20 -
dL
/ ^ : ¿у. < 4 * у
■ / / ■
L rtri ; и 1 / /■
<"tr j ю
Контроль 20
при длине волны 334 нм Для экспериментов использовали раствор в концентрации 1,0-0,1 мМ Окислы азота определяли спектрофотометрическим методом с использованием реактива Грисса как описано ранее [10]
Для специфичного выявления МДА вместо ТБК-актив-ных продуктов использовали следующую модификацию метода анализа по образованию флюоресцентных продуктов МДА и тиобарбитуровой кислоты [11] К 350 мкл 1 мМ КН2Р04 рН 3,0 добавляли 5 мкл 20 мМ глутатиона восстановленного и 5 мкл бутанола После перемешивания вносили 50 мкл исследуемого образца Перемешивали и добавляли 6 г/л тиобарбитуровую кислоту в коли честве 100 мкл, перемешивали повторно Образцы плотно закрывали пробками и выдерживали 45 мин при 93°С После инкубации пробы охлаждали в ледяной бане 10 мин и центрифугировали при 4500 g 7 мин Супернатант фильтровали через мембранные фильтры с размером пор 0,2 мкм После этого пробы вносили в хроматогра-фическую систему
Как показано на рис 1, содержание МДА-производных ТБК (tR= от ЗД5 до 3,25 мин) в составе ТБК-активных продуктов, определенных спектрофотометрическим методом, МДА составляет менее 50% Большая часть ТБК-активных продуктов не выявляется по флюоресценции, характерной для ТБК-производных МДА
В составе ТБК-активных продуктов помимо производных МДА имеются дополнительные дериваты На это указывают данные других авторов [12], которые обнаруживают среди ТБК-активных продуктов наряду с перок-сидами липидов ацетилнейраминовую кислоту и били рубин
Статистическая обработка результатов экспериментов проведена непарным t-тестом Стъюдента Различия признавали достоверными при рК0 05 Результаты обработки представляли как стандартные ошибки (SE) или стандартные отклонения (SD) Для получения указанных статистических параметров использовали Statsoft® Statistics версия 6 и Microsoft® Excel 2002
Результаты исследования
Под влиянием прооксиданта в образцах сыворотки крови экспериментальных крыс обнаруживается нарастание уровня МДА (рис 2)
После однократного введения нитрозоглутатиона окислы азота в сыворотке крови крыс постепенно снижаются от 20 до 40 мин (рис 3)
При анализе гидролизатов белков сыворотки крови крыс полученных и проанализированных спустя 40 мин после введения нитрозоглутатиона обнаруживается фракция нитротирозина с характерным поглощени-
Рис. 4. Влияние парентерального введения нитрозоглутатиона (в дозе 200 мкмоль/кг) на содержание МДА в сыворотке крови крыс контрольной группы и через 20, 40 и 60 мин после введения препарата.
K.MDA 1_MDA 2_М0А 3_MDA
ем при 420-430 нм в слабощелочной (рН 8,0) и 360-380 нм в слабокислой (рН 4,5) среде Максимальные пики абсорбции относились к образцам, полученным через 40 мин после введения нитрозотиола глутатиона
Накопление продукта ПОЛ МДА под влиянием нитрозотиола глутатиона развивается постепенно в течение 60 мин после введения препарата (рис 4) Под влиянием увеличения доноров N0 не наблюдается выраженного оксидативного стресса по уровню продукта ПОЛ - МДА Интересно отметить, что максимальный уровень окислов азота в крови выявляется сразу через 20 мин после введения препарата возрастая примерно в 3 раза по сравнению с их уровнем в сыворотке интактных животных, а уровень МДА поднимается от 0,7 до, примерно, 2,8 мкМ постепенно в течение всего периода наблюдения В отличие от других моделей экспериментального оксидативного стресса при нитрозотиоловом оксидативном статусе не выявлено значительной активации ПОЛ у крыс, находящихся на обычной диете
Обсуждение
Механизмы воздействия нитрозотиолов при парентеральном введении связаны с их прямым вкладом в общий пул N0 Нитрозотиолы высвобождают N0 в соответствии с реакцией ЮГГО-*!« + N0
В этой реакции способен также образовываться ти-ильный радикал Эта реакция в физиологических ситуациях протекает достаточно интенсивно только при поглощении световой энергии или других видов излучения, в особенности в присутствии ионов переходных металлов Реакции транснитрозилирования, протекающие в присутствии переходных металлов, в том числе ионов меди, приводят к образованию дисульфидов, например глутатиона 2С5КО-^С88С + 2 N0
Во внутренних средах организма высвобождение N0 можно представить в виде реакции вБКО + Си1+ + Н+ вБИ + N0 + Си2+ Окисленные ионы меди подвергаются восстановлению за счет эндогенных аминотиолов или аскорбата 2С5Н + 2Си2+->С58С + 2Си+ + 2Н+ В присутствии ионов меди или железа происходит ге генерация N0 из нитрозотиолов и окисление тиоловых групп Исходя из того, что эти ионы с переменной валентностью в свободном состоянии во внутренней среде практически отсутствуют, в настоящее время интенсивно изучаются белки их содержащие [18] Функции церулоплазмина, СОД и других медьсодержащих белков в регенерации N0 изучены недостаточно
При интерпретации летальных воздействий со стороны тех или иных метаболитов и регуляторов клеточных
функций используют ряд терминов: апоптоз, интерфазная гибель, клеточная гибель, некроз, травма клетки (повреждение клетки). Одним из эффекторов апоптоза является нарушение свободнорадикального метаболизма клетки. Однако однозначного ответа на вопрос об участии NO в запуске апоптоза не существует, точно так же как не существует однонаправленного участия NO в реакциях защиты клеток от апоптогенных влияний других радикалов.
Наряду с окислительно-восстановительными парами никотидамидных коферментов, глутатиона и аскорбата, находящимися в клетках и плазме крови соответственно, и действующих в миллимолярных концентрациях, существуют зависимые от них тиолдисульфидные пары, действующие в клетках в микромолярных и более низких концентрациях. К ним относятся тиоредоксины, глутаредоксины, которые вместе с соответствующими энзимами обеспечивают высокую скорость восстановления таких субстратов, как рибонуклеотиды в дезокси-рибонуклеотиды, существенных тиоловых групп энзимов и кофакторных белков.
Известны наблюдения, свидетельствующие в пользу того, что низкие концентрации нитрозоглутатиона оказывают мощное цитопротекторное воздействие в ише-мических ситуациях. В нормальных физиологических условиях низкомолекулярные нитрозотиолы, в частности нитрозоглутатион, в концентрациях 6-8 мкМ оказывают цитопротекторный эффект [14, 15]. В таких концентрациях наблюдается инактивация каспаз 1,3,8 путем нитрозилирования их существенных тиолов и соответственно торможение апоптоза, например в моторных нейронах [16-19]. Накопление нитрозоглутатиона в настоящее время рассматривается в качестве естественного способа депонирования NO в клетке, так как этот нитрозотиол стабильнее других возможных эндогенных нитрозотиолов, включая S-нитрозо-цистеинил-глицин. Последний высвобождается из глутатиона наряду с остатком глутамата под влиянием энзима гамма-глу-тамилтранспептидазы. Это позволяет рассматривать гамма-глутамилтранспептидазу в качестве регулятора концентрации свободного NO в клетках [20].
Важнейший восстановитель плазмы крови аскорбат не окисляется NO, однако аскорбат восстанавливает а-токофероксильные радикалы, а NO может окислять а-токоферол. Эти реакции лежат в основе прооксидантно-го действия NO в плазме крови [5]. СОД в условиях окси-дативного стресса теряет каталитически важные ионы меди и цинка, что ведет к увеличению супероксиданио-на и накоплению пероксинитрита [13].
Токсические эффекты при повышении содержания монооксида азота следует ожидать при создании условий для протекания реакции:
NO + О2- ® ONOO" + Н® ONOOH ONO + «ОН, где «ОН является основным радикалом, вызывающим множественные необратимые изменения нативных молекул нуклеиновых кислот и белков. Кроме этого, перок-синитрит вызывает нитрование циклических аминокислот и нитрозилирование серосодержащих остатков цистеина в белках и пептидах. Сам по себе NO при образовании в больших количествах имеет точки приложения своего действия в митохондриях, вызывая подавление тканевого дыхания. В условиях нехватки субстратов цикла трикарбоновых кислот, например при резком ограничении поступления глюкозы в клетки, происходит инициация апоптотических процессов в клетке, а в модельных ситуациях при нехватке глюкозы в условиях избытка NO наблюдается некроз клеток.
В спектр токсических воздействий пероксинитрита входит также непосредственное нитрозилирование гуанина и разрывы в цепи ДНК, что также ведет к апоптозу клеток [21]. Эти эффекты пероксинитрита усиливаются при ацидозе, так как в этих условиях образуется ONOOH, являющаяся источником гидроксильного радикала. При высоких концентрациях доноров NO на-
блюдается активация энзимов завершающей фазы апоптоза семейства ПАРП и АДФ-рибозилирования. Анти-апоптотическое действие N0 (в том числе подавление КАСПаз) сохраняется до тех пор, пока:
1) конъюгация с супероксиданионом не приводит к образованию слишком больших количеств пероксинитрита, отражающихся на соотношении тиолдисульфид-ных равновесий и торможении дыхательной цепи в митохондриях;
2) не происходит образование N0 при снижении энергообеспечения клеток подходящими метаболитами глюкозы или других источников промежуточных метаболитов цикла трикарбоновых кислот и гексододифос-фатного пути окисления углеводов;
3) не нарастает ацидоз, в том числе метаболический;
4) не исчерпывается возможность переводить высо-кореакционноспособные формы N0 в нитрозотиолы.
Следует также учитывать, что при достаточном поступлении в клетки пластического и энергетического материала N0 оказывает разносторонние эффекты, направленные на улучшение условий протекания внутриклеточного метаболизма, включая связывание свободных радикалов кислорода, в первую очередь суперокси-даниона. Антиапоптотическое действие N0 сохраняется при низких его концентрациях и низких концентрациях других свободных радикалов. При очень высоких концентрациях нитрозотиолов, около 1мМ, независимо от действия других свободных радикалов кислорода наблюдается развитие нитрозилирующих реакций, т.е. ни-трозилирующий стресс (образование нитрозоаминов, дезаминирование оснований ДНК и других дериватов). В условиях неэффективного энергетического метаболизма митохондрий, снижения оборота и пула никоти-намидных коферментов, падения концентрации свободных тиоловых групп, снижение эффективности синтеза АТФ в митохондриях, повышение синтеза N0 сопровождается усилением апоптотических влияний N0 и его метаболитов на клетки.
Пероксинитрит накапливается не только в результате реакции конъюгации между свободным N0 и супероксиданионом. При разрушении СОД в условиях оксида-тивного стресса, сопровождающегося высвобождением ионов меди или при высвобождении этого иона из других белков, в клетках появляется возможность быстрого денитрозилирования Б-нитрозоглутатиона. Баланс соотношения нитрозотиолы: пероксинитрит смещается в сторону пероксинитрита. Этот процесс, по-видимому, предопределяет переключение положительных для клетки модулирующих эффектов N0 на активацию апоптоза. В связи с этим прежняя общая стратегия при терапии состояний, сопровождающихся активацией свободнорадикального метаболизма на резкое увеличение антиоксидантного потенциала организма, должна быть дополнена принципами лечебных подходов к отдельным звеньям свободнорадикального метаболизма. Таким образом, необходимо учитывать, что цитопротекторный эффект свободного радикала в виде оксида азота в определенной области его эндогенных концентраций сохраняется. Это можно осуществлять под контролем лабораторного анализа МДА, СОД, нитротиро-зина, гомоцистеина, окислов азота и нитрозотиолов.
N0 в виде нитрозотиолов является необходимым при протекании важнейших регуляторных и цитопротек-торных процессов на уровне органелл клетки и всего организма. Остается малоизученной проблема управления внутриклеточными цитопротекторными функциями N0. Проводя фармакотерапевтическое воздействие методами, вмешивающимися в связывание и гашение свободных радикалов, необходимо учитывать, что при этом связываются такие физиологически важные парамагнитные молекулы, как монооксид азота. С другой стороны, излишнее назначение доноров N0 также влечет за собой неблагоприятные последствия. Нарушение этого звена метаболизма в эндотелии и окружающих
\
клетках формирует состояние оксидативного и нитро-зилирующего стресса Клетки субэндотелия (макрофаги, фибробласты, гладкомышечные и др ) и клетки крови также участвуют в развитии указанных выше нарушений метаболизма АФК, РАВ и нарушений регуляции кровообращения Нарушение функций клеток, связанных с образованием, транспортом и использованием (метаболизмом) физиологически важного свободного радикала - NO, может являться непосредственной причршой развития тяжелых состояний, заключающихся в развитии атеротромботических осложнений
Литература
1 ВанинАФ Дыншпрозилъные комплексы железа и S-нитрозо тиолы - две возможные формы сгпабилизации и гпранспоргпа оксида азота в биосистемах Биохимия 1998, 63 (7) 924-38
2 Волин М С Дэвидсон К А Камински ПМ и др Механизмы пере дачи сигнала оксид ант - оксид азота в сосудистой ткани Биохимия 1998, 63 (7) 958-65
3 Liu Z, RuddMA FreedmanJE, LoscalzoJ S-Transmtrosation Reactions Are Involved in the Metabolic Fate and Biological Actions of Nitric Oxide J Pharmacol experiment ther 1998, 284 (2) 526-34
4 Mallis RJ, Buss JE, Thomas J A Oxidative modification ofH-ras S thi olation and S mtrosilation of reactive cysteines Biochem J2001, 355 145-53
5 Осипов АН Изучение реакций активных форм кислорода (супероксидных и гидроксильныхрадикалов, перекиси водорода, гипохлорита) и окиси азота с биологически важными соедине ниями Авгпореф дис д ра биол наук М, 1999
6 СтоклеЖ К,Мюлле Б,АндрианцитохайнаР,КлещевА Гиперпродукция оксида азота в пагпофизиологии кровеносных сосудов Биохимия 1998, 63 (7) 976-83
7 Ross R The pathogenesis of atherosclerosis A perspective for the 1990s Nature 1993, 362 801
8 Upchurh GR, Welch GN, Fabian AJ et al Homocysteine decreases bioavailable nitnc oxide by a mechanism involving glutathione peroxidase f Biol Chem 1997, 272 1 7012-7
9 fourd'heueil D et al Dynamik state of S-nitrosothiols in hwnanplas ma and и hole blood Free Radic Biol Med 2000, 28 409-17
10 Жлоба AA Лабораторная диагностика нарушений свобод-норадикалъного метаболизма Методическое пособие СПб Изд-во СПбГМУим ИПЛавлова, 2001
11 HalliuellB, Chinco S Lipid peroxidation its mechanism, yneasure ment, and significance Am f Clin Nutr 1993, 57 715S-725S
12 Ohkan a H, Ohishi N, Yagi Kumo, Assay for lipid peroxides in ani-?nal tissues by thiobarbituric acid reaction Anal Biochem 1979, 95 351-8
13 Wan-hua amy Yu, Spatial and Temporal Correlation of Nitric Oxide Synthase Expression with CuZn Superoxide Dismutase Reduction in Motor Neurons following Axotomy Ann NYAS 2002, 962 111-21
14 Kluge I, Gutteck-Amsler U, Zollinger M, Do KQ S mtrosoglutathione in rat cerebellwn identification and quantification by liquid chromatography-mass spectrometry JNeurochem 1997, 69 2599-607
15 RauhalaP,LinAM Y, Chiueh CC Neuroprotection by S mtrosoglutathione of brain dopamine new от Jro?n oxidatn e stress FASEB J 1998, 12 165-73
16 Dimmeler S, Haendeler], Nehls M et al Suppression of Apoptosis by Nitric Oxide via Inhibition oflnterleukin IB-converting Enzyrne (ICE) like and Cysteine Protease Protein (CPP) 32 like Proteases f Exp Med 1997, 185 601-7
17 Kim Y M, Kim TH, Chung HT et al Nitric oxide prevents tumor necrosis factor alpha induced rat hepatocyte apoptosis by the interruption of mitochondrial apoptotic signaling through S-nitrosylation of caspase 8 Hepatology 2000, 32 770-8
18 Mannick]B, HausladenA, Liu L et al Fas-induced caspase deni-trosylation Science 1999, 284 651-4
19 Rossig L, Fichtscherer В, BreitschopfK et al Nitric Oxide Inhibits Caspase-3 by S-Nitrosation in Vivo 1999 f Biol Che?n 1999, 274 6823-6
20 HoggN, Singh Rf, Kalyanaraman В The role of glutathione in the transport and catabolism of nitric oxide 1996FEBS Lett 1996, 382 223-8
21 МаедаХ,Акаике T Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке Биохимия 1998, 63 (7) 1007-19
