CC BY
89
Обзорнаястатья/Review article_
УДК 636.084.4.422 ' DOI: http://doi.org/10.20914/2310-1202-2017-3-174-179_
Влияние бактериальных культур на сохранность зеленых кормов
Оксана Ю.Мальцева 1 [email protected]
Ольга Л. Мещерякова 1 [email protected]
Инна В. Новикова 1 [email protected]
Дарья С.Степанова 1 dari [email protected]
Мария С.Степанова 1 [email protected]
Ольга С. Корнеева 1 [email protected]
1 Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19, г. Воронеж, 394036, Россия
Реферат. Для получения силосной закваски растительного сырья на основе бактериальных монокультур были тщательно изучены свойства и выбраны штаммы молочнокислых и пропионовокислых бактерий, наиболее полно удовлетворяющие требованиям, предъявляемым к консервирующим препаратам. Были выбраны следующие штаммы: Bifidobacterium bifidum N1 в виде лиофилизата, Propionibacterium freudenreichiisub sp. shermanii - КМ 186 в виде жидкого препарата, Lactobacillus plantarum 8P-A3 в виде лиофилизата. Для получения данного бактериального концентрата была проведена серия опытов по подбору необходимых концентраций для каждого вида силосуемого сырья. Положительным результатом считали отсутствие посторонней микрофлоры в заложенной на хранение биомассе по истечении двух месяцев. О качестве заготавливаемого силоса судили по содержанию органических кислот в травянистой массе. Основным показателем эффективности применения молочнокислых бактерий для закваски является накопление молочной кислоты, пропионовокислых - пропионовой кислоты. Содержание кислот при силосовании трудносилосуемых (амарант красный в фазе молочно-восковой спелости, лебеда) и легкосилосуемых культур (кукуруза в начале фазы восковой спелости (конец фазы молочно-восковой спелости), подсолнечник однолетний масличный в начале цветения) определяли в соответствии с ГОСТ. Высокое содержание молочной и пропионовой кислот гарантирует хорошую сохранность силоса. Их низкое содержание означает недостаток сахаров в массе или же указывает на то, что в массу проникает кислород.
Ключевые слова: силосование, закваска, травянистые корма, сельское хозяйство, молочнокислые бактерии, пропионовокис-лые бактерии
The influence of bacterial cultures on the conservation of green
fodders
Oksana Yu. Maltseva 1 [email protected]
Olga L. Meshcheryakova 1 [email protected]
Inna V. Novikova 1 [email protected]
Dari'a S. Stepanova 1 dari [email protected]
Maria S. Stepanova 1 [email protected]
Olga S. Korneeva 1 [email protected]
1 Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia
Summary. Properties of microbial cultures were carefully studied and strains of lactic and propionate bacteria, which meet requirements imposed to the preserving medicines, are chosen. The following strains were selected: Bifidobacterium bifidum N1 as a lyophilizate, Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii - KM 186 in the form of a liquid preparation, Lactobacillus plantarum 8P-A3 in the form of lyophilizate. To obtain this bacterial concentrate, a series of experiments was conducted to select the necessary concentrations and to create the optimal composition of the starter for each type of silicate raw material. A positive result was the absence of extraneous micro flora in the stored biomass after a month. The quality of harvested silage was judged by the content of organic acids in the herbaceous mass. The main indicator of the effectiveness of lactic acid bacteria for leaven is the accumulation of lactic acid, propionic acid - propionic acid. The content of acids in the siloing of the labor-prone (amaranth red in the phase of the milk-wax ripeness, quinoa) and light-sown crops (corn at the beginning of the phase of wax ripeness (end of the phase of milky wax ripeness), sunflower one-year-old oilseed at the beginning of flowering) was determined in accordance with GOST. The high content of lactic and propionic acids guarantees good preservation of the silage. Their low content means a lack of sugars in the mass or
indicates that oxygen penetrates into the mass._
Keywords: silage, leaven, herbaceous fodder, agriculture, lactic acid bacteria, propionic acid bacteria
Для цитирования МальцеваО.Ю., МещеряковаОЛ., НовиковаИ.В., СгепановаД.С., СтепановаМ.С., Корнеева О.С. Влияние бактериальных культур на сохранность зеленых кормов // Вестник ВГУИТ. 2017. Т. 79. № 3. С. 174-179. doi:10.20914/2310-1202-2017-3-174-179
For citation
Maltseva O.Y., Meshcheryakova O.L., Novikova I.V., Stepanova D.S., Stepanova M.S., Korneyeva O.S. The influence of bacterial cultures on the conservation of green fodders. Vestnik VGUIT [Proceedings of VSUET]. 2017. vol. 79. no. 3. pp. 174-179. (in Russian). doi: 10.20914/2310-12022017-3-174-179
Введение
Сочные травянистые корма занимают значительный удельный вес в ежедневном рационе молочного скота наравне с грубыми кормами и витаминными концентратами. В роли основных видов корма из травянистых растений и сельскохозяйственных культур выступают силос и сенаж. Питательная ценность, безопасность и наличие в них качественных компонентов являются решающими факторами, определяющими производительность и общее состояние здоровья скота.
Длительность процесса закладки, некачественная утрамбовка и защищенность зеленой массы от попадания кислорода ведут к возникновению процессов гниения во время хранения силоса; загрязненность почвой повышает возможность неправильного протекания процесса ферментации, что приводит к образованию маслянокислых бактерий; нарушение технологии выемки биокорма повышает возможность развития возбудителей анаэробной порчи. Главным консервирующим веществом в силосе должна быть молочная кислота. Для ее образования требуется меньше сахара, недостаток которого в растениях отрицательно сказывается на качестве их консервирования. Поэтому при силосовании растений с недостатком сахара в зеленую массу добавляют легкосилосующиеся культуры и специальные силосные бактериальные закваски, приготовленные из молочнокислых бактерий.
В настоящее время наибольшее применение находят именно биологические методы силосования кормов. Одним из способов сохранения бобовых, зерновых и травянистых растений является силосование, основанное на действии бактерий молочнокислого брожения. Для того, чтобы улучшить качество процесса брожения, повысить анаэробную стабильность, снизить уровень образующегося в процессе консервирования сока, а также значительно увеличить кормовую ценность силоса производителями ежегодно предлагается широкий спектр силосующих средств именно биологического происхождения.
Ключевым фактором эффективного повышения энергетической и протеиновой питательности силоса является применение микробиологических заквасок. При этом их качество определяет не цена, а способность надежно сквашивать трудно поддающиеся силосованию высокобелковые травянистые растения с низким содержанием сахара, такие как люцерна, лебеда, амарант и т. д.
Практика показывает, что в процессе заготовки кормов преимущество следует отдать не сухим концентрированным закваскам, а жидким формам консерванта, поскольку они
представляют собой бактерии в активной фазе развития и при внесении в зеленую массу начинают действовать немедленно, в сравнении с сухими формами микробных консервантов. За это время концентрация патогенной микрофлоры, представленной, в основном, плесневыми грибами и гнилостными бактериями, достигает своего максимума, нагревая травянистую массу и активируя процесс маслянокислого брожения, который затруднительно и зачастую невозможно полностью погасить с помощью силосных препаратов.
В связи с этим широкое распространение получили различные силосные закваски, действие которых направлено на обеспечение доминирования микрофлоры молочнокислого брожения. Такие препараты при достаточной дозе их внесения в силосуемую массу обеспечивают доминанту молочнокислого брожения на всех этапах процесса силосования.
Материалы и методы
Для создания бактериальной закваски, которая будет соответствовать заявленным требованиям и сможет обеспечить сохранность в готовом сырье максимального числа жизнеспособных клеток,были тщательно изучены свойства микробных культур и выбраны штаммы молочнокислых и пропионовокислых бактерий, наиболее полно удовлетворяющимт-ребованиям, предъявляемым к консервирующим препаратам. Для решения поставленной задачи были использованы следующие виды микроорганизмов: лиофильно высушенная культура бактерий Bifidobacterium bifidum - N1; жидкая бактериальная закваска Propionibacterium freudenreichiisub sp. shermanii - КМ 186; лиофильно высушенный концентрат бактерий Lactobacillus plantarum 8Р-А3. При выборе микробных монокультур для силосования определенного вида растительного сырья были учтены индивидуальные особенности каждого вида бактерий и их специфические свойства.
В качестве силосуемого сырья были выбраны следующие сельскохозяйственные культуры и травянистые растения: легкосило-суемые (кукуруза в фазе восковой спелости (конец фазы молочно-восковой спелости), подсолнечник однолетний масличный) и труд-носилосуемые (лебеда обыкновенная, амарант молочно-восковой спелости).
Ниже изложен последовательный процесс силосования выбранных травяных культур.
Была проведена серия опытов по подбору оптимальных концентраций монокультур бактерий для каждого вида силосуемого сырья. Результаты проведенных экспериментов представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Подбор оптимального расхода монокультур бактерий для силосования растений
Table 1.
Selection of optimal consumption of monocultures of bacteria for ensiling plants
Штамм микроорганизмов Strain of microorganisms Количество жизнеспосо бных клеток, КОЕ/гр Number of viable cells, CFU/g Диапазон рекомендуемого расхода бактерий на0,1 дм3воды, г The recommended range of bacteria for 0.1 dm3 of water, g Расход рабочего раствора на 0,15 кг силосуемой массы, дм3 The consumption of the working solution is 0.15 kg of silage mass, dm3
Bifidobacterium bifidum N1 5х 108 0,5-3,0 0,001
Propionibacterium freudenreich-iisub sp. shermanii КМ 186 2 x 109 0,5-2,0 0,001
Lactobacillus plantarum 8Р-А3 2 x 109 1,0-4,0 0,001
Бактериальную закваску применяли из расчета 3,34 дм3 на 1 т зеленой массы. Силосуемую биомассу очищали, измельчали до 0,5 см и орошали выбранной концентрацией монокультур микроорганизмов, утрамбовывали по 150 г. в стерильные емкости на хранение без доступа воздуха.
Положительным результатом считали отсутствие посторонней микрофлоры в заложенной на хранение биомассе по истечении 2-х месяцев. Качество силосования оценивалось по физико-химическим показателям (наличие молочной кислоты, уровень рН) [9-11].
На основе полученных данных определили, что для силосования легкосилосуемых культур оптимальной концентрацией бактерий Bifidobacterium bifidum N1 является 1,5 г на 0,1 дм3 водного раствора. При полученном расходе достигается требуемый уровень рН = 4,1.
В исследуемых образцах амаранта и лебеды при концентрации ниже 2 г на 0,1 дм3водного раствора после обработки восстановленной бактериальной закваской было обнаружено присутствие посторонней микрофлоры: бактерии группы кишечной палочки, плесневые грибы рода Aspergillus, Penicillum, Fusarium. Это позволяет сделать вывод о недостаточной концентрации выбранного штамма по сравнению с легкосилосуемым сырьем.
Рост вышеперечисленных микроорганизмов снижает кормовую ценность травянистой массы и увеличивает риск возможности развития заболеваний у сельскохозяйственных животных. Для достижения оптимального диапазона рН = 4,1-4,2 для обработки трудносилосуемых растений применяют выбранный штамм из расхода 2 г сухого бактериального концентрата на 0,1 дм3 воды. Результаты представлены на рисунке 1.
Восстановленная закваска на основе лак-тобактерий позволила достичь требуемого уровня рН зеленой массы легкосилосуемых культур (кукуруза в конце фазы молочно-воско-вой спелости, подсолнечник в начале цветения)
при расходе 2,4 г сухого концентрата на 0,1 дм3 раствора для восстановления закваски.
При силосовании амаранта и лебеды до рН среды выше 4,5 активно развивалась патогенная микрофлора: плесневые грибы. Полученные результаты отражены на рисунке 2. е
5,5 — ;
3 ;
0,5 1 1,5 2 2,5
Расзсод бифидооактерий (г)на 0,1 дм^еоды
Consumption of bifidobacteria
Рисунок 1. Зависимость рН от концентрации бифидобактерий для обработки трудносилосуемого сырья
Figure 1. Dependence of рНof the medium on the concentration of bifidobacteria for the treatment of labor-sensitive raw materials
1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5
Pa ci од лакто бактерий (г) н a 0,1 дм* e оды
Consumption of Lactobacillus
Рисунок 2. Зависимость реакции среды рН от концентрации лактобактерий для обработки трудносилосуемого сырья
Figure 2. Dependence of the reaction of the рНof the medium on the concentration of lactic acid bacteria for the treatment of labor-sensitive raw materials
При силосовании легкосилосуемых культур закваской на основе пропионовокислых бактерий при ее восстановлении из расчета 1,2 г на 0,1 дм3 воды отсутствовала посторонняя микрофлора консервируемой массы.
На рисунке 3 представлена зависимость уровня рН среды от концентрации бактерий Propionibacterium freudenreichiisub sp. shermanii для заготовки силоса из трудносилосуемого сырья. При концентрации1,9 г бактерий на 0,1 дм3 воды реакция среды достигает оптимальных значений (рН =4,1) для эффективного процесса силосования. При снижении концентрации бактерий наблюдался рост плесневых грибов родов Fusarium, Mucor, Aspergillus и Penicillum.
Рдеюдпрфпнокобокчелик бактерий (г)нл 0.1 ДН1 волы,
Consumption of propionic acid bacteria
Рисунок 3. Зависимость уровня рН среды от концентрации пропионовокислых бактерий для обработки трудносилосуемого сырья
Figure 3. Dependence of the рН of the medium on the concentration of propionic acid bacteria for the treatment of labor-scarce raw materials
Высокое содержание молочной и пропи-оновой кислот гарантирует хорошую сохранность силоса. Их низкое содержание означает недостаток сахаров в массе или же указывает на то, что в массу проникает кислород.
Бактерии Propionibacterium freudenreichiisub sp. shermanii накапливают в процессе своей жизнедеятельности пропионовую кислоту, что характеризует их способность к сбраживанию сахаров, а, следовательно, воздействие на патогенные микроорганизмы при приготовлении силоса.
GJ I и 2
Расходом фидо5 актеров (j) н а 0.1 д я3 с од ы
легшзсшюфваиЕутлиы трзнносшгос^тапеЕЗ'жь^м
Consumption of bifidobacteria
Рисунок 4. Зависимость количества молочной кислоты в силосе от концентрации бифидобактерий
Figure 4. Dependence of the amount of lactic acid on silage of the concentration of bifidobacteria
На рисунке 4 отражено содержание образовавшейся молочной кислоты при различных концентрациях бифидобактерий для каждого вида силосуемого сырья.
При силосовании выбранных культур лактобактериями наибольшее содержание молочной кислоты достигалось при концентрации 2,4 г сухого бакконцентрата на 0,1 дм3 воды для кукурузы и подсолнечника и 3,5 г - для лебеды и амаранта. Полученные результаты отражены на рисунке 5.
0 g
k \ Lact]
hs
? : caa
'J Vs i
S*j 40 3 5 й
1 20.
is: - -
,9 * - л i, | и
1рт0££10£Ч1Ш f LynirypH
В'ллурн
]
1,5
1
IA
3
3.5
РанодлтоЗшеркШна 0,1 JU: воды
Consumption of Lactic acid
Рисунок 5. Зависимость количества молочной кислоты в силосе от концентрации лактобактерий
Figure 5. Dependence of the amount of lactic acid on the concentration of lactic acid bacteria
Определили, что при концентрации 1,2 г сухого концентрата пропионовокислых бактерий на 0,1 дм3 воды для легкосилосуемых и при 1,9 для трудносилосуемых культур уровень пропионовой кислоты достигает своих оптимальных значений.
На рисунке 6 представлена зависимость количества пропионовой кислоты в силосуемой массе от концентрации пропионовокислых бактерий.
Р t, 100
^ Propionic acid content в
трудно сило су е^ште культуры
_легкоси.тосуеные культуры
Расход прапноновокнелых oaK7ep[ifi(r) на u.I дат водь!
Consumption of propionic acid bacteria
Рисунок 6. Зависимость количества пропионовой кислоты в силосе от концентрации пропионовокислых бактерий
Figure 6. Dependence of the amount of lactic acid on silage of the concentration of propionic acid bacteria
Основными показателями качественной заготовки силоса из травянистых растений и культуртакже являются цвет, запах, структура. В соответствие с ГОСТ 10444.11-2013 (ISO 15214:1998) «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных»данные показатели определили органолептически.
Было выяснено, что цвет и структура силоса соответствовали требованиям, посторонний запах силосуемой массы отсутствовал при всех концентрациях бактериальной закваски, а контаминантная микрофлора присутствовала в сырье до оптимальной концентрации засева бактерий.
ЛИТЕРАТУРА
I Иванов Д.В. Современные технологии и технические средства приготовления силосованных кормов: учебное пособие. Ставрополь: АГРУС, 2014.
_ Семенихина В.Ф., Будрик В.Г., Рожкова И.В. и др. Разработка технологий заквасок прямого внесения // Сборник научных трудов. «Научное обеспечение молочной промышленности». 2010.
3 Абраскова С.В., Шашко Ю.К., Шашко М.Н. Биологическая безопасность кормов. Минск: Бела-рус. наука, 2013. 257 с.
4 Чичерин И.Ю., Погорельский И.П., Лундов-ских И.А., Малов А.А. и др. Динамика содержания лакто-бацилл, микробных метаболитов и антибактериальной активности растущей культуры LactobacillusPlantarum 8P-A3 // Журнал инфектологии. 2013.
5 Denkova R, Denkova Z.. Yanakieva V., Bla-zheva D. Antimicrobial activity of propionic lactobacilli, bifidobacteria and propionic acid bacteria, isolated from different sources //Formatex. 2013. V.2. P. 857-864.
6 Bevilacqua A., Cagnazzo M.T., Caldarola C., Ciuffreda E. et al. Bifidobacteria as Potential Functional Starter Cultures // SciRes. 2012. V.3. P.55-63.
7 ГОСТ 23637-90. Сенаж. Технические условия. Определение массовой доли органических кислот методом Леппера-Флига.
8 ГОСТ 10444.11-2013 (ISO 15214:1998). Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных.
9 Bliavya V. et al. Effect of clusterbean genotypes (Cyamopsistetragonoloba L.) with different seed rate on green fodder yield //International Journal of Tropical Agriculture. 2016. V. 34. №. 4. P. 961-964.
10 Mewes M. et al. A systematic approach for assessing spatially and temporally differentiated opportunity costs of biodiversity conservation measures in grasslands //Agricultural Systems. 2015. V. 137. P. 76-88.
II Mupangwa W.. Thierfelder C. Intensification of conservation agriculture systems for increased livestock feed and maize production in Zimbabwe // International Journal of Agricultural Sustainability. 2014. V. 12. №. 4. P. 425-439.
Заключение
На основе органолептической и биохимической оценки выбранного силосуемого сырья было выяснено, что в концентрациях монокультур молочнокислых и пропионовокислых бактерий, выбранных оптимальными, достигаются наилучшие показатели процесса заготовки зеленых кормов. Использование полученных концентраций бактерий позволит в дальнейшем создать комплексную закваску, которая будет не только обладать улучшенными консервирующими свойствами, но и способствовать нормализации пищеварения сельскохозяйственных животных и улучшения качества получаемой продукции.
REFERENCES
1 Ivanov D.V. Sovremennye tekhnologii I tekhnicheskie sredstva [Modern technologies and technical means of preparation of silage forages] Stavropol, AGRUS, 2014. (in Russian)
2 Semenikhin V.F., Budrik V.G., Rozhkova I.V. et al. Development of technologies for starter cultures of direct application. Nauchnoe obespechenie molochnoi promysh-lennosti [Collection of scientific works. "Scientific provision of the dairy industry"] Moscow, VNIMI, 2010. (in Russian)
3 Abraskova S.V., Shashko Yu. K., Shashko M.N. Biologicheskaya bezopasnost' kormov [Biological safety of fodder] Minsk, Belarus Science, 2013. 257 p. (in Russian)
4 Chicherin I.Yu., Pogorelsky I.P., Lundovskikh I.A., Malov A.A. et al. Dynamics of the content of lactoba-cilli, microbial metabolites and antibacterial activity of the growing culture of Lactobacillus Plantarum 8P-A3. Zhurnal infektologii [Journal of Infectology] 2013. (in Russian)
5 Denkova R., Denkova Z., Yanakieva V., Bla-zheva D. Antimicrobial activity of propionic lactobacilli, bifidobacteria and propionic acid bacteria, isolated from different sources. Formatex. 2013. vol. 2. pp. 857-864.
6 Bevilacqua A., Cagnazzo M.T., Caldarola C., Ciuffreda E. et al. Bifidobacteria as Potential Functional Starter Cultures. SciRes. 2012. vol. 3. pp.55-63.
7 GOST 23637-90. Senazh. Tekhnicheskie usloviya [State standard 23637-90. Haylage. Technical conditions. Determination of the mass fraction of organic acids by the Le]per-Flig method] Moscow, Standartinform Publ., 1991. 10 p. (in Russian).
8 GOST 10444.11-2013 (ISO 15214: 1998). Mikrobiologiya pishchevykh produktov [State standard 10444.11-2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs] (in Russian)
9 Bhavya V. et al. Effect of clusterbean genotypes (Cyamopsistetragonoloba L.) with different seed rate on green fodder yield. International Journal of Tropical Agriculture. 2016. vol. 34. no. 4. pp. 961-964.
10 Mewes M. et al. A systematic approach for assessing spatially and temporally differentiated opportunity costs of biodiversity conservation measures in grasslands. Agricultural Systems. 2015. vol. 137. pp. 76-88.
11 Mupangwa W., Thierfelder C. Intensification of conservation agriculture systems for increased livestock feed and maize production in Zimbabwe. International Journal of Agricultural Sustainability. 2014. vol. 12. no.. 4. pp. 425-439.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
Оксана Ю.Мальцева к.т.н., доцент, кафедра биохимии и биотехнологии), Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19, г. Воронеж, 394036, [email protected]
Ольга Л. Мещерякова к.т.н.,доцент, кафедра биохимии и биотехнологии), Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19, г. Воронеж, 394036,
Инна В. Новикова д.т.н., доцент, кафедра бродильных и сахаристых производств, Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19, г. Воронеж, 394036,
Дарья С.Степанова магистрант, кафедра биохимии и биотехнологии, Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19,г. Во-ронеж,394036, Россия,[email protected] Мария С.Степанова, магистрант, кафедра биохимии и биотехнологии, Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19,г.Во-ронеж,394036, Россия,[email protected] Ольга С. Корнеева д.б.н., профессор, зав. кафедрой биохимии и биотехнологии, Воронежский государственный университет инженерных технологий, пр-т Революции, 19, г. Воронеж, 394036, Россия,[email protected]
КРИТЕРИЙ АВТОРСТВА
Все авторы в равной степени принимали участие в написании рукописи и несут ответственность за плагиат
КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. ПОСТУПИЛА 20.08.2017 ПРИНЯТА В ПЕЧАТЬ 14.09.2017
INFORMATION ABOUT AUTHORS
Oksana Y. Maltseva,assistant professor, biochemistry and biotechnology department, Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia, [email protected] Olga L. Meshcheryakova, assistant professor, biochemistry and biotechnology department, Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia, [email protected] Inna V. Novikova, doctor of technicalsciences, professor, department of Technology of fermenting and sugary production, Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia,[email protected] Daria S. Stepanova, student, biochemistry and biotechnology department, Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia, [email protected] Maria S. Stepanova, student, biochemistry and biotechnology department, Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia, [email protected] Olga S. Korneyeva, doctor of biological sciences, professor, biochemistry and biotechnology department, Voronezh state university of engineering technologies, Revolution Av., 19 Voronezh, 394036, Russia,[email protected]
CONTRIBUTION
All authors equally participated in the writing of the manuscript and are responsible for plagiarism
CONFLICT OF INTEREST
The authors declare no conflict of interest. RECEIVED 8.20.2017 ACCEPTED 9.14.2017
