CC BY
132
УДК 577.158:611.36+577.164.17
влияние 5-формилтетрагидрофолиевой кислоты на характер изменения активности цитохром р450-зависим0й монооксигеназной системы гепатоцитов и некоторые биохимические показатели крови крыс при хронической
алкогольной интоксикации И. П. Суть ко
Лаборатория биохимической токсикологии и наркологии ГУ «НПЦ «Институт фармакологии и биохимии НАН Беларуси»
Исследовалось влияние восстановленной формы фолиевой кислоты 5-формилтетрагидрофолата (лейково-рина) на монооксигеназную систему гепатоцитов и биохимические показатели крови крыс при хронической алкогольной интоксикации. Значительное увеличение скорости гидроксилирования анилина и р-нитрофенола, О-деалкилирования этокси- и метоксирезоруфинов, О-деалкилирования пентоксирезоруфина указывает на преимущественную активацию у животных, получавших этанол, 2Е1, 1А2 и 2В1/2 изоформ цитохрома Р450. Лейково-рин нормализовывал ксенобиотико-метаболизирующую функцию печени, в первую очередь, активность цитохро-мов Р4501А2 и 2В1/2, и уменьшал степень выраженности эндогенной интоксикации.
Ключевые слова: 5-формилтетрагидрофолиевая кислота, активность цитохром Р450-зависимой моноокси-геназной системы гепатоцитов, хроническая алкогольная интоксикация.
The influence of the reduced form of folic acid - 5-formyltetrahydrofolate (leucovorin) - on the hepatocytes monooxygenase system activity and blood biochemical parameters in chronic alcohol intoxication has been studied. Substantial increase in aniline and p-nitrophenol hydroxylases, and ethoxy-, methoxy- and penthoxyresorufin O-dealkylases activities indicates primary induction in animals receiving ethanol, 2Е1, 1А2 and 2В1/2 isoforms ofcytochrome Р450. The obtained results prove that leucovorin have normalized the catalytic activity of cytochrome P450, especially cytochromes P450 1A2 and 2B1/2, and also reduced an endogenous intoxication.
Key words: 5-formyltetrahydrofolate, hepatocytes monooxygenase system activity, chronic alcohol intoxication.
Введение
В основе алкогольного поражения печени лежит способность алкоголя в организме окисляться до ацетальде-гида, основного метаболита этанола, который, образуя комплексы с белками, приводит к активации или угнетению ряда ферментов, нарушению репарации ДНК, истощению запасов глутатиона и других внутриклеточных антиоксидантов, разобщению окисления и фосфорили-рования со снижением энергопродукции, увеличению интенсивности процессов ПОЛ, стимулированию образования провоспалительных цитокинов и коллагена [16].
Системное окисление этанола в печени включает три метаболических пути, которые могут функционировать параллельно: с использованием алкогольдегидрогеназы, системы микросомального окисления и каталазы перок-сисом [16, 31]. Цитохром Р450-зависимая микросомаль-ная этанолокисляющая система играет незначительную роль в метаболизме небольших количеств алкоголя, но активируется при его избытке и приобретает существенное значение при злоупотреблении им [31].
Этанол является субстратом цитохрома Р450 и в то же время оказывает влияние на монооксигеназную систему, активируя отдельные изоформы цитохрома Р450, главным образом цитохром Р450 2Е1 [18]. Реакции мик-росомального окисления ксенобиотиков и эндогенных субстратов являются важным источником образования свободных радикалов, продукция которых увеличивается при активации микросомальных монооксигеназ [18, 20]. Если функциональной мощности компонентов анти-оксидантной системы оказывается недостаточно, то сво-боднорадикальные повреждения биомолекул и интенсификация перекисного окисления липидов вносят свой вклад в развитие интоксикации.
В то же время повреждение гепатоцитов, наблюдаю-
щееся в ходе развития патологического процесса в печени, стимулирует регенерацию этого органа. Показано, что ведущую роль в репаративных процессах в печени при остром или хроническом действии агентов различной этиологии играют ДНК-синтетические процессы -пролиферация и полиплоидизация гепатоцитов [3].
Таким образом, фармакологическая коррекция алкогольного поражения печени может осуществляться препаратами, способными влиять на процессы тканевого обмена (витамины), нормализовывать функциональную активность и стимулировать репаративно-регенерацион-ные процессы в печени.
Такой направленностью действия обладает и лейко-ворин (^Д]-5-формилтетрагидрофолат), который представляет собой восстановленную форму фолиевой кислоты, способную вовлекаться в пути одноуглеродного переноса без участия фермента дигидрофолат редукта-зы [28, 29].
Регулирующая роль 5-формилтетрагидрофолата в одноуглеродном метаболизме [8, 12, 29], роль запасной формы фолатных коферментов в покоящемся состоянии жизненного цикла клетки [8, 12], более быстрое его превращение в метилтетрагидрофолиевую кислоту по сравнению с фолиевой кислотой [24], а также антиоксидант-ные свойства [9, 30] позволяют предположить, что 5-фор-милтетрагидрофолат может выступать в роли активного эндогенного регулятора обмена веществ в организме, в том числе и цитохром Р450-зависимой монооксигеназ-ной системы гепатоцитов.
Фолаты представляют интерес и в связи с тем, что потребление этанола связано с нарушением всасывания фолиевой кислоты в кишечнике, сниженным поступлением ее в печень и повышенной экскрецией с мочой [27]. Фолатная недостаточность в свою очередь способ-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Журнал ТрТМУ 2011 № l
ствует нарушению функции печени посредством изменений в метаболизме метионина [14, 27].
Целью данного исследования явилось изучение влияния лейковорина (5-формилтетрагидрофолата) на характер изменения активности монооксигеназной системы гепатоцитов и некоторые биохимические показатели крови крыс при хронической алкогольной интоксикации животных.
Материалы и методы исследований
Опыты были проведены на 48 крысах-самцах линии Wistar массой 130-150 г.
Моделирование хронической алкогольной интоксикации у крыс проводилось согласно Liber C.S., DeCarli L.M. [17]. Животные экспериментальных групп получали ad libitum жидкую диету, 36 % энергетической ценности которой обеспечивалось за счет этанола. В контрольной изокалорической диете этанол замещался углеводным компонентом диеты.
Одной из экспериментальных групп животных (группа II) назначался лейковорин (5-формилтетрагидрофоли-евая кислота) фирмы «Лэнс» (Россия). Лейковорин вводился один раз в сутки, внутрибрюшинно, в дозе 17,5 мг/кг. Доза препарата выбрана в соответствии с экспериментальными данными, полученными ранее [4]. Животным контрольной группы и экспериментальной группы I в это же время вводили физиологический раствор внут-рибрюшинно в дозе 0,3 мл/100 г.
Через 6 недель после начала эксперимента животных декапитировали на фоне эфирного наркоза. Проводили забор крови. Печень промывали охлажденным 1,15% раствором KCL через нижнюю полую вену. Микросо-мальную фракцию печени выделяли дифференциальным центрифугированием [2]. Готовили 25% гомогенат в 1,15% растворе KCL. Осадок микросом суспендировали в 0,05М трис HCL буфере (pH=7,4) с 1мМ ЭДТА и 20% содержанием глицерина. Все манипуляции проводили при +4°С. Микросомальную и цитозольную фракции печени в дальнейшем замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С.
Активность монооксигеназной системы эндоплазма-тического ретикулума гепатоцитов in vitro оценивали по содержанию цитохромов Р450 и b5, скорости окисления NADPH и NADH, а также по скорости метаболизма эток-си-, метокси- и пентоксирезоруфинов, р-нитрофенола и анилина в микросомальной фракции печени крыс.
Определение содержания общего цитохрома Р450 и b5 производили по методу T. Omura, R. Sato [22], окисление NADPH (NADH) оценивали по скорости падения оптической плотности NADPH (NADH) в процессе его окисления согласно методу Gillette [11]. Скорости реакций О-деэтилирования 7-этоксирезоруфина, О-демети-лирования 7-метоксирезоруфина и О-деалкилирования 7-пентоксирезоруфина определяли по количеству образовавшегося в результате реакции резоруфина [26]. Скорость метаболизма р-нитрофенола оценивали по количеству образовавшегося р-нитрокатехола при 536 нм [15]. Скорость гидроксилирования анилина определяли по количеству образовавшегося р-аминофенола [13].
Определение активности трансаминаз, щелочной фосфатазы и у-глутамилтрансферазы, показателя тимоловой пробы, содержания общего билирубина в сыворотке крови проводили с использованием набора реактивов ООО «Анализ Плюс» (Беларусь) и «PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.» (Чехия). Содержание средних молекул определяли методом, основанном на осаждении высокомолекулярных белков плазмы крови действием хлор— б
ной кислоты и этилового спирта с последующей фотометрией при 210 нм [1].
Активность дигидрофолатредуктазы в цитозольной фракции печени исследовали спектрофотометрическим методом [23]. В качестве субстрата использовали дигид-рофолиевую кислоту, синтезированную путем восстановления фолиевой кислоты дитионитом натрия [5, 10].
Концентрацию общего белка в микросомальной фракции определяли по методу Lowry [25].
Статистическая обрабтка результатов поводилась с использованием критерия t Стьюдента. Различия в сравниваемых группах считались достоверными при уровне значимости 95 % (р< 0,05).
Результаты и их обсуждение
Результаты проведенного эксперимента показали, что хроническое потребление этанола крысами в течение 6 недель сопровождается повышением содержания общего пула цитохромов Р450 и Ь5 в микросомальной фракции печени на 39 и 21 %, соответственно. На 43 % увеличивались скорости окисления NADPH и NADH. Повышение содержания общего пула цитохрома Р450 сопровождалось увеличением активности 7-этоксирезоруфин О-деэтилазы (цитохром Р450 1А1 и 1А2-зависимая реакция) на 38 %, 7-пентоксирезоруфин О-деалкилазы (цитохром Р450 2В1/2-зависимая реакция) - на 86 %, анилин р-гидроксилазы (цитохром Р450 2Е1 -зависимая реакция) - на 67 %, р-нитрофенол гидроксилазы (цитохром Р450 2Е1 -зависимая реакция) - на 90 %. В 2 раза по сравнению с контрольной группой увеличивалась активность 7-ме-токсирезоруфин О-деметилазы (цитохром Р450 1А2-за-висимая реакция) (таблица 1).
Таблица 1 - Активность цитохром Р450-зависимой монооксигеназной системы печени крыс при хронической алкогольной интоксикации без и на фоне введения лейковорина
Показатели Контроль Группа I (этанол+ физ. раствор) Группа II (этанол+ лейковорин)
Цитохром Р450, нмоль/мг белка 0,72 ± 0,06 1,00 ± 0,11* 139 100 0,75 ± 0,06 # 104 75
Цитохром Ь5, нмоль/мг белка 0,52 ± 0,03 0,63 ± 0,04 * 121 100 0,683 ± 0,03* 132 109
Окисление NADРH, нмоль/мин/мг белка 2,53 ± 0,16 3,63 ± 0,31* 144 100 2,93 ± 0,21 116 81
Окисление NADH, нмоль/мин/мг белка 2,03 ± 0,17 2,90 ± 0,24* 143 100 2,50 ± 0,18 123 86
7-Этоксирезоруфин О-деэтилаза, пмоль/мин/мг белка 40,26 ± 4,30 55,72 ± 5,77* 138 100 51,54 ± 3,44 128 92
7-Метоксирезоруфин О-деметилаза, пмоль/мин/мг белка 14,80 ± 1,29 29,76 ± 4,38* 201 100 14,98 ± 1,24 # 101 50
7-Пентоксирезоруфин О-деалкилаза, пмоль/мин/мг белка 6,63 ± 1,53 12,35 ± 2,06* 186 100 7,323 ± 1,30 # 110 59
Анилин р-гидроксилаза, нмоль/мин/мг белка 0,36±0,035 0,60±0,05* 167 100 0,57±0,06* 160 96
Р-нитрофенол гидроксилаза, нмоль/мин/мг белка 0,16±0,01 0,30±0,02* 190 100 0,28±0,02* 174 92
Примечание: Над чертой - изменения исследуемых показателей (в %) по отношению к контролю, принятому за 100 %, под чертой - по отношению к I группе. Р < 0,05 по отношению к контролю. # Р < 0,05 по отношению к I группе.
Введение лейковорина опытным животным нормализовало содержание общего пула цитохрома Р450, скорости окисления NADPИ и NADИ, активность 7-этокси-, 7-метокси- и 7-пентоксирезоруфин О-деалкилаз в мик-росомальной фракции печени крыс.
Исследование сыворотки крови показало, что у экспериментальных животных, получавших этанол в течение 6 недель, увеличивалась активность АлАТ на 40 %, концентрация общего билирубина возрастала в 2,72 раза, увеличилась степень выраженности эндогенной интоксикации (содержание средних молекул возрастало на 24%) (таблица 2). Увеличение показателя тимоловой пробы в этой группе животных в 2,36 раза по сравнению с контролем свидетельствует о наличии воспалительного поражения печени. Уровни активности сывороточных g-глутамилтрансферазы, служащей индикатором алкогольного повреждения печени, и щелочной фосфатазы были повышены, соответственно, на 26 и 24 %.
Таблица 2 — Изменение биохимических показателей сыворотки крови у крыс с хронической алкогольной интоксикацией без и на фоне введения лейковорина
Показатели Контроль I группа (этанол+ физ. раствор) II группа (этанол+ лейковорин)
Активность 0,84±0,04* 0,79±0,03*
АлАТ, 0,60±0,03 140 133
мккат/л 100 95
Активность 0,91±0,03 0,92±0,03
АсАТ, 0,90±0,01 102 103
мккат/л 100 101
Общий 10,83 ± 1,00* 10,50 ± 1,23*
билирубин, 3,98 ± 0,538 272 264
мкмоль/л 100 97
Тимоловая 0,45 ± 0,075 1,06 ± 0,12* 1,08 ± 0,14*
проба, ед. 8-И 236 100 241 102
Щелочная 1307,00 ± 94,99* 1028,00 ± 59,65 #
фосфатаза, Ед/л 892,10 ± 60,06 147 100 115 79
у-глутамил- трансфераза, Ед/л 1,08 ± 0,06 1,36 ± 0,067* 126 100 1,16 ± 0,07 108 86
Средние 1,29 ± 0,07* 1,08 ± 0,05 #
молекулы, г/л 1,04 ± 0,04 124 100 104 84
контроль
I группа (этаноп+физ. раствор)
II группа (этанол+лейковорин)
Примечание: Над чертой - изменения исследуемых показателей (в %) по отношению к контролю, принятому за 100 %, под чертой - по отношению к I группе. Р < 0,05 по отношению к контролю. # Р < 0,05 по отношению к I группе.
Назначение лейковорина животным, подвергающимся хронической алкогольной интоксикации, способствовало нормализации таких биохимических маркеров состояния гепатобилиарной системы, как щелочной фос-фатазы и у-глутамилтрансферазы. Содержание средних молекул в экспериментальной группе, получавшей лей-коворин, снижалось до уровня контрольной группы (таблица 2).
Потребление животными этанола в течение 6 недель приводило к снижению активности дигидрофолатредук-тазы на 21 % по сравнению с контролем. У животных, получавших лейковорин (группа II), зарегистрировано достоверное увеличение активности данного фермента по сравнению с группой I (рисунок 1).
Таким образом, результаты, полученные в ходе данного экспериментального исследования, подтверждают нарушение функционирования печени при хронической алкогольной интоксикации. Анализ активности цитохром Р450-зависимого монооксигеназного комплекса гепато-цитов свидетельствует об активации ферментов первой
Гисупок 1 - Активность ОигиОрофолатреОуктазы в цитозоле печени крыс
Примечание: * Р < 0,05 по отношению к контролю.
# Р < 0,05 по отношению к I группе
фазы метаболизма лекарственных веществ у длительно потреблявших этанол крыс по сравнению с контрольными животными. Значительное увеличение скорости гид-роксилирования анилина и р-нитрофенола, О-деалкили-рования этокси- и метоксирезоруфинов, О-деалкилиро-вания 7-пентоксирезоруфина указывает на преимущественную активацию у животных, получавших этанол, соответственно, 2Е1, 1А2 и 2В1/2 изоформ цитохрома Р450.
В группе животных, получавших лейковорин, содержание общего пула цитохрома Р450, скорости окисления NADPH и NADH, активности этоксирезоруфин О-деэти-лазы (1А1-, 1А2-, 1В1/2-зависимая реакция), метоксире-зоруфин О-деметилазы (1А2-зависимая реакция) и пен-токсирезоруфин О-деалкилазы (2В 1/2-зависимая реакция) были на уровне контрольной группы. Это свидетельствует о способности лейковорина восстанавливать ксенобио-тико-метаболизирующую функцию печени при хронической алкогольной интоксикации, снижая до уровня контроля, в первую очередь, активности 1А2 и 2В1/2 изо-форм цитохрома Р450. Несмотря на то, что первостепенную роль в метаболизме этанола играет цитохром Р450 2Е1, показано, что изоформы Р450 1А2 и 2В1/2 также ме-таболизируют этанол в микросомах печени крыс и человека [18, 31].
Гепатозащитное действие лейковорина, о чем свидетельствуют данные биохимического анализа крови животных, вероятно, достигается благодаря важной роли восстановленных форм фолиевой кислоты в переносе одноуглеродных единиц. Так, 5-метилтетрагидрофолат играет важную роль в процессах метилирования, в том числе и метилирования ДНК [19, 28]. Фолатные кофер-менты, участвуя в синтезе метионина, обеспечивают необходимый пул метильных радикалов для биосинтеза фосфолипидов [7]. S-аденозилметионин, образующийся из метионина, в свою очередь, регулирует образование восстановленного глутатиона в печени [27] (рисунок 2).
Диметил-глицин
Синтез ^ ,,,
Тетрагидро-
пурш°в \ фолат ^ метио
V S-аденозил- V метионин
А.
10-формил-тетрагидро-фолат
i
5-формил-тетрагидро-фолат
5-метил тетрагидро-фолат
гомоцистеин
Бетаин
Цистатионин Цистеин глутатион
Рисунок 2 - Упрощенная схема метаболизма фолатов в печени
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Журнал ТрТМУ 2011 № 1
Показан также гепатопротекторный эффект S-адено-зилметионина против алкоголь- и цитохром Р450 2Е1-ин-дуцированного повреждения печени. Установлено, что S-аденозилметионин взаимодействует с цитохромами Р450, особенно с цитохромом 2Е1, и ингибирует их каталитическую активность при хроническом воздействии алкоголя на организм [6].
Положительное влияние лейковорина на общее функциональное состояние печени может быть связано с антиоксидантными свойствами восстановленных форм фолиевой кислоты [9, 30], а также и с липотропным действием фолатов [3, 21]. Фолаты не только снижают содержание липидов в печени, но также способствуют повышению содержания холина в печени и плазме крови на фоне дефицитного в отношении холина рациона. Фолие-вой кислотой можно также устранить жировую инфильтрацию печени, вызываемую избытком ниацина. Липот-ропный эффект фолатов, вероятно, объясняется участием фолиевых коферментов в переносе метильной группы, а также участием в превращении глицина в серин, который, в свою очередь, используется для образования холина [4].
Заключение
Полученные в ходе экспериментального исследования результаты показали, что лейковорин нормализует ксенобиотико-метаболизирующую функцию печени, в первую очередь, содержание общего цитохрома Р450 и активность его изоферментов 1А2 и 2В1/2, и уменьшает степень выраженности эндогенной интоксикации при хронической алкогольной интоксикации крыс. Положительное влияние лейковорина на общее функциональное состояние печени, вероятно, связано с участием восстановленных форм фолатов, в том числе и 5-формил-тетрагидрофолиевой кислоты, в реакциях биологического метилирования, их антиоксидантными и липотропны-ми свойствами.
Литература
1. Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимичес-кой лабораторной диагностике: в 2 т. / В.С. Камышников. - Минск: Беларусь, 2000. - Т.1. - 495 с.
2. Карузина, И.И. Выделение микросомальной фракции печени и характеристика ее окислительных систем / И.И. Карузина,
A.И. Арчаков // Современные методы в биохимии / под общ. ред.
B.Н. Ореховича. - М., 1977. - С. 42-78.
3. Подымова, С.Д. Болезни печени. Руководство для врачей. / С.Д. Подымова. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. - 704 с.
4. Сутько, И.П., Мельниченко, Н.Г., Зверинский, И.В. Оценка влияния лейковорина на монооксигеназную систему эндоплаз-матического ретикулума гепатоцитов крыс без и на фоне введения метотрексата / И.П. Сутько, Н.Г. Мельниченко, И.В. Зверинс-кий // Вестник ГрГУ им. Я.Купалы. Серия 2. - 2007. - № 2(52). -
C. 116-120.
5. Blakley, R.L. Crystalline dihydropteroylglutamic acid / R.L. Blakley // Nature. - 1960. - Vol. 188. - P. 231-232.
6. Cederbaum, A. I. Hepatoprotective effects of S-adenosyl-L-methionine against alcohol- and cytochrome P450 2E1-induced liver injury / A. I. Cederbaum // World J. Gastroenterol. - 2010. - Vol. 16, N 11. - P. 1366-1376.
7. Fidanza, A. Vitamins and lipid metabolism / A. Fidanza, M. Audisio // Acta Vitaminol. Enzymol. - 1982. - Vol. 4, № 1-2. - P. 1 05 -1 1 4.
8. Field, M.S. Regulation of de novo purine biosynthesis by methenyltetrahydrofolate synthetase in neuroblastoma / M.S. Field,
D.M.E. Szebenyi, P.J. Stover // J. Biol. Chem. - 2006. - Vol. 281, № 7. - P. 4215-4221.
9. Free radical scavenging behavior of folic acid: Evidence for possible antioxidant activity / R. Joshi [et al.] // Free Radical Biology & Medicine. - 2001. - Vol. 30, № 12. - P. 1390-1399.
10. Futterman, S. Enzymatic reduction of folic acid and dihydrofolic acid to tetrohydrofolic acid / S. Futterman // J. Biol. Chem. - 1957. - Vol. 228. - P. 1031-1038.
11. Gillete, J.R. The oxidation of drugs by liver microsomes on the role of TPNH and oxygen / J.R. Gillete, B.B. Brodie, B.N. La Du // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1957. - Vol. 119. - P. 523-540.
12. Huang, T. Mechanism for the coupling of ATP hydrolysis to the conversion of 5-formyltetrahydrofolate to 5,10-methenyltetrahydrofolate / T. Huang, V. Schirch // J. Biol. Chem. -1995. - Vol. 270, № 38. - P. 22296-22300.
13. Kato, R. Effect of starvation on NADPH-dependent enzymes in liver microsomes of male and female rats / R. Kato, R. Gillette // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1965. - Vol. 150. - P. 279-284.
14. Kharbanda, K.K. Role of transmethylation reactions in alcoholic liver disease / K.K. Kharbanda // World J. Gastroenterol. -2007. - Vol. 13, N 37. - P. 4947-4954.
1 5 . Koop, D.R. Hydroxylation of p-nitrophenol by rabbit ethanol-inducible cytochrome P-450 isozyme 3a / D.R. Koop // Mol. Pharmacol. - 1986. - Vol. 29, № 4. - P. 399-404.
16. Lieber, C.S. Metabolism of alcohol / C.S. Lieber // Clin. Liver Dis. - 2005. - Vol. 9. - P. 1-35.
17. Lieber, C.S. The feeding of alcohol in liquid diets: two decades of applications and 1982 update / C.S. Lieber, L.M. DeCarli // Alcohol Clin. Exp. Res. - 1982. - Vol. 6, № 4. - P. 523-531.
1 8. Liver disease selectively modulates cytochrome P450-mediated metabolism / R.F. Frye [et al.] // Clin. Pharmacol. Ther. -2006. - Vol. 80. - P. 235-245.
19. Lucock, M. Folic acid: Nutritional biochemistry, molecular biology, and role in disease processes / M. Lucock // Molecular genetics and Metabolism. - 2000. - Vol. 71. - P. 121-138.
20. Lu, Y., Cederbaum, A.I. CYP2E1 and oxidative liver injury by alcohol / Y. Lu, A.I. Cederbaum // Free Radical Biology & Medicine.
- 2008. - Vol. 44. - P. 723-738.
21. Mato, J.M., Martinez-Chantar, M.L., Lu, S.C. Methionine metabolism and liver disease / J.M. Mato, M.L. Martinez-Chantar, S.C. Lu / Annu. Rev. Nutr. - 2008. - Vol. 28. - P. 273-293.
22. Omura, T. The carbon monoxide binding pigment of liver microsomes. II. Solubilization, purification and propeties / T. Omura, R. Sato // J. Biol. Chem. - 1964. - Vol. 239. - P. 2379-2385.
23. Osborn, M.J. Enzymatic reduction of dihydrofolic acid / M.J. Osborn, F.M. Huennekens // J. Biol. Chem. - 1958. - Vol. 233, № 4.
- P. 969-974.
24. Pratt, R.F. Folates in plasma and bile of man after feeding folic acid-3H and 5-formyltetrahydrofolate (folinic acid) / R.F. Pratt, B.A. Cooper // J. Clin. Invest. - 1971. - Vol. 50. - P. 455-462.
25. Protein measurment with the folin phenol reagent / O.N. Lowry [et al.] // J. Biol. Chem. - 1951. - Vol. 193. - P. 265-275.
26. Rapid determination of enzyme activities of recombinant human cytochromes P450, human liver microsomes and hepatocytes / A. Ghosal [et al.] // Biopharm. Drug Dispos. - 2003. - Vol. 24. - P. 375-384.
27. Role of s-adenosylmethionine, folate, and betaine in the treatment of alcoholic liver disease: summary of a symposium / V. Purohit [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. - 2007. - Vol. 86. - P. 14-24.
2 8. Stanger, O. Physiology of folic acid in health and disease / O. Stanger // Curr. Drug Metab. - 2002. - Vol. 3, № 2. - P. 211-223.
29. Stover, P.J. Physiology of folate and vitamin B12 in health and disease / P.J. Stover // Nutr. Reviews. - 2004. - Vol. 62, № 6. - P. 3-13.
30. Tetrahydrofolate and 5-methyltetrahydrofolate are folates with high antioxidant activity. Identification of the antioxidant pharmacophore / B.M. Rezk [et al.] // Febs Letters. - 2003. - Vol. 555. - P. 601-605.
31. Zakhari, S. Overview: how is alcohol metabolized by the body? / S. Zakhari // Alcohol Res. Health. - 2006. - Vol. 29, N 4. - P. 245-254.
Поступила 04.02.2011
