CC BY
7
9. Grigorovskij, V. V., Strafun, S. S., Kostogryz, O. A. et. al (2012). Patomorfologicheskie izmenenija i ishod travma-ticheskogo defekta sustavnoj poverhnosti myshhelka bedrennoj kosti v uslovijah implantacii v jeksperimente autogennyh hon-drocitov suspenzii ehvivo. Ortopedija, travmatologija i prote-zirovanie, 4, 30-39.
10. Petrenko, A. Ju., Hunov, Ju. A., Ivanov, Je. N. (2011). Stvolovye kletki. Svojstva i perspektivy klinicheskogo prime-nenija. Lugansk: OOO «Press Jekspress», 368.
11. Litovchenko, A. V. (2015). Reparatyvna metodyka hirurgichnogo likuvannja defektiv hrjashha kolinnogo sugloba. Mizhnarodnyj medychnyj zhurnal, 21 (2), 52-55.
12. Ishenin, Ju. M. (2010). Doktrina mehanicheskoj tun-nelizacii. Vestnik klinicheskoj mediciny, 3 (2), 51-54.
13. Eroshkin, S. N. (2012). Vozmozhnosti revaskuljarizira-jushhej osteotrepanacii v kompleksnom lechenii gnojnonekrotich-eskih form sindroma diabeticheskoj stopy. Novosti hirurgii, 5, 57-61.
14. Brittberg, M., Aglietti, P., Gambardella, R. et. al. International Cartilage Repair Society ICRS. ICRS 2005а. Available at: http://www.cartilage.org
15. Lysholm, J., Gillquist, J. (1982). Evaluation of knee ligament surgery results with special emphasis on use of a scoring scale. The American Journal of Sports Medicine, 10 (3), 150-154. doi: 10.1177/036354658201000306
Дата надходженнярукопису 18.09.2015
Лгговченко Андрш Вшторович, асшрант, кафедра екстрено! та неввдкладно! медично! допомоги, ортопеда та травматологи, Харшвський нацюнальний медичний унiверситет, пр. Ленiна, 4, м. Харшв, Укра!на, 61022 E-mail: weunp@ukr.net
Березка Микола 1ванович, доктор медичних наук, професор, завiдувач кафедри, кафедра екстрено! та неввдкладно! медично! допомоги, ортопеди та травматологi!, Харк1вський нацюнальний медичний ушвер-ситет, пр. Ленша, 4, м. Харк1в, Укра!на, 61022
Гулща Максим Олегович, кандидат медичних наук, ассистент, кафедра екстрено! та невщкладно! медично! допомоги, ортопеди та травматологи, Харшвський нацюнальний медичний ушверситет, пр. Ленша, 4, м. Харшв, Укра!на, 61022
Гарячий Свгенш Владиславович, кандидат медичних наук, асистент, кафедра екстрено! та неввдкладно! медично! допомоги, ортопеди та травматологи, Харшвський нацюнальний медичний ушверситет, пр. Лень на, 4, м. Харшв, Укра!на, 61022
УДК: 616.24-02.54/.57-07:576.852.211 DOI: 10.15587/2313-8416.2015.51771
ВИКОРИСТАННЯ НОВО1 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧНО1 СИСТЕМИ GENOTYPE I Р1ДКОГО ЖИВИЛЬНОГО СЕРЕДОВИЩА ДЛЯ ШВИДКО1 Д1АГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЬОЗУ
© А. I. Барбова, Л. В. Гайова, О. А. Журило, П. С. Троф1мова, Н. М. Ал1ева
В po6omi представленi результати молекулярно-генетичного до^дження мульmирeзисmeнmносmi в сис-meMi GenoType MTBDRplus. Встановлено, що при наявностi мутацш, що асоцiйованi з резистентнктю до iзонiазиду лише в 93.1 % випадках спостер^аеться медикаментозна сттюсть мжобактерш туберку-льозу до iзонiазиду при проведены тесту в рiдкому сeрeдовищi. Робота виконана в рамках Нацiональноi програми боротьби iз захворюванням на туберкульоз
Ключовi слова: туберкульоз, модель, лжування, ьзотазид, доза, експеремент, змти, система, дослiджeння, дiагносmика
This paper presents the results of molecular genetic test system GenoType multyresistentens MTBDRplus. It was established that the presence of mutations associated with resistance to isoniazid, only 93.1 % of cases ofMBT to isoniazid during the test in a liquid medium. Work carried out under the National Programme to combat tuberculosis.
Materials and methods. We investigated the clinical sputum samples from patients with pulmonary tuberculosis. The applied system GenoType. Principle DNA strip technology GenoType is that the DNA-coated strip specific test that are complementary to the derived PCR amplicon. After the single-stranded amplicon denaturation associated with tests on strip (hybridize), and visualized in a sequential enzymatic reaction with streptavydynom and alkaline phosphatase. Evaluation of hybridization is performed automatically. For culturing sputum liquid culture medium used - Middlebrook broth 7N9 VASTES MGIT system.
Results and discussion. The results of molecular genetic studies of samples of sputum-concentrated and concentrated by a system GenoType not differed (P>0.05). Diagnostic value of two methods (molecular and genetic - system GenoType andphenotype - VASTESMGIT 960 system) was very high (100 %). Two systems have tested positive in the study 756 (95.5 %) Mycobacterium strains that were identified in the system VASTES MGIT 960, formed Cord Factor and the results were positive identification test ID MTB MGIT they attributed to Mycobacterium tuberculosis complex. 36 (4.5 %) samples from positive MGIT tubes were negative. As a result of molecular-genetic identification ofnontuberculous mycobacteria complex it was found that 18 (2.3 %) strains of mycobacteria belonging to the M. avium-intracellulare, 12 (1.5 %) mycobacterial cultures were attributed to M. kansasii, 6 (0,7 %) cultures were identified as M. fortuitum. The results of the molecular study of MS on Mycobacterium resistance profile INN + RIF coincided in 95.5 % (894 strains) the results of testing by pheno-typic proportions. In the presence of mutations associated with resistance to INH, only 93.1 %o of cases observed MC M. tuberculosis to INH during TMCH in a liquid medium Middlebrook 7N9. In the presence of mutations in the genes responsible for resistance to the presence of Q, in a liquid medium only 288 (90.6 %) strains of M. tuberculosis have MS to Ofx. The strains of mycobacteria DNA were detected mutations in genes associated with MS to aminoglycosides / cyclic peptides in 299 (94.0 %) cases were resistant to Am and 302 (94.9 %) cases were resistant to the results Cm DST system VASTES MGIT 960. In determining the resistance to E major differences were found between the productivity of molecular genetic and phenotypic research methods - only 206 (64.2 %) strains of M. tuberculosis were resistant to the analysis system VASTES MGIT 960. Conclusions. GenoType system allows you to quickly carry out the identification and differentiation of Mycobacterium strains of nontuberculous mycobacteria. The results of the molecular genetic studies multyrezystents system GenoType MTBDRplus match in 95.5 % of the phenotypic test results by proportions. Using DNA strip technology GenoType to determine mutations in the genes of Mycobacterium responsible for the IPU to TDC, necessarily requires a parallel DST setting in a liquid medium
Keywords: tuberculosis, model, treatment, isoniazid, dose, experiment, change, system, research, diagnostic
1. Вступ
Туберкульоз, що e найдавшшим i найбшьш по-ширеним захворюванням, на ввдмшу ввд шших шфек-цш перебтае хрошчно i тим самим один чи дешлька хворих можуть багаторазово заражати оточуючих рiзними штамами збуднишв, в тому чи^ резистент-ними. Захворювання розвиваеться, як правило, не вь дразу: ввд зараження до появи симптомiв може пройти шлька мюящв, iнодi рошв [1, 2].
У цей час у всьому свт ввдбулося пвдвищення частоти хiмiорезистентностi мшэбактерш туберку-льозу до основних протитуберкульозних препаралв (ПТП) ^зошазиду та рифампщину) i виявилося зна-чне зниження ефективносп антимiкобактерiальноl терапп при застосуванш юнуючо! ДОТС-стратеги (лшування тд безпосередшм контролем коротким курсом препаралв) контролю за туберкульозом. Цю шфекцш викликають бактерп роду Mycobacterium родини Mycobacteriaceae, типовим видом яко! i е Mycobacterium tuberculosis [3].
Бактерюлоги вивчають i публiкують питания бю-логи резистентного туберкульозу, розробляють швидк тести отримання результата резистентносп збуднишв, вивчають спектр медикаментозно! стшкосп (МС) мь кобактерш туберкульозу за результатами тестування у сво!х лабораторiях. Надзвичайна епiдемiчна сигуащя з туберкульозу в Укра!ш потребуе постшного удоскона-лення метода профшактики, виявлення та дiагностики захворювань на туберкульоз серед населення з метою зниження шфтованосп, захворюваносп та зменшення резервуару туберкульозно! шфекци [1, 2, 4, 5].
Одним iз прюритетних напрямшв в системi протитуберкульозних заходiв е тдвищення рiвня своечасно! ефективно! дiагностики. На бактерюло-
пчш лабораторп покладаеться особлива функщя у питаниях дiагностики заразних випадшв захворювання на туберкульоз та мониторингу ефективностi процесу лiкуваиня. Саме тому, важливим напрямком удосконалення та оптимiзацi! роботи лабораторiй протитуберкульозно! служби е обов'язкова стандар-тизацiя основних бактерюлопчних методiв. Впрова-дження !х в роботу дозволить отримати результати, яш можуть бути порiвнянi з результатами дослщжень iнших лабораторiй, що дасть можливють своечасно виявляти та реагувати на помилки в дiагностицi, про-водити оптимальне специфiчне лжування хворих, оптимiзувати та полегшити навчання фахiвцiв, ощ-нити якiсть роботи лабораторш, окремих фахiвцiв та проводити вщповщний контроль ефективностi лабо-раторних дослщжень [6, 7].
Для тдвищення ефективносп дiагностики туберкульозу все часпше використовуеться наступний пвдхвд: поеднання генодiагностики iз наступним куль-туральним посiвом на рiдкi живильнi середовища [8].
Використання сучасних генотипiчних i феноти-пiчних методiв дiагностики туберкульозу в практищ роботи мереж1 бактерюлопчних лабораторш протитуберкульозних заклада Укра!ни е необхвдним для максимального скорочення термiнiв шдикаци i вдентифь каци мiкобактерiй та визначення !х медикаментозно! стiйкостi до протитуберкульозних препаралв. Дуже важливим е розробка алгоршадв !х комбiноваиого за-стосування та впровадження в рутинну дiагностику практику ютотно пвдвищить ранню виявляемiсть хворих, у тому числ з малими формами туберкульозу i позалегеневим туберкульозом. Вони е перспективни-ми при обстеженш дiтей, контактних i олиобациляр-них хворих [2, 4, 6-9].
2. Обгрунтування досл1дження
Важливiсть ефективно! антибактерiальноi терапи не викликае сумшву, тобто результагивнiсть хiмiотерапii обумовлена антибагае^альною дiею хiмiотерапевтич-них препарагiв на мшобактери туберкульозу, при прове-дент хiмiотерапii бакгерiостатична дiя препаратiв впли-вае не тiльки на мiкобактерi!' туберкульозу, але й на рiзнi органи i системи хворого але даш лiтераIури що стосу-ються цього зводяться головним чином до констатаци проявiв та частоти розвитку по6!чно! дИ i опису окремих випадкiв (Куликовская Н. В. и соавт., 1996) [10]. На сьо-годнi в Украiнi, коли зпдно указу Президента Укра!ни затверджена Нацюнальна програма боротьби iз захворю-ванням на туберкульоз на 2002-2005 роки, юнують усi умови для лшування туберкульозу у вперше виявлених хворих i подолання проблеми хiмiорезистентного туберкульозу. Однак крiм державно! шдтримки, зусиль з боку лiкарiв-фтизiатрiв, лiкарiв загально! лшувально! мереж!, необхiднi заходи з боку громадськосп та засобiв масово! iнформацi!' для щдвищення р!вня знань населения про необхвдшсть своечасного i правильного лжування туберкульозу для попередження епiдемi!' хiмiорезистеитного туберкульозу (Черенько С. О., 2010) [11].
В рамках Нацюнально! програми боротьби !з за-хворюванням на туберкульоз першочерговим завдан-ням е ефективне функцiонувания мереж1 лабораторiй з дiагностики туберкульозу, як! мають забезпечити своечасне та яшсне виявлення i дiагностику заразних випадк1в туберкульозу, мониторинг процесу л^ван-ня та документальне тдтвердження вилiковування хворого шсля зак1пченпя л^вання. Для отримання яшсних, достов!рних результата лабораторних до-слвджень у закладах, що здшснюють лабораторну да-агностику туберкульозу, авторами застосована система GenoType. Система GеnoType i набори реагенпв: GеnoType Mycobacteria Direct, GеnoType MTBRplus, GеnoType MTBRsl призначенi:
- для визначення комплексу M. tuberculosis i чо-тирьох клшчно значимих нетуберкульозних вид!в мь кобактерiй: M. intracellulare, M. kansasii, M. malmoense, M. avium. Принцип роботи набору заснований на ре-акцi!' NASBA i DNA•STRIP-техиологi!;
- для визначення стшкосп до рифампiцину (RIF) i iзонiазиду (INH) в позитивних зразках мокротиння або в негативних кттчних i культуральних зразках. Виявлення стшкосп до RIF можливо при детекцл найбiльш значимих асоцiйованих мутацш гена rpoB, (кодуе бета субодиницю РНК полiмерази). Для виявлення стшкосп до INH, дослвджують ген katG, (кодуе каталазу перокси-дазу) i область перегляду в генi inhA (кодуе NADH ено-!л ACP редуктазу) (набiр GеnoType MTBRplus);
- для визначення стшкосп до фторхшолошв (Q) (офлоксацин (Ofx) та моксифлоксацин (Mfx)), амiноглiкозидiв i циктчним пептидам - ш'екцшш антибiотики такi як канамщин (Km), амiкацин (Am), капреомщин (Cm) i вюмицин, а також етамбутол (Е) в позитивних зразках мокротиння. Визначення MC до Q можливо при детекцп найбiльш значимих асоцшо-ваних мутацiй гена gyrA (кодуе А-субодиницю ДНК гiрази). Для виявлення MC до амiноглiкозидiв/циклiч-
них nem^ÎB дослвджуеться ген 16S гРНК 9 (rrs) i для виявлення MC до E - ген embB вщповвдно (цi гени разом з генами embA i embC кодують арабiнозил транс-феразу) (ra6ip GеnoType MTBRsl).
Для культивування мокротиння використано рiдке живильне середовище - бульйон Middlebrook 7Н9 в CTcreMi ВАСТЕС MGIT.
Результата молекулярно-генетичного досль дження мультирезистентностi в системi GenoType MTBDRplus спiвпадають в 95,5 % з результатами фе-нотишчного тестування методом пропорцiй. Викори-стання ДНК-стрип технологй' GenoType для визначення мутацш в генах мшобактерш, що ввдповщають за MC до ПТП, обов'язково потребуе паралельно! постановки ТМЧ в редкому середовища
Таким чином, виходячи з актуальности своечас-ностi для практики та враховуючи все вищевикладене, дана наукова робота може бути видана в якосп статтi для лiкарiв-бактерiологiв та лiкарiв-клiнiцистiв. Стат-тя буде корисною для лiкарiв рiзних спецiальностей, дiяльнiсть яких пов'язана з проблемами легеневого та позалегеневого туберкульозу.
3. Мета дослщжень
Щдвищення ефективностi i стандартизашя ме-тодiв лабораторно! дiагностики туберкульозу шляхом використання ново! молекулярно-генетично! системи GenoType i рщкого живильного середовища Middlebrook 7Н9 в системi ВАСТЕС MGIT 960.
4. Матер1али та методи
Для до^дження було ещбрано 684 зразка мокротиння з позитивними результатами бактерюскопп при забарвленш за методом Циля-Нiльсена. В досль дженнi використовували зразки концентрованого и неконцентрованого мокротиння.
Критерiем включения об'екпв вивчення у дослвди були всi штами M. tuberculosis, яш видiляли з клiнiчних зразк1в мокротиння ввд хворих на туберкульоз легень.
Для деконтамiнацiï, розрвдження i концентрацп мiкобактерiй у мокротиннi використовували реагент ВВЬ Mусорrер з NAL^^OH i додавали рiвний об'ем його до зразшв мокротиння. 1нкубували пробiрки при шмнатнш температурi протягом 15 хв. Центрифугува-ли пробiрки зi зразками при прискоренш 3000 g протягом 20 хв., зливали супернатант iз пробiрок, потiм до осаду додавали 0,8-1,0 мл стерильного фосфатного буферу та по 0,5 мл заавали в пробiрки MGIT. Для зба-гачення рiдкого живильного середовища Middlebrook 7Н9 використовували реагент PANYA, який шсля роз-ведення по 0,8 мл додавали до кожноï пробiрки MG^ безпосередньо перед посiвом матерiалу. Щробiрки по-мiщали в систему ВАСТЕС MG^ 960 та iнкубували. Для фенотишчно! iдентифiкацiï видiлених штамiв мь кобактерiй застосований iмунохроматографiчний тест (ID МТВ MGIT) [1, 3, 4, 12, 13].
В робоп використана молекулярно-генетична система GenoType з рiзними наборами реагентiв:
- набори GеnoType Mycobacteria Direct i Gе-noType Mycobacteria СМ застосовували для визна-
чення комплексу M. tuberculosis (M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis subsp., M. bovis BCG, М. capre, M. microti, M. сanetti, M. pinnipedii) i чотирьох клжчно значимих нетуберкульозних видiв мшэ-бактерш: M. intracellulare, M. kansasii, M. malmoense, M. avium. Принцип робо-ти набору заснований на реакци NASBA i DNA. STRIP-технологii;
- набiр GеnoType MTBRplus вико-ристовували для визначення стшкосп до рифампщину (RIF) i iзонiазиду (INH) в позитивних зразках мокротиння або в не-гативних клжчних i культуральних зраз-ках. Виявлення стшкосп до RIF можливо при детекцп найбшьш значимих асоцшо-ваних мутацш гена rpoB, (кодуе ß-субо-диницю РНК полiмерази). Для виявлення стшкосп до INH, дослщжують ген katG, (кодуе каталазу, пероксидазу) i область перегляду в генi inhA (кодуе NADH ено!л ACP редуктазу);
- набiр GеnoType MTBRsl був застосований для визначення стшкосп до фторхшолошв (Q), амiноглiкозидiв/циклiчних пептидiв, а також етам-бутолу (Е) в позитивних зразках мокротиння. Визначення MC до Q можливо при детекцп найбшьш значимих асоцшованих мутацш гена gyrA (кодуе а-субодиницю ДНК прази). Для виявлення медикаментозно! стшкосп до амiноглiкозидiв/циклiчних пептидiв дослщжуеться ген 16S гРНК 9 (rrs) i для виявлення MC до E - ген embB вщповщно (цi гени разом з генами embA i embC кодують арабшозил-трансферазу) [5, 14, 15].
В наборах для виявлення, щентифжацп i визначення МС мжобактерш використана ДНК-стри-пова технологiя (виробництво Hain Lifescience (ffi-меччина)).
Процедура проведення тестування шдроздм-лася на три етапи: видiлення ДНК iз дослiдного мате-рiалу, мультиплексна амплiфiкацiя з бютиншровани-ми праймерами i реверс-гiбридизацiя.
Пiсля хiмiчно! денатураци, одноланцюговi амп-лiкони зв'язуються iз зондами (пбридизац!я). Високо специфiчне зв'язування комплементарних ланцюпв ДНК обумовлено жорсткими умовами, яш створюють-ся в результат оптимально! комбiнацi! складу буфера i температури. Таким чином, зонди можуть вiрогiдно розпiзнавати калька варiантiв послщовностей у тесту-емо! областi гена. Кон'югована стрептавiдином лужна фосфатаза зв'язуеться з бютином амплiконiв за допо-могою фрагментiв стрептавiдина. У тдсумку, лужна фосфатаза перетворюе доданий субстрат у пофарбо-вану форму, яка стае видимою на мембраш стрипiв, як кольоровий преципiтат. Оцiнка проводиться комп'ю-терною програмою автоматично.
Зберiгання даних дослiджень та !х математич-на обробка виконувались за допомогою лщензшних програмних продуктiв, як1 входять до пакету Microsoft Office Professional 2000, лiцензiя Russian Academic OPEN NoLevel № 17016297.
5. Результата дослщження
В табл. 1 показано результати дослвджень зраз-kîb мокротиння за допомогою молекулярно-генетич-но! системи GenoType, n=684, (M±m) %.
В табл. 2 показано результати пор1вняльного до-слвдження культурального i молекулярно-генетичного методу дiагностики туберкульозу позитивних за результатами бактерюскош! зразкiв мокротиння, (М±т) %.
Таблиця 2 Результати порiвняльного дослвдження культурального i молекулярно-генетичного методу дiагностики туберкульозу позитивних за результатами бактерюскош! зразшв мокротиння, (М±т) %
ЮльКсть зразюв
Методи дослщження мокротиння
Абс M ± m
ВАСТЕС MGIT(+) 846 100
GenoType(+) 846 100
Примтка: (+) - позитивный результат
В табл. 3 показано результати дослвдження кттч-них iзолятiв мiкобактерiй, що були видiленi в рщкому се-редовищi в системi ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %.
В табл. 4 показано результати порiвняльного аналiзу мультирезистентних штамiв M. tuberculosis за допомогою молекулярно-генетично! системи.
GenoType MTBDRplus i системи ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %.
В табл. 5 показано результати порiвняльного аналiзу медикаментозно! стiйкостi до рифампщину за допомогою молекулярно-генетично! системи GenoType и набору MTBDRplus i системи ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %.
В табл. 6 показано результати порiвняльного аналiзу медикаментозно! стшкосп до iзонiазиду за допомогою системи GenoType i набору MTBDRplus та системи ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %.
В табл. 7 показано результати порiвняльного ана-лiзу медикаментозно! стiйкостi до фгорхiнолонiв, амь ноглiкозидiв/циклiчних пептидiв та етамбутолу штамiв М. tuberculosis за допомогою молекулярно-генетичного та фенотишчного методiв, N=318, (M±m) %.
Таблиця 1
Результати дослвджень зразкiв мокротиння за допомогою молекулярно-генетично! системи GenoType, n=684, (M±m) %
Клшчний матерiал Кiлькiсть зразюв, що мютять ДНК мiкобактерiй
M. tuberculosis-complex М. avium-intracellulare М. fortuitum M. kansasii
абс М±т абс М±т абс М±т абс М±т
Мокротиння 642 93,9±0,9* 24 3,5±0,7* 12 1,8±0,5* 6 0,9±0,4*
Концентро-ване мокротиння 642 93,9±0,9* 24 3,5±0,7* 12 1,8±0,5* 6 0,9±0,4*
Примтка: * - р>0,05 при nopiemmi результатiв позитивностi зразтв неконцентрованого та концентрованого мокротиння в системi GenoType
Таблиця 3
Результата дослщження клшчних iзолятiв мжобактерш, що були видiленi в редкому середовищi в системi ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %
Ыстоди дослвдження Кшьюсть штамш мжобактерш
абс M±m
Корд-фактор (+) ID MTB MGIT (+) GenoType MTBDRplus (+) 756 95,5±0,7*
Корд-фактор (-) ID MTB MGIT (-) GenoType MTBDRplus (+) 36 4,5±0,7*
Всього 792 100
Примтки:
(+) - позитивний результат; (-) - негативний результат;
* - р<0,01 при поргвнянш кглькостг зразюв мокротиння з позитивними результатами фенотитчноï ¡дентифгкацп i молекулярно-генетичних до^джень та K^m^i зразюв мокротиння з негативними результатами фенотипiчноï iдентифiкацiï i позитивними результатами аналiзу в сис-темi GenoType MTBDRplus
Таблиця 4
Результата порiвняльного аналiзу мультирезистентних штамiв M. tuberculosis за допомогою молекулярно-генетично1' системи GenoType MTBDRplus i системи ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %
Mcrc^n дослвдження Кшьюсть штамш
абс M±m
GenoType MTBDRplus RIF (+) INH (+) ВАСТЕС MGIT RIF (+) INH (+) 894 95,5±0,7*
GenoType MTBDRplus RIF (+) INH (+) ВАСТЕС MGIT RIF (-) INH (-) 42 4,5±0,6*
Всього 936 100
Примтки:
(+) - позитивний результат; (-) - негативний результат;
* - р<0,01 при порiвняннi показниюв мультирезистентно-crni, виявлених фенотитчним i генотитчним методами од-ночасно та результатiв мультирезистентностi, виявлени-ми за результатами молекулярно-генетичного до^дження i негативнихрезультатiв мультирезистентностi методом культуральноï дiагностики
Таблиця 5
Результата аналiзу медикаментозно1' стшкосп до рифамшцину за допомогою молекулярно-генетичноï системи GenoType и набору MTBDRplus i системи ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %
Mcrc^ дослщження Кшьюсть штамш
абс M±m
GenoType MTBDRplus RIF (+) ВАСТЕС MGIT RIF (+) 102 100
Всього 102 100
Примтки:
(+) - позитивний результат; (-) - негативний результат
Таблиця 6
Результати порiвняльного аналiзу медикаментозноï стшкосп до iзонiазиду за допомогою системи GenoType i набору MTBDRplus та системи ВАСТЕС MGIT 960, (M±m) %
Mетоди дослщження Юльюсть штамiв
абс M±m
GenoType MTBDRplus INH (+) ВАСТЕС MGIT INH (+) 324 93,1±1,4*
GenoType MTBDRplus INH (+) ВАСТЕС MGIT INH (-) 24 6,9±1,3*
Всього 348 100
Примтки:
(+) - позитивний результат; (-) - негативний результат;
* -р<0,01 при порiвняннi показниюврезистентностi до iзо-шазиду (INH), виявлених за допомогою культурального методу i молекулярно-генетичноï системи GenoType та показниюв резистентностi до iзонiазиду (INH), виявлених лише за допомогою молекулярно-генетичного методу
Таблиця 7
Результати порiвняльного аналiзу медикаментозно1'
стшкосп до фторхшолошв, амiноглiкозидiв/циклiчних пептидiв та етамбутолу
шташв M. tuberculosis за допомогою молекулярно-генетичного та фенотишчного метсдав,
N=318, (M±m) %
Mетоди дослвдження Юльюсть штамш
абс M±m
GenoType MTBDRsl Q (+) ВАСТЕС MGIT Ofх (+) 288 90,6±1,6*
GenoType MTBDRsl Q (+) ВАСТЕС MGIT Ofх (-) 30 9,4±1,6*
GenoType MTBDRsl амшоглжозиди/ цикшчш пептиди (+) ВАСТЕС MGIT Am (+) 299 94,0±1,3*
GenoType MTBDRsl амшоглжозиди/ цикшчш пептиди (+) ВАСТЕС MGIT Am(-) 19 6,0±1,3*
GenoType MTBDRsl амшоглжозиди/ циктчш пептиди (+) ВАСТЕС MGIT Cm (+) 302 94,9±1,2*
GenoType MTBDRsl амшоглжозиди/ цикшчш пептиди (+) ВАСТЕС MGIT Cm(-) 16 5,1±1,2*
GenoType MTBDRsl E (+) ВАСТЕС MGIT E(+) 206 64,2±2,7*
GenoType MTBDRsl E (+) ВАСТЕС MGIT E (-) 112 35,8±2,7*
Примтки:
(+) - позитивний результат; (-) - негативний результат;
* - р<0,01 при порiвняннi показниюв резистентностi до Ofx, Am, Cm та Е, виявлених за допомогою культурального методу i системи GenoType та показниюв резистентностi до Q, амiноглiкозидiв/циклiчних пептидiв та Е, виявлених лише за допомогою молекулярно-генетичного методу
6. Обговорення результат1в досл1дження
Шсля проведения всiх етапiв дослiдження були отримаш наступнi результати молекулярно! вденти-фiкацiï мiкобактерiй на рiвнi ДНК: в 642 (93,9 %) зразках було шдтверджено наявнють комплексу М. tuberculosis, в 42 (6,2 %) зразках було виявлено мшо-бактерп нетуберкульозного комплексу: в 24 (3,5 %) випадках - М. avium-intracellulare, в 12 (1,8 %) випад-ках - М. fortuitum, а в 6 випадках (0,9 %) спостерта-лась M. kansasii. Результати дослвджень за допомогою системи пбридизаци з типоспецифiчними зондами GenoType представлеш в табл. 1.
З даних табл. 1 видно, що результати молекуляр-но-генетичних дослiджень зразкiв неконцентрованого i концентрованого мокротиння за допомогою системи GenoType не вiдрiзнялись мiж собою (р>0,05).
З табл. 2 видно, що вс зразки мокротиння, що давали рют при дослвдженш методом посiву в системi ВАСТЕС MGIT 960, мали позитивний результат в системi GenoType, щодо наявност ДНК M. tuberculosis-complex. Дiагностична щншсть двох методiв дiагностики була дуже високою та склада-ла 100 %.
При посiвi клшчних iзолятiв мiкобактерiй на 5,0 % кров'яний агар росту неспецифiчноï мшрофло-рi не спостерiгалося, що сввдчило про видiлення чи-стоï культури мiкобактерiй. При мiкроскопiï вмiсту позитивних пробiрок MGIT була пiдтверджена кис-лотостiйкiсть видiлених бактерiй, корд-фактор був визначений в 756 (95,5 %) випадках, в 36 (4,5 %) позитивних пробiрках MGIT при мшроскопи були виявлеш окремi кислотостшш бактерiï (КСБ), якi не утворюва-ли корд-фактор. Це дало нам тдставу припустити, що данi культурi мiкобактерiй не належать до комплексу М. tuberculosis i потребують подальшо1' ретельно1' iдентифiкацiï.
Всi культури мшобактерш, що були отримаиi з позитивних пробiрок MGIT дослiджувалися за допомогою iмунохроматографiчного iдентифiкацiйного тесту ID MTB MGIT. За результатами дослвдження виявило-ся, що 756 (95,5 %) культур, як мали корд-фактор, були вдентифтоваш, як М. tuberculosis-complex, 36 (4,5 %) культур, що не утворювали корд-фактор, ввднесеш до мiкобактерiй нетуберкульозного комплексу.
На наступному етапi всi культури мiкобактерiй були дослiдженi за допомогою молекулярно-генетич-ноï системи GenoType. Результати дослвджень пред-ставленi в табл. 3.
З табл. 3, видно, що 756 (95,5 %) штамiв мiко-бактерш, якi були видiленi в системi ВАСТЕС MGIT 960, утворювали корд-фактор та були позитивними за результатами вдентифшацшного тесту ID MTB MGIT, при проведенш молекулярно-генетичних дослвджень в системi GenoType були iдентифiкованi як М. tuberculosis-complex.
За результатами дослвджень з використанням iдентифiкацiйного тесту ID MTB MGIT 36 (4,5 %) проб з позитивних пробiрок MGIT мали негативний результат. Ц мшобактери не утворювали корд-фактор, тому 1х можна було вiднести до комплексу нетубер-
кульозних мiкобактерiй. Тому було проведено 1х до-слiджения в системi GenoType з наборами GеnoType Mycobacteria Direct i GеnoType Mycobacteria СМ, яш дають можливiсть вдентифшувати клшчно-значи-мi iзоляти мiкобактерiй за межами туберкульозного комплексу.
За результатами молекулярно-генетичноï вден-тифiкацiï було встановлено, що з 36 культур мiкобак-терш 18 (2,3 %) належали до М. avium-intracellulare, 12 (1,5 %) культур мiкобактерiй були ввднесеш до М. kansasii, 6 (0,7 %) культур було вдентифшовано, як М. fortuitum.
Враховуюч те, що для призначення ефективноï терапп хворим на туберкульоз, необхвдним е не тшь-ки результат про наявшсть M. tuberculosis-complex в органiзмi пацiента, найбiльш вагомим е отримання в короткий термш профiлю медикаментозноï резистент-ностi видшених мiкобактерiй, нами були розпочати дослвдження щодо обгрунтування використання моле-кулярно-генетичноï системи GenoType для швидкого визначення МС мiкобактерiй.
Нашi дослiджения були спрямоваш на визна-ченнi MС M. tuberculosis-complex в системi GenoType та наборами реагента GenoType MTBDRplus та GenoType MTBDRsl для визначення медикаментозноï резистентностi до INH i RIF, Q, амiноглiкозидiв/ци-клiчних пептидiв та E вiдповiдно.
За результатами фенотишчного тестування на МС M. tuberculosisв рiдкому середовищi були вщбра-нi 936 мультирезистентних штамiв M. tuberculosis, що циркулювали серед хворих на туберкульоз з рiзними категорiями та випадками захворювання. Результати дослвджень представлеш в табл. 4.
Результати молекулярного дослвдження МС мь кобактерш щодо профiлю резистентностi MDR-шта-мiв, тобто до INH i RIF одночасно сшвпали в 95,5 % (894 штами) з результатами фе^то^ч^то тестування методом пропорцш в системi ВАСТЕС MGIT 960.
Результати визначення монорезистентносп до RIF, або в комбшацп з iншими ПТП, ^м INH за допомогою двох метсдов не вiдрiзнялись мiж собою и пов-нiстю спiвпадали (табл. 5).
За допомогою набору GenoType MTBDRplus нами було дослвджено 348 штамiв МБТ з резистент-шстю до INH i спiвставленнi з результатами тесту медикаментозноï чутливостi (ТМЧ) в системi ВАСТЕС MGIT 960. В табл. 6 представлеш результати по-рiвняння результатiв фено- та генотишчного методiв щодо резистентносп до INН.
Було виявлено, що при наявносп мутацiй, що асоцшоваш з резистентнiстю до INH, лише в 93,1 % випадках спостерпалась MC M. tuberculosis до INH при проведенш TM4 в рвдкому середовищi Middlebrook 7Н9.
Нами були виконаш дослiдження щодо порiв-няльного вивчення показникiв резистентностi до ПТП 2-го ряду, виявлених за допомогою молекулярно-ге-нетичного i фенотипiчного метсдав. Для цього було вiдiбраио 318 штамiв M. tuberculosis, якi за результатами вивчення МС в системi GenoType iз застосуван-
ням набору GenoType MTBDRsl, мали резистентшсть до групи Q, амiноглiкозидiв/циклiчних пептидiв та E. Для визначення медикаментозноï стiйкостi фенотитч-ним методом до офлоксащну (Ofx), амiкацииу (Am), капреомщину (Cm) та Е було застосовано рiдке сере-довище в системi ВАСТЕС MGIT 960.
Результати порiвияльних дослiджень представ-ленi в табл. 7.
З табл. 7 видно, що при наявносп мутаци в генах, що вщповщають за наявшсть стiйкостi до Q, в рщкому середовищi лише 288 (90,6 %) штамiв M. tuberculosis мали МС до Ofx. Штами мшобактерш, в ДНК яких були виявлеш мутацiï в генах, асоцшова-них з МС до амiноглiкозидiв/циклiчних пептидiв, в 299 (94,0 %) випадках були стшкими до Am та в 302 (94,9 %) випадках були стшкими до Cm за результатами ТМЧ в системi ВАСТЕС MGIT 960. При визна-ченш стiйкостi для E були виявлеш найбiльшi розбш-ностi мiж результативнiстю молекулярно-генетичного i фенотипчиого методiв дослiджения - лише 206 (64,2 %) штамiв M. tuberculosis були стшкими за результатами аналiзу в системi ВАСТЕС MGIT 960.
На пiдставi отриманих експериментальних даних та проведеного аналiзу встаиовлено загальнi пiдходи до дiагностики туберкульозу та хiмiорезис-тентного туберкульозу з використаниям сучасних гено-фенотипових метсдов. Генотиповi методи вико-ристовуються з метою виявлення, диференцiальноï дiагностики i визначення чутливосп мiкобактерiй до ПТП 1-го i 2-го ряду, обов'язково паралельно супрово-джуються класичними культуральними дослвдження-ми на рiдких та/або щiльних живильних середовищах, не використовуються для бактерюлопчного мошто-рингу л^вання хворих на туберкульоз (для цього застосовуються бактерiоскопiя мазкiв мокротиння i культуральш дослiдження на рiдких та/або щ№них живильних середовищах).
7. Висновки
Впроваджения в дiагностичнi дослвдження на туберкульоз системи GenoType дозволило швидко проводит iдентифiкацiю видiлених мiкобакгерiй та ди-ференцiацiю нетуберкульозних штамiв мiкобакгерiй (M. avium-intracellulare, M. fortuitum, M. kansasii та iн.).
1. Результати молекулярно-генетичного досл> дження мультирезистентносп в системi GenoType MTBDRplus ствпадають в 95,5 % з результатами фе-нотипiчного тестування методом пропорцш.
2. Виявлено, що при наявносп мутацш, що асо-цшоваш з резистентшстю до iзонiазиду, лише в 93,1 % випадках спостерпаеться МС МБТ до iзонiазиду при проведенш тесту в редкому середовищi.
3. Наявшсть мутацш в генах, що асоцшоваш з медикаментозною стшшстю до протитуберкульозних препаралв, не завжди пвдтверджуеться фенотипчии-ми методами дослiджень. Тому використання ДНК-стрип технологiï GenoType для визначення мутацш в генах мiкобактерiй, що ввдповвдають за медикамен-тозну стiйкiсть до протитуберкульозних препаралв, обов'язково потребуе паралельноï постановки тесту
медикаментозноï чутливостi в рiдкому середовищi для повноï характеристики медикаментозноï стшкосп мь кобактерiальноï популяцiï.
4. Авторами доведено, що стстема GenoType дозволяе швидко проводити iдентифiкацiю мiкобакте-рш та диференцiацiю нетуберкульозних штамiв мiко-бактерiй.
Л1тература
1. Иртуганова, О. А. Автоматизированные методы культурального определения Mусobacterium tuberculosis на жидких средах [Текст] / О. А. Иртуганова и др. // Проблемы туберкулеза. - 2001. - № 3. - С. 53-56.
2. Дорожкова, И. Р. Повышение эффективности выделения и идентификации микобактерий в условиях централизованной микобактериологической лаборатории [Текст] / И. Р. Дорожкова, М. В. Макарова, Г. Е. Фрейман // Туберкулез и болезни легких. - 2012. - № 11. - С. 21-26.
3. Барбова, А. I. Застосування автоматизовано1 системи MGIT для дiагностики туберкульозу легень i визначення медикаментозно1 стшкост мжобактерш [Текст]: метод. рек. / А. I. Барбова та in - 1нститут фтииатрп i пульмонологи iм. Ф. Г. Яновського АМН Украши. - К.: 1ФП, 2007. - 24 с.
4. Журило, О. А. Молекулярно-генетичш тдходи до здшснення щешпфжацп мжобактерш [Текст]: тез. доп. / О. А. Журило, А. I. Барбова, П. С. Трофiмова та in. // V зЧзд фтизiатрiв i пульмонолога Украши. - К., 2013. - С. 123-124.
5. Елисеев, П. И. Результаты применения методов GenoType MTBDRplus и BАСТЕС MGIT для определения лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза [Текст] / П. И. Елисеев, Е. И. Никишова, Г. П. Горина, А. О. Марьяндышев // Туберкулез и болезни легких. - 2012. -№ 6. - С. 31-34.
6. Журило, О. А. Система забезпечення якосп бактерюлопчних дослвджень в закладах, що здшснюють мжробь ологчну дiагностику туберкульозу на рiзних ршнях надання медично1 допомоги Украши [Текст] / О. А. Журило та in -Кровоград: Полiум, 2013. - 72 с.
7. Журило, О. А. Стандарти бакгерiологiчноï дiа-гностики туберкульозу в лаборатор1ях протитуберкульозних закладш Украши [Текст] / О. А. Журило, А. I. Барбова, Т. Г. Глушкевич, Л. В. Третякова. - Кшв, 2012. - 190 с.
8. Барбова, А. I. Сучасш тдходи щодо проведения бактерюлопчно1 щентифжацп мжобактерш [Текст] / А. I. Барбова, О. А. Журило, П. С. Трофiмова та in // Украш-ський пульмонолоичний журнал. - 2013. - № 3. - С. 28-32.
9. Фещенко, Ю. I. Ушфжований клшчний протокол первинно1, вторинно1 (спецiалiзованоï) та третинно1 (ви-сокоспецiалiзованоï) медичио1 допомоги «Туберкульоз»: особливосп його пiдготовки та чим вiдрiзnяеться вiд по-передniх клшчних протоколiв [Текст] / Ю. I. Фещенко, С. О. Черенько, А. I. Барбова // Туберкульоз, легеневi хворо-би, ВIЛ-inфекцiя. - 2013. - № 2. - С. 8-18.
10. Куликовская, Н. В. Получение и характеристика моноклоновых антител к микобактериям Stegmatis и Kansassi [Текст] / Н. В. Куликовская, М. Л. Каплина, О. Л. Калинина // Проблемы туберкулеза. - 1996. - № 1. - С. 2-4.
11. Черенько, С. О. Основш принципи лжування туберкульозу легень з резистентними мшобактер1ями тубер-
Kyjit03y [TeKCT] / C. O. TepernKO // yKp. nyjitMOHOJioriHHHH xypHaji. - 2010. - № 3. - C. 27-32.
12. Lu, P.-L. Evaluation of the BACTEC MGIT 960 Systemin Combination with the MGIT TBc Identification Test for Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex in Respiratory Specimens: Table 1. [Text] / P.-L. Lu, Y.-C. Yang, S. C. Huang, Y.-S. Jenh, Y.-C. Lin, H.-H. Huang, T. C. Chang // Journal of Clinical Microbiology. - 2011. - Vol. 49, Issue 6. -P. 2290-2292. doi: 10.1128/jcm.00571-11
13. Rusch-Gerdes, S. Multicenter laboratory validation of the BACTEC MGIT 960 technique for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis to classical second-line drug sand newer antimicrobials [Text] / S. Rusch-Gerdes, G. E. Pfyffer, M. Casal, M. Chadwick, S. Siddiqi // Journal of Clinical Microbiology. - 2006. - Vol. 44, Issue 3. - P. 688-692. doi: 10.1128/jcm.44.3.688-692.2006
14. Kiet, V S. Evaluation of the MTBDRsl Test for Detection of Second-Line-Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis [Text] / V. S. Kiet, N. T. N. Lan, D. D. An, N. H. Dung, D. V. Hoa, N. van Vinh Chau et. al // Journal of Clinical Microbiology. - 2010. - Vol. 48, Issue 8. - P. 2934-2939. doi: 10.1128/ jcm.00201-10
15. Lacoma, A. GenoType MTBDRsl for Molecular De-tectiono f Second-Line-Drug and Ethambutol Resistancein My-cobacterium tuberculosis Strainsand Clinical Samples [Text] / A. Lacoma, N. Garcia-Sierra, C. Prat, J. Maldonado, J. Ruiz-Man-zano, L. Haba et. al // Journal of Clinical Microbiology. -2011. - Vol. 50, Issue 1. - P. 30-36. doi: 10.1128/jcm.05274-11
References
1. Yrtuhanova, A. A. et. al. (2001). Automated methods for determining Mousse culture Bacterium tuberculosis in zhyd-kyh environments. Problems of tuberculosis, 3, 53-56.
2. Dorozhkova, R. I., Makarov, M. V., Freiman, G. E.
(2012). Allocation Increase of the effectiveness and Authentication mykobakteryy in terms tsentralyzovannoy mykobakteryolo-hycheskoy laboratory. Tuberculosis and lung disease, 11, 21-26.
3. Barbova, A. I. et. al. (2007). The use of automated MGIT system for the diagnosis of pulmonary tuberculosis and determination of drug resistance of mycobacteria. Institute of Phthisiology and Pulmonology. F. G. Yanovsky AMS Ukraine. Kyiv: IFS, 24.
4. Zhurylo, O. A., Barbova, A. I., Trofimova, P. S. et. al.
(2013). Molecular genetic approaches to identify mycobacterial Congress of TB doctors and pulmonologists Ukraine. Kyiv, 123-124.
5. Eliseev, P. I., Nikishova, E. I., Gorina, G. P., Mar'jan-dyshev, A. O. (2012). Results of application methods GenoType MTBDRplus and BASTES MGIT lekarstvennoy chuvstvytel-
nosty definitions for tuberculosis pathogen. Tuberculosis and lung disease, 6, 31-34.
6. Zhurylo, A. A. (2013). Quality Assurance System bacteriological research in institutions that carry out microbiological diagnosis of tuberculosis at different levels of care Ukraine. Kirovograd: Polium, 72.
7. Zhurilo, O. A., Barbova, A. I., Glushkevich, T. G., Tretjakova, L. V. (2012). Standards bacteriological diagnosis of tuberculosis in laboratories TB facilities Ukraine. Kirovograd: Polium, 190.
8. Barbova, A. I., Zhurylo, O. A., Trofimova, P. S. et. al (2013). Modern approaches to conducting bacteriological identification of Mycobacterium. Ukr. pulmonol. Zh., 3, 28-32.
9. Feschenko, Y. I., Cherenko, A., Barbova, A. I. (2013). Unified clinical protocols of primary, secondary (specialized) and tertiary (highly specialized) medical care "Tuberculosis", especially its training and different from previous clinical protocols. Tuberculosis, pulmonary disease, HIV infection, 2, 8-18.
10. Kulikov, N. V., Kaplina, M. L., Kalinin, O. L. (1996). Preparation and characterization of antibodies to Mycobacteri-um monoklonovyh Stegmatis and Kansassi. Problems tuberku-leza, 1, 2-4.
11. Cherenko, S. O. (2010). Basic principles of treatment of tuberculosis resistant Mycobacterium tuberculosis. Ukr. Pul monological magazine, 3, 27-32.
12. Lu, P.-L., Yang, Y.-C., Huang, S. C., Jenh, Y.-S., Lin, Y.-C., Huang, H.-H., Chang, T. C. (2011). Evaluation of the Bactec MGIT 960 System in Combination with the MGIT TBc Identification Test for Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex in Respiratory Specimens: Table 1. Journal of Clinical Microbiology, 49 (6), 2290-2292. doi: 10.1128/jcm.00571-11
13. Rusch-Gerdes, S., Pfyffer, G. E., Casal, M., Chad-wick, M., Siddiqi, S. (2006). Multicenter Laboratory Validation of the BACTEC MGIT 960 Technique for Testing Susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis to Classical Second-Line Drugs and Newer Antimicrobials. Journal of Clinical Microbiology, 44 (3), 688-692. doi: 10.1128/jcm.44.3.688-692.2006
14. Kiet, V. S., Lan, N. T. N., An, D. D., Dung, N. H., Hoa, D. V., van Vinh Chau, N. et. al (2010). Evaluation of the MTBDRsl Test for Detection of Second-Line-Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis. Journal of Clinical Microbiology, 48 (8), 2934-2939. doi: 10.1128/jcm.00201-10
15. Lacoma, A., Garcia-Sierra, N., Prat, C., Maldonado, J., Ruiz-Manzano, J., Haba, L. Et. al (2011). GenoType MTBDR sl for Molecular Detection of Second-Line-Drug and Ethambu-tol Resistance in Mycobacterium tuberculosis Strains and Clinical Samples. Journal of Clinical Microbiology, 50 (1), 30-36. doi: 10.1128/jcm.05274-11
Дата надходження рукопису 22.09.2015
Гайова Людмила Володимир1вна, доктор медичних наук, професор, кафедра бюоргашчно1' та бюлопчно1' ими, Нацюнальний медичний ушверситет iм. О. О. Богомольця, бул. Т. Шевченка, 13, м. Кт'в, Украша, 01601 Е-mail: ludmilagaevaya@gmail.com
Барбова Ганна 1ван1вна, кандидат медичних наук, старший науковий сшвробггник, лабораторiя мжробь ологи Державно1' установи, Нацюнальний шститут фтизiатрiï i пульмонологи iм. Ф. Г. Яновського НАИН Украши, вул. Амосова Mиколи, 10, м. Кшв, Украша, 03680 Е-mail: barbova@ifp.kiev.ua
Журило Олександр Анатолiйович, доктор медичних наук, лаборагорш мiкробiологii Державно! установи, Нацюнальний шститут фтизiагрп i пульмонологи ím. Ф. Г. Яновського НАМН Украни, вул. Амосова Ми-коли, 10, м. Ки!в, Укра!на, 03680 E-mail: microbio@ifp.kiev.ua
Трофимова Полша CTamcraBiBHa, кандидат медичних наук, науковий сшвробиник, лабораторiя мжробь ологii Державно! установи, Нацюнальний шститут фтизiагрii i пульмонологи ím. Ф. Г. Яновського НАМН Укра!ни, вул. Амосова Миколи, 10, м. Ки!в, Украша, 03680 E-mail: trofimova@ifp.kiev.ua
Алieва Наталiя МиколаТвна, лшар-бактерюлог першо! категори, завiдувачка клiнiко-дiагностичною ла-бораторieю, клiнiко-дiагностична лабораторiя, Полтавський обласний протитуберкульозний диспансер, вул. Шиловська, 51-А, м. Полтава, Укра!на, 36028 E-mail: microbio@ifp.kiev.ua
UDC 616.5
DOI: 10.15587/2313-8416.2015.51530
HIDRADENITIS SUPPURATIVA SUCCESSFULLY TREATED WITH ADALIMUMAB © I. Bukhari, A. Al Zahrani
Гнтний г1драден1т (ГГ) - це захворювання шк1ри, що характеризуется формуванням численних к1ст, аб-сцес1в та свщевих тракт1в в зон апокринних залоз. Етюлогя i патогенез ГГ нев1дом1.1снуюч1 медичт та х1рург1чн1 терапевтичнi практики мають мiнiмальний ефект лкування цього захворювання. Бiологiчний зааб Адалмумаб - це новий перспективний зааб лiкування ГГ Ключовi слова: Гнтний гiдраденiт, бюпрепарати, апокринш залози, адалiмумаб
Aim: To discuss the new beneficial effect of adalimumab in the management of hidradenitis suppurativa(HS). Case: We report a 25-year-old arabic female with a 14-year history with long-standing poorly controlled active hidradenitis suppurativa who was successfully treated with adalimumab.
Discussion: Hidradenitis suppurativa is a skin disorder characterized by the formation of multiple cysts, abscesses and sinus tracts in apocrine gland-bearing areas. The aetiology and pathogenesis of HS are unknown. Current medical and surgical therapies are only minimally effective at treating the disease. The biologic agent Adalimumab is a new promising agent for the treatment of HS.
Conclusion: The biologic agent adalimumab is an effective treatment for HS Keywords: Hidradenitis suppurativa, biologics, apocrine glands, adalimumab
1. Introduction
Hidradenitis suppurativa (HS) is a chronic inflammatory disease of the skin characterized by recurrent nodules, abscesses, sinus tract formation and scarring affecting mainly areas rich with apocrine glands including the axillae, groin, buttocks, perianal and submammary regions. The disease initially presents during puberty and is more common in females. Treatment options include oral antibiotics, isotretinoin, finasteride, prednisone, cyclospo-rine, surgery, carbon dioxide laser therapy and radiotherapy. Recently, the efficacy of different biologics has been demonstrated. We report a patients with long-standing active hidradenitis suppurativa who was successfully treated with adalimumab.
2. The case
A 25-year-old arabic female presented with a 14-year history of painful discharging nodules, sinuses and cysts involving axillae (Fig. 1, a), submammary region and groin. Her past medical history was negative ex-
cept for mild acne vulgaris affecting the face. There was no history of inflammatory bowel disease or any other medical illnesses. Physical examination of the axillary areas, submammary and the groins revealed multiple er-ythematous tender nodules with discharging sinuses and abcesses. Some areas were macerated due to the conti-neous severe inflammation. Other areas showed healed hypertrophic scars. Her baseline investigations including complete blood count, liver function tests, renal function tests, lipid profile, anitnuclear antibodies, antidouble stranded DNA, complement 3 and 4 and c reactive protiens were within normal limits. Culture of the discharge from the abcesses was negative. So the patient was diagnosed as a case of HS. Initially, she was treated with oral isotretinoin 1 mg per kg for 5 months with no improvement then a course of oral doxycycline 100 mg once daily for 12 weeks failed to improve the condition. A single course of Infliximab (three intravenous infusions at weeks 0, 2 and 6) was started for 10 weeks with minimal improvement. Over a period of few months
