CC BY
6
направлена на выявление значимой для современной клинической медицины проблемы, заключающейся в выраженной вариабельности биологических эффектов, наблюдаемых при имплантации аналогичных КФС-материалов — от эффективной аугментации костной ткани до полного отторжения импланта, сопровождающегося разрушением собственной костной ткани.
С использованием подхода низкотемпературной химической трансформации получены КФС различного фазового состава и морфологии поверхности и проведены комплексные in vitro и in vivo исследования потенциала интегративного, индуцирующего, регенеративного, иммуногенного и провоспалительного потенциала соединений, являющихся участниками цикла естественной биоминерализации костной ткани. Установлено, что ДКФД, ОКФ и ГАп дозозависимо модулируют жизнеспособность, пролиферативную активность, адгезию и миграцию остеобластных клеток в условиях in vitro, а также ингибируют провоспалительную активацию миелоидных клеток врожденного иммунитета (макрофагов), но не влияют на активацию клеток адаптивного иммунитета (T-и B-лимфоцитов). При этом, в условиях in vivo, на модели адъювант-индуцированного хронического латентного асептического воспаления у крыс моделированным хроническим воспалением) выявлено достоверное повышение общего количества лейкоцитов (в 1,8-2 раза, р<0,05) и моноцитов (увеличение в 2,5-2,7 раза, р<0,05) при имплантации ОКФ и ГАп, но не ДКФД. При имплантации тех же материалов животным с нормальным иммунным статусом каких-либо достоверных изменений в показателях крови не выявлено. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант РНФ № 21-73-20251 «Влияние структурных и фазовых трансформаций кальцийфосфатных соединений на механизмы биоинтеграции или отторжения материалов, предназначенных для регенерации костной ткани»).
Литература:
1. Yamada S., Tokumoto M., Tatsumoto N, et al. Am J Physiol Renal Physiol. 2014;306(12): F1418-28.
2. Beghdadi W., Madjene L.C., Benhamou M. et al. Front Immunol.
2011; 2: 37.
ИЗМЕНЕНИЕ ФЕНОТИПА И МОРФОЛОГИИ КЛЕТОК МИКРОГЛИИ ПРИ ТРАВМЕ СПИННОГО МОЗГА РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ
А.В. Тимофеева, Э.Р. Ахметзянова
Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Казань, Россия
e-mail: anua_tima@mail.ru
Ключевые слова: микроглия, фенотип, травма спинного мозга крысы.
В последнее десятилетие идет активное изучение поведения клеток микроглии при различных поражениях центральной нервной системы, в том числе исследования поляризации данных клеток при травме спинного мозга (ТСМ). Считается, что полученные результаты могут открыть широкие перспективы для терапии пациентов не только с повреждением спинного мозга, но и другими неврологическими заболеваниями, в патогенезе которых активную роль играют клетки микроглии. В нашей работе мы провели количественную оценку различных популяций клеток микроглии нейротоксического (М1)
и нейропротективного (М2а) фенотипа в хронический период (60 сутки) ТСМ различной степени тяжести как в области приближенной к эпицентру повреждения (Th9), так и на удалении от него (L2-L3).
Крысам породы Wistar наносили контузионную ТСМ легкой (1,5 м/с), средней (2,5 м/с) и тяжелой (4 м/с) степени тяжести при помощи импактора на уровне Th8. Количественную оценку клеток микроглии на фоне ТСМ проводили путем иммуногистохимического анализа с использованием антител к Iba1+/CD40+(M1 фенотип) и 1Ьа1+/ТЭР-р+(М2а фенотип) в зонах передних канатиков (VF), передних рогов (VH) и кортикоспинального тракта (CST). Количество 1ьа1+-клеток на 60 сутки после повреждения различной тяжести было достоверно выше в области Th9 с максимальным значением в зоне CST при сравнении с удаленными от эпицентра ТСМ участками L2-L3. При оценке Iba1+/CD40+-клеток было обнаружено, что в зоне CST их количество выше при травме 2,5 и 4 м/с в области Th9, данный показатель снижается на удалении к L2-L3, но остается достоверно выше при сравнении с интактным контролем. Количество Iba1+/TGF-p+-клеток не претерпевало значимых изменений на фоне ТСМ различной степени тяжести на уровне Th9. Однако на удалении от места травмы (L2-L3) было обнаружено достоверное увеличение количества Iba1+/TGF-p+-клеток в области CST и VH в группе 1,5 м/с при сравнении с интактным контролем и группой с тяжелой степенью ТСМ (4 м/с). Также стоит отметить, что в области CST и задних канатиков было отмечено скопление клеток микроглии кольцевидной формы (annular-shaped microglia) [1] в области приближенной к эпицентру травмы Th9, а также на значительном расстоянии от него (C6-C7). При этом клетки микроглии с указанной морфологией отсутствовали в области каудальнее от повреждения L2-L3.
Таким образом, после ТСМ различной степени тяжести наибольшие изменения в распределении М1 фенотипа микроглии были обнаружены в месте приближенном к эпицентру травмы, а именно на уровне Th9, в то время как в отдаленной области (L2-L3) отмечены изменения в популяции как М1, так и М2а. Работа выполнена в рамках Программы стратегического академического лидерства Казанского Федерального Университета (ПРИ0РИТЕТ-2030) и при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-34-90060.
Литература:
1. Akhmetzyanova E.R. et al. Frontiers in molecular neuroscience. - 2021. - Т. 14.
ВАСКУЛЯРИЗАЦИЯ ЗОНЫ ЗАЖИВЛЕНИЯ СТЕНКИ МАТКИ КРЫСЫ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ КОНДИЦИОНИРОВАННОЙ СРЕДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АУТОЛОГИЧНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ГИПОКСИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ
Н.Б. Тихонова1, А.А. Темнов2 3, В.В. Алексанкина1, А.П. Милованов1, Т.В. Фокина1, А.Н. Склифас3
1 НИИМЧ им. акад. А.П. Авцына ФГБНУ РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского, Москва, Россия
2 МФТИ, Москва, Россия
3 ИБК РАН, Пущино, Россия
e-mail: reprod_pathol@morfolhum.ru
Ключевые слова: заживление, матка крысы, кондиционированная среда культивирования, мезенхимальные клетки, васкуляризация.
Механизм формирования несостоятельных рубцов стенки матки после кесарева сечения и разработка методов, предотвращающих возникновение патологического рубцевания, — важные задачи современного акушерства.
Целью нашего исследования стало изучение влияния компонентов кондиционированной среды культивирования аутологичных мезенхимальных клеток костного мозга на васкуляризацию зоны заживления после сквозного хирургического разреза маточной стенки крысы.
Материалы и методы. Исследование проведено на половозрелых самках крыс линии Sprague Dawley (N=20, 220± 30 г, возраст 3-4 месяца). Всем животным был выполнен сквозной продольный разрез правого рога матки с антимезометриальной стороны длиной 1 см. Половине животным в место разреза вносили Препарат, полученный на основе кондиционированной среды культивирования аутологичных мезенхимальных клеток при культивировании в гипоксических условиях (10% О2). Разрез ушивали хирургической нитью Викрил ups 6. Материал для гистологического исследования брали через 5 и 15 суток. Гистологические срезы окрашивали по Маллори, а также проводили иммуногистохимическое окрашивание с помощью мышиных моноклональных антител к альфа гладко-мышечному актину и к CD31. На гистологических препаратах проводили измерение площади между разрезанными слоями миометрия, а также подсчитывали площадь сосудов в зоне заживления. Обработку результатов выполняли в программе Statistica 12 (StatSoft). Сравнение групп проводили с помощью U-критерия Манна-Уитни, различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты. К 5-м суткам произошло полное смыкание маточной стенки. Площадь между разобщенными мышечными слоями у группы, получившей препарат, была достоверно меньше по сравнению с контрольной группой на 5-е (p<0,05) и на 15-е сутки (p<0,05). В контрольной группе площадь заживления с 5-х по 15-е сутки увеличилась (p<0,05). В опытной группе увеличение было недостоверным (p<0,05). Площадь сосудов в зоне заживления у животных опытной группы была достоверно ниже по сравнению с контрольными животными и на 5-е (p<0,05) и на 15-е сутки (p<0,05).
Заключение. Компоненты среды культивирования, полученной путем культивирования аутологичных мезен-химальных клеток костного мозга при пониженном содержании 02 (10%), существенно влияют на размер и васкуля-ризацию зоны заживления стенки матки после сквозного хирургического разреза, уменьшают интенсивность васку-ляризации и способствуют уменьшению площади зоны.
АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ СПОСОБ
«ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИЯ» ЛИМФОЦИТОВ
Н.В. Тишевская1, Н.М. Геворкян2
1 ФГБОУ ВО Южно-Уральский государственный медицинский университет, Челябинск, Россия
2 ФГБНУ НИИ биомедхимии им. В.Н. Ореховича, Москва, Россия
e-mail: natalya-tishevskaya@yandex.ru
Ключевые слова: перепрограммирование, лимфоциты,
РНК, регенерация.
В отличие от способов перепрограммирования клеток in vitro в обход иммунологической несовместимости, здесь описан способ естественного «перепрограммирования» лимфоидных клеток in vivo. Каждый клон мор-фогенетически компетентных Т-лимфоцитов (Т-лфц)
является прообразом соматических клеток определенного гистотипа, их подвижным прототипом в гуморальной среде, и осуществляет клональную регуляцию роста клеток собственных тканей организма. Это подтверждается воспроизводимой при адоптивном переносе лимфоцитов органо- и тканеспецифичностью проявления их морфо-генетической активности у интактных реципиентов, способностью Т-лфц синтезировать и секретировать многие биологически активные вещества, включая гормоны и факторы роста, и сходной с их тканью-мишенью реактивностью [1]. Особо выраженная и более ранняя реакция Т-лфц на внешние воздействия объясняет патогенетическую и терапевтическую роль этих клеток в развитии или коррекции нарушенных функций организма. То есть поражение органа и нарушение функций соответствующих клонов лимфоцитов — явления взаимосвязанные, причем дисфункция лимфоцитов, в силу указанных причин, первична.
Выраженным морфогенетическим эффектом обладает и выделенная из лимфоидных клеток суммарная РНК (сРНКлк) [2, 3], которая не имеет аллогенных и ксеногенных ограничений. Введение сРНКлк селезенки крыс с аллоксановым диабетом (АД) вызывает гипергликемию у интактных крыс [4], что свидетельствует о «перепрограммировании» донорских лимфоцитов, также чувствительных к токсическому действию аллоксана. Стойкая нормогликемия у крыс с Ад достигалась введением сРНКлк здоровых особей. сРНКлк селезенки крыс с нормализовавшимся после АД уровнем глюкозы крови не вызывала у интактных животных гипергликемии [5], что свидетельствует о естественном «перепрограммировании» лимфоцитов крыс, перенесших АД. Работа выполнена в рамках Программы фундаментальных исследований в РФ на долгосрочный период (2021-2030 годы).
Литература:
1. Тишевская Н.В., Геворкян Н.М., Козлова Н.И. Успехи соврем. биологии. 2015. Т. 135. № 2. С. 189-202.
2. Бабаева А.Г., Геворкян Н.М., Тишевская Н.В., Комарова И.А. Клиническая и экспериментальная морфология. 2015. № 1(13). С. 33-37.
3. Тишевская Н.В., Бабаева А.Г., Геворкян Н.М. Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2016. Т. 102. № 11. С. 1280-1301.
4. Геворкян Н.М., Тишевская Н.В. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2020. Т. 64. № 2. С. 85-88.
5. Геворкян Н.М., Тишевская Н.В. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2020. Т. 64. № 4. С. 37-46.
ИЗГОТОВЛЕНИЕ БЕСКЛЕТОЧНОГО ПРОДУКТА ИЗ ВЫСОКОРЕГЕНЕРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА ПУПОВИНЫ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЛУБОКИХ РАН
Д.В. Товпеко, А.А. Кондратенко, Л.И. Калюжная, В.Е. Чернов
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: tovpeko.dmitrY@gmail.com
Ключевые слова: Вартонов студень пуповины человека, внеклеточный матрикс, децеллюляризация, заживление ран, раневое покрытие, регенеративная медицина.
Лечение ран различной этиологии остается актуальной проблемой для военной медицины и гражданского здравоохранения. Сохраняется постоянный интерес к поиску биосовместимых материалов и разработке на их основе раневых покрытий, способствующих более эффективному
