CC BY
11
Механизм формирования несостоятельных рубцов стенки матки после кесарева сечения и разработка методов, предотвращающих возникновение патологического рубцевания, — важные задачи современного акушерства.
Целью нашего исследования стало изучение влияния компонентов кондиционированной среды культивирования аутологичных мезенхимальных клеток костного мозга на васкуляризацию зоны заживления после сквозного хирургического разреза маточной стенки крысы.
Материалы и методы. Исследование проведено на половозрелых самках крыс линии Sprague Dawley (N=20, 220± 30 г, возраст 3-4 месяца). Всем животным был выполнен сквозной продольный разрез правого рога матки с антимезометриальной стороны длиной 1 см. Половине животным в место разреза вносили Препарат, полученный на основе кондиционированной среды культивирования аутологичных мезенхимальных клеток при культивировании в гипоксических условиях (10% О2). Разрез ушивали хирургической нитью Викрил ups 6. Материал для гистологического исследования брали через 5 и 15 суток. Гистологические срезы окрашивали по Маллори, а также проводили иммуногистохимическое окрашивание с помощью мышиных моноклональных антител к альфа гладко-мышечному актину и к CD31. На гистологических препаратах проводили измерение площади между разрезанными слоями миометрия, а также подсчитывали площадь сосудов в зоне заживления. Обработку результатов выполняли в программе Statistica 12 (StatSoft). Сравнение групп проводили с помощью U-критерия Манна-Уитни, различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты. К 5-м суткам произошло полное смыкание маточной стенки. Площадь между разобщенными мышечными слоями у группы, получившей препарат, была достоверно меньше по сравнению с контрольной группой на 5-е (p<0,05) и на 15-е сутки (p<0,05). В контрольной группе площадь заживления с 5-х по 15-е сутки увеличилась (p<0,05). В опытной группе увеличение было недостоверным (p<0,05). Площадь сосудов в зоне заживления у животных опытной группы была достоверно ниже по сравнению с контрольными животными и на 5-е (p<0,05) и на 15-е сутки (p<0,05).
Заключение. Компоненты среды культивирования, полученной путем культивирования аутологичных мезен-химальных клеток костного мозга при пониженном содержании 02 (10%), существенно влияют на размер и васкуля-ризацию зоны заживления стенки матки после сквозного хирургического разреза, уменьшают интенсивность васку-ляризации и способствуют уменьшению площади зоны.
АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ СПОСОБ
«ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИЯ» ЛИМФОЦИТОВ
Н.В. Тишевская1, Н.М. Геворкян2
1 ФГБОУ ВО Южно-Уральский государственный медицинский университет, Челябинск, Россия
2 ФГБНУ НИИ биомедхимии им. В.Н. Ореховича, Москва, Россия
e-mail: natalya-tishevskaya@yandex.ru
Ключевые слова: перепрограммирование, лимфоциты,
РНК, регенерация.
В отличие от способов перепрограммирования клеток in vitro в обход иммунологической несовместимости, здесь описан способ естественного «перепрограммирования» лимфоидных клеток in vivo. Каждый клон мор-фогенетически компетентных Т-лимфоцитов (Т-лфц)
является прообразом соматических клеток определенного гистотипа, их подвижным прототипом в гуморальной среде, и осуществляет клональную регуляцию роста клеток собственных тканей организма. Это подтверждается воспроизводимой при адоптивном переносе лимфоцитов органо- и тканеспецифичностью проявления их морфо-генетической активности у интактных реципиентов, способностью Т-лфц синтезировать и секретировать многие биологически активные вещества, включая гормоны и факторы роста, и сходной с их тканью-мишенью реактивностью [1]. Особо выраженная и более ранняя реакция Т-лфц на внешние воздействия объясняет патогенетическую и терапевтическую роль этих клеток в развитии или коррекции нарушенных функций организма. То есть поражение органа и нарушение функций соответствующих клонов лимфоцитов — явления взаимосвязанные, причем дисфункция лимфоцитов, в силу указанных причин, первична.
Выраженным морфогенетическим эффектом обладает и выделенная из лимфоидных клеток суммарная РНК (сРНКлк) [2, 3], которая не имеет аллогенных и ксеногенных ограничений. Введение сРНКлк селезенки крыс с аллоксановым диабетом (АД) вызывает гипергликемию у интактных крыс [4], что свидетельствует о «перепрограммировании» донорских лимфоцитов, также чувствительных к токсическому действию аллоксана. Стойкая нормогликемия у крыс с Ад достигалась введением сРНКлк здоровых особей. сРНКлк селезенки крыс с нормализовавшимся после АД уровнем глюкозы крови не вызывала у интактных животных гипергликемии [5], что свидетельствует о естественном «перепрограммировании» лимфоцитов крыс, перенесших АД. Работа выполнена в рамках Программы фундаментальных исследований в РФ на долгосрочный период (2021-2030 годы).
Литература:
1. Тишевская Н.В., Геворкян Н.М., Козлова Н.И. Успехи соврем. биологии. 2015. Т. 135. № 2. С. 189-202.
2. Бабаева А.Г., Геворкян Н.М., Тишевская Н.В., Комарова И.А. Клиническая и экспериментальная морфология. 2015. № 1(13). С. 33-37.
3. Тишевская Н.В., Бабаева А.Г., Геворкян Н.М. Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2016. Т. 102. № 11. С. 1280-1301.
4. Геворкян Н.М., Тишевская Н.В. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2020. Т. 64. № 2. С. 85-88.
5. Геворкян Н.М., Тишевская Н.В. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2020. Т. 64. № 4. С. 37-46.
ИЗГОТОВЛЕНИЕ БЕСКЛЕТОЧНОГО ПРОДУКТА ИЗ ВЫСОКОРЕГЕНЕРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА ПУПОВИНЫ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЛУБОКИХ РАН
Д.В. Товпеко, А.А. Кондратенко, Л.И. Калюжная, В.Е. Чернов
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: tovpeko.dmitrY@gmail.com
Ключевые слова: Вартонов студень пуповины человека, внеклеточный матрикс, децеллюляризация, заживление ран, раневое покрытие, регенеративная медицина.
Лечение ран различной этиологии остается актуальной проблемой для военной медицины и гражданского здравоохранения. Сохраняется постоянный интерес к поиску биосовместимых материалов и разработке на их основе раневых покрытий, способствующих более эффективному
лечению и регенерации ран. Особого внимания заслуживают бесклеточные матриксы (ECM), получаемые из различных тканей человека и животных путем децеллюляри-зации. Каждый тип ткани имеет свой уникальный состав ECM, представленный гликопротеинами, протеогликанами и гликозаминогликанами, важными для пролиферации и синтетической активности соединительнотканных клеток, модулирующими ангиогенез и способствующими заживлению ран. Вартонов студень пуповины человека (WJ) представляет собой твердую слизистую соединительную ткань внеэмбрионального происхождения. Фенотип тканей пуповины аналогичен эмбриональным тканям, у которых выявлена способность к безрубцовому заживлению ран. Это делает пуповину человека особенно привлекательным биоматериалом для регенеративной медицины [1].
В настоящем исследовании децеллюляризацию WJ проводили детергентным способом с использованием 0,05% раствора додецилсульфата натрия (SDS) по ранее описанному протоколу [2]. Эффективность удаления клеток и нуклеиновых фрагментов оценивали с помощью гистологического окрашивания флуоресцентным красителем 4,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) и количественного определения ДНК. Сохранность структурного состава подтверждали с помощью инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье (FTIR).
Гистологические исследования выявили отсутствие ядер клеток в децеллюляризованном WJ (dWJ). Среднее содержание ДНК в WJ составило 468,75 (453,65-475,15) нг/мкл, в dWJ - 29,2 (27,8-30,7) нг/мкл (p<0,001).
FTIR-спектры dWJ показали отсутствие фосфолипид-ного плеча, свидетельствующее о качественности децел-люляризации и, вместе с минимальным содержанием ДНК, — о потенциальной неиммуногенности изготовленного продукта. FTIR-спектры WJ и dWJ продемонстрировали аналогичные характеристические полосы поглощения, соответствующие функциональным группам коллагенов, протеогликанов и гликозаминогликанов.
Таким образом, изготовленный из высокорегенеративного биоматериала гомологичного происхождения бесклеточный продукт является потенциально неиммунноген-ным, сохраняет основные структурные и функциональные компоненты, присущие нативной пуповине и важные для процессов регенерации глубоких повреждений кожи.
Литература:
1. Kocl Z., Vyborny K., Dubisova J. et al. Tissue Eng. Pant C Methods. 2017. V. 23, № 6. P/ 333.
2. Калюжная Л.И., Чернов В.Е., Фрумкина А.С. и др. Вестн. Росс. воен.-мед. акад. 2020. Т. 22. № 1. C. 124.
ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ЛИЗАТА ТРОМБОЦИТОВ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОЧНОГО КАНАТИКА ЧЕЛОВЕКА
Л.Н. Токтохоева1, Е.С. Дёмина1, Н.П. Рабданова1, Р.Ю. Абашеев1, А.С. Долодоев1, 2, А.П. Цыбденова1 2, Ю.С. Балханов2, А.А. Нимаева3, М.Ф. Серых3
1 Бурятский государственный университет им. Доржи Банзарова, Улан-Удэ, Россия
2 ООО «МИП «Байкальский центр биотехнологий»
3 ООО «Шэнэскин», Улан-Удэ, Россия
e-mail: lyubov2316@mail.ru
Ключевые слова: ксеногенная сыворотка, лизат тромбоцитов, мезенхимальные стволовые клетки пупочного канатика.
Применение лизата тромбоцитов в связи с поиском оптимального состава сред для культивирования клеток, не содержащих ксеногенных компонентов и предназначенных для клинических и лабораторных протоколов, представляется актуальным [1]. Целью работы являлось определение влияния лизата тромбоцитов на морфофи-зиологические особенности стволовых клеток пупочного канатика человека in vitro.
Выделение мезенхимальных стволовых клеток осуществляли из вартонова студня пупочного канатика человека ферментативным способом с помощью коллагеназы I типа и эксплантами. Ведение мезенхимальных стволовых клеток проводили в среде DMEM/ F12 c эмбриональной телячьей сывороткой и лизата-ми тромбоцитов человека. Криодеструкцию тромбоцитов из пулированных лейкоредуцированных концентратов осуществляли при -200С не менее 48 часов. Размороженные и ресуспендированные образцы лизата тромбоцитов центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут и привносили в бессывороточную среду.
Показана пролиферативная активность и дифферен-цировочный отклик мезенхимальных стволовых клеток пупочного канатика человека при добавлении 10% лизата тромбоцитов в среду культивирования. Установлено, что внесение тромболизата в специализированную питательную среду для культивирования стволовых обеспечивает получение качественного клеточного трансплантата в те же сроки, что и при культивировании с эмбриональной телячьей сывороткой. Полученные данные позволяют рекомендовать использование лизата тромбоцитов в качестве альтернативы ксеногенной сыворотки.
Литература:
1. Сергеева Н.С., Шанский Я.Д., Свиридова И.К., Кирсанова В.А., Ахмедова С.А., Кувшинова Е.А., Мейснер И.С. Гены и клетки. - 2014. - Том IX. - № 1. - С. 77-85.
МАТРИКСЫ НА ОСНОВЕ СОПОЛИМЕРОВ
ХИТОЗАНА С ОЛИГОЛАКТИДАМИ:
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ В МОДЕЛИ IN VITRO
Т.В. Толстова1, М.Г. Дроздова1, Т.Н. Попырина2,
Т.С. Демина2, Т.А. Акопова2, Е.А. Марквичева1
1 ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина
и ЮА. Овчинникова РАН, Москва, Россия
2 ФГБУН Институт синтетических полимерных материалов им. Н.С. Ениколопова РАН, Москва, Россия
e-mail: balabanovatv88@gmail.com
Ключевые слова: хитозан, биоматериалы, тканевая инженерия, мезенхимальные стромальные клетки.
Природные полимер хитозан (Chit) используют как биоматериал для получения матриксов благодаря его биосовместимости и способности к биодеградации. Однако, Chit матриксы обладают низкой механической прочностью, а скорость их биодеградации недостаточно высокая. Создание композитных матриксов на основе Chit позволяет преодолеть эти недостатки, а также регулировать скорость их биодеградации и гидрофильно-гидрофобный баланс. Эти параметры определяют направленность дифференцировки мезенхимальных стромальных клеток (МСК), которые обладают большим потенциалом в тканевой инженерии. Цель работы — получение плёнок (2D) и макропористых гидрогелей (3D) на основе
