CC BY
12
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
231
лечению и регенерации ран. Особого внимания заслуживают бесклеточные матриксы (ECM), получаемые из различных тканей человека и животных путем децеллюляри-зации. Каждый тип ткани имеет свой уникальный состав ECM, представленный гликопротеинами, протеогликанами и гликозаминогликанами, важными для пролиферации и синтетической активности соединительнотканных клеток, модулирующими ангиогенез и способствующими заживлению ран. Вартонов студень пуповины человека (WJ) представляет собой твердую слизистую соединительную ткань внеэмбрионального происхождения. Фенотип тканей пуповины аналогичен эмбриональным тканям, у которых выявлена способность к безрубцовому заживлению ран. Это делает пуповину человека особенно привлекательным биоматериалом для регенеративной медицины [1].
В настоящем исследовании децеллюляризацию WJ проводили детергентным способом с использованием 0,05% раствора додецилсульфата натрия (SDS) по ранее описанному протоколу [2]. Эффективность удаления клеток и нуклеиновых фрагментов оценивали с помощью гистологического окрашивания флуоресцентным красителем 4,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) и количественного определения ДНК. Сохранность структурного состава подтверждали с помощью инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье (FTIR).
Гистологические исследования выявили отсутствие ядер клеток в децеллюляризованном WJ (dWJ). Среднее содержание ДНК в WJ составило 468,75 (453,65-475,15) нг/мкл, в dWJ - 29,2 (27,8-30,7) нг/мкл (p<0,001).
FTIR-спектры dWJ показали отсутствие фосфолипид-ного плеча, свидетельствующее о качественности децел-люляризации и, вместе с минимальным содержанием ДНК, — о потенциальной неиммуногенности изготовленного продукта. FTIR-спектры WJ и dWJ продемонстрировали аналогичные характеристические полосы поглощения, соответствующие функциональным группам коллагенов, протеогликанов и гликозаминогликанов.
Таким образом, изготовленный из высокорегенеративного биоматериала гомологичного происхождения бесклеточный продукт является потенциально неиммунноген-ным, сохраняет основные структурные и функциональные компоненты, присущие нативной пуповине и важные для процессов регенерации глубоких повреждений кожи.
Литература:
1. Kocl Z., Vyborny K., Dubisova J. et al. Tissue Eng. Pant C Methods. 2017. V. 23, № 6. P/ 333.
2. Калюжная Л.И., Чернов В.Е., Фрумкина А.С. и др. Вестн. Росс. воен.-мед. акад. 2020. Т. 22. № 1. C. 124.
ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ЛИЗАТА ТРОМБОЦИТОВ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОЧНОГО КАНАТИКА ЧЕЛОВЕКА
Л.Н. Токтохоева1, Е.С. Дёмина1, Н.П. Рабданова1, Р.Ю. Абашеев1, А.С. Долодоев1, 2, А.П. Цыбденова1 2, Ю.С. Балханов2, А.А. Нимаева3, М.Ф. Серых3
1 Бурятский государственный университет им. Доржи Банзарова, Улан-Удэ, Россия
2 ООО «МИП «Байкальский центр биотехнологий»
3 ООО «Шэнэскин», Улан-Удэ, Россия
e-mail: lyubov2316@mail.ru
Ключевые слова: ксеногенная сыворотка, лизат тромбоцитов, мезенхимальные стволовые клетки пупочного канатика.
Применение лизата тромбоцитов в связи с поиском оптимального состава сред для культивирования клеток, не содержащих ксеногенных компонентов и предназначенных для клинических и лабораторных протоколов, представляется актуальным [1]. Целью работы являлось определение влияния лизата тромбоцитов на морфофи-зиологические особенности стволовых клеток пупочного канатика человека in vitro.
Выделение мезенхимальных стволовых клеток осуществляли из вартонова студня пупочного канатика человека ферментативным способом с помощью коллагеназы I типа и эксплантами. Ведение мезенхимальных стволовых клеток проводили в среде DMEM/ F12 c эмбриональной телячьей сывороткой и лизата-ми тромбоцитов человека. Криодеструкцию тромбоцитов из пулированных лейкоредуцированных концентратов осуществляли при -200С не менее 48 часов. Размороженные и ресуспендированные образцы лизата тромбоцитов центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут и привносили в бессывороточную среду.
Показана пролиферативная активность и дифферен-цировочный отклик мезенхимальных стволовых клеток пупочного канатика человека при добавлении 10% лизата тромбоцитов в среду культивирования. Установлено, что внесение тромболизата в специализированную питательную среду для культивирования стволовых обеспечивает получение качественного клеточного трансплантата в те же сроки, что и при культивировании с эмбриональной телячьей сывороткой. Полученные данные позволяют рекомендовать использование лизата тромбоцитов в качестве альтернативы ксеногенной сыворотки.
Литература:
1. Сергеева Н.С., Шанский Я.Д., Свиридова И.К., Кирсанова В.А., Ахмедова С.А., Кувшинова Е.А., Мейснер И.С. Гены и клетки. - 2014. - Том IX. - № 1. - С. 77-85.
МАТРИКСЫ НА ОСНОВЕ СОПОЛИМЕРОВ
ХИТОЗАНА С ОЛИГОЛАКТИДАМИ:
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ В МОДЕЛИ IN VITRO
Т.В. Толстова1, М.Г. Дроздова1, Т.Н. Попырина2,
Т.С. Демина2, Т.А. Акопова2, Е.А. Марквичева1
1 ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина
и ЮА. Овчинникова РАН, Москва, Россия
2 ФГБУН Институт синтетических полимерных материалов им. Н.С. Ениколопова РАН, Москва, Россия
e-mail: balabanovatv88@gmail.com
Ключевые слова: хитозан, биоматериалы, тканевая инженерия, мезенхимальные стромальные клетки.
Природные полимер хитозан (Chit) используют как биоматериал для получения матриксов благодаря его биосовместимости и способности к биодеградации. Однако, Chit матриксы обладают низкой механической прочностью, а скорость их биодеградации недостаточно высокая. Создание композитных матриксов на основе Chit позволяет преодолеть эти недостатки, а также регулировать скорость их биодеградации и гидрофильно-гидрофобный баланс. Эти параметры определяют направленность дифференцировки мезенхимальных стромальных клеток (МСК), которые обладают большим потенциалом в тканевой инженерии. Цель работы — получение плёнок (2D) и макропористых гидрогелей (3D) на основе
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
