Устойчивость лейкозных клеток человека c фенотипом множественной лекарственной резистентности к фотодинамическому воздействию с 5-АЛК Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Е.Д. Шишко1, А.А. Филъченков1, М.П. Завелевич1, Л.М. Куява1, Д.Ю. Блохин2, Н.Ф. Гамалея1 ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ИНДУКЦИЯ АПОПТОЗА ЛЕЙКОЗНЫХ КЛЕТОК,

УСИЛЕННАЯ НАНОЧАСТИЦАМИ ЗОЛОТА

1ИЭПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев 2ФГБУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Для понимания механизмов гибели клеток при фотодинамической терапии опухолей целесообразным является изучение апоптоза при фотодинамическом воздействии на клетках с различной степенью лекарственной устойчивости.

Цель исследования. Сравнительная оценка индукции апоптоза лазерным излучением в клетках Jurkat Т-лимфобластного лейкоза человека и сублинии Jurkat/A4 с фенотипом МЛР, сенсибилизированных Фотолоном® или его нанокомпозитом с золотом.

Материалы и методы. Клональная сублиния Jurkat/A4 создана методом селекции СБ95-отрицательных клеток после инкубации культуры Jurkat с агонистическими анти-СБ95 антителами (патент РФ № 2267532). Анализ жизнеспособности клеток при фотодинамическом воздействии с сенсибилизатором хлоринового типа Фотолоном® или его нанокомпозитом с золотом проводили методом исключения красителя трипанового синего. Содержание клеток с гиподиплоидной ДНК определяли на цитофлуориметре FACSCalibur (“Becton Dickinson”, США) после окрашивания пропидий йодидом.

Результаты. При фотосенсибилизации клеток Jurkat Фотолоном® в диапазоне концентраций 0,1-0,5 мкг/мл воздействие лазерного излучения (X = 658 нм, доза 1 Дж/см2) приводило к концентрационно-зависимой гибели клеток, достигающей 75% при максимальной из использованных концентраций; при этом содержание апопто-тических клеток превышало 40%. В случае использования Фотолона® в виде нанокомпозита с золотом процент гибели клеток Jurkat и апоптотический индекс возрастали и при более низких концентрациях фотосенсибилизатора. В том же диапазоне концентраций Фотолон® оказался менее эффективным для клеток Jurkat/A4: гибель клеток при максимальной из использованных концентраций препарата не превышала 25% с крайне низким в сравнении с клетками Jurkat уровнем апоптоза. В отличие от клеток Jurkat, применение Фотолона® в виде нанокомпозита с золотом не только не повышало эффективность фотосенсибилизации клеток Jurkat/A4, но даже снижало ее.

Выводы. Комплексирование Фотолона® с золотом усиливает активность фотосенсибилизатора при действии на культуру Jurkat , но не на Jurkat/A4. Клетки этой сублинии проявляют повышенную резистентность к апоптоз-индуцирующему действию фотодинамической обработки как с Фотолоном®, так и с его золотым нанокомпозитом.

Е.Д. Шишко1, А.А. Филъченков1, М.П. Завелевич1, Л.М. Куява1, Д.Ю. Блохин2, Н.Ф. Гамалея1 УСТОЙЧИВОСТЬ ЛЕЙКОЗНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

C ФЕНОТИПОМ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ФОТОДИНАМИЧЕСКОМУ ВОЗДЕЙСТВИЮ С 5-АЛК

1ИЭПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев 2ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва

Введение. Изучение процессов апоптоза, индуцированного фотодинамическим воздействием в клетках с различной степенью лекарственной устойчивости, важно для понимания механизмов гибели клеток при фотоди-намической терапии опухолей.

Цель исследования. Сравнительный анализ цитотоксичности и индукции апоптоза в клетках Т-лимфобластного лейкоза человека (линия Jurkat) и ее сублинии Jurkat/A4 с фенотипом множественной лекарственной резистентности (МЛР) при фотодинамическом воздействии с 5-аминолевулиновой кислотой (АЛК). Материалы и методы. Клетки Jurkat и Jurkat/A4 в логарифмической фазе роста инкубировали 4 ч с АЛК (0,11,0 мМ), после чего подвергали воздействию лазерного света (длина волны 633 нм, доза 25 Дж/см2). Жизнеспособность клеток (тест с трипановым синим) определяли через 18 ч после фотодинамического воздействия. Индукцию апоптоза в этот же срок регистрировали по содержанию гиподиплоидных клеток на цитофлуориметре FACSCalibur (“Becton Dickinson”, США) после окрашивания их пропидиум йодидом.

Результаты. Фотодинамическое воздействие с АЛК приводило к концентрационно-зависимой гибели клеток обеих линий, хотя эффективность воздействия при одинаковых концентрациях АЛК для клеток Jurkat/A4 была ниже, чем для Jurkat, особенно при самой низкой из использованного диапазона концентраций АЛК (40% гибели клеток Jurkat и 11-13% - Jurkat/A4). При фотодинамическом воздействии с 0,1 мМ АЛК культуры различались по апоптотическому индексу и абсолютному содержанию апоптотических клеток. Вместе с тем, содержание апоптотических клеток в этих культурах по сравнению с суммарной гибелью клеток было небольшим и не превышало 20%. В отличие от концентрационно-зависимой гибели фотосенсибилизированных клеток обеих линий, четкой концентрационной зависимости для показателей апоптоза в них отмечено не было.

Выводы. Клетки Jurkat/A4 с фенотипом МЛР оказываются более устойчивыми к фотодинамическому воздействию с АЛК по сравнению с клетками исходной линии. Поскольку апоптотический путь гибели этих клеток не является основным, можно предположить, что клетки Jurkat/A4 обладают устойчивостью к различным механизмам, приводящим к их смерти.

№ 2/том 12/2013

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ