CC BY
63
110 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
Т.А. Федотчева1,2, О. П. Шейченко1, К.Е. Широких2 Цель исследования — изучить динамику экспрессии |ЦИТОСТАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ АЛКАЛОИДА и ядерной транслокации белка p53 в опухолевых клетках КУБЫШКИ ЖЕЛТОЙ НУФЛЕИНА MCF-7 (аденокарцинома молочной железы человека) при ФГБНУВИЛАР, Москва; действии аминонитроксильных комплексов платины (IV) 2ГБОУВПО «РНИМУим. Н.И. Пирогова» (ВС118 — е-аммин-^-(4-амино-2,2,6,6-тетраметилпипе-Минздрава России, Москва ридин-1-оксил)-а,/-бис(ацетат)-Ь,с-дихлороплатина (IV); Введение. Основной задачей при создании противо- BC146 — е-аммин-^-(4-амино-2,2,6,6-тетраметилпипери-опухолевых соединений является их высокая избирательная дин-1-оксил)-а/-бис(бутаноато)-Ь,с-дихлороплатина (IV); активность по отношению к опухолевым клеткам и наи- BC131 — е-аммин-й'-(4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-меньшее цитотоксическое действие по отношению к нор- 1-оксил)-а/-бис(пентаноато)-Ь,с-дихлороплатина (IV); мальным клеткам. Такими свойствами могут обладать алка- BC149 — е-аммин-^-(3-амино-2,2,5,5-тетраметилпирроли-лоиды, полученные из лекарственных растений. Достаточно дин-1-оксил)-а/-бис(бутаноато)-Ь,с-дихлороплатина (IV). хорошо изученным алкалоидом является препарат люте- Материалы и методы. Экспрессию белка р53 определя-нурин, полученный из кубышки желтой (Nuphar luteae ли с помощью денатурирующего электрофореза белков (L.) Smith syn. Nuphar luteum L.) сотрудниками ВИЛАР и пред- в полиакриламидном геле с последующим иммуноблоттин-ставляющий собой сумму гидрохлоридов димерных серо- гом. В качестве препаратов сравнения исследовали цисплатин содержащих фуранохинолизидиновых алкалоидов из кор- и сатраплатин. Цисплатин, сатраплатин и аминонитрок-невищ кубышки желтой семейства кувшинковых. Один сильные комплексы платины (IV) наносили в концентрации, из алкалоидов в составе лютенурина — нуфлеина бисанги- вызывающей гибель 50 % клеток, с экспозицией 6—24 ч. дродигидрохлорид (нуфлеин) — был выделен и очищен, Результаты. Обнаружено, что при действии всех иссле-выявлено его бактериостатическое действие на трихомо- дуемых соединений максимум накопления белка р53 на-нады, высокая активность в отношении грамположитель- блюдается после 12 ч действия комплекса. Накопление р53 ных микробов и патогенных грибов типа кандида. Исходя в ядрах начинается уже после 6 ч экспозиции и снижается из этих данных, было выдвинуто предположение о наличии к 24 ч. Максимум накопления белка р53 в цитозоле наблю-цитостатической активности у нуфлеина. дается после 12—18 ч. Все изученные комплексы платины Цель исследования — анализ цитостатической активно- показали сходное действие на процесс внутриклеточного сти нуфлеина на клетках рака шейки матки человека HeLa накопления р53, однако характер распределения белка и фибробластах кожи крыс в сравнении с цисплатином. между цитозолем и ядром при действии разных комплек-Материалы и методы. Для оценки цитотоксического сов различается. Так, при действии цисплатина белок p53 действия нуфлеина инкубировали клетки в течение 48 ч появляется в цитоплазме через 12 ч и через 18 ч после введе-в присутствии различных концентраций препарата (диа- ния обнаруживается слабо. Сходная динамика была обнару-пазон 10-9—10-2 М). Жизнеспособность клеток оценивали жена для сатраплатина и комплекса ВС149. При действии методом МТТ. Параметр IC50 — концентрацию препарата, комплексов ВС118, ВС146 и ВС131 максимум проявления вызывающую гибель 50 % клеток, — определяли с помо- белка p53 в цитозоле приходится на 12 ч после введения. щью программы Graphpad Prism 6.0. Заключение. Динамика накопления белка p53 в ядре Результаты. Нуфлеин эффективно подавляет жизне- сходна для разных комплексов платины, однако его экс-способность клеток Hela c IC50 = 2,9 х 10-8 М, в то время прессия в цитозоле при этом различна. Это свидетельству-как цисплатин в таких же условиях менее эффективен ет о разной динамике синтеза белка p53 в ходе клеточного (IC50 = 6,2 х 10-6 М). На модели нормальных клеток — фибро- ответа на действие комплексов платины разной структуры. бластов кожи крыс IC50 для нуфлеина и цисплатина составили 1,94 х 10-6 и 1,47 х 10-5 М соответственно. Е.В. Филоненко, О.В. Чулкова, Л.Г. Серова Заключение. Нуфлеин обладает высокой цитостатиче- ВОЗМОЖНОСТИ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ской активностью на клетках рака шейки матки человека, ТЕРАПИИ В ЛЕЧЕНИИ ДИСТРОФИЧЕСКИХ превосходящей активность цисплатина в 200 раз. На нор- ЗАБОЛЕВАНИЙ, ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ мальных клетках нуфлеин оказывал в 100 раз менее выра- НЕОПЛАЗИЙ И РАКА ВУЛЬВЫ женное цитотоксическое действие, чем на опухолевых МНИОИ им. П.А. Герцена — филиал ФГБУНМИРЦ клетках, что очень ценно в плане повышения избиратель- Минздрава России, Москва ности химиотерапии опухолей. Введение. Злокачественные опухоли вульвы занимают 4-е место и составляют 2,5—5,0 % злокачественных онко-Н.В. Филатова, В.А. Мумятова, А.А. Балакина, гинекологических заболеваний. Средний возраст больных В.Д. Сень, А.А. Терентьев раком вульвы составляет 67,0 ± 1,5 года. Включение фотоДИНАМИКА ЭКСПРЕССИИ И ЯДЕРНОЙ динамической терапии (ФДТ) в арсенал хирургических ТРАНСЛОКАЦИИ БЕЛКА Р53 ПРИ ДЕЙСТВИИ методов лечения в гинекологии расширило возможности КОМПЛЕКСОВ ПЛАТИНЫ радикальной и одновременно органосохраняющей терапии ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область заболеваний вульвы. Введение. Опухолевый супрессор белок р53 регулирует Цель исследования — изучение эффективности ФДТ транскрипцию ряда генов, продукты которых вовлечены у пациенток с предраком и раком вульвы. в регуляцию клеточного цикла, репарацию ДНК, апоптоз, Материалы и методы. ФДТ была проведена 42 паци-ингибирование ангиогенеза. енткам с доброкачественными заболеваниями, предраком
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
111
(так называемые интраэпителиальные неоплазии вульвы) и раком вульвы. Из них у 13 (30,9 %) пациенток был диагностирован крауроз вульвы, у 8 (19,1 %) — интраэпителиальные неоплазии вульвы I—III степени, у 21 (50 %) — плоскоклеточный рак. Все пациентки были разделены на 2 группы: в 1-й (n = 29) препарат на основе хлорина е6 (фотолон) вводили внутривенно капельно в дозе 1 мг/кг массы тела; во 2-й (n = 13) препарат на основе 5-аминоле-вулиновой кислоты (аласенс) наносили аппликационно в виде 20 % мази. Длительность лечения составляла 20—40 мин. Плотность энергии — 100—350 Дж/см.
Результаты. Лечебный эффект после ФДТ при патологии вульвы оценивался визуально, субъективно (отсутствие жалоб на зуд) и по данным цитологического или морфологического исследования через 3—6 мес после ФДТ Положительный лечебный эффект был достигнут у всех пациенток через 3 мес. Полная клиническая ремиссия через 1 год после проведения сеанса ФДТ была достигнута у 40 (95,2 %) больных. У 2 (4,7 %) пациенток было проведено повторное лечение в связи с рецидивом заболевания. У 1 пациентки с диагнозом дисплазии вульвы III степени через 1 год по данным гистологического исследования диагностирована дисплазия вульвы II степени, и у 1 больной с дистрофическим заболеванием вульвы (крауроз) через 6 мес зарегистрированы клинические проявления болезни (зуд) и гиперкератоз плоского эпителия по данным гистологического исследования. Побочные проявления заключались в болевом синдроме после проведения ФДТ, который купировался приемом нестероидных противовоспалительных средств.
Заключение. Таким образом, полученные результаты ФДТ с использованием препаратов фотолон и аласенс при лечении пациенток с дистрофическим изменениями, ин-траэпителиальными неоплазиями и раком вульвы показали высокую лечебную эффективность с минимальным количеством побочных эффектов и отсутствием осложнений после проведенного лечения. Метод ФДТ позволил выполнить органосохраняющее лечение у больных с заболеваниями вульвы без ухудшения качества их жизни.
А.А. Фильченков1, М.П. Завелевич1,
С.Л. Рыбалко2, Д. Б. Федорченко2, Д.Ю. Блохин3
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ВИРУСАМ РАЗНЫХ
ТАКСОНОМИЧЕСКИХ ГРУПП КЛЕТОК JURKAT/A4
С ФЕНОТИПОМ МНОЖЕСТВЕННОЙ
ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ
ИЭПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев, Украина;
2НИИэпидемиологии и инфекционных заболеваний АМН
Украины, Киев, Украина;
3ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. В лейкозных клетках с фенотипом множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) апоптотиче-ский ответ при действии химиотерапевтических препаратов существенно снижен. Использование моделей лейкозных клеток со стабильным фенотипом МЛУ позволяет анализировать механизмы, препятствующие запуску в них программы апоптоза. Вместе с тем апоптоз, как известно, является одним из механизмов цитопатогенного действия многих вирусов. Определение чувствительности к вирусам
клеток с фенотипом МЛУ позволяет расширить наши представления о роли различных компонентов системы апоп-тоза как в реализации МЛУ, так и в развитии цитопатоген-ного эффекта при действии вирусов.
Цель исследования — сравнить чувствительность клеток линии Jurkat и ее клональной сублинии Jurkat/A4 с фенотипом МЛУ к вирусу простого герпеса (ВПГ), вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ) и вирусу диареи крупного рогатого скота (BVDV).
Материалы и методы. Линии клеток Jurkat, Vero, МТ-4 и MDBK получены из банка клеточных линий ИЭПОР НАНУ. Клональная сублиния Jurkat/A4, полученная селекцией при действии на клетки Jurkat агонистических анти-CD95-антител, была предоставлена авторами. В работе использованы штамм ВН ВПГ 2-го типа и ВИЧ-1, продуцируемый клетками культуры МТ4/ВШ (НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского), BVDV (Институт ветеринарной медицины УААН). Вирусами заражали культуры Jurkat и Jurkat/A4, после чего определяли титр вирусов по цито-патогенному действию на чувствительных линиях клеток Vero (для ВПГ через 72 ч) и MDBK (для BVDV через 24 ч). О репродукции ВИЧ судили по уровню р24 в культураль-ной жидкости, после чего определяли инфекционный титр ВИЧ на чувствительных клетках МТ-4 на 5-е сутки. Содержание гиподиплоидных клеток и клеток с активной формой каспазы-3 определяли с помощью цитофлуориметра FACSCalibur (Becton Dickinson, США) и набора Caspase-3, Active Form, mAb Apoptosis Kit: FITC (BD Bioscience Phar-mingen, США).
Результаты. Инфекционные титры исследуемых вирусов оказались следующими: ВПГ — 4,0 lgID50 в клетках Jurkat и 5,5 lgID50 в клетках Jurkat^; BVDV - 3,0 lgID50 в клетках Jurkat и 4,0 lgID50 в клетках Jurkat/А4; ВИЧ — 3,0lgID50 в клетках Jurkat и 3,0 lgID50 в клетках Jurkaty^. Инфицирование ВПГ увеличивало содержание гиподипло-идных клеток и клеток с активной формой каспазы-3 в равной степени в линиях Jurkat и Jurkat/А4.
Заключение. Клетки Jurkat и Jurkat/A4 оказались чувствительными к инфицированию ВПГ, ВИЧ и BVDV. При этом клетки Jurkat/A4 с фенотипом МЛУ более чувствительны к инфицированию ВПГ и BVDV в сравнении с клетками исходной линии Jurkat. Индукция каспазозависимой гибели клеток Jurkat/A4 при продуктивной инфекции ВПГ свидетельствует об активации в них эффекторных механизмов апоптоза.
Ю.П. Финашутина, В.А. Мисюрин, Е.Н. Пушкова, Н.А. Лыжко, В. В. Тихонова, О.Н. Солопова, А. В. Мисюрин ЭКСПРЕССИЯ И ОЧИСТКА РЕКОМБИНАНТНОГО РАКОВО-ТЕСТИКУЛЯРНОГО АНТИГЕНА GAGE1
ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Белки семейства GAGE насчитывают около 16 членов и относятся к раково-тестикулярным антигенам, экспрессирующимся в различных опухолях. Экспрессия белков GAGE у здоровых людей происходит только в семенниках, однако было обнаружено, что активация экспрессии группы генов GAGE может происходить при различных раковых заболеваниях, и их экспрессия коррелирует с плохим прогнозом у больных раком желудка, раком пи-
№1 I том 15 I 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
