CC BY
142
ИММУНОЛОГИЯ № 2, 2013
стотой, доступностью, хорошей воспроизводимостью, чувствительностью, специфичностью и возможностью использования в клинических исследованиях. В настоящее время метод ПЦР в реальном времени активно применяют в медицинских лабораториях, поскольку он обладает достаточной простотой и высокой пропускной способностью, особенно если учитывать возможности автоматизации по выделению нуклеиновых кислот и постановке реакций, а также наличие на медицинском рынке российских приборов таких отечественных производителей, как НПФ ДНК-Технология.
Заключение. В ходе экспериментов специфические тестсистемы, разработанные для оценки уровня экспрессии мРНК генов IL-2 и IL-2ra, были использованы с целью определения динамики накопления мРНК соответствующих генов в лимфоцитах, стимулированных митогенами ФГА и КонА; впервые была построена развернутая кинетика ответа мононуклеар-ных клеток крови на Т -клеточные митогены в течение 5-7 сут культивирования. мРНК этих генов были использованы как маркеры РБТЛ с помощью метода ПЦР в режиме "реального времени". Определены основные закономерности экспрессии мРНК генов IL-2 и IL-2ra в ходе стимуляции, выявлены значимые различия в экспрессии данных генов у разных доноров крови под действием двух митогенов. Показано, что мРНК гена IL-2 может служить ранним маркером активации моно-нуклеарных клеток крови в РБТЛ в первые же часы после стимуляции КонА. Применен подход оценки результатов реакции без использования нормировочных генов.
Полученные в работе результаты могут быть использованы в дальнейшем как в научных разработках, так и в клинической практике, поскольку РБТЛ является удобной и наглядной моделью исследования функциональной активности лимфоцитов in vitro.
ЛИТЕРАТУРА
1. ПЦР в реальном времени / Ребриков Д.В., Саматов ГА., Трофимов Д.Ю., Семенов П.А., Савилова А.М., Кофиади И.А., Абрамов Д.Д. М.: БИНОМ; 2009.
2. Савилова А.М., Бурменская О.В., Чулкина М.М., Трофимов
Д.Ю., Алексеев Л.П. Способ оценки степени пролиферации лимфоцитов и исследование экспрессии мРНК генов ИЛ2 и ИЛ2РА в активированных митогеном лимфоцитах с помощью ПЦР в реальном времени. Физиология и патология иммунной системы. 2009; 13 (11): 14-24.
3. Breen E.C., McDonaldM., Fan J., Boscardin J., Fahey J.L. Cytokine gene expression occurs more rapidly in stimulated peripheral blood mononuclear cells from human immunodeficiency virus-infected persons. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000; 7 (5): 769-73.
4. Coligan J.E. et al., eds. Current protocols in immunology. Chichester etc: John Wiley & Sons; 2003.
5. Harrington N.P., Surujballi O.P., Prescott J.F. Cervine (Cervus elaphus) cytokine mRNA quantification by real-time polymerase chain reaction. J. Wildlife Dis. 2006; 42 (2): 219-33.
6. Horgan A.F., Mendez M.V., O’Riordain D.S., Holzheimer R.G., Mannick J.A., RodrickM.L. Altered gene transcription after burn injury results in depressed T-lymphocyte activation. Ann. Surg. 1994; 220 (3): 342-52.
7. Katial R.K., Sachanandani D., Pinney C., Lieberman M.M. Cytokine production in cell culture by peripheral blood mononuclear cells from immunocompetent hosts. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1998; 5 (1): 78-81.
8. Nowell P.C. Phytohemagglutinin: An initiator of mitosis in cultures of normal human leucocytes. Cancer Res. 1960; 20: 462-6.
9. Reem G.H., Yeh N.H. Interleukin 2 regulates expression of its receptor and synthesis of gamma interferon by human T lymphocytes. Science. 1984; 225 (4660): 429-30.
10. Stavy L., Treves A.J., Feldman M. Effect of concanavalin A on lymphocyte-mediated cytotoxicity. Nature. 1971; 232 (5305): 56-8.
11. Verfaillie T, Cox E, To LT, Vanrompay D, Bouchaut H., Buys N., Goddeeris B. M. Comparative analysis of porcine cytokine production by mRNA and protein detection. Vet Immunol Immunopathol. 2001; 81 (1-2): 97-112.
12. Otter W.D., Jacobs J.J.L., Battermann J.J., Hordijk G.J., Krastev Z., Moiseeva E.V. et al. Local therapy of cancer with free IL-2. Cancer Immunol Immunother. 2008 July; 57(7): 931-50.
Поступила 24.10.12
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 612.6.05.014.482.08
К.В. Уткин1, И.А. Кофиади1, Е.И. Батенева4, А.В. Аклеев2, И.В. Орадовская1, А.А. Рагимов3, Г.Х. Викулов1, Т.Т. Радзивил5, Ю.г. Пащенкова1, л.П. Алексеев1
установление генетических маркеров устойчивости и чувствительности человека к радиационному воздействию
1ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России (115478, г Москва, Каширское ш., д. 24, корп. 2);2УНПЦ РМ ФМБА России; 3РНЦХ РАМН им. Б.В. Петровского; 4ЗАО НПФ ДНК-Технология; 5ФгУЗ КБ № 81 ФМБА России
Введение. Развитие атомной промышленности обеспечивает растущие потребности человечества в доступных источниках энергии, а также способствует реализации новых перспектив в достижении экономического и социального прогресса. Вместе с тем следует помнить о том, что этот путь отмечен многими человеческими жертвами, число которых, к сожалению, продолжает расти. Поэтому цель обеспечения радиационной безопасности - исключение или снижение до достижимого минимума вероятности негативного влияния радиации на организм человека [1].
Алексеев Леонид Петрович (Alekseev Leonid Petrovich), тел. 8(499) 617-78-22
Медицинские последствия радиационного поражения варьируют в зависимости от доз облучения. Результат воздействия доз, превышающих пороговое значение, проявляется в виде тяжелых клинических симптомов, вероятность развития которых чрезвычайно высока. В свою очередь эффекты малых доз облучения, которые находятся в зависимости от значения эффективной дозы, накопленной человеком за жизнь, носят стохастический характер и, согласно общепринятым в радиобиологии представлениям, не могут быть причиной непосредственных нарушений здоровья. Однако даже санитарные нормативы, регламентирующие допустимые дозы облучения, не гарантируют полной радиационной безопасности [2]. Считается, что длительное воздействие малых доз может вызывать в клетках организма изменения, приводящие к на-
- 80 -
МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИММУНОЛОГИЯ И ИММУНОГЕНЕТИКА
рушениям генетического аппарата, онкогенезу, нарушению метаболизма и кроветворных функций [3-5]. Известно также, что вероятность развития клинических эффектов малых доз облучения оценивается на индивидуальном уровне [6]. При этом одним из важнейших нерешенных воросов, остается установление биологических маркеров, позволяющих выявлять лиц с повышенной или пониженной с медицинской точки зрения устойчивостью к радиационному воздействию.
Важным направлением в данной области признана радиационная генетика. Причем наиболее перспективными для оценки радиационно-ассоциированных рисков являются врожденные (наследуемые) факторы предрасположенности к заболеваниям. Генетическая составляющая играет важную роль в развитии всех мультифакториальных заболеваний, в том числе иммунозависимых, сердечно-сосудистых и онкологических. Установление генетических маркеров предрасположенности к заболеваниям, для которых облучение является дополнительным фактором риска, позволит предотвратить контакты чувствительных индивидуумов с источниками радиации и оптимизировать методы в области радиологии и радиотерапии.
Проведение такого рода исследований стало возможным благодаря новым молекулярно-генетическим данным, в первую очередь полученным в рамках международной программы "Геном человека". В частности, одним из результатов проекта стала возможность оценки генетического разнообразия человека на уровне полиморфизма одиночных нуклеотидных замен (Single Nucleotide Polymorphism, SNP). Этот уровень исследований позволяет идентифицировать варианты генов, непосредственно связанные или косвенно ассоциированные с той или иной реакцией организма в ответ на факторы внутренней и окружающей среды.
На сегодняшний день среди изученных генетических систем наиболее выраженным является полиморфизм генов иммунной системы, насчитывающей тысячи аллельных вариантов, которые определяют особенности иммунного ответа (прежде всего главного комплекса гистосовместимости и генов цитокинов). Данная система генов вместе с генами, ответственными за поддержание целостности генома и регуляцию клеточного цикла (в том числе гены репарации ДНК и апоптоза - OGG1, XRCC1, ATM, TGFB1 и др.), перспективна для изучения механизмов генетического контроля восстановления и адаптации организма после облучения. Решение этой задачи позволит повысить эффективность профессионального подбора, снизить смертность и раннюю инвалидизацию контингентов, задействованных в атомной промышленности. В то же время поиск путей оценки радиационных рисков может стать важным этапом совершенствования методов лучевой терапии и ядерной медицины.
Цель исследования - установление молекулярногенетических маркеров, ассоциированных с повышенной или пониженной устойчивостью организма человека к клиническим эффектам радиационного воздействия.
Материалы и методы. Исследовали образцы геномной ДНК, которую выделили из крови 220 человек, забранной в рамках плановых медицинских осмотров на базе профильных учреждений. В 1-ю группу (группа RR) вошли 70 образцов геномной ДНК из коллекции Уральского научно-практического центра радиационной медицины, полученных от неродственных пациентов - жителей прибрежных сел реки Течи, подвергавшихся длительному комбинированному облучению: внешнему g-облучению и внутреннему, обусловленному инкорпорацией 90Sr в костную ткань. Медиана накопленной дозы на красный костный мозг 1,23 Зв. Выборка включает представителей русской популяции, а также объединенной группы татарской и башкирской популяций тюркской ветви алтайской языковой семьи (25 и 45 человек, соответственно) 1933-1949 года рождения. Соматическому статус обследованных лиц соответствовал возрастной группе.
Во 2-ю группу (группа RS; n = 50) вошли образцы
ДНК, полученные от индивидуумов с клиническими признаками соматической патологии, которые подверглись профессионально-ассоциированному облучению в рамках допустимых концентраций. Образцы собраны в ходе проспективного иммуноэпидемиологического исследования контингента, задействованного на одном из предприятий атомной промышленности Сибирского региона, проводимого ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России.
В 3-ю группу (группа сравнения P - популяционный контроль) вошли образцы ДНК, полученные от 100 представителей русской популяции - доноров первичной кроводачи из коллекции ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России, собранной на базе ФГБУ Российский научный центр хирургии им. акад. Б.В. Петровского РАМН.
Очистку ДНК проводили методом высаливания по стандартной процедуре [7].
В исследование были включены генетические маркеры, расположеннные в генах систем регуляции клеточного цикла и репарации ДНК (ATM TGFB1, XRCC1, OGG1), иммунного ответа (интерлейкин (IL)-7, IL-15-RA, DRB1, DQA1, DQB1) а также маркеры из региона 8q24, известные высокой степенью ассоциации с онкологическими заболеваниями (табл. 1)
Генотипирование образцов проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с оценкой температуры плавления гомо- и гетеродуплексов синтетических аллельспеци-фичных проб и ДНК-мишени в режиме реального времени (точность использованных систем подтверждена повторным генотипированием выборки образцов методом секвенирова-ния по Сэнгеру [8]). Плавление ДНК-дуплексов в динамике изучали с использованием линейных "примыкающих" проб на сертифицированном оборудовании. ПЦР проводили в детектирующем амплификаторе ДТ-96 (ЗАО НПФ ДНК-Технология, Россия) по следующей программе: 94°С - 10 с, 64°С - 20 с, 72°С - 10 с в течение 40 циклов, с дополнительным раундом плавления в диапазоне температур 25 - 75°С.
Частоту аллелей вычисляли по формуле: f = n/2N,
где n - встречаемость аллеля.
Все оборудование и реактивы, использованные в работе, были предоставлены ЗАО НПФ ДНК-технология (Россия). Дизайн праймеров и молекулярных проб осуществляли с помощью программы Oligo 6.0, а также базы данных dbSNP и алгоритма Blast Национального центра биотехнологической информации США (www.ncbi.nlm.nih.gov).
Результаты статистически обрабатывали с помощью критерия х2 (p < 0,05) [9].
Разработка тест-систем и генотипирование. В ходе рабо-
Таблица 1
Гены и маркеры, включенные в исследование
Ген Маркер
DRB1, DQA1, DQB1 34 аллеля
ATM rs1801516
ATM rs664677
TGFB1 rs1800469
XRCC1 rs1799782
OGG1 rs1052133
IL-7 rs2717536
IL-15RA rs2296135
8q24 rs9642880
8q24 rs6983267
8q24 rs1447295
8q24 rs13281615
- 81 -
ИММУНОЛОГИЯ № 2, 2013
Сравнительный анализ частот аллелей кандидатных SNP-маркеров в исследованных группах Таблица 2
Маркер Ген Частота минорного аллеля
группа RR (±SE) группа RS (±SE) группа P (±SE)
rs1801516 ATM 0,08 (±0,02) 0,17 (±0,04) 0,16 (±0,02)
rs664677 ATM 0,58* (±0,04) 0,4 (±0,05) 0,41 (±0,03)
rs1800469 TGFB1 0,3 (±0,04) 0,34 (±0,05) 0,34 (±0,03)
rs1799782 XRCC1 0,08 (±0,02) 0,03 (±0,02) 0,09 (±0,02)
rs1052133 OGG1 0,07 (±0,04) 0,18 (±0,04) 0,17 (±0,03)
rs2717536 IL-7 0,07 (±0,02) 0,08 (±0,02) 0,07 (±0,02)
rs2296135 IL-15RA 0,48 (±0,04) 0,49 (±0,05) 0,49 (±0,03)
rs9642880 8q24 0,52* (±0,04) 0,47 (±0,05) 0,49 (±0,04)
rs6983267 8q24 0,47 (±0,04) 0,47 (±0,05) 0,48 (±0,03)
rs1447295 8q24 0,07 (±0,02) 0,13 (±0,03) 0,12 (±0,02)
rs13281615 8q24 0,45 (±0,04) 0,45 (±0,05) 0,46 (±0,03)
ты созданы тест-системы для выявления аллелей генов ATM, TGFB1, XRCC1, OGG1, IL-7, IL-15-RA методом ПЦР в реальном времени. Тест-системы представляют собой комплект синтетических реагентов (биомолекул), буферных растворов, а также сертифицированных технических средств визуализации и анализа. Оригинальные модификации, используемые при конструировании и синтезе биомолекул, позволяют повысить аналитическую чувствительность использованной технологии по сравнению с существующими подходами. Данная модификация метода дает возможность проводить одновременную детекцию обоих аллелей.
Для идентификации аллелей проводили ПЦР с праймерами, фланкирующими полиморфный участок генома. Для определения генотипа использовали пробы, несущие молекулы донора и акцептора флюоресценции. Вариабельный нуклеотид располагали в центральной части аллельспеци-фичной пробы.
С помощью разработанных тест-систем определили генотипы индивидуумов из исследуемых групп сравнения по семи полиморфизмам: ATM (rs1801516, rs664677), TGFB1 (rs1800469), XRCC1 (rs1799782), OGG1 (rs1052133), IL-7 (rs2717536), IL-15-RA (rs2296135). Для оценки возможной ассоциации четырех маркеров из региона 8q24 (rs9642880, rs6983267, rs1447295, rs13281615) с риском развития онкопатологий в группах сравнения использовали тест-системы, изготовленные в рамках научно-исследовательской разработки, проводимой отделом иммуногенетики ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии совместно с РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Результаты генотипирования приведены в табл. 2.
Генотипирование по 34 аллелям генов HLA-DRB1, DQA1 и DQB1 проводили с помощью тест-систем, предоставленных ЗАО НПФ ДНК-Технология (Россия). Тест-системы позволяют в режиме реального времени определять аллели генов HLA на среднем уровне разрешения. Результаты гено-типирования приведены в табл. 3.
Распределение аллелей кандидатных SNP-маркеров в исследуемых группах. Из 11 исследованных SNP-маркеров для четырех (rs1801516, rs664677, rs1052133, rs1799782) в сравниваемых группах обнаружили отличия в распределении (табл. 4). Минорный аллель T варианта Asp1853Asn гена ATM (rs1801516) встречается в основной группе (RR) реже, чем в относительно популяционном контроле (P). В то же время частота минорного аллеля T варианта IVS22-77 (rs664677) того же гена в группе RR выше. Поскольку группу RR составили облученные лица, прожившие более 60 лет от начала облучения в условиях хронического воздей-
ствия радиационного фактора, мы можем рассматривать их как группу радиорезистентных индивидуумов. Таким образом, можно говорить о разнонаправленном влиянии данных маркеров на признак радиорезистентности.
Еще одно отличие обнаружили для минорного аллеля G варианта Ser326Cys, расположенного в 326-м кодоне гена OGG1 (rs1052133). Наличие протективного эффекта для этого маркера описывалось ранее [10]. В группе RS относительно двух других групп сравнения установили единственное достоверное отличие в распределении аллеля А гена XRCC1 (rs1799782). В данном случае полученные нами результаты подтверждают установленную ранее ассоциацию маркера rs1799782 с онкологическими заболеваниями [11]. Однако роль конкретных аллелей гена XRCC1 в формировании предрасположенности к онкозаболеваниям на сегодняшний день выглядит противоречивой. Разные научные коллективы получили данные как о прямой, так и об обратной связи аллеля T с риском развития онкологических заболеваний. Результаты, полученные в настоящей работе, служат вкладом в дальнейшее развитие представлений о роли гена XRCC1 в механизме канцерогенеза. В табл. 3 представлены суммарные результаты по подтвержденным и установленным впервые в рамках данного исследования ассоциациям.
Из 34 аллелей HLA класса II единственная ассоциация с признаком устойчивости к радиационному воздействию установлена для группы аллелей HLA-DRB1*11 (см. табл. 4). Кроме того, мы обнаружили группы аллелей в генах HLA-DRB1 и HLA-DQB1 перспективные для дальнейшего исследования в более крупных выборках. Данные по распределению аллелей HLA класса II в группах индивидуумов с повышенной/пониженной устойчивостью к радиации получили впервые. Результаты настоящей работы открывают новые представления о роли молекул главного комплекса гистосовместимости в радиационной генетике.
Полученные результаты позволяют говорить о вкладе генетического фактора в формирование индивидуальной радиорезистентности. Исследованные SNP-маркеры (rs1801516, rs664677, rs1052133, rs1799782) являются перспективными для оценки индивидуальной радиорезистентности или радиочувствительности с точки зрения риска развития соматической патологии. Конечно, объем выборки и отсутствие ряда групп сравнения, которые могли бы дополнить выявленную картину распределения аллелей, не позволяют на данном этапе исследования делать выводы об отсутствии ассоциации остальных маркеров с чувствительностью тканей к радиационному воздействию. Создание репрезентативной панели
- 82 -
МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИММУНОЛОГИЯ И ИММУНОГЕНЕТИКА
Таблица 3
Результаты генотипирования биообразцов по генам HLA класса II
Ген Аллель Частота аллеля
группа RR (±SE) группа RS (±SE) группа P (±SE)
DRB1 *1 0,11 (±0,02) 0,1 (±0,03) 0,1 (±0,02)
DRB1 *3 0,1 (±0,02) 0,07 (±0,02) 0,07 (±0,02)
DRB1 *4 0,13 (±0,02) 0,1 (±0,03) 0,11 (±0,02)
DRB1 *7 0,15 (±0,03) 0,18 (±0,03) 0,15 (±0,03)
DRB1 *8 0,05 (±0,01) 0,04 (±0,01) 0,02 (±0,01)
DRB1 *9 0,01(±0,01) 0 0,01 (±0,01)
DRB1 *10 0,03 (±0,01) 0 0,01 (±0,01)
DRB1 *11 0,04 (±0,01) 0,13 (±0,03) 0,14 (±0,02)
DRB1 *12 0,08 (±0,02) 0,02 (±0,01) 0,03 (±0,01)
DRB1 *13 0,11 (±0,02) 0,13 (±0,03) 0,14 (±0,02)
DRB1 *14 0,01 (±0,01) 0,01 (±0,01) 0,02 (±0,01)
DRB1 *15 0,16 (±0,03) 0,16 (±0,03) 0,13 (±0,02)
DRB1 *16 0,03 (±0,01) 0,07 (±0,03) 0,06 (±0,01)
DQA1 *101 0,1 (±0,02) 0,1 (±0,03) 0,13 (±0,02)
DQA1 *102 0,2 (±0,03) 0,23 (±0,04) 0,19 (±0,03)
DQA1 * О U) 0,1 (±0,02) 0,09 (±0,03) 0,1 (±0,02)
DQA1 *201 0,15 (±0,03) 0,17 (±0,03) 0,15 (±0,03)
DQA1 * U) о 0,12 (±0,02) 0,1 (±0,03) 0,12 (±0,02)
DQA1 *302 0 0 0
DQA1 *401 0,02 (±0,01) 0,03 (±0,01) 0,02 (±0,01)
DQA1 * сл о 0,3 (±0,03) 0,25 (±0,04) 0,29 (±0,03)
DQB1 *201 0,2 (±0,03) 0,22 (±0,04) 0,19 (±0,03)
DQB1 *203 0 0 0
DQB1 * U) о 0,25 (±0,03) 0,19 (±0,03) 0,24 (±0,03)
DQB1 *302 0,08 (±0,02) 0,08 (±0,02) 0,08 (±0,02)
DQB1 *303 0,04 (±0,01) 0,04 (±0,02) 0,03 (±0,01)
DQB1 *304 0 0 0
DQB1 *305 0 0 0
DQB1 *401 0,02 (±0,01) 0,03 (±0,01) 0,02 (±0,01)
DQB1 * сл о 0,1 (±0,02) 0,09 (±0,02) 0,11 (±0,02)
DQB1 *502 0,08 (±0,02) 0,08 (±0,03) 0,07 (±0,02)
DQB1 * сл о со 0,02 (±0,01) 0,01 (±0,01) 0,02 (±0,01)
DQB1 * о 0,03 (±0,01) 0,02 (±0,01) 0,03 (±0,01)
DQB1 *602-8 0,2 (±0,01) 0,22 (±0,04) 0,2 (±0,03)
маркеров для оценки индивидуальной генетически обусловленной радиочувствительности требует комплексного подхода. Тем не менее установление отличий даже на уровне десятков образцов определяет целесообразность дальнейших исследований.
Достаточно велика вероятность установления ложных ассоциаций из-за недостаточно полных на сегодняшний день представлений о степени меж- и внутрипопуляционной генетической вариабельности и особенностях структурнофункциональной организации генома [12]. Поэтому принципиальным является вопрос формирования широких групп сравнения, валидации ассоциаций и разработки эффективной модели дальнейших исследований.
По результатам выполненных исследований целесообразно провести сопоставление полученных иммуногенетиче-
Таблица 4
суммарные результаты по подтвержденным и установленным впервые в рамках данного исследования ассоциациям
Маркер Аллель Признак Тип ассоциации
ATM(rs1801516) Т Радиорези- стентность Обратная (выявлена впервые)
ATM(rs664677) Т Радиорези- стентность Прямая (выявлена впервые)
OGG1(rs1052133) G Радиорези- стентность Обратная (подтверждена)
XRCC1(rs1799782) A Радиочувстви- тельность Обратная (подтверждена)
DRB1 *11 Радиорези- стентность Обратная (выявлена впервые)
ских данных и показателей оценки иммунного статуса у жителей прибрежных сел реки Течи и персонала предприятия атомно-энергетического комплекса Сибирского региона.
выводы. 1. Разработаны лабораторные варианты тестсистем, позволяющих определять аллели семи SNP-маркеров методом ПЦР в реальном времени. Данный подход точен и прост в применении и может быть рекомендован для использования в лабораторной практике.
2. Для трех SNP-маркеров (rs1801516, rs664677, rs1052133) обнаружены отличия в распределении в группе RR относительно таковых в двух других группах сравнения. Минорный аллель T варианта Asp1853Asn гена ATM (rs1801516) встречается в тестируемой группе реже, чем в популяционном контроле. В то же время частота минорного аллеля T варианта IVS22-77 (rs664677) того же гена в группе облученных людей выше. Еще одно отличие в группе RR обнаружено для минорного аллеля G варианта Ser326Cys, расположенного в 326-м кодоне гена OGG1 (rs1052133).
3. Выявлены отличия в распределении SNP-маркера (rs1799782) в гене XRCC1 в группе RS относительно аналогичного показателя в двух других группах. Частота минорного аллеля A в тестируемой выборке достоверно ниже.
4. Установлена ассоциация аллеля HLA-DRB1*11 с формированием фенотипа, характеризующегося повышенной устойчивостью к радиации. Обнаружены кандидатные маркеры в локусах HLA-DRB1 и HLA-DQB1, перспективные для дальнейшего изучения.
литература
1. Ильина Л.А., ред. Радиационная медицина. Т.2: Радиационные поражения человека. М.: ИздАТ.; 2001.
2. Бурлакова Е.Б. Анализ факторов, модифицирующих риск малых доз облучения В кн.: Труды Международной конф."Радиоактивность при ядерных взрывах и авариях".М.: Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН; 2000.
3. Рябухин Ю.С. Низкие уровни ионизирующего излучения и здоровье: системный подход. (Аналитический обзор). Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2000; 45 (4): 5-45.
4. Ярмоненко С.П. Низкие уровни излучения и здоровье: радиобиологические аспекты. Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2000; 45 (3): 5-32.
5. Richardson D.B., Wing S. Greater sensitivity to ionizing radiation at older age: follow-up of workers at Oak Ridge National Laboratory through 1990. Int. J. Epidemiol. 1999; 28 (3): 428-36.
6. Burnet N.G., Johansen J., Turesson I. et al. Describing patients’ normal tissue reactions: concerning the possibility of individualising radiotherapy dose prescriptions based on potential predictive assays of normal tissue radiosensitivity. Steering Committee of the BioMed2 European Union Concerted Action Programme
- 83 -
ИММУНОЛОГИЯ № 2, 2013
on the Development of Predictive Tests of Normal Tissue Response to Radiation Therapy. Int. J. Cancer. 1998; 79 (6): 606-
13.
7. Miller S.A., Dykes D.D., Polesky H.F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res. 1988; 16 (3): 1215.
8. SangerF., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chainterminating inhibitors. 1977. Biotechnology. 1992; 24:104-8.
9. Petrie A., Sabin C. Medical satistics at a gance, 3-d Ed.: 2009.
10. Агеева А.М., Иванина П.В., Мансурова ГН. и др. Ассоциация полиморфизмов генов предрасположенности со злока-
чественными новообразованиями у работников ядерно- и радиационноопасного производства. Сибирский онкологический журнал. 2008; прил. 1: 9-10.
11. Pratesi N., Mangoni M., Mancini I. et al. Association between single nucleotide polymorphisms in the XRCC1 and RAD51 genes and clinical radiosensitivity in head and neck cancer. Ra-diother. Oncol. 2011; 99 (3): 356-61.
12. Price A.L., Butler J., Patterson N. et al. Discerning the ancestry of European Americans in genetic association studies. PLoS Genet. 2008; 4 (1): e236.
Поступила 26.09.12
ВРОЖДЕННЫЙ ИММУНИТЕТ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 612.014.46.017.1.083
Т.Г. Свиридова1, С.В. Слободчикова2, Д.Г. Дерябин1, К.В. Шмагель2, В.А. Черешнев2
влияние аякилоксибензолоб на поглотительную и секреторную функции нейтрофилов периферической крови человека
1ФГБУ ВПО Оренбургский государственный университет (460018, г Оренбург, пр. Победы, 13); 2ФГБУ науки Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения РАН (614081, г Пермь, ул. голева, 13)
Установлено подавление поглотительной и секреторной активностей нейтрофильных фагоцитов после их предварительной обработки химическими аналогами алкилоксибензолов (АОБ) микробного и растительного происхождения. Показано, что подобное действие высоких концентраций АОБ сопряжено с цитотоксическим эффектом, наиболее выраженным у их мембранотропных длинноцепочечных гомологов. Снижение действующих концентраций АОБ до значений, соответствующих их присутствию в крови и тканях человека, отменяет цитотоксичность, но сохраняет значения активации нейтрофилов ниже референтных. Выявление подобной гипоактивации фагоцитирующих клеток рассматривается в контексте модуляции иммунной системы при образовании АОБ компонентами микробиоценоза или их поступлении с зерновыми продуктами питания.
К л ю ч е в ы е с л о в а : нейтрофилы, фагоцитоз, поглощение, дегрануляция, алкилоксибензолы, иммуномодулирующий эффект
T.G. Sviridova, S.V Slobodchikov, D.G. Deryabin, K.V Shmagel, VA. Chereshnev
THE INFLUENCE oF ALKYL PHENYL ALCoHoL on ABSoRBING AND SECRETORY FUNCTIoN of PERIPHERAL BLooD NEUTRoPHILS HUMAN
Set the suppression of sorption and secretory activity of neutrophilic phagocytes after their preliminary processing of chemical analogues alkyloxybenzene (AoB) of microbial and plant origin. It is shown, that such action of high concentrations of AoB is associated with cytotoxic effects, the most pronounced among them membrane-acting long-homologues. Reduction of existing concentrations of AoB to values appropriate to their presence in the blood and tissues of a man, cancels cytotoxicity, but stores the values of the activation of neutrophils below the reference values. the identification of such hipoactivation phagocytic cells is considered in the context of modulation of the immune system in the formation of AoB components of microbocenosis or their admission with grain food.
Key words: neutrophils, phagocytosis, absorption, degranulation, alkyloxybenzene,, immunomodulating effect
отношений в организме хозяина [1]. В частности, сказанное в полной мере может быть отнесено к особой группе резорци-нольных липидов - алкилоксибензолам (АОБ), синтезируемым обширной группой свободно живущих, симбионтных и патогенных микроорганизмов, у которых они выполняют важные регуляторные и адаптогенные функции [9]. Дополнительную интригу в этот вопрос вносит присутствие АОБ в составе зерновых продуктов, используемых в системах диетического и лечебного питания [19]. Интегральным же результатом образования АОБ представителями микробного сообщества и поступления с пищей является их накопление в крови и тканях человека до микромолярных концентраций [16, 17].
Функциональная активность лейкоцитов периферической крови человека находится под множественным контролем эндогенных и экзогенных факторов различного генеза [14]. При этом среди подобных воздействий заметное место занимают малые молекулы микробного происхождения (англ. small molecules originating from microbes), в силу особенностей своего строения достаточно легко проникающие через барьерные структуры, плохо метаболизирующиеся и тем самым вовлекаемые в первый уровень регуляции микробно-иммунологических взаимо-
Дерябин Дмитрий Геннадьевич (Deryabin Dmitriy Gennad’evich), e-mail: d2deruabin@yandex.ru
- 84 -
