CC BY
75
гранулоцитах периферической крови проопе- без нарушения компенсаторных возможностей
рированных пациентов снижена скорость и данной клеточной популяции.
стимулированный уровень продукции АФК,
УРОВЕНЬ ЦИРКУЛИРУЮЩЕЙ ДНК И АКТИВНОСТЬ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗ В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА
А.В. ЧЕРЕПАНОВА1, С.Н. ТАМКОВИЧ12, Е.В. КОЛЕСНИКОВА1,
В.И. ПЕРМЯКОВА3, П.И. шелестюк4, С.А. ТУЗИКОВ5, В.В. ВЛАСОВ1,
П.П. ЛАКТИОНОВ1
Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск1 Новосибирский государственный университет2 Центральная клиническая больница СО РАН, г. Новосибирск3 Областной онкологический диспансер, г. Новосибирск4 ГУ «НИИ онкологии Томского научного центра СО РАМН»5
Актуальность. Известно, что при развитии патологии происходит увеличение концентрации внеклеточных ДНК в плазме крови. Причиной этого может быть изменение ДНКазной активности крови в результате развития патофизиологических процессов.
Цель исследования. Мы исследовали влияние ДНКаз крови на концентрацию внеклеточных ДНК (внДНК) в крови больных раком желудка.
Материал и методы. Кровь здоровых доноров была предоставлена Центральной клинической больницей Советского района г. Новосибирска, образцы крови впервые поступивших больных раком желудка были собраны в Новосибирском областном онкологическом диспансере. Концентрацию выделенной внДНК крови определяли при помощи флуоресценции интеркалирующего красителя Hoechst 33258. Для оценки уровня ДНКазной активности крови нами был использован иммуноферментный анализ, основанный на гидролизе ПЦР фрагмента ДНК.
Результаты. Концентрация внДНК в плазме крови здоровых доноров (п=60) не превышает 13 ± 12,9 нг/мл крови, ДНКазная активность составляет 0,14 ± 0,13 ед. акт/мл крови (р<0,05). У больных раком желудка (п=17) концентрация внДНК в плазме достоверно выше, чем у здоровых доноров (критерий Манна-Уитни, р<0,001),
и составляет в среднем 70 (0-254) нг/мл крови. Так же как и в более ранних исследованиях, не выявлено зависимости концентрации внеклеточных нуклеиновых кислот плазмы от стадии онкологического заболевания. В 30 % исследованных образцов плазмы больных раком желудка дезоксирибонуклеазная активность была ниже уровня детекции и в среднем составляла 0,10 (0-0,37) ед. акт. ДНКазы 1/мл крови. Сравнение дезоксирибонуклеазной активности плазмы крови здоровых доноров и больных раком желудка показало, что при развитии патологии происходит понижение ДНКазной активности (критерий Манна-Уитни, р<0,01), однако корреляции между активностью дезоксирибонуклеаз и стадией заболевания не обнаружено.
Выводы. Данные о концентрации внДНК и ДНКазной активности крови в норме и при онкопатологии свидетельствуют о достоверной (р<0,001) обратной зависимости этих параметров с коэффициентом корреляции Спирмена - 0,37. Таким образом, одним из факторов, определяющих повышение концентрации внДНК у больных раком желудка, является снижение активности дезоксирибонуклеаз крови.
Работа поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (№ 06-04-49732а), грантами Президента РФ
(МК-59.2007.4), BRHE (№ Y4-B-08-13), Рособразования (РНП.2.2.2.3.10035), интеграционным
проектом СО РАН №13, Фондом содействия отечественной науке.
РАЗРАБОТКА СПОСОБА СТАНДАРТИЗАЦИИ ИММУНОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ БЕЛКА ТЕПЛОВОГО шОКА HSP70
В.А. ЧЕРНИКОВ1, Н.В. ГОРОХОВЕЦ2, В.А. МАКАРОВ1, Л.В. САВВАТЕЕВА2,
С.Е. СЕВЕРИН2
Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова1 Московский научно-исследовательский институт медицинской экологии2
Актуальность. Одним из наиболее перспективных и динамично развивающихся методов терапии злокачественных новообразований является иммунотерапия. Предотвращение метастазирования и уменьшение размеров опухоли достигается в основном за счет двух типов эффекторных клеток - цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и нормальных киллерных клеток (НК). Индукция ЦТЛ, специфичных к антигенам опухоли, возможна при участии антиген-презентирующих клеток (АПК), предварительно нагруженных соответствующим опухолевым антигеном. Белок теплового шока hsp70 является мощным средством доставки антигенных пептидов в АПК, стимулирующим кросс-презентацию этих антигенов и созревание АПК. В отличие от РНК и ДНК-вакцин препараты hsp70 способны активировать НК, отвечающие за деструкцию клеток, не экспрессирующих молекулы МНС-1 класса на поверхности мембраны, чем часто характеризуются клетки злокачественных новообразований. Эффективность препаратов hsp70 определяется содержанием комплексов с антигенными пептидами. Увеличение содержания комплексов с пептидами в препарате hsp70 повышает эффективность индукции ЦТЛ. С другой стороны, конформационные изменения, происходящие с белком при образовании комплексов, могут снижать эффективность активации им НК. Поэтому определение оптимального содержания комплексов с антигенными пептидами и разработка метода стандартизации препаратов на основе hsp70 представляют собой одну из
важнейших задач, которые необходимо решить перед внедрением методов иммунотерапии с использованием hsp70 в клиническую практику.
Цель исследования. На основе экспериментальных данных о функционировании hsp70 in vitro предложить способ стандартизации препарата на основе его комплексов с пептидами.
Материал и методы. Объектом исследования являлись рекомбинантный HSP70A1B человека и его гибридный аналог, полученные стандартными методами генной инженерии и биотехнологии. АТР-азная активность белка (нмоль/мг*мин) определялась колориметрическим методом по количеству образовавшегося фосфата. Связывание с меченым пептидом (% связавшегося белка) определялось колориметрическим методом по поглощению метки. Статистичекий анализ данных проводился с помощью ПО Statistica 7.0 и Origin Pro 7.5.
Результаты. Зависимость АТР-азной активности препаратов HSP70A1B и его гибридного аналога от процентного содержания в них комплексов с пептидом носила линейный характер и не зависела от структуры пептида (p<0,05). Угловой коэффициент прямой, отражающей данную зависимость, различался для HSP7 0A1B и его гибридного аналога.
Выводы. На основе полученных экспериментальных данных можно утверждать, что АТР-азная активность препарата hsp70 является следствием образования комплексов данного белка с пептидами. Определение величины АТР-азной активности может быть предложено в качестве способа стандартизации препаратов
