CC BY
10УДК 616.002.828
УЛЬТРАСТРУКТУРА КЛЕТОК ПРИРОДНЫХ ШТАММОВ
CRYPTOCOCCUS
NEOFORMANS
Степанова А.А. (вед.н.сотр .)*, Босак И.А. (лабораторный миколог), Синицкая И.А (ст.н.сотр.)
НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина ГОУ ДПО СПб МАПО, Санкт-Петербург, Россия
© Коллектив авторов, 2010
Показано, что клетки культур четырех природных штаммов С. neoformans, выделенные из помета голубей и выращенные на среде Сабуро, не различались между собой по размерам и ультраструктуре интерфазных ядер. Развитие клеток проходило однотипно и сопровождалось синтезом цитозоля, свободных рибосом, активизацией ядрышка, пролиферацией митохондрий и вакуолей в растущих клетках, а также синтезом запасных липидов и розеток гликогена - в зрелых. Применение традиционных методов ТЭМ позволило выявить три типа морфогенеза капсул клеток природных штаммов С. neoformans, тогда как гистохимическое окрашивание кислых полисахаридов альциановым синим - принципиально иные особенности их строения, характерные для каждого из изученных штаммов.
Ключевые слова: альциановый синий, кислый полисахарид, морфогенез, органелллы клетки, полисахаридная капсула, природные штаммы, ультраструктура
THE ULTRASTRUCTURE OF NATURAL STRAINS OF CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS CELLS
Stepanova A.A. (leading researcher), Bosac I .A. (laboratory mycologist), Sinitskaya I .A. (senior researcher)
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of SEI APE SPb MAPE, Saint Petersburg, Russia
© Collective of authors, 2010
It was shown that the cells of four natural C. neoformans strains, isolated from the pigeon droppings and grown on the Saburo medium, didn’t differ between themselves in the sizes, shape and ultrastructure of interphase nucleus. They undergo the same pattern of morphogenesis which accompanied by synthesis of cytosole and free ribosomes, activation of nucleolus, mitochondrions and vacuolar proliferation in growing cells, and also synthesis of storage lipid globules and rosettes of glycogen - in mature. Application of traditional methods by ТЕМ was reveal three types of capsular morphogenesis for the cells of natural strains of C. neoformans, whereas histochemical coloring of acid polysaccharides with using alcian blue - essentially other structure, distinctive for each of studied strains.
Key words: acid polysaccharide, alcian blue, morphogenesis, natural strains, polysaccharide capsule, the cellular organelles, ultrastructure
* Контактное лицо: Степанова Амалия Аркадьевна Тел.: (812) 303-51-40
ВВЕДЕНИЕ
Ранее нами [1-4] на примере 17 клинических штаммов С. neoformans, выращенных in vitro, было показано, что ультраструктура зрелых клеток гриба варьирует как в пределах колонии одного штамма, так и разных штаммов. Представляло интерес выяснить характерные особенности строения клеток природных штаммов этого вида гриба.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Изучали клетки культур четырех штаммов (РКПГУ-1399, 1400, 1401, 1402) С. neoformans из коллекции НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина СПб МАПО, выделенные из проб помета голубей, собранных на чердаках зданий г. Санкт-Петербурга. Культуры гриба выращивали на среде Сабуро (pH - 5,7) в термостате при 37 °С. Кусочки трех, семи и десятидневных колоний гриба с фрагментом питательной среды фиксировали для целей трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) по стандартной методике [5]. Кислые полисахариды выявляли с помощью альцианового синего по методу Гайер [7]. Промеры клеточных компонентов проводили на 20-25 медианных срезах интактных зрелых клеток С. neoformans в поле зрения электронного микроскопа. Подсчет диаметра клеток и толщины капсулы (в туши) осуществляли на живых клетках в поле зрения светового микроскопа Leica DM LB в 20-кратной повторности при увеличении хЮОО. В световом микроскопе Axio Imager.Zl (Carl Zeiss) клетки культур гриба изучали с использованием оптики Номар-ского. Доверительные интервалы вычисляли с помощью программы Exel.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Зрелые клетки природных штаммов С. neoformans имели сходные и небольшие размеры (табл. 1), в то время как среди клинических - доминировали культуры с более крупными размерами [1, 2].
Таблица 1
Средние значения (мкм) диаметра зрелых клеток и интерфазного ядра трехдневных культур природных штаммов С. neoformans, выращенных на агаризированной среде Сабуро
Номер штамма Диаметр клеток Диаметр ядра
РКПГУ-1399 5,30±0,112 1,59±0,040
РКП ГУ-1400 5,71±0,260 1,90±0,030
РКП ГУ-1401 5,25±0,094 1,65±0,060
РКП ГУ-1402 5,34±0,080 1,62±0,020
Форма растущих и зрелых клеток в колониях (независимо от штамма и способа изучения) С. neoformans, как правило, сферическая (Рис. 1а-д, 2а,б) либо слегка эллипсоидная (Рис. 2в,е). Сразу после отделения от материнской клетки (Рис. 1а) дочерняя клетка подвергалась изодиаметрическому росту. Основной объем ее занимало одно интерфазное ядро округлой (Рис. 1а) или слегка неправильной
формы, содержащее нуклеоплазму умеренной электронной плотности, диффузный хроматин и одно мелкое (0,3 мкм) эксцентричное плотное ядрышко.
Рис. 1. Схема морфогенеза клеток природных штаммов С. пеоЬтюпч, выращенных на среде Сабуро. Особенности ультраструктуры капсулы на схеме не показаны а-в - растущие клетки; г - завершившая рост клетка; д - зрелая клетка; е - стареющая клетка; ж, з - отмершая клетка.
Условные обозначения здесь и на рис. 2-4: В - вакуоль;
Г - гликоген; КС - клеточная стенка; ЛВ - липидное включение; М - митохондрия; Мф - микрофиламенты; Пз - пузырьки; ПК - полисахаридная капсула; ПС - питательная среда; Р - рибосомы; Рб - рубчик; ЭР - эндоплазматический ретикулум; Я - ядро; Яд - ядрышко
Последнее состояло из гранулярного и фибрил-ллярного компонентов, представленных в равной мере. Митохондрии редкие (2-3 на срез клетки), мелкие (0,2-0,3 мкм), одиночные, с умеренно развитой системой крист и слабо контрастными мембранами. Вакуоли и запасные вещества отсутствовали. Редкие агранулярные цистерны эндоплазматическо-го ретикулума (ЭР) наблюдали вблизи плазмалеммы. Цитозоль плотный, насыщен свободными рибосомами. Плазмалемма плотно прилегала к тонкой (0,08-ОДО мкм) клеточной стенке.
Дифференциация клеток гриба сопровождалась формированием нескольких мелких светлых вакуолей (Рис. 16, 2в). Последние встречали повсеместно; они светлые либо со скоплениями фибриллярного ма териала. По мере роста клеток С. пео/огтат мелкие вакуоли сливались, формируя одну крупную центральную (Рис. 1в), претерпевающую стремительный рост. В содержимом интерфазного ядра растущих клеток выявляли одно (Рис. 2ж) крупное (в среднем, 0,6 мкм), эксцентричное, рыхлое ядрышко с преобладанием гранулярного компонента. Рост клеток гриба протекал на фоне существенного увеличения числа митохондрий (до 8-12 на срез клетки, Рис. 1г) и их размеров (до 0,8 мкм). Помимо округлых митохондрий, наблюдали органеллы эллипсоидной, округлой (Рис. 2з,л) и реже -гантелевидной формы (Рис. 2д). Заметно возрастала плотность распределения и протяжённость крист. Цистерны ЭР в умеренном числе, короткие, прямые или слабо извилистые, агранулярные либо несли небольшое число рибосом.
В толще цитозоля крайне редко (1-2 на срез клетки, рис. 2з) отмечали одиночные мелкие светлые пузырьки. Пероксисомы встречали редко; они мелкие (0,3-0,4 мкм), с плотным матриксом. Вблизи ядер растущих клеток наблюдали скопление из небольшого числа длинных микротрубочек. Цитозоль плотный, богат свободными рибосомами (Рис. 4а).
По завершении роста клетки гриба переходили к созреванию, в ходе которого начинался активный синтез запасных веществ. В клетке, в первую очередь, происходила аккумуляция запасных липидов (Рис. 2е), а позже - и розеток гликогена (Рис. 1г, 2и,л). Липидные включения мелкие (0,2 мкм) и средних размеров (0,4-0,6 мкм), одиночные либо в небольших группах. Розетки гликогена (0,1-0,2 мкм) в большом числе. Вскоре вместо одной центральной вакуоли появлялось несколько - средних размеров (Рис. 1г,е,и). Плотный цитозоль по-прежнему насыщен свободными рибосомами. На этой стадии % от объема клетки занимало одно интерфазное ядро (Рис. 1г, 2г,д,е), приуроченное к клеточной стенке. Средний диаметр его, в зависимости от штамма, варьировал в небольших пределах (табл. 1). Ядрышко одно, довольно крупное (0,5 мкм), с преобладанием гранулярного компонента.
После завершения синтеза запасных веществ в клетках гриба заметно снижалась численность митохондрий (до 3-4 на срезе клетки). Они мелкие (от 0,2 до 0,3 мкм), с небольшим числом крист. Цитозоль уплотнялся настолько, что в содержимом клетки выявляли только одно (Рис. 2а) или несколько (Рис. 1д) крупных (от 1,0 до 1,5 мкм) липидных включений неправильной формы, а также скопления гликогена небольшого объема. После стадии созревания клетки С. пео/огтат переходили к старению (Рис. 1е), завершающемуся их полным отмиранием (Рис. 1ж,з).
Для клеток культур изученных природных штаммов криптококка характерны тонкие клеточные стенки (табл. 2).
Таблица 2
Средние значения (мкм) толщины клеточной стенки и капсулы зрелых клеток изученных штаммов С. пео^гтапв, выделенных из окружающей среды и выращенных на агаризированной среде Сабуро
Номер штамма Толщина клеточной стенки в ТЕМ Толщина капсулы в световом микроскопе
РКПГУ-1399 0,36 ±0,002 0,638±0,025
РКП ГУ-1400 0,26±0,005 0,803±0,026
РКПГУ-1401 0,31 ±0,007 0,615±0,021
РКП ГУ-1402 0,28±0,006 0,743 ±0,026
Клеточная стенка у дочерних почек клеток штамма РКПГУ-1399 отличалась высокой электронной плотностью (Рис. 3 1а, 4а). В растущих и зрелых клетках она становилась неоднородной по электронной плотности: в нижней 2/3 она темная плотная гомогенная, тогда как в верхней (нарастающей!) 1/3 части растущих клеток гриба имели место светлые беспорядочно ориентированные вкрапления (Рис. 3 1б, 46, стрелка). В закончивших рост клетках этого штамма электронная плотность клеточной стен-
ки существенно возрастала, тогда как толщина наружного слоя со светлыми вкраплениями заметно сокращалась (Рис. 4д) и составляла, в среднем, 0,06 мкм±0,004.
У клеток культур штамма РКПГУ-1400 строение клеточной стенки было однотипным - гомогенным и высокой электронной плотности на всех стадиях их развития (Рис. 3 II а-в, 4в,е). Особенностью строения стенок клеток этого штамма РКПГУ-1401 было то, что в растущих клетках (Рис. 3 III а, 4л,м) они были гомогенными и темными, тогда как в закончивших рост (в верхней их трети) появлялись продольно ориентирующиеся мелкие светлые вкрапления (Рис. 3 III в, 4п, стрелка). Растущие и зрелые клетки штамма РКПГУ-1402 (Рис. 3 IV а,б) были сходны между собой и таковыми РКПГУ-1400 в том, что имели темные плотные гомогенные стенки (Рис. 4 о,р,с), начиная со стадии почкования (Рис. 4н). Отметим, что в той части клеточной стенки, где происходило формирование почки, в материнской и дочерней клетках, по завершении процесса их разделения, оставался так называемый «рубчик» (Рис. 1г, 4г). Число рубчиков в пересчёте на одну клетку гриба варьировало от одного до трёх.
Клетки природных штаммов С. neoformans отличались наличием тонких полисахаридных капсул (табл. 2), что отмечено и другими авторами [8 и др.]. Отметим, что толщина капсулы у зрелых клеток, изученных нами природных штаммов криптококка в условиях in vitro, всегда была больше таковой клеточной стенки (в два раза у клеток штаммов РКПГУ-1399, РКПГУ-1401, РКПГУ-1402, в 3 раза - РКПГУ-1400, см. табл. 2). У зрелых клеток преобладающего числа (62%) клинических штаммов гриба, выращенных в сходных условиях, капсулы более чем в 10 раз были толще клеточных стенок [1].
Анализ строения полисахаридных капсул зрелых клеток природных штаммов С. neoformans, выявленных с помощью традиционных методов фиксации ма териала для ТЕМ, позволил выделить три типа ее строения (Рис. 3 I-IV а-в).
Так, первый тип строения полисахаридной капсулы описан нами для клеток штамма РКПГУ-1399 (Рис. За-в). На протяжении всего периода развития клеток этого штамма, начиная со стадии почкования (Рис. 4а), строение полисахаридной капсулы в ходе применения традиционных методов фиксации материала было трехслойным (Рис. 46, д). Первый (нижний) слой светлый, с хаотично распределенными тонкими микрофибриллами, тогда как второй (средний) - темный, гомогенный. Последний 3-й слой темный, более рыхлый в молодых клетках (Рис. 46), заметно уплотнялся в закончивших рост клетках (Рис. 4д), наружный контур его становился более ровным. Отмечены изменения в соотношении толщины слоев капсулы в ходе морфогенеза клеток гриба. Так, в растущих клетках толщина первого и второго слоев была практически одинаковой (0,15 мкм±0,002, рис. 4а,б), тогда как в закончивших
I Мф
II
1. Мф
III
Мф
IV
б 1
Г, -" / '. |
б
^ (
ттмшш *
б ■ 1
^2
1
! МФ
Рис. 3. Схема морфогенеза (а-в) капсулы зрелых клеток С. -й'ёо/ЬййШ» после применения традиционных методов фиксации для ТЕМ и после гистохимического выявления кислых полисахаридов (г).
Арабскими цифрами показаны слои капсулы, римскими -обозначены штаммы (I - РКПГУ-1399, II - РКПГУ-1400,
III - РКПГУ-1401, IV- РКПГУ-1402). а - дочерняя почка, б - растущая, в, г - зрелые клетки гриба
рост (Рис. 4д) - второй слой становился заметно толще первого (0,09 мкм±0,001). Толщину третьего слоя (0,40 мкм±0,006) возможно было определить после вычитания толщины первого и второго слоев из среднего значения толщины полисахаридной капсулы, полученного по данным светооптического исследования. После гистохимического окрашивания аль-циановым синим толщина капсулы у зрелых клеток анализируемого штамма, в среднем, составляла 0,83 мкм±0,005. В растущих клетках в составе капсулы четко выявлялись два слоя (Рис. 4ж): нижний слой (более толстый светлый), содержал хорошо развитую систему микрофибрилл сходной толщины, тогда как верхний - темный, более Тонкий, с неровным контуром. В закончивших рост зрелых клетках (Рис. 3 1г, 4и) отмечали значительное увеличение толщины элементов нижнего слоя, составляющие их микрофибриллы становились более плотными, а толщина - более вариабельной. В то же время верхний слой сильно утоньшался и приобретал вид тонкого, сильно извилистого и прерывистого. На парадермальном срезе капсулы видно, что микро-фибриллы, пронизывающие полисахаридную капсулу, локализовались не беспорядочно, а расположены практически строго в шахматном порядке (Рис. 4з). Толщина капсулы зрелых клеток после окраски альциановым синим была, в среднем, равна 0,59 мкм±0,005.
Второй тип строения полисахаридных капсул был характерен для клеток штамма РКПГУ-1400 (Рис. 3 Па-в). Капсулы в растущих (Рис. 4в) и зрелых (Рис. 4е) клетках этого штамма однослойные, состоящие из светлого аморфного матрикса, пронизанного тонкими хаотично ориентированными темными
микрофибриллами, примыкающими своим основанием к клеточной стенке, вблизи которой плотность их распределения была заметно выше. Отметим, что при исследовании клеток, погруженных в питательную среду Сабуро, верхняя граница и контур капсулы четко выявлялись (Рис. 4в) на фоне специфического тонко-фибриллярного рисунка, характерного для нее. Окрашивание альциановым синим позволило выявить для зрелых клеток этого изолята хорошо развитую систему темных плотных конусообразных крупных выростов (Рис. ЗПг, 4к), имеющих варьирующую высоту (в среднем, 0,47 мкм±0,006) и толщину (в среднем, 0,12 мкм±0,002).
Для клеток культур штаммов РКПГУ-1401 и РКПГУ-1402 описан третий тип строения полисахаридной капсулы (Рис. 3III a-в, IV a-в), совмещающий в себе на ранних стадиях морфогенеза черты второго, а на завершающих - первого типа, ранее приведенных нами для клеток других исследованных штаммов. В дочерней почке (Рис. 3 Ша, 3 IVa, 4л,н) клеток С. neoformans этих штаммов капсула была однослойной. При этом в светлом аморфном матриксе выявляли умеренные скопления беспорядочно ориентированных микрофибрилл. В составе капсулы растущих (Рис. 3 III6, 3 IV6) и закончивших рост клеток (Рис. 3 Шв, 3 IVa, 4п,с), на некотором удалении (в среднем,
0,07 мкм±0,002) от клеточной стенки, стал различим темный слой небольшой толщины (в среднем, 0,03 мкм±0,005), формирующийся из микрофибрилл, изменяющих радиальную ориентацию на поперечную. В зрелых клетках гриба полисахаридные капсулы состояли из трех слоев: нижнего (1-й слой) светлого, с хаотично локализующимися тонкими довольно многочисленными микрофибриллами, среднего (2-й слой) - темного, с мелкими светлыми беспорядочно локализующимися вкраплениями (Рис. 4м) и наружного (3-й слой) - аморфного, светлого (Рис. 3 Шв, 3 IVb). Первый и второй слои капсулы по толщине (0,08 мкм±0,002) не различались между собой. Толщина 3-го слоя, в среднем, составляла 0,46 мкм±0,006. Полисахаридные капсулы клеток, погруженных в питательную среду, имели хорошо различимый, слегка волнистый, наружный контур (Рис. 4с). При гистохимическом выявлении кислых полисахаридов в капсуле зрелых клеток штамма РКПГУ-1401 показано наличие из двух слоев (Рис. 3 Шг, 4т): нижнего (в среднем, 0,15 мкм±0,004) светлого, с многочисленными тонкими темными радиально ориентированными микрофибриллами, и верхнего (в среднем,
0,17 мкм±0,006), состоящего из темных гомогенных скоплений неправильной формы. Толщина капсулы зрелых клеток гриба после окраски кислых полисахаридов, в среднем, была равна 0,63 мкм±0,008. В то же время кислые полисахариды после окраски альциановым синим имели иные особенности строения (Рис. 3 IVr, 4у): они формировали хорошо развитый слой толщиной, в среднем, 0,70 мкм±0,001, состоящий из массивных темных отложений в виде протуберанцев неправильной формы, внутри которых
имели место редкие светлые «окна» варьирующего размера и неправильной формы. Отметим, что для ранее изученных нами [1, 4, 6, 9] с помощью традиционных методов ТЭМ в условиях культуры клинических штаммов криптококка второй (РКПГУ-1400) тип строения капсулы не был характерен, в то время как первый (РКПГУ-1399) и третий (РКПГУ-1401) типы были описаны для зрелых клеток трех из 17 изученных штаммов.
В целом, применением метода гистохимического окрашивания альциановым синим выявили насколько многолика структура кислого полисахарида, входящего в состав капсулы клеток природных штаммов гриба. Общий план строения их капсулы, с одной стороны, не совпадал с данными ТЭМ, а с другой, был специфичен для каждого отдельно взятого штамма (даже у клеток штаммов РКПГУ-1401 и РКПГУ-1402, имеющих сходный тип ее строения). Нами показано, что для полноценной ультрастук-турной характеристики капсул криптококка целесообразно использовать одновременно эти два метода просвечивающей электронной микроскопии.
Таким образом, морфогенез клеток природных штаммов С. пео/огтат протекал однотипно, что резко отличает их от ранее изученных клинических штаммов [1, 3, 5, 6], которые различались между собой по степени хроматизации интерфазных ядер, числу и строению митохондрий, типам аккумулируемых запасных веществ и их сочетанию. Отметим, что клетки изученных природных штаммов гриба, в отличие от клинических [1, 3, 5, 6], содержали только два типа запасных веществ: липидные включения и розетки гликогена, причем первые доминировали. Общеизвестно, что липидные включения являются энергетически более емким типом запасного вещества, чем гликоген. Клетки ранее изученных на среде аналогичного состава клинических штаммов С. пео/огтат [1, 3, 6], при переходе в стадию зрелости, аккумулировали намного более разнообразные типы запасных веществ.
ВЫВОДЫ
1. Интерфазные ядра дифференцирующихся клеток культур природных штаммов С. пео/огтат (РКПГУ-1399,1400,1401,1402) не различались между собой по размерам и слабой степени хроматизации.
2. Морфогенез клеток природных штаммов С. пео/огтат проходил однотипно и сопровождался синтезом цитозоля, новообразованием свободных рибосом, активизацией ядрышка, пролиферацией митохондрий и вакуолей в растущих клетках, а также синтезом запасных липидов и розеток гликогена - в зрелых.
3. Изученные штаммы разделились на две группы по особенностям морфогенеза и строению клеточной стенки. У клеток штаммов РКПГУ-1400 и РКПГУ-1402 клеточные стенки были гомогенными и темными на протяжении всего периода их развития. В растущих клетках штаммов РКПГУ-1399 и
РКПЕУ-1401 стенки были гомогенными и темными, а в таковых закончивших рост - в верхней К появлялись продольно ориентированные мелкие светлые вкрапления.
4. Полисахаридные капсулы зрелых клеток природных штаммов С. neoformans (Р КІІГУ 1399, 1400,
1401, 1402) в 2-4 раза толще их клеточных стенок.
ЛИТЕРАТУРА
1. 1. Васильева Н.В. Факторы патогенности Cryptococcus neoformans и их роль в патогенезе криптококкоза: Автореф. дисс... докт.биол.наук. - 2005;. - 42 с.
2. 2. Босак И.А. Сравнительная характеристика природных и клинических изолятов Cryptococcus neoformans: Автореф. дисс... канд.мед.наук. - 2009. - 24 с.
3. Щ Васильева Н.В., Степанова А.А., Синицкая И.А. Семенов В.В. Сравнительное изучение ультраструктуры штаммов С. neoformans разной вирулентности // Проблемы медицинской микологии. - 2005, - Т.7, №2. - С. 99.
4. 4. Васильева Н.В., Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура капсул зрелых клеток штаммов Cryptococcus neoformans in vitro in vivo // Проблемы медицинской микологии. - 2006. - Т. 8, №2. - С. 25.
5. 5. Васильева Н.В., Степанова А.А., Синицкая И.А. Электронно-микроскопическое изучение биологии развития клеток слабо^ и сильновирулентного штаммов Cryptococcus neoformans //1 [роблемы медицинской микологии. -2007. - Т. 9, №2. - 47-48.
6. 6. Васильева Н.В., Степанова А. А., Синицкая И.А. Особенности морфогенеза клеток Cryptococcus neoformans в зависимости от вирулентности штаммов // Проблемы медицинской микологии. - 2007. - Т.9, №2. - С. 23-30.
7. 7. Гайер Г. Электронная гистохимия. - М.: «Мир», 1974. - 488 с.
8. 8. Bulmer G.S. Twenty-five years with Cryptococcus neoformans // Mycopathology. - 1990. - Vol.109. - P. 111-122.
9. 9. Vasilyeva N.V., Stepanova A.A., Sinitskaya I.A. Electron-microscopic investigation of the cell wall and polysaccharide capsules in mature cells strains of Cryptococcus neoformans in yitro and vivo. 7-th Internat. Conf. on Cryptococcosis & Cryptocoecus, Japan. - 2008. - P. 74.
Поступила в редакцию журнала: 11.11.2010
Рецензент: Р.А. Аравийский
Применение традиционных методов ТЭМ помогло выявить три типа морфогенеза капсул у клеток гриба Общий план строения капсулы зрелых клеток криптококка после гистохимического окрашивания был принципиально иным, что позволило выделить четыре типа ее строения.
Рис. 2. Световая (а-в туши; б-оптика Номарского) и трансмиссионная электронная микроскопия (в-л) клеток семидневных культур природных штаммов СгурШктхм пеоШтат, выращенных на среде Сабуро. а-г,е - РКП ГУ-1400; д,л - РКПГУ-1401; ' з,к- РКПГУ-1399; г,ж - РКПГУ-1402.Ув.: а,б -хЮОО; в,к-х30000; з -Х45000; г,д,и -Х35000; е,ж,л -Х40000
Э I» [ Щ Ц - г лын I 1И о р 11
Мс^ ПК ПС
^ ПК
Рис. 4. Клеточная стенка и капсулы растущих (а,б,в,ж,е,л,м,н,о,р) и зрелых (г-и,к,п,т,с,у) клеток криптококка (изолят ГП1) в трансмиссионном электронном микроскопе. а,б,г,д,в,е, л,м,п,н,о,р,с - глутаральдегид-осмий, ж,з,и,к,т,у - альциановый синий. б,п - Т показаны светлые вкрапления в клеточной стенке; г - Г показан пробел в клеточной стенке; у - стрелками показаны светлые «окна», а,б,г,д,ж,з,и - РКП ГУ-1399; в,е,к- РКП ГУ - 1400; л,м,п,т - РКП ГУ-1401; н,о,р,с,у- РКП ГУ-1402. Ув,: а -Х35000; б,в,г,д,ж,з,и,к,т - хбОООО; л,м,п - Х50000; е,с,у - Х40000; н,о,р - Х45000
