Особенности морфогенеза клеток Cryptococcus neoformans в зависимости от вирулентности штаммов Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

УДК 616. 992

ОСОБЕННОСТИ МОРФОГЕНЕЗА КЛЕТОК CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИРУЛЕНТНОСТИ ШТАММОВ

Васильева Н.В., Степанова А.А., Синицкая И.А.

НИИ медицинской микологии им.П.Н.Кашкина ГОУ ДПО СПб МАПО, Санкт-Петербург, Россия

© Коллектив авторов, 2007

С помощью методов трансмиссионной электронной микроскопии (ТЕМ) проведено сравнительное изучение особенностей морфогенеза клеток слабо и сильновирулентных штаммов (РКПГ 1165 и 1105 соответственно) C. neoformans, выращенных на среде Сабуро, при экспериментальном криптококкозе у белых мышей Впервые выявлены различия в особенностях биологии развития клеток гриба in vitro и in vivo в зависимости от степени вирулентности штаммов.

Ключевые слова: вирулентность, Cryptococcus neoformans, in vitro, in vivo, клетки, морфогенез, мозг мышей, ультраструктура, экспериментальный криптококкоз

PECULIARITIES OF CELLS MORPHOGENESIS OF CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS IN DEPENDENCE ON STRAIN’S VIRULENCE

Vasilyeva N.V., Stepanova A.A., Sinitskaya I.A.

Kashkin Research Institute of Medical Mycology, SEI APE SPb MAPE, Saint Petersburg, Russia

© Collective of auttars, 2007

Differences in peculiarities of fungal cell development in vitro and in vivo in dependence on strain’s virulence have been described by us for the first times.

Key words: Cryptococcus neoformans, cell, experimental

cryptococcosis, in vitro, in vivo, morphogenesis, mouse brain, peculiarities, ultractructure, virulence

введение

Cryptococcus neoformans - базидиомицетовый оппортунистический гриб, вызывающий тяжелый менингоэнцефалит и диссеминированные инфекции преимущественно у больных СПИД и другими иммунодефицитами.

В литературе [1-3 и др.] отсутствуют сведения по морфогенезу клеток разных штаммов гриба, различающихся по вирулентности. По таким данным удается составить обобщенный «ультраструктурный портрет» клеток гриба, находившихся в условиях in vitro и in vivo.

Основной целью настоящей работы было изучить на примере клеток двух штаммов С. neoformans разной вирулентности общие и специфические особенности их морфогенеза in vitro и in vivo.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Штамм РКПГ 1165 был выделен из селезенки умершего больного СПИД, менингоэнцефалитом и диссеминированным кандидозом (аутопсийный материал от Э.И., 5.05.94 г.), тогда как РКПГ 1105 - из ликвора больного (8.04.94 г.) СПИД и менингоэнце-фалитом.

Культуры двух штаммов C. neoformans выращивали на агаре Сабуро в течение 72 часов при 37 °С. Часть колонии гриба препаровальной иглой заключали в каплю жидкого 2% агара и фиксировали для ТЭМ по методике, описанной нами ранее [4].

Ультратонкие срезы готовили с помощью алмазного ножа на ультратоме LKB-V, собирали на медные сетки и изучали под электронным микроскопом Jem-100SX. Измерения клеточных компонентов (ядра, ядрышка, митохондрий и др.) проводили на 15-20 медианных срезах интактных зрелых клеток для обоих штаммов C. neoformans.

результаты и их обсуждение

На ультратонких срезах трехдневных колоний обоих исследованных штаммов С. neoformans идентифицировали пять основных типов клеток: почкующиеся, растущие, зрелые, стареющие и отмершие.

Штамм C. neoformans 1165. Клетка криптококка, выращенная in vitro, сразу после завершения митоза и отделения от материнской клетки (Рис. 1а, 2а) имела небольшие размеры (2,5±0,05 мкм). Основной объем ее занимало ядро округлой (1,4±0,06 мкм) формы, локализующееся в центре клетки либо у клеточной стенки (Табл. 1).

Нуклеоплазма плотная, степень хроматизации слабая. Ядрышко одно, эксцентричное, плотное, с ровным контуром. Митохондрии редкие (2-3 на медианный срез клетки), сферической или неправильной формы, с плотным матриксом и небольшим числом коротких крист. Цистерны эндоплазматическо-го ретикулума редкие, короткие, слегка извилистые, агранулярные, располагались у клеточной стенки. Вакуоли, запасные вещества, пероксисомы и микро-

трубочки не выявлены. Вблизи ядра отмечали редкие (2-3 на срез клетки) мелкие светлые пузырьки.

Таблица 1

Признаки, характеризующие особенности строения зрелых клеток слабо и сильновирулентного штамма

C. neoformans в условиях in vitro и in vivo

Количественные и качествен- In vitro In vivo

ные характеристики клетки

Слабовирулентный штамм 1165

Диаметр ядра 1,4 ±0,06 мкм 1,4 ± 0,07 мкм

Диаметр ядрышка 0,6 ±0,03 мкм 0,6 ± 0,02 мкм

Количество митохондрий 5-8 на срез клетки 5-8 на срез клетки

Размеры митохондрий от 0,4 до 0,6 мкм от 0,4 до 0,6 мкм

Типы запасных веществ липидные включения и розетки гликогена розетки гликогена

Количество пероксисом — 1-2 на срез клетки

Диаметр пероксисом — 0,1 ± 0,02 мкм

Количество пузырьков — 10-20 на срез клетки

Толщина клеточной стенки 0,12 ± 0,06 мкм 0,10 ± 0,05 мкм

Сильновирулентный штамм 1105

Диаметр ядра 1,6 ± 0,07 мкм 1,6 ± 0,08 мкм

Количество митохондрий 5-8 на срез клетки 1 гигантская и 5-7 одиночных на срез клетки

Размеры митохондрий от 0,3 до 0,7 мкм от 0,2х0,9 мкм до 0,3—0,7 мкм

Типы запасных веществ липидные включения и темные глобулы полифосфатов в вакуолях крайне редко мелкая полифосфатная гранула и розетки гликогена

Количество пероксисом — 2-6 на срез клетки

Диаметр пероксисом — 0,35 ± 0,02 мкм

Количество пузырьков — 60-70 на срез клетки

Толщина клеточной стенки 0,21 ± 0,005 мкм 0,11 ± 0,003 мкм

Цитозоль плотный, насыщен свободными рибосомами. Плазмалемма клеток трехслойная, асимметричная, плотно прилегала к тонкой (0,08±0,002 мкм), однослойной клеточной стенке, имеющей повышенную электронную плотность и фибриллярное строение (Рис. 3а).

По мере роста клетки гриба, в ней отмечали формирование вначале одной, а затем нескольких мелких светлых вакуолей (Рис. 1б), возникающих как локальные расширения цистерн эндоплазматического ретикулума. Вакуоли локализовались, как правило, в центральной части клетки. Контур ядра становился слабоизвилистым. Ядрышко увеличивалось в размере (0,6±0,03 мкм, Рис. 2б). Наблюдали увеличение числа (до 5-8 на срез клетки) митохондрий и их размеров (0,4-0,6 мкм). Последние были равномерно распределены по площади среза клетки, отличались наличием матрикса умеренной электронной плотности и большого числа крист сходной электронной плотности. Позже мелкие вакуоли сливались, формируя одну крупную центральную (Рис. 1в). На этом этапе рост клеток завершался; их средний диаметр составлял 6,7±0,54 мкм. Далее в клетках гриба начинался синтез большого числа запасных веществ (Рис. 1б, в, г). Они были двух типов - липидные включе-

ния и розетки гликогена (Рис. 2в). Первоначально в клетке происходил синтез запасных липидов, а затем и гликогена. Липидные включения средних размеров (0,3-0,4 мкм), многочисленные, умеренной электронной плотности. Они одиночные либо в небольших группах. Розетки гликогена мелкие (0,1±0,03 мкм), в большом числе, темные. Оба типа запасных веществ были представлены в равной мере и находились в тесном контакте друг с другом. По завершении синтеза запасных веществ число митохондрий сокращалось до 3-4 на срез клетки. Они мелкие (0,2-0,3 мкм), одиночные, с плотным матриксом и редкими светлыми кристами. Также отмечали изменения в строении вакуолей. Вместо крупной вакуоли появлялись 2-3 средних размеров и мелкие. Форма ядра становилась эллипсоидной. Размеры ядрышка заметно сокращались (0,2±0,01 мкм), что сопровождалось снижением доли гранулярного компонента. Отмечали незначительное (до 0,12±0,06 мкм) увеличение толщины стенки клетки гриба. Полисахаридная капсула зрелых клеток гриба имела простое строение. Она состояла из трех слоев (Рис. 3 а). Первый слой был тонкий, светлый, с редкими вертикально ориентированными микрофибриллами. Второй слой был в два раза толще, электронно-плотный, с неровной верхней границей. Третий слой капсулы самый толстый, светлый. Полисахаридные капсулы такого строения соответствовали 1-му типу по классификации Н.В. Васильевой с соавт. [5].

При переходе клеток С. neoformans к старению вновь происходило формирование одной крупной вакуоли (Рис. 1д). Существенно снижалось число митохондрий и свободных рибосом. Часть митохондрий увеличивались в размерах, что сопровождалось просветлением их матрикса и снижением числа крист. Запасные вещества исчезали, цитозоль просветлялся. Далее происходил разрыв тонопласта вакуолей, что приводило к полному автолизу содержимого клетки (Рис. 1е). Клеточная стенка утоньшалась и сильно деформировалась, приобретая неправильную форму. Вскоре и она полностью лизировалась.

Таким образом, морфогенез клеток культур слабовирулентного штамма РКПГ 1165 сопровождался формированием центральной вакуоли, увеличением числа митохондрий, синтезом большого числа запасных веществ в форме гликогена и липидных включений.

В тканях мозга мышей через семь суток после начала эксперимента разновозрастные клетки гриба располагались плотно относительно друг друга, образуя скопления, состоящие из почкующихся, растущих, зрелых, стареющих и полностью опустошенных клеток. Клетка гриба сразу после завершения деления имела такое же строение, что и in vitro (Рис. 1а, 2г). В растущих клетках гриба отмечали формирование центральной вакуоли (Рис. 1в, 2и). Созревание клеток сопровождалось синтезом большого числа розеток гликогена (Рис. 1и, 2е). Однако по сравнению с клетками, культивируемыми in vitro, липидные вклю-

чения наблюдали как исключение и лишь по одному на срез клетки (Рис. 2ж, к). Они отличались небольшими размерами (0,1 мкм) и умеренной электронной плотностью. В цитозоле появлялось небольшое число (1-2 на срез клетки) мелких (0,1 мкм) пероксисом (Рис. 2з) и пузырьков (10-20 на срез клетки). Выявлены пузырьки трех типов: мелкие (Рис. 2л) с серым содержимым, средние (Рис. 2м) и крупные (Рис. 2н), характеризующиеся наличием тонко-фибриллярного материала. Различий в строении цитозоля, строении (Рис. 2е) и толщине (0,10 ± 0,05 мкм) клеточной стенки зрелой клетки криптококка, по сравнению с условиями in vitro, не выявили.

Отмечены существенные изменения в строении полисахаридной капсулы. Теперь она приобретала строение (Рис. 3в), соответствующее 5-му типу [5]. В составе капсулы такого типа различимы три слоя. Первый слой был тонкий, светлый. Второй - толстый, темный, гомогенный. В светлом матриксе третьего слоя выявлялась умеренно развитая сеть микрофибрилл, пронизывающих всю толщу капсулы. От наружной поверхности второго слоя в толщу третьего отходили толстые конусообразные выросты, число которых варьировало от трех до семи на срез клетки.

Далее в клетке криптококка происходили процессы старения, приводившие к полному отмиранию ее содержимого. Характер этих преобразований был идентичен тем, что были описаны ранее для условий in vitro.

Штамм C. neoformans 1105. В условиях in vitro клетка гриба сразу после отделения от материнской клетки имела округлую форму (Рис. 4а, 5а) и небольшие размеры (3,0 ± 0,03 мкм). Она содержала одно эксцентричное ядро (1,6 ± 0,07 мкм), отличающееся средним уровнем хроматизации и наличием ровного контура (см. табл.). В клетке из запасных веществ можно было крайне редко наблюдать одно мелкое липидное включение, приуроченное к клеточной стенке (0,21 ± 0,05 мкм). Цитозоль плотный, насыщен свободными рибосомами. По остальным признакам ультраструктуры его клетки были сходны с аналогичными слабовирулентного штамма 1165, выращенного in vitro.

По мере роста клеток С. neoformans в них появлялись 2-3 мелкие вакуоли (Рис. 4б), последующий рост и слияние которых приводило к формированию одной центральной вакуоли (Рис. 4в, 5б). После завершения роста диаметр клетки гриба составлял 6,8 ± 0,03 мкм, а толщина клеточной стенки, соответственно, 0,2 ± 0,03 мкм. Число митохондрий увеличивалось до 5-8 на срез клетки. Они были равномерно распределены по площади среза, имели сферическую или эллипсоидную форму и довольно крупные размеры (0,3-0,7 мкм). Зрелые клетки гриба этого штамма отличались небольшим уровнем содержания запасных веществ. Последние были представлены редкими липидными включениями средних размеров (0,2-0,3 мкм) и крупными темными включениями округлой формы, локализующимися в вакуолях

вблизи тонопласта (Рис. 4г). Цитозоль умеренной электронной плотности, богат свободными рибосомами. Плазмалемма ровная, плотно прилегала к клеточной стенке (0,21 ± 0,01 мкм) гранулярной структуры (Рис. 3б). Полисахаридная капсула зрелых клеток криптококка анализируемого штамма относится ко второму типу [5]. Она состояла из трех слоев (Рис. 3б). Первый слой ее тонкий, светлый, тогда как второй — грубо-фибриллярный. На поверхности последнего встречались электронно-плотные глыбки, а в толще и в основании — мелкие светлые включения. Третий слой капсулы светлый, аморфный.

Последующий переход клеток гриба к старению сопровождался изменениями, описанными для них в условиях in vitro, а также штамма 1165 (in vitro и in vivo).

В тканях мозга мышей через семь суток после внутривенного заражения их штаммом 1105 (РКПГ) также выявляли, в основном, скопления, состоящие из плотно расположенных клеток гриба, находящихся на разных стадиях развития. Молодая клетка гриба имела ультраструктуру, типичную для клеток в условиях in vitro (Рис. 4а, 5г). В период роста в ней формировались 1-2 вакуоли средних размеров (Рис. 4б, 5д), которые впоследствии сливались и формировали одну центральную (Рис. 4в, 5з). В содержимом такой вакуоли отмечали скопления фибриллярного материала разной плотности и конфигурации. Крайне редко можно было наблюдать мелкие вакуоли с темной глобулой (Рис. 5е). В клетке появлялись многочисленные (до 60-70 на срезе клетки) пузырьки, располагающиеся равномерно по площади среза клетки и придающие цитозолю своеобразный «пенистый вид». Довольно часто пузырьки можно было встретить вблизи плазмалеммы (Рис. 5л); нередкими были и картины экзоцитоза их содержимого. Пузырьки мелкие либо крупные, с фибриллярным содержимым разной электронной плотности (Рис. 5е л). Одновременно происходило увеличение числа митохондрий (до 5-7 на срез клетки, рис. 4в). Анализом серийных срезов показано наличие в клетке гриба одной крупной митохондрии, средняя и большая часть которой локализовалась вблизи оболочки ядра (Рис. 4и, 5ж). Эта часть органеллы имела V-образную форму (0,2х0,9 мм), тогда как оставшиеся концевые участки митохондрии располагались вблизи и параллельно клеточной стенке. Гигантская митохондрия отличалась наличием плотного матрикса и большого числа хорошо развитых крист. Топографическая приуроченность такой митохондрии к ядру и клеточной стенке клетки криптококка не случайна. Мы объясняем это необходимостью усиленного снабжения энергией, прежде всего, ядра как центрального компонента клетки, обеспечивающего все жизненно важные аспекты ее жизнедеятельности, и плазма-леммы, контролирующей транспорт метаболитов, в том числе различных ферментов патогенного гриба, одним из явных механизмов секреции которых является экзоцитоз пузырьков. Следует отметить, что

это первое сообщение о наличии гигантской митохондрии в клетках С. neoformans. Среди патогенных видов грибов такая органелла была обнаружена в некоторых клетках вегетативного мицелия A. niger [5], A. fumigatus [6], A. flavus [7], A. versicolor [8], а также растущих головках и конидиеносцах A. niger [9].

По завершении роста клетки С. neoformans в ней имел место синтез большого числа розеток (0,08-0,10 мкм) гликогена (Рис. 4и, 5и, к) и одиночных, мелких (0,2±0,01 мкм) липидных включений. В клетках гриба появлялись 2-6 крупные (от 0,3 до 0,4 мкм) перокси-сомы, характеризующиеся наличием плотного тонкогранулярного матрикса и темной ограничивающей мембраны (Рис. 5з). Интересно отметить, что в тканях мозга мышей зрелые клетки гриба формировали в два раза более тонкие (0,11±0,03 мкм) клеточные стенки, чем клеточные стенки в условиях культуры. Особенности ультраструктуры полисахаридной капсулы зрелых клеток сильновирулентного штамма РКГП 1105 были идентичны капсулам клеток слабовирулентного РКПГ 1165.

Далее в ультраструктуре клеток наблюдали дегенеративные изменения, как и в клетках, выращенных in vitro.

Таким образом, при изучении ультраструктуры клеток слабо (РКПГ 1165) и сильновирулентного штаммов (РПКГ 1105) C. neoformans in vitro общим было формирование одной центральной вакуоли средних размеров, увеличение числа митохондрий и их размеров. По завершении роста в клетках слабовирулентного штамма криптококка аккумулировались многочисленные липидные включения и розетки гликогена, представленные в равной мере, тогда как у сильновирулентного, напротив, отмечали синтез небольшого числа липидных включений и крупных одиночных темных гранул полифосфатов в вакуолях.

Рост клеток гриба слабовирулентного штамма в тканях мозга, также как в условиях культуры, сопровождался формированием центральной вакуоли, увеличением числа митохондрий и их размеров, а также синтезом большого числа запасных веществ. Однако, по сравнению с условиями in vitro, розетки гликогена в них занимали доминирующее положение. В цитозоле клеток гриба появлялось небольшое число пероксисом и пузырьков.

Отличительными особенностями морфогенеза клеток сильновирулентного штамма криптококка in vivo были: синтез большего числа запасных веществ, формирование гигантской митохондрии и многочисленных пузырьков, а также появление большого числа крупных пероксисом. При анализе данных по

количественному и качественному составам запасных веществ, аккумулируемых клетками изученных штаммов, показано, что для клеток слабовирулентного штамма РКПГ 1165, выращенных in vitro, характерно наличие большего количества запасных веществ, чем у сильновирулентного РКПГ 1105. Разным был и их качественный состав: липидные включения и гликоген у первого и липидные включения и темные глобулы в вакуолях - у второго. В тоже время in vivo клетки обоих штаммов, независимо от их вирулентности, довольно активно осуществляли синтез только одного типа запасного вещества - розеток гликогена. Следует отметить, что клетки слабовирулентного штамма РКПГ 1165 формировали in vitro и in vivo клеточные стенки идентичной толщины, тогда как сильновирулентного РКПГ 1105 - в два раза более тонкие в тканях мозга мышей.

ВЫВОДЫ

1. Общими признаками морфогенеза клеток слабо и сильновирулентного штаммов C. neoformans в условиях in vitro было формирование центральной вакуоли, увеличение числа митохондрий и их размеров, а также синтез запасных веществ. Зрелые клетки слабовирулентного штамма РКПГ 1165 синтезировали намного больше запасных веществ, чем сильновирулентного РКПГ 1105. Выявлены различия и в типе аккумулируемых веществ: клетки слабовирулентного штамма РКПГ1165 синтезировали гликоген и липидные включения, тогда как сильновирулентного РКПГ 1105 - липидные включения и темные глобулярные включения в вакуолях.

2. Общими признаками дифференциации клеток C. neoformans у штаммов разной вирулентности (РКПГ1165 и РКПГ 1105) в период инфицирования ими тканей мозга мышей было: формирование центральной вакуоли, синтез запасных веществ, появление пероксисом, пролиферация митохондрий и пузырьков. По сравнению с клетками гриба в условиях in vitro, таковые (вне зависимости от степени вирулентности) в тканях мозга синтезировали большое число запасных веществ (преимущественно гликоген). Отличительной особенностью морфогенеза клеток сильновирулентного штамма РКПГ 1105 было формирование гигантской митохондрии, появление большего числа пузырьков и увеличением размеров пероксисом.

3. Зрелые клетки слабо (РКПГ 1165) и сильновирулентного штаммов (РКПГ 1105) в условиях in vitro формировали соответственно капсулы первого и второго типов, тогда как in vivo одного - пятого.

ЛИТЕРАТУРА

1. Van Burik J.-A.H., Magee P.T. Aspects of fungal pathogenesis in human // Ann. Rev. Microbiol. - 2GG1. - Vol. 55. - P. 74З-772.

2. Ishinkin N., Zasshi G. Three-dimensional reconstruction of mitotic cells of Cryptococcus neoformans based on septal section electron microscopy // Review. Japensis. -199S. - Vol. 39, №3. - P. 123-127.

3. Kopeckd M., Gabriel M., Takeo K., et al. Microtubules and actin cytoskeleton in Cryptococcus neoformans compared with ascomycetous budding and fission yeasts // European J. of Cell Biology. - 2GG1. - Vol. SG. - P. 3G3-311.

4. Степанова A.A., Синицкая ИЛ.Ультраструктура клеток Aspergillus niger van Thieghem. Вегетативный мицелий // Журн. Проблемы мед. микологии. - 2GG3. - Т. 5, №4. - C. 32-39.

5. Васильева Н. В., Степанова А. А., Синицкая И. А. Ультраструктура капсул зрелых клеток штаммов Cryptococcus neoformans in vitro и in viw // Журн. Проблемы медицинской микологии. - 200б. - Vol. S, №2. - P. 25.

6. Степанова A.A., Синицкая И.A. Субмикроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus fumigatus Fres. // Журн. Пробл. мед. микологии. - 2GG4. - Т. б, №3. - С. 34-4G.

7. Степанова A.A., Синицкая И.A. Ультраструктура клеток вегетативного мицелия Aspergillus flavus Link, выращенного in vitro // Журн. Пробл. мед. микологии. - 2GG5. - Т. S, №1. - С. 4G-45.

S. Степанова A.A., Синицкая И.A. Цитология клеток выращенного in vitro вегетативного мицелия Aspergillus versicolor (Vuill.) Tiraboschi // Журн. Пробл. мед. микологии. - 200б. - Т. S, №3. - С. 22-2S.

9. Степанова A.A., Синицкая И.A. Морфогенез конидиогенного аппарата Aspergillus niger van Tieghem по данным электронной микроскопии // Журн. Проблемы мед. микологии. - 2GG4. - Т. б, №2. - P. 37-4S.

Поступила в редакцию журнала 15.11.2007

Рецензент: A.E. Васильев

ЛВ

и

Рис. 1. Схематичное изображение морфогенеза клеток слабовирулентного штамма 1165 С. neoformans in vitro (а-е) и в тканях мозга мышей (а-в, д,е, и). Пероксисомы и пузырьки на схеме не показаны (обозначения см. в подписи к рис. 3)

Рис. 2. Ультраструктура клеток С. neoformans (штамма 1165) in vitro (а-в) и in vivo (г-л). Ув.: а,б,г- х3000; д - х25000;

в,е,ж,м - х55000; з,л - х35000; и - х20000; к - х40000.

Рис. 3. Ультраструктура клеточных стенок и капсул С. neoformans in vitro (а. б) и in vivo (в). а - капсула 1-го типа (штамм РКПГ 1165); б - капсула 2-го типа (штамм РКПГ 1105); в - капсула пятого типа (штаммы РКПГ 1165 и 1105). Ув. а.б - х 60000; в - х 40000. Условные обозначения (здесь и на рис. 2. 3. 4): В - вакуоль; Г - гликоген. КС - клеточная стенка. ЛВ - липидное включение. М - митохондрия. Пс - пероксисома; К - капсула; Пз - пузырьки; Р - рубчик; ТГ - темная гранула;

ЭГ - электронно-плотная гранула; ЭР - эндоплазматический ретикулум. Я - ядро. Яд - ядрышко. I - клеточная стенка;

II - полисахаридная капсула; 1. 2. 3 - слои полисахаридной капсулы.

Рис. 4. Схематичное изображение морфогенеза клеток сильновирулентного штамма 1105 С. neoformans

in vitro (а-е) и в тканях мозга мышей (а-в, д, е, и).

Рис. 5. Ультраструктура клеток С. neoformans (штамм 1105) in vitro (а-в) и in vivo (г-н). Ув.: а,д,г - х20000; б - х25000; в,ж,з,е, л-н - х55000; и,к - х30000.