CC BY
20
58
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
А.А. Липенгольц12, А.А. Черепанов12, Е.Ю. Григорьева1, В.Н. Кулаков2 ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСА ВИСМУТА С ДИЭТИЛЕНТРИАМИНПЕНТАУКСУСНОЙ КИСЛОТОЙ В БИНАРНОЙ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва;
2ФГБУ ГНЦ «ФМБЦ им. А. И. Бурназяна», Москва
Введение. Бинарная лучевая терапия является перспективным таргетным избирательным методом лечения злокачественных новообразований. В основе метода лежит преимущественное взаимодействие внешнего рентгеновского излучения с химическими элементами, имеющими порядковый номер в периодической таблице более 52. Такое взаимодействие обеспечивает избирательное поражение только опухолевых тканей при облучении. Вероятность взаимодействия рентгеновского излучения с химическими элементами возрастает с увеличением порядкового номера элемента. Висмут является химическим элементом с самым высоким порядковым номером из всех стабильных химических элементов. По этой причине перспективным может быть применение комплексов висмута в бинарной лучевой терапии злокачественных новообразований.
Цель исследования — изучение протвоопухолевой эффективности комплекса висмута с диэтилентриаминпен-тауксусной кислотой ДТПА (Bi-DTPA) в бинарной лучевой терапии опухолей.
Материалы и методы. Исследование проводили на мышах-самках линии C57BL6 с трансплантированными в правую заднюю голень опухолями. В качестве опухолевых моделей были использованы аденокарцинома молочной железы Са755 и меланома B16F10. Облучение проводили на 8-9-е сутки после перевивки по достижению объема опухолей 0,3 ± 0,1 см3. Непосредственно перед облучением животным интратуморально вводили исследуемый комплекс в объеме 0,05 мл. Облучение проводили на рентгеновском аппарате с напряжением 110 кВ и мощностью дозы в позиции облучения 0,8 Гр/мин. Величина поглощенной дозы для меланомы B16F10 составляла 20 Гр, а для аденокарциномы молочной железы Са755 — 15 Гр. Контролем в исследовании служили группы животных, облученных в той же дозе излучения, что и опытные группы, а также группа, на которую никакого воздействия не осуществлялось.
Результаты. Оценку противоопухолевого эффекта проводили по индексу торможения роста опухоли (ТРО) и по логарифму погибших клеток (LgN). В опытных группах ТРО на 14-е сутки после облучения составило 90 и 91 % для B16F10 и Са755 соответственно, тогда как в контрольных облученных группах — 77 и 73 % соответственно. LgN для опытных групп с B16F10 и Са755 составил 2,79 и 1,27 соответственно, в облученных контрольных группах — 0,66 и 1,08 соответственно.
Заключение. Полученные результаты показывают значимое увеличение противоопухолевого эффекта рентгеновского облучения при введении комплекса висмута с ДТПА и говорит о перспективности использования комплекса висмута в бинарной лучевой терапии.
Н.А. Лыжко12, Ю.П. Финашутина1,2, В.А. Мисюрин12, О.Н. Солопова1, А.В. Мисюрин, Л.А. Кесаева1'2, О.С. Бурова1, М.А. Барышникова1 ЦИТОСТАТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ 5D3F2 И 6H8F12 К БЕЛКУ PRAME ПРИ ИХ СОВМЕСТНОМ ИНКУБИРОВАНИИ С КУЛЬТУРАМИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
1ФБГУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ООО «ГеноТехнология», Москва
Введение. Белок PRAME может быть перспективной мишенью для противоопухолевой иммунотерапии, так как не экспрессируется в здоровых клетках, но активен в опухолевых клетках многих гистологических типов. Нами были разработаны мышиные моноклональные антитела (МоАТ) 5D3F2 и 6H8F12, распознающие эпитопы PRAME.
Цель исследования — определение эффектов, оказываемых МоАТ 5D3F2 и 6H8F12 на PRAME-экспрессирую-щие опухолевые клетки.
Материалы и методы. Использовали линии опухолевых клеток К562, THP-1 и NOMO-1. Методом RQ-PCO определяли уровень экспрессии гена PRAME. Количество клеток, имеющих эпитопы белка PRAME на поверхности, определяли на проточном цитометре. Проводили инкубирование опухолевых клеток с МоАТ 5D3F2 и 6H8F12 вместе и по отдельности в концентрациях 111 и 112 мкг/мл, 11 и 12 мкг/мл соответственно. Проводили подсчет клеток после инкубирования с МоАТ Количество мертвых клеток оценивали при проведении МТТ-теста.
Результаты. Уровень экспрессии гена PRAME в клетках линий К562, THP-1 и NOMO-1 составил 104; 1,6 и 0,5 % соответственно. Количество клеток К562, THP-1 и NOMO-1, имеющих белок PRAME на поверхности, составило 14; 3 и 0,9 % соответственно. При инкубировании клеток К562 и THP-1 с МоАТ 5D3F2 и 6H8F12 вместе и по отдельности в концентрации 11 и 12 мкг/мл соответственно наблюдалось замедление роста на 15—20 % и гибель 15—20 % клеток. При инкубировании К562 и THP-1 с МоАТ 5D3F2 и 6H8F12 вместе и по отдельности в концентрации 111 и 112 мкг/мл соответственно наблюдалось замедление роста на 50 % и гибель 4 % клеток. При инкубировании NOMO-1 с МоАТ 5D3F2 и 6H8F12 вместе в концентрации
II и 12 мкг/мл соответственно наблюдалось замедление роста на 30 % и гибель 10 % клеток. При инкубировании NOMO-1 с МоАТ 5D3F2 в концентрации 111 мкг/мл замедления роста не наблюдалось; с 6H8F12 в концентрации 112 мкг/мл — наблюдалось замедление роста на 30 % и не происходило гибели клеток.
Заключение. Обнаружено цитостатическое и цитоток-сическое действие МоАТ 5D3F2 и 6H8F12 в концентрации
III и 112 мкг/мл, оказываемое на опухолевые клетки линий К562, THP-1 и NOMO-1. Меньшая концентрация в некоторых случаях оказывала более выраженный эффект. При инкубировании опухолевых клеток со смесью МоАТ усиления эффектов не наблюдалось. Чем выше уровень экспрессии гена PRAME в клетках и чем большее число клеток имело на поверхности эпитопы PRAME, тем больший эффект оказывали МоАТ Цитотоксичность МоАТ в отсутствие белков комплемента и иммунных клеток мо-
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 59
жет объясняться рецепторной функцией белка PRAME, Разобщенность кривых, принадлежащих к первому и вто-находящегося на поверхности опухолевой клетки. рому кластерам, свидетельствует о разобщенности процессов образования новых типов клеток и морфогенеза. Различ-А.А. Макашов, А. П. Козлов ные подклассы генов TSEEN принадлежат к описанному РАЗЛИЧНЫЕ КЛАССЫ нами выше 3-му кластеру. ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫХ ГЕНОВ ЧЕЛОВЕКА ОБЛАДАЮТ РАЗЛИЧНОЙ ЭВОЛЮЦИОННОЙ С.Ю. Маклакова, В.В. Топко. Г.А. Шипулин, НОВИЗНОЙ Т. С. Зацепин, Е.К. Белоглазкина, Н.В. Зык, Биомедицинский центр, Санкт-Петербург; А.Т. Мажуга, В.Э. Котелянский ФТАОУВО СПбПУ, Санкт-Петербург СИНТЕЗ ЛИГАНДОВ АСИАЛОГЛИКОПРОТЕИНОВОГО Введение. Ранее мы показали, что человеческий геном РЕЦЕПТОРА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ содержит многие эволюционно новые гены и/или нукле- БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ отидные последовательности, которые экспрессируются В КЛЕТКИ ПЕЧЕНИ опухолеспецифически либо преимущественно в опухолях. ФТАОУВО «МТУ им. М.В. Ломоносова», Москва Цель исследования. В данной работе планировалось Введение. Паренхимными клетками печени в больших изучить эволюционную новизну различных классов опу- количествах (0,5—1 млн на 1 гепатоцит) экпрессируется холеассоциированных генов человека. асиалогликопротеиновый рецептор (ASGPR). Способность Материалы и методы. Были изучены следующие функ- ASGPR переносить через мембрану высокомолекулярные циональные классы генов человека: гены домашнего хозяй- структуры, его уникальное расположение исключительно ства; онкогены; дифференцировочные гены; гены опухоле- на поверхности гепатоцитов, высокая степень экспрессии, вых супрессоров; гены, ассоциированные с различными быстрый цикл регенерации делают его перспективной ми-опухолями; гены опухолевых антигенов, отобранных для шенью для адресной доставки биологически активных ве-создания противоопухолевой вакцины; гомеозисные гены; ществ в паренхимные клетки печени. Исходя из структур-гены, вовлеченные в апоптоз; гены раково-тестикулярных ных особенностей рецептора, ранее были предложены антигенов; белковые гены и гены некодирующих РНК молекулы-векторы разветвленного строения, содержащие с высокой опухолеспецифичностью, выявленные нами 3 остатка галактозы или N-ацетилгалактозамина. Такие с помощью метода глобального вычитания in silico (ГВ); все тривалентные лиганды продемонстрировали высокую аф-аннотированные белоккодирующие гены человека. Для финность по отношению к рецептору-мишени. определения эволюционной новизны вышеперечисленных Цель исследования — синтез тривалентных лигандов генов были применены программы HomoloGene. release68, ASGPr и исследование возможности получения конъюга-ProteinHistorian, BLAST и HMMER. тов на их основе с помощью медькатализируемой реакции Результаты. Для каждого функционального класса генов азид-алкинового циклоприсоединения. была построена кривая филогенетического распределения Материалы и методы. Состав и строение полученных их ортологов. Самое верхнее расположение на графике за- соединений подтверждали с помощью спектроскопии няла кривая, описывающая филогенетическое распреде- ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и масс-спектроме-ление ортологов генов домашнего хозяйства. Ниже нее трии. ЯМР-спектры 1Н и 13С регистрировали на приборах расположились кривые филогенетического распределения Bruker DPX-300 и Agilent 400 MR с частотами 400 и 100 МГц. ортологов дифференцировочных генов, онкогенов, генов, Масс-спектры высокого разрешения регистрировали на при-ассоциированных с различными опухолями, и генов опухо- боре Bruker micrOTOF II методом электрораспылительной левых супрессоров. Эта группа кривых формирует первый ионизации (ESI). В работе использовали коммерческие ре-кластер. Промежуточное положение на графике занимает активы (Sigma-Aldrich) без дополнительной очистки. кривая распределения ортологов всех белоккодирующих Результаты. Нами оптимизирована общая методика генов человека. Под ней располагается второй кластер, получения тривалентных лигандов ASGPr, универсаль-включающий в себя кривые филогенетического распреде- ность которой была продемонстрирована на примере син-ления генов апоптоза, гомеозисных генов, опухолевых ан- теза структур, содержащих различные углеводные остатки тигенов и белковых генов, выявленных с помощью ГВ. (N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин и N-аце-Самое нижнее положение на графике занимает группа тилманнозамин). Использованный подход позволяет по-кривых таксономического распределения ортологов генов лучать лиганды с азидной группой, что открыло возмож-раково-тестикулярных антигенов (всех и расположенных ность конъюгирования данных соединений-векторов только на X-хромосоме), генов некодирующих РНК, вы- с модельным олигонуклеотидом dT20, содержащим терми-явленных ГВ. Эта группа является 3-м кластером, включа- нальную тройную связь, с помощью медькатализируемой ющим в себя эволюционно наиболее новые гены. реакции азид-алкинового циклоприсоединения. Заключение. Нами обнаружено, что различные классы Заключение. Лиганды, полученные в результате данной опухолеассоциированных генов обладают различной эво- работы, обладают высоким потенциалом как векторные люционной новизной. Мы подтвердили существование фрагменты для направленной доставки биологически ак-генов TSEEN (tumor specifically expressed, evolutionarily novel). тивных веществ в клетки печени. Введение азидной группы Параллельная эволюция онкогенов, генов опухолевых су- в структуру позволяет селективно и с высокими выходами прессоров и дифференцировочных генов свидетельствует получать конъюгаты с терапевтическими молекулами. о роли опухолей в происхождении новых клеточных типов. Работа выполена при поддержке РНФ (грант № 14-34-00017).
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
