CC BY
10
ва. - Текст : непосредственный // Вечер. - 2005. -124 с.
7. Диетическая терапия при сердечнососудистых заболеваниях. Методические рекомендации № 374-пл/б24А (утв. Минздравсоцразвития РФ 28.12.2006).
8. Shelf life of canned milk as an indicator of efficiency of the technological process / I.A. Ivkova, E.A. Zubareva, N.B. Dovgan and J.A. Podolnikova. -Text : direct // IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, Volume 624, International Conference on World Technological Trends in Agribusiness 4-5 July 2020, Omsk City, Western Siberia, Russian Federation.
9. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ : методические рекомендации МР 2.3.1. 1915-04. - Москва : Минздрав России, 2004.
10. Применение растительного белка в диетотерапии сердечно-сосудистых заболеваний : методическое письмо / В.А. Тутельян [и др.]. - Москва, 2003. - 28 с. - Текст : непосредственный.
11. Чазов В.И. Проблемы первичной и вторичной профилактики сердечно-сосудистых заболеваний / В.И. Чазов. - Текст : непосредственный // Терапевтический архив. - 2002. - № 9. - С. 5-8.
Ивкова Ирина Александровна, д-р техн. наук, проф., Омский ГАУ, ia.ivkova@omgau.org; Кругловецкая Ирина Борисовна, ассистент, Омский ГАУ, ib.kruglovetskaya@omgau.org.
7. Dieticheskaya terapiya pri serdechno-sosudistyh zabolevaniyah. Metodicheskie rekomenda-cii № 374-pl/b24A (utv. Minzdravsocrazvitiya RF 28.12.2006).
8. She//- life of canned milk as an indicator of efficiency of the technological process / I.A. Ivkova, E.A. Zubareva, N.B. Dovgan and J.A. Podolnikova. -Text : direct // IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, Volume 624, International Conference on World Technological Trends in Agribusiness 4-5 July 2020, Omsk City, Western Siberia, Russian Federation.
9. Rekomenduemye urovni potrebleniya pi-shchevyh i biologicheski aktivnyh veshchestv : meto-dicheskie rekomendacii MR 2.3.1. 1915-04. - Moskva : Minzdrav Rossii, 2004.
10. Primenenie rastitel'nogo belka v dietotera-pii serdechno-sosudistyh zabolevanij : metodicheskoe pis'mo / V.A. Tutel'yan [i dr.]. - Moskva, 2003. -28 s. - Tekst : neposredstvennyj.
11. Chazov V.I. Problemy pervichnoj i vtori-chnoj profilaktiki serdechno-sosudistyh zabolevanij / V.I. Chazov. - Tekst : neposredstvennyj // Terapevti-cheskij arhiv. - 2002. - № 9. - S. 5-8.
Ivkova Irina Aleksandrovna, Doc. of Techn. Sci., Prof., Omsk SAU, ia.ivkova@omgau.org; Krug-lovetskaya Irina Borisovna, Assistant, Omsk SAU, ib.kruglovetskaya@omgau.org.
УДК 619:611.1:611-018.1:616 Б01 10.48136/2222-0364_2021_4_156
В.И. ОКОЛЕЛОВ, ИГ. ТРОФИМОВ, Н С. ЗОЛОТОВА, Н.Р. ПАВЛОВА
Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, Омск
ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ КАРТИНА КРОВИ У КОРОВ ПРИ ГЕМОБЛАСТОЗАХ
Гемобластозы - одно из самых распространенных инфекционных заболеваний крупного рогатого скота. Проблеме посвящено много публикаций в регионах России, в том числе и в Западной Сибири. Несмотря на определенный прогресс в исследованиях этиологии и патогенеза лейкоза, развитие методов диагностики и системы экономически эффективных и целесообразных мероприятий, ситуация с лейкозом в стране остается напряженной. Проанализирован иммунофенотипический профиль лимфоцитов во время лимфопролиферативных процессов у молочного скота. Выявлена гетерогенность лимфопролифе-ративных заболеваний и определены основные типы лимфом и лейкозов, распространенных на территории Омской области. Установлено, что у 50-60% животных с повышенными лейкоцитами и лимфоцитами, достигших уровня «подозрительных» на лейкозную болезнь при повторных исследованиях (через месяц), картина крови в пределах нормы. Согласно полученным данным на показатели крови животных
© Околелов В.И., Трофимов И.Г., Золотова Н.С., Павлова Н.Р., 2021
влияет ряд факторов (заболевания различной природы, стельность), их необходимо учитывать при проведении диагностических исследований на лимфопролиферативные заболевания для исключения ошибок.
Ключевые слова: лейкоцитоз, гемобластозы, лимфоциты, лимфопролиферация, цитоморфология, картина крови.
Введение
Вопросу о связи развития злокачественных новообразований (лейкозов) с нарушениями иммунной системы организма в последнее время уделяется особое внимание. Ввиду ослабления иммунной системы у животных отмечено повышение количества заболеваний, сопровождающихся лейкемоидными реакциями, что снижает выявление инфицированных животных в общепринятых диагностических тестах [1; 2].
Эффективность иммунного ответа определяется количеством взаимодействующих иммунокомпетентных клеток. Оптимальный эффект такого взаимодействия наблюдается в тех случаях, когда в периферической крови на одну В-клетку приходится 1,5-2,5 Т-лимфоцита [3]. При гемобластозе у коров данное соотношение меняется следующим образом: уменьшение количества Т-лимфоцитов на фоне увеличения В-лимфоцитов. В зависимости от развития патологического процесса динамично изменяется соотношение различных групп клеток. Так, качественный состав лимфоцитов существенно меняется при лейкозном процессе [4; 5]. Клеточные элементы на ранних стадиях болезни в основном представлены зрелыми лимфоцитами всех трех величин (малые, средние и большие) [6; 7]. С развитием болезни преобладает число средних и крупных лимфоцитов. Часто появляются атипичные формы, их количество увеличивается на последних стадиях при обострении до 10-15% [8]. Заболевание лейкозом проявляется в большинстве случаев в специфических явлениях клеток крови, в то время как это не наблюдается при неопухолевых заболеваниях [9].
Роль гематологических исследований возрастает, если их проводят в динамике, особенно при анализе лейкограмм [10; 11]. Важно знать, что при диагностике, помимо состояния крови, следует учитывать и общее состояние животных, так как кроветворная система очень чувствительна к раздражителям, соответственно, отражает патологические изменения, происходящие в организме. Поэтому выявление лейкоза с разной картиной крови - актуальная задача [12].
Проблема заболеваемости крупного рогатого скота, сопровождающейся лейкемо-идными реакциями, недостаточно освещена в литературных источниках. Хотя изучение морфологии периферической крови при различных физиологических и патологических состояниях с учетом особенностей организма имеет важное значение для исключения ошибок при диагностике заболеваний системы крови [13]. До сих пор проблема проведения достоверной дифференциальной диагностики лейкоза не решена.
Материал и методы
Исследования проводили на дойных коровах семи хозяйств Омской области с различной эпизоотической ситуацией по гемобластозам и ВЛКРС-инфекции.
Цитоморфологический анализ мазков крови проведен в трех группах животных 3-5 лет: первая группа состояла из 100 РИД-положительных по ВЛКРС животных общественного сектора, вторая группа - из 100 РИД-отрицательных по ВЛКРС животных общественного сектора, третья - из 100 РИД-отрицательных животных частного сектора. В то же время, чтобы исключить влияние экологических, а также техногенных факторов промышленных комплексов, третья группа была использована в качестве контрольной. За животными наблюдали в течение 9 мес. Весной и осенью ежемесячно проводили их клинические осмотры, исследования крови (серологические и гематологические), анализировали условия кормления и содержания, учитывали меры по профилактике и лечению.
Четыре группы животных (по 15 гол.) были отобраны для подтвердждения наличия стабильных цитоморфологических изменений в лимфоцитах. В первую группу вошли условно здоровые животные, во вторую - подозрительные по «лейкозному ключу» с реактивными процессами, в третью - животные, больные по «лейкозному ключу», без реактивных процессов, а в четвертую - больные по «лейкозному ключу», с реактивными процессами. Под наблюдением данные группы находились в течение семи месяцев (с апреля по октябрь), за это время четыре раза проведены гематологические исследования (апрель, июнь, август, октябрь). С целью определения иммунофенотипического профиля лимфоцитов у коров, подозрительных по «лейкозному ключу» и с гематологическими заболеваниями, всего исследовано 60 образцов сыворотки крови по общепринятым методикам: подсчет клеток крови - в камере Горяева на тринокулярном световом микроскопе «MICROS» серии МС 200 с TV-камерой, увеличение 10x100, лейкоцитарную формулу выводили согласно действующим методическим указаниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота, принятым в 2000 г.; окрашивание мазков - по методу Паппенгейма.
Реакцию иммунодиффузии (РИД) проводили с использованием стандартных методов. Методом непрямой иммунофлюоресценции - иммунофенотипирование крови на суспензиях живых лимфоцитов, выделенных градиентным центрифугированием в коммерческом растворе Ficoll-Paque. Полученные данные проанализированы на люминесцентном микроскопе «Люман Р8» при увеличении 15x90. При подсчете светящихся лимфоидных клеток крови животных учитывали и оценивали результаты следующим образом: отрицательная результат (-) - отсутствие позитивных клеток, сомнительный результат (±) - умеренное количество позитивных клеток и положительный результат (+) - большое число позитивных клеток. В исследовании применяли стандартную панель моноклональных антител «anti-bovi» к антигенам CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD19, CD20, CD23, CD25, CD38, CD95 и HLA-DR (CD - cluster differentiation). Статистический анализ данных проведен с использованием программного обеспечения BI-OSTATISTICS v. 4,03.
Результаты и их обсуждение
Исследования, проведенные в течение трех лет, показывают, что традиционным «лейкозным ключом» 30% больных животных не выявляются.
Полученные результаты свидетельствуют: при лимфопролиферативных заболеваниях происходят стабильные морфологические изменения в крови (таблица).
Гемограмма коров при гемобластозах и реактивных состояниях
Показатель крови Контроль Гемобластозы Реактивные состояния
Весна Осень Весна Осень Весна Осень
M ± m, n = 15 M ± m, n = 15 M ± m, n = 15 M ± m, n = 15 M ± m, n = 15 M ± m, n = 15
Базофилы, % 0,33 ± 0,1 0,4 ± 0,1 0,26 ± 0,2* 0,59 ± 0,3* 0,72 ± 0,2* 0,6 ± 0,2*
Эозинофилы, % 6,31 ± 0,7 5,5 ± 0,8 1,73 ± 0,4 3,58 ± 0,5 2,41 ± 0,6 3,2 ± 0,6
Палочкоядерные ней-трофилы, % 4,62 ± 0,4 3,9 ± 0,4 7,0 ± 0,9 8,93 ± 1,1 6,72 ± 0,7 3,1 ± 0,5*
Сегментоядерные нейтрофилы, % 25,22 ± 1,8 23,9 ± 1,3 1,42 ± 0,4 0,99 ± 0,2 3,71 ± 0,6 24,4 ± 2,7*
Лимфоциты, % 60,67 ± 2,2 64,4 ± 1,2 71,82 ± 2,2 58,28 ± 1,5 75,91 ± 0,9 63,4 ± 1,9*
Незрелые и атипичные лимфоциты, % 1,52 ± 0,4 1,3 ± 0,4 17,53 ± 1,5 26,27 ± 1,4 9,82 ± 0,5 4,4 ± 0,9
Моноциты,% 1,33 ± 0,4 0,6 ± 0,2 0,24 ± 0,1 1,36 ± 0,4* 0,71 ± 0,2* 0,9 ± 0,4*
Примечание. *p > 0,05 данные не достоверны.
Оценивая лейкоцитарная формулу животных с гемобластозами, наблюдали регенеративный сдвиг ядра нейтрофилов влево. В то же время увеличилось количество па-лочкоядерных нейтрофилов и метамиелоцитов - юных форм. Количество эозинофилов колебалось от 3 до 9%, в зависимости от возраста обследованных животных; доля лимфоцитов в 38% случаев умеренно увеличивалась (67-80%), а в остальных случаях колебалась в пределах 80-95%.
Качественный состав лимфоидных элементов крови имеет немаловажное значение в диагностике.
Так, при лимфопролиферативных заболеваниях выявлено значительное увеличение количества атипичных лимфоцитов. При микроскопии мазков периферической крови у больных определялась популяция малых мономорфных клеток с высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением с цитоморфологическими признаками зрелых лимфоцитов. У ядер таких клеток округлая форма, структура хроматина плотная и глыбчатая. Ободок цитоплазмы узкий, слабо или умеренно базофильный. Помимо подавляющего большинства клеток типа малых лимфоцитов, определялись более крупные лимфоидные клетки, пролимфоциты, их содержание не превышало 10%, но количество этих клеток достигало 35% и более у 13% исследуемых животных. Количество лимфобластов в крови не превышало 1,5% и отмечено у 7% исследованного поголовья.
В мазках периферической крови двухъядерные клетки типа «ки§1» обнаружены у 52% обследованных животных. Бинуклеарные клетки - это формы амитотического деления клеток. Ядра таких клеток в одной цитоплазме могут быть соединены тонкой перемычкой. У оба вида клеток структура и величина хроматина ядра, сходная со зрелыми клетками. В среднем доля таких клеток - 10%.
У большинства обследованных животных отмечены ридеровские формы. Эти лимфоциты имеют ядро неправильной формы с бухтообразным вдавлением с одной стороны или более сложным полиморфизмом. Цитоплазма широкая или, наоборот, узкая, слабо- или сильнобазофильная. Также обнаруживали от 5 до 18% клеток с ядрами в виде листа клевера, подковы, восьмерки, размером со средний лимфоцит. Ядро с глубокими вдавлениями с одной, двух или трех сторон неправильной формы. Хроматин глыбчатой и плотной структуры.
Клетки с рассеченными ядрами (центроциты) определены у 10% обследованных животных. Такие клетки незначительно крупнее малого лимфоцита, имеют мелкие плохо различимые ядрышки, мелкогранулярный хроматин и тонкий ободок светлой цитоплазмы. Ядра центроцитов в препаратах выглядят угловатыми, вытянутыми из-за глубокой расщелины.
Вместе с центроцитами отмечено редкое появление крупных клеток с обликом бласта - центробластов, их ядра округло-овальной формы, светлые, на ядерной мембране расположены 2-3 ядрышка, ободок цитоплазмы умеренно выраженный или широкий, базофильный.
При исследовании мазков крови больных животных в 95% случае обнаружены так называемые клетки лейколиза (тени Боткина - Гумпрехта), их содержание варьирует от 5 до 30%.
В 23% случаев у коров с гемобластозами отмечены изменения в цитоплазме. У лимфоцитов таких животных средний размер, но сравнительно крупнее таких же в норме. Наличие коротких и тонких выростов цитоплазмы на одном из полюсов клетки (так называемые ворсинчатые лимфоциты - «УШош»-лимфоциты) принято считать главной морфологической особенностью данных лимфоцитов. Ядра яйцевидной формы с конденсированным хроматином, небольшие ядрышки видны в половине случаев. В
отдельных клетках отмечены плазмоцитоидные признаки - более выраженная базофи-лия цитоплазмы и эксцентрично расположенное ядро. По форме такие клетки веретенообразные, с полярно удлиненной цитоплазмой с бахромчатыми краями и более нежным строением ядерного хроматина, чем у зрелых лимфоцитов. Но чаще структура этих клеток плотная, округлая, с глыбчатым ядром.
Цитоплазматические вакуоли разного размера обнаружены в 12% случаев. Цитоплазма в таких клетках широкая, светло-голубого цвета, содержит либо от одного до пяти крупных вакуолей, либо множество мелких. Ядро представлено плотной или нежной структурой, чаще неправильной формы.
В крови 20% исследованных животных отмечены лимфоциты с признаками лизиса, морфологически имеющие нарушение целостности и структуры цитоплазмы, но без изменений ядерной структуры.
При эндометрите и мастите наблюдали, что лимфоциты имели лизированную, ва-куолизированную цитоплазму с двумя или более выпячиваниями цитоплазмы, при лимфопролиферативных заболеваниях эти выросты были униполярными, в редких случаях в цитоплазме обнаруживались клетки с одиночными вакуолями.
В случае гиподерматита, актиномикоза и некробактериоза морфологически зрелые лимфоциты обнаружены у 70% животных, 5-10% из которых имели атипичную форму ядра.
В хозяйствах Омской области неоднородность лимфопролиферативных заболеваний подтверждена результатами иммунофенотипических исследований коров, зараженных гемобластозами.
Хронический B-клеточный лейкоз (В-ХЛЛ) с характерной экспрессией ассоциированных с B-клетками антигенов: CD19, CD20, CD25, CD23 и CD5 обнаружен у 51,6% животных. Экспрессия CD20 и CD25 слабая, это характерно для ХЛЛ. Не было экспрессии CD38.
В-пролимфоцитарный лейкоз выявлен у 12,9% обследованных КРС. При этом типе лейкемии, в отличие от В-ХЛЛ, наоборот, экспрессия CD20 выражена, а экспрессия антигена CD5 слабая. Экспрессия CD38 также отсутствовала.
Иммунофенотипические признаки селезеночной лимфомы обнаружены у 22,6% животных. Иммунофенотип опухолевых клеток соответствует зрелым В-лимфоцитам: положительными оказались В-антигены CD19 и CD20; CD5, CD23, CD25 и CD38 экс-прессировали слабо.
Фенотип фолликулярной лимфомы наблюдали у 9,7% животных. Иммунофенотип опухолевых клеток также соответствует зрелым В-лимфоцитам: положительная экспрессия у В-антигенов (CD19, CD20); слабая - у CD23, не экспрессировали - CD5, CD25, CD38.
Признаки Т-пролимфоцитарного лейкоза, по данным иммунофенотипического исследования, имели 3,2% животных. Отмечены выраженная мембранная экспрессия CD3, умеренная мембранная экспрессия CD5 и CD4. Опухолевые клетки не экспрессировали CD20, CD23. В ходе иммуноцитохимического исследования периферической крови и костного мозга абсолютно преобладали Т-лимфоциты зрелого фенотипа CD3+, CD4+, CD8- и практически полностью отсутствовали В-лимфоциты (CD20+ и CD25+).
Маркеры, характерные для лимфом, у 16,3% животных с высоким уровнем лим-фоцитоза не экспрессировали.
Проведенные исследования иммунофенотипа подтверждают лимфопролифера-тивную природу цитоморфологических изменений, в связи с чем можно дать класси-
фикацию основным видам гемобластозов и описать их иммуноморфологические признаки.
В-клеточный хронический лимфолейкоз (В-ХЛЛ). Уровень лейкоцитов варьирует в широком диапазоне от 12 • 109/л до 84 • 109/л, при лимфоцитозе - 67-95%. Абсолютное количество лимфоцитов - от 10 • 109/л до 76 • 109/л. При микроскопическом исследовании мазков периферической крови животных с В-ХЛЛ идентифицированы малые клетки с цитоморфологическими признаками зрелых лимфоцитов. Во всех исследуемых мазках обнаружены лимфоидные клетки типа «kugl» - от 8 до 25%. 15% и более лим-фоидных клеток с неправильной формой: ридеровские клетки или центроциты. У 75% больных животных наблюдали клетки с ядрами в виде листа клевера, подковы, восьмерки. Наряду с большинством клеток типа малых лимфоцитов 40% животных имели более крупные лимфоидные клетки и пролимфоциты, количество которых не превышало 10%. Исследуя мазки больных с В-ХЛЛ, в 10% случаев обнаружены тени Боткина -Гумпрехта. При В-ХЛЛ на поверхности лейкемических лимфоцитов обнаружена экспрессия В-клеточных антигенов (СБ19, СБ20) и активационных антигенов (СБ5, СБ23). Для подтверждения диагноза хронического лимфолейкоза необходимо выявить антиген СБ5.
В-пролимфоцитарный лейкоз. Уровень лейкоцитов колеблется от 21 • 109/л до
37 • 109/л, лимфоцитоз - от 79 до 89%. Абсолютное количество лимфоцитов - от 16 • 109/л до 33 • 109/л. Пролимфоцитами представлено более 30% циркулирующих в крови лимфоидных клеток. При анализе иммунофенотипа экспрессия антигена СБ5 слабая или совсем отсутствовала, а у В-клеточных маркеров СБ19 и СБ20 отмечали положительную экспрессию.
Селезеночная лимфома с ворсинчатыми лимфоцитами (ЛСВЛ). Уровень лейкоцитов - в пределах от 7 • 109/л до 39 • 109/л, у большинства животных лимфоцитоз превышает 78%. Абсолютное количество лимфоцитов - от 4 • 109/л до 20 • 109/л, крайне редко достигает 39 • 109/л. Лимфоциты в мазках крови среднего размера, но более крупные, по сравнению с таковыми в норме и при В-ХЛЛ. Интересное морфологическое явление, выявленное в циркулирующих лимфоцитах - наличие тонких и коротких выростов цитоплазмы (так называемые ворсинчатые лимфоциты). Экспрессия антигена СБ38 выражена на поверхностных мембранах клеток, положительная реакция отмечена к В-клеточным антигенам СБ19, СБ20. Характерные маркеры для В-ХЛЛ (антигены СБ23 и СБ5) при ЛСВЛ на клетках не экспрессируются. Антиген СБ25 выявляется в небольшом количестве случаев.
Фолликулярная лимфома. Средний уровень лейкоцитов составляет 7,8 • 109/л, лимфоцитоз - 67%. Абсолютное количество лимфоцитов в среднем 5,5 • 109/л. В периферической крови большинство лимфоидных клеток полиморфны, их размеры меньше, чем при В-ХЛЛ, значительная часть клеток с рассеченным ядром (напоминают нормальные центроциты и центробласты). Иммунофенотипически маркеры СБ19, СБ20 экспрессируются опухолевыми В-лимфоцитами в отсутствии СБ5. Также отмечена слабая экспрессия СБ23.
Т-пролимфоцитарный лейкоз. Уровень лейкоцитов колеблется от 20 • 109/л до
38 • 109/л, лимфоцитоз - до 80%. Абсолютное количество лимфоцитов - от 16 • 109/л до 30 • 109/л. Пролимфоциты являются доминирующим типом клеток, обнаруживаемым в мазках периферической крови. Т-пролимфоциты - клетки среднего размера с глыбча-той плотной структурой хроматина, в большинстве случаев содержащие одно четко различимое ядрышко. Такие ядра не имеют правильных округлых контуров, как В-пролимфоциты. У них ядерная мембрана с «зазубринами», небольшими вдавления-
ми, ядра отдельных клеток перекрученные или извитые. Ядра клеток округлой формы могут быть складчатыми с вдавлением. Цитоплазма клеток интенсивно или умеренно базофильная, в некоторых клетках наблюдаются цитоплазматические отростки. Для фенотипа характерен хелперный профиль СБ4+ и СБ8-. В периферической крови выявлена популяция CD3+ СБ4+ СБ5+ СБ8- клеток, что при комбинированном анализе морфологических и фенотипических данных позволило провести иммунофенотипиче-скую верификацию варианта Т-пролимфоцитарного лейкоза.
Заключение
В результате эпизоотологического мониторинга отмечена сезонная динамика среди животных, подозреваемых на гемобластозы. Весной в среднем выявляют 7% подозрительных по заболеванию коров, среди которых в этот же период наблюдается закономерное увеличение числа животных с реактивными состояниями (гиподерматоз, маститы, эндометриты, стельность, бурситы, некробактериоз и др.). Осенью в 2,5 раза снижается не только процент выявляемых животных, подозрительных по лейкозу, но и уменьшается количество животных с реактивными состояниями.
Для каждого типа гемобластоза характерен устойчивый цитоморфологический состав опухолевых клеток: хронический лимфолейкоз - малые лимфоциты, «клевер», «ки§1»-тип, тени цитолиза (Боткина - Гумпрехта), Ридера, пролимфоциты; пролимфо-цитарный лейкоз - Т- или В-пролимфоциты; лимфома маргинальной зоны селезенки -ворсинчатые лимфоциты («УШош»-лимфоциты); фолликулярная лимфома - центро-бласты и центроциты.
Установлено, что у 50% подозреваемых животных количественные и качественные изменения в периферической крови носят реактивный характер (атипичные и молодые формы лимфоцитов - 9,82 ± 0,5%, нормальные лимфоциты - 75,91 ± 0,9%, Р < 0,05), при дальнейшем наблюдении эти показатели снижаются до физиологической нормы. При лимфопролиферативных заболеваниях цитоморфологические изменения носят устойчивый характер, при первом исследовании у гематологически больных животных процент незрелых и атипичных клеток - на уровне 17,53 ± 1,5 (Р < 0,05), ко второму исследованию количество клеток этого типа либо остается на прежнем уровне, либо прогрессирует.
Отмечено, что при достаточно большом количестве заболеваний в русле периферической крови реакция со стороны лимфоцитов проявляется атипизмом в разном процентном соотношении. Актуален учет морфофункциональных изменений лейкоцитов, так как функциональная активность последних связана с наличием в них субстратов, ферментов, энергетического материала, обеспечивающих жизненно важные процессы, в том числе реализацию иммунного ответа.
Исследования, проводимые в динамике, позволили описать картину периферической крови и ряд клеток, характерных для гемобластозов. Некоторые из этих клеток также встречаются при заболеваниях неопухолевого характера, но в меньшем количестве.
При лимфолейкозе в 80% случаев атипичные клетки представляют лимфоциты с различными изменениями формы и структуры ядра.
В результате исследований обнаружено: при лимфолейкозе присутствуют не только ридеровские клетки и двухъядерные формы лимфоцитов, но и клетки с ядром в форме клевера и подковы. Последние два вида клеток не обнаружены при других болезнях нелейкозной этиологии.
Можно сделать вывод: при лимфопролиферативных заболеваниях происходят не только количественные, но и качественные специфические устойчивые изменения лимфоидных клеток. В случае с реактивными состояниями количество атипичных и молодых форм клеток значительно ниже, чем при гемобластозах.
При наличии упомянутых заболеваний (мастит, эндометрит, некробактериоз, ги-подерматоз, актиномикоз) в период исследований на гемобластозы не исключены диагностические ошибки, несмотря на наличие в ряде случаев характерных клинических симптомов.
Лимфопролиферативная природа цитоморфологических изменений в периферической крови КРС подтвердилась при иммунофенотипическом анализе.
Сопоставление морфофункциональных характеристик нормальных и лейкемиче-ских клеток (трансформированных клеток гемопоэза) дало возможность описать своеобразный антигенный профиль лимфоцитов и точно идентифицировать вариант гемо-бластозов. Линейную принадлежность, стадию зрелости и функциональное состояние клетки можно установить по набору мембранных и цитоплазматических антигенов.
С помощью идентификации маркеров стала возможной диагностика не только хронического лимфолейкоза, но и лимфом других типов. Используя набор монокло-нальных антител, выявляющих клетки нормальной лимфоидной ткани, установлено клеточное происхождение лимфом.
В обследованных хозяйствах все лимфопролиферативные заболевания крупного рогатого скота были подразделены на две категории: Т- и В-клеточные.
Гемобластозы В-клеточной линии отчетливо преобладают над Т-клеточными. Так, на территории Омской области лейкозы и лимфомы В-клеточного происхождения составляют 96,8%, у остальных 3,2% Т-клеточная принадлежность. Частота встречаемости различных вариантов гемобластозов неодинакова: В-клеточный хронический лимфолейкоз - 51,6%, лимфома маргинальной зоны - 22,6%, В-пролимфоцитарный лейкоз - 12,9%, фолликулярная лимфома - 9,7%, Т-пролимфоцитарный лейкоз - 3,2%.
Для ранней стадии всех форм лимфопролиферативных процессов диагностическое значение имеют лимфоциты. Увеличение их количества в периферической крови дает возможность предполагать, что какая-то часть из них лейкемическая по своей природе. Поэтому целесообразно установить наличие морфологических отличий между лимфоидными элементами крови больных гемобластозами и свободных от гемобласто-за животных.
Роль гематологических исследований в дифференциально-диагностическом аспекте возрастает при проведении их в динамике, особенно при анализе лейкограмм. Трактовку лейкограмм необходимо обязательно связывать с общим состоянием организма животного.
Успешная борьба с гемобластозами и их профилактика, в первую очередь, определяется чувствительностью, специфичностью, достоверностью гематологических методов исследования (цитоморфологический анализ), проведение которых целесообразно с учетом сезонных изменений в организме животных.
Проведенные исследования еще раз подтвердили, что классический гематологический анализ по стандартному «лейкозному ключу» имеет определенную погрешность в сторону положительного или отрицательного результата. Это приводит к увеличению срока оздоровления крупного рогатого скота от ВЛКРС и, соответственно, к экономическому ущербу.
V.I. OKOLELOV, I.G. TROFIMOV, N.S. ZOLOTOVA, NR. PAVLOVA
Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk
Cytomorphological picture of blood in cows with hemoblastosis
Hemoblastosis is one of the most common infectious diseases of cattle. A significant number of publications in the regions of Russia, including Western Siberia, have been devoted to this problem. Despite some progress in the study of the etiology and pathogenesis of leukosis, the development of diagnostics, as well as a system of effective and economically feasible measures, the situation of leukosis in the country continues to be tense. In the present work, the immunophenotypic profile of lymphocytes in lymphoproliferative processes in dairy cows was analyzed. The heterogeneity of lymphoproliferative diseases was revealed and the main types of lymphomas and leukemias common in the farms of the Omsk region were determined. It was found that 50-60% of animals with an increased number of leukocytes and lymphocytes to the level of "suspicious" for leukemia disease during repeated examination (after a month) have a blood picture within the normal range. The obtained data indicate the influence of a number of factors (diseases of different etiologies, pregnancy) on the blood picture of animals, which must be taken into account when conducting diagnostic studies for lymphoproliferative diseases in order to exclude errors.
Keywords: leukocytosis, hemoblastosis, lymphocytes, lymphoproliferation, cytomorphology, blood picture.
Список литературы
1. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота / М.И. Гу-люкин, Л.А. Иванова, Н.В. Замараева [и др.]. -Текст : непосредственный // Ветеринария. - 2002. -№ 12. - С. 3-8.
2. Донник И.М. Показатели иммунной системы животных, инфицированных вирусом лейкоза / И.М. Донник. - Текст : непосредственный // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц : материалы Всесоюзной конференции к 65-летию Свердловской НИВС. - Екатеринбург, 2000. - С. 73-75.
3. Петров Н.И. Лейкозом можно управлять / Н.И. Петров. - Текст : непосредственный // Новое сельское хозяйство. - 2003. - № 3. - С. 34-36.
4. Гематологические показатели крыс линии Wistar при экспериментальной BLV-инфекции / Е.С. Красникова, А.В. Красников, Р.В. Радионов [и др.]. - Текст : непосредственный // Инновации и продовольственная безопасность. - 2018. -№ 4(22). - С. 138-145.
5. Зорина Н.Р. Дифференциальная диагностика лейкемоидных реакций при патологиях у крупного рогатого скота / Н.Р. Зорина, В.И. Околе-лов. - Текст : непосредственный // Главный зоотехник. - 2005. - № 11. - С. 74-77.
6. Bendixen H.J. Untersuchungen uber die Rinderleukose in Denmark. Pathogenese und Enzooto-logic der ubertragbaren Rinderleukose / H.J. Bendixen. -Text : direct // Deutsche Tierarzyliche Wochenschrift. -1960. - Bh. 67. - S. 57-63.
7. Околелов В.И. Цитоморфологические особенности картины крови при лейкозе и других
References
1. Razrabotka effektivnyh meropriyatij protiv lejkoza krupnogo rogatogo skota / M.I. Gulyukin, L.A Ivanova, N.V. Zamaraeva [i dr.]. - Tekst : nepo-sredstvennyj // Veterinariya. - 2002. - № 12. - S. 3-8.
2. Donnik I.M. Pokazateli immunnoj sistemy zhivotnyh, inficirovannyh virusom lejkoza / I.M. Donnik. - Tekst : neposredstvennyj // Aktual'nye voprosy diagnostiki, profilaktiki i bor'by s lejkozami sel'skohozyajstvennyh zhivotnyh i ptic : materialy Vsesoyuznoj konferencii k 65-letiyu Sverdlovskoj NIVS. - Ekaterinburg, 2000. - S. 73-75.
3. Petrov N.I. Lejkozom mozhno upravlyat' / N.I. Petrov. - Tekst : neposredstvennyj // Novoe sel'skoe hozyajstvo. - 2003. - № 3. - S. 34-36.
4. Gematologicheskie pokazateli krys linii Wistar pri eksperimental'noj BLV-infekcii / E.S. Kras-nikova, A.V. Krasnikov, R.V. Radionov [i dr.]. - Tekst : neposredstvennyj // Innovacii i prodovol'stvennaya bezopasnost'. - 2018. - № 4(22). - S. 138-145.
5. Zorina N.R. Differencial'naya diagnostika lejkemoidnyh reakcij pri patologiyah u krupnogo rogatogo skota / N.R. Zorina, V.I. Okolelov. - Tekst : neposredstvennyj // Glavnyj zootekhnik. - 2005. - № 11. -S. 74-77.
6. Bendixen ^./.Untersuchungen uber die Rinderleukose in Denmark. Pathogenese und Enzooto-logic der ubertragbaren Rinderleukose / H.J. Bendixen. -Text : direct // Deutsche Tierarzyliche Wochenschrift. -1960. - Bh. 67. - S. 57-63.
7. Okolelov V.I. Citomorfologicheskie osoben-nosti kartiny krovi pri lejkoze i drugih boleznyah zhivotnyh / V.I. Okolelov, N.R. Zorina. - Tekst : nepo-sredstvennyj // Nauchnye osnovy profilaktiki i leche-niya boleznej zhivotnyh. - Ekaterinburg, 2005. -S. 95-101.
болезнях животных / В.И. Околелов, Н.Р. Зорина. -Текст : непосредственный // Научные основы профилактики и лечения болезней животных. - Екатеринбург, 2005. - С. 95-101.
8. Распространение гемобластозов коров в Омском Прииртышье / В.И. Околелов, В.П. Пла-щенко, Т.Ю. Чеботарева [и др.]. - Текст : непосредственный // Международные научные исследования. - 2016. - № 4(29). - С. 92-97.
9. Проблема лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации / В.И. Околелов, Н.Р. Зорина, С.В. Никольченко [и др.]. - Текст : непосредственный // Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе, Омск, 1 января - 31 декабря 2004 года. - Омск : Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, 2004. -С. 222-234.
10. Околелов В.И. Особенности диагностики и меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / В.И. Околелов. - Текст : непосредственный // Эффективное животноводство - залог успешного развития АПК региона : сборник материалов Международной научно-практической конференции, Омск, 6 декабря 2017 года. - Омск: Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина, 2017. - С. 193-199.
11. Околелов В.И. Типирование лимфопро-лиферативного процесса у коров от других патологических состояний / В.И. Околелов, А.А. Новицкий, Н.Р. Павлова (Зорина). - Текст : непосредственный // Международные научные исследования. -2017. - № 3(32). - С. 58-63.
12. Симонян Г.А. Ветеринарная гематология / Г.А. Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов. - Москва : Колос, 1995. - С. 99-104. - Текст : непосредственный.
13. Development of Carbon Sorbents Based on Nanodispersed Carbon Using Biotechnology / L.G. P'yanova, V.A. Likholobov, A.V. Lavrenov et al. - Text : direct // Procedia Engineering. - 2016. -Vol. 152. - P. 655-663. - DOI 10.1016/j.proeng.2016. 07.670.
8. Rasprostranenie gemoblastozov korov v Omskom Priirtysh'e / V.I. Okolelov, V.P. Plashchen-ko, T.Yu. Chebotareva [i dr.]. - Tekst : neposredstven-nyj // Mezhdunarodnye nauchnye issledovaniya. -2016. - № 4(29). - S. 92-97.
9. Problema lejkoza krupnogo rogatogo skota v Rossijskoj Federacii / V.I. Okolelov, N.R. Zorina, S.V. Nikol'chenko [i dr.]. - Tekst : neposredstvennyj // Problemy veterinarnogo obrazovaniya i nauchnyh is-sledovanij v agropromyshlennom komplekse, Omsk, 1 yanvarya - 31 dekabrya 2004 goda. - Omsk : Omskij gosudarstvennyj agrarnyj universitet im. P.A. Sto-lypina, 2004. - S. 222-234.
10. Okolelov V.I. Osobennosti diagnostiki i mery bor'by s lejkozom krupnogo rogatogo skota / V.I. Okolelov. - Tekst : neposredstvennyj // Effektiv-noe zhivotnovodstvo - zalog uspeshnogo razvitiya APK regiona : sbornik materialov Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii, Omsk, 6 dekabrya 2017 goda. - Omsk: Omskij gosudarstvennyj agrarnyj universitet imeni P.A. Stolypina, 2017. - S. 193-199.
11. Okolelov V.I. Tipirovanie limfoprolifera-tivnogo processa u korov ot drugih patologicheskih sostoyanij / V.I. Okolelov, A.A. Novickij, N.R. Pavlova (Zorina). - Tekst : neposredstvennyj // Mezhdunarodnye nauchnye issledovaniya. - 2017. - № 3(32). -S. 58-63.
12. Simonyan G.A. Veterinarnaya gematolo-giya / G.A. Simonyan, F.F. Hisamutdinov. - Moskva : Kolos, 1995. - S. 99-104. - Tekst : neposredstvennyj.
13. Development of Carbon Sorbents Based on Nanodispersed Carbon Using Biotechnology / L.G. P'yanova, V.A. Likholobov, A.V. Lavrenov et al. - Text : direct // Procedia Engineering. - 2016. -Vol. 152. - P. 655-663. - DOI 10.1016/j.proeng. 2016.07.670.
Околелов Владимир Иванович, д-р вет. наук, проф., Омский ГАУ, okolelov49@mail.ru; Трофимов Игорь Георгиевич, д-р вет. наук, проф., Омский ГАУ, ig.trofimov@omgau.org; Золо-това Наталья Сергеевна, канд. вет. наук, ст. преподаватель, Омский ГАУ, ns.zolotova@omgau.org; Павлова Наталья Робертовна, канд. вет. наук, Омский ГАУ, okolelov49@mail.ru.
Okolelov Vladimir Ivanovich, Doc. of Vet. Sci., Prof., Omsk SAU, okolelov49@mail.ru; Trofi-mov Igor Georgievich, Doc. of Vet. Sci., Prof., Omsk SAU, ig.trofimov@omgau.org; Zolotova Natalia Ser-geevna, Cand. of Vet. Sci., Senior Lecturer, Omsk SAU, ns.zolotova@omgau.org; Pavlova Natalia Ro-bertovna, Cand. of Vet. Sci., Omsk SAU, okole-lov49@mail.ru.
