CC BY
17УДК 616.002.828
цитология КЛЕТОК
ВЫРАЩЕННОГО IN VITRO ВЕГЕТАТИВНОГО МИЦЕЛИЯ ASPERGILLUS VERSICOLOR (VUILL,) TIRABOSCHI
Степанова A.A., Синицкая И.А.
НИИ медицинской микологии им. П. Н. Кашкина ГОУ ДПО СПбМАПО, Санкт-Петербург, Россия
© Степанова А. А., Синицкая И. А., 2006
Рассмотрена ультраструктура зрелых клеток гиф вегетативного мицелия у штамма (PKlJrF-1241/797) A. versicolor, выделенного от больного отомикозом и выращенного на твердой агаризированной среде Чапека. Показаны различия в ходе морфогенеза клеток гиф воздушного и субстратного мицелиев, с одной стороны, а также зрелых клеток гиф субстратного мицелия, с другой. Зрелые клетки гиф воздушного мицелия имеют однообразную ультраструктуру, для них типичны: 1) низкий уровень вакуолизации; 2) отсутствие запасных веществ; 3) присутствие плотного цитозоля, маскирующего ядра и другие компоненты клетки.
Выделено пять типов зрелых клеток субстратного мицелия по: 1) размерам и форме ядер; 2) степени вакуолизации; 3) числу, размерам и строению митохондрий; 4) уровню развития и структуре эндоплазматического ретикулума; 5) наличию, отсутствию, типу и сочетанию запасных веществ; 6) наличию или отсутствию микротелец; 7) толщине и строению латеральных клеточных стенок.
Ключевые слова: Aspergillus versicolor, вегетативный мицелий, поровый аппарат септ, ультраструктура
CYTOLOGY OF THE VEGETATIVE MYCELIUM CELLS OF IN VITRO GROWING ASPERGILLUS VERSICOLOR (VUILL,) TIRABOSCHI
Stepanova A.A., Sinitskaya I.A.
Kashkin Research Institute of Medical Mycology, SEI APE SPb MAPE, Saint Petersburg, Russia
© Stepanova A. A., Sinitskaya LA., 2006
It was considered the ultrastructure of A. versicolor mature hyphal cells strain (PKFirF-1241/797) of vegetative mycelium, isolated on Czapek stiff agar medium from patient with otomicosis. Differences in patterns of morphogenesis of the cells of aerial and submerged mycelium, on the one hand, and the cells of submerged mycelium, on the other hand, are given. The mature cells of aerial vegetative mycelium have the similar ultrastructure, for its are typical the: 1) low level of vacuolization; 2) absence of storage substances; 3) presence of dense
cytozole, which conceal nuclei and another cellular components. Five types of the mature cells types of submerged mycelium are recognized according to: 1) sizes and shape of nuclei; 2) level of vacuolization; 3) number, sizes and structure of mitochondria; 4) level of endoplasmic reticulum development and its structure; 5) presence, absence, types of storage substances and their combinations; 6) presence or absence of microbodies; 7) thickness and structure of lateral cell walls.
Key words: Aspergillus versicolor, septal pore apparatus, ultrastructure, vegetative mycelium
ВВЕДЕНИЕ
Настоящая статья - итог части продолжающейся нами работы по аспергиллам [1-3]; она посвящена изучению ультраструктуры клеток вегетативного мицелия A. versicolor. В природе A. versicolor является обитателем почв. Кроме того, он встречается на гниющих растительных остатках, плодах и овощах, а также на различных промышленных субстратах [4]. Этот гриб может вызывать заболевания у людей, в частности, хронический множественный аспергил-лез кожи, костей [5], а также остеомиелит [6], онихо-микоз [7],аспергиллез [8] и гранулематозное поражение легких [9]. A. versicolor способен синтезировать токсины и другие метаболиты [10]. В доступной нам литературе отсутствуют сведения об ультраструктуре клеток этого вида гриба.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Изучали штамм A. versicolor из коллекции НИИ медицинской микологии им. П. Н. Кашкина СПб МАПО (РКШТ-1241/797), выделенный 2.06.2004 г. от пациента В.И., больного отомикозом. Культуру гриба выращивали на твердой агаризированной среде Чапека при 27 °С и исследовали через 2, 3, 5, 10 и 20 дней после посева. Способы фиксации и подготовки образцов для просвечивающей электронной микроскопии приведены нами ранее [1].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Колонии Л. versicolor, выросшие через 2 дня после посева, были белого цвета с диаметром 1,0 см. Через 3 суток их цвет оставался белым, а диаметр колоний увеличивался, в среднем, до 1,5 см. Через 5 и 10 суток край колоний был белым, а остальная часть - светлозеленой. Диаметр колоний через 5 дней составлял 4 см, а через 10 дней - 5 см, при этом они приобретали разные оттенки - зеленого, желтого и коричневого цветов. Через 20 дней после посева окраска колоний была прежней, а диаметр возрастал до 6 см.
У объекта настоящего исследования концевые клетки гиф воздушного и субстратного мицелия имели средний диаметр 1,7 мкм (Рис. 1.1 а-е). В апикальной части клетки выявляли скопление из довольно большого числа мелких светлых пузырьков (Рис. 1.1 а-е, 2 а). В центральной части клетки локализовались два мелких (1,3 мкм) интерфазных ядра округлой формы, а в базальной — отмечали одну мелкую светлую вакуоль, тонопласт которой имел
извилистый контур. Митохондрии в небольшом числе, мелкие (0,2-0,4 мкм), полиморфные, приурочены к клеточной стенке. Эндоплазматический ретикулум (ЭР) — в форме редких, коротких, одиночных, слабо извилистых агранулярных цистерн, локализующихся по периферии клетки. Цитозоль — плотный, свободные рибосомы в нем слабо различимы. Отметим, что аналогичное строение имели апикальные клетки гиф мицелия у ранее изученных нами штаммов А. niger
[1], А. Jumigatus [2] и А./1ауш [3].
Воздушный мицелий. Диаметр зрелых клеток гиф воздушного мицелия варьировал в пределах от
2.0 до 2,6 мкм. В них выявляли четыре интерфазных ядра округлой (1,5 мкм) формы (Рис. 1.2 а), локализующихся одиночно. Ядрышко — одно, мелкое (0,3 мкм), низкой электронной плотности. Цитозоль плотный, маскирует практически все компоненты клетки, за исключением редких мелких светлых вакуолей, равномерно распределенных по площади среза клетки. Запасные вещества отсутствуют. Клеточная стенка однослойная (0,2 мкм), светлая, гомогенная, снаружи покрыта тонким (0,05 мкм) темным прерывистым слоем.
Субстратный мицелий. Диаметр зрелых клеток гиф субстратного мицелия варьировал в пределах от
3.0 до 3,7 мкм. В составе субстратного мицелия выявляли пять основных типов зрелых клеток гиф, различающихся по: 1) размерам и форме ядер; 2) уровню вакуолизации; 3) числу, размерам и строению митохондрий; 4) наличию или отсутствию элементов ЭР и их строению; 5) наличию или отсутствию запасных веществ, их типу и сочетанию; 6) наличию или отсутствию микротелец; 7) толщине и строению латеральных клеточных стенок. Характерно, что во всех зрелых клетках субстратного мицелия обнаруживали по четыре слабо хроматизированных ядра, размеры и форма которых зависели от типа гифы.
Зрелые клетки гиф первого типа содержали ядра (2,0x0,8 мкм) эллипсоидной формы (Рис. 1.2 б; 2 б), расположенные по одиночке и отличающиеся наличием слегка извилистого контура. Ядрышко — одно, крупное (0,5 мкм), гранулярно-фибриллярного строения. Иногда снаружи ядерной оболочки интерфазного ядра наблюдали небольших размеров плоское темное полярное тельце веретена. Ультраструктур-ный облик клеток определяют светлые вакуоли средних размеров и разнообразной формы, располагающиеся на одинаковом расстоянии друг от друга (Рис.2 б). Митохондрии — довольно крупные (0,5-1,0 мкм), в небольшом числе, одиночные, округлые или эллипсоидной формы, в основном, ориентируются по периферии клетки. Форма их округлая или эллипсоидная. Отличительной чертой строения митохондрий является наличие плотного матрикса и большого числа светлых, параллельно расположенных, крист, ориентирующихся продольно. ЭР — в форме редких, коротких и слегка извилистых периферических агранулярных цистерн. Забегая вперед, отметим, что ЭР такого строения был характерен для зрелых клеток
гиф второго, четвертого и пятого типов. Микротельца — редкие, одиночные, мелкие (0,2-0,3 мкм), округлой или слегка неправильной формы, имеют плотный матрикс неоднородной электронной плотности и слабо контрастную ограничивающую мембрану. Отметим, что в зрелых клетках остальных типов они не встречаются.
Из запасных веществ выявлены одиночные фиб-розиновые тельца. Число их на срез клетки колеблется от 4 до 8. Они располагаются вблизи клеточной стенки и проявляют большое разнообразие формы (Рис. 2 в-ж). Содержимое телец может быть гомогенным (Рис. 2 в), тонко-фибриллярным (Рис. 2 г, д) или с темными гомогенными включениями разнообразной формы (Рис. 2 е,ж). До сих пор фибрози-новые тельца были описаны для конидий ряда видов мучнисторосяных грибов из семейства Erysiphaceae [11, 12], парафизоподобных [13] и буферных клеток, а также клеток-ножек телио- [14] иуредоспор [15,16] ржавчинных грибов. Недавно они были выявлены и у С. neoformans [17]. Характерно, что в клетках вышеперечисленных видов грибов их, как и у A. versicolor, наблюдали на стадии созревания. Относительно химической природы фиброзиновых телец в научной литературе [12] существует предположение, что они представляют собой запасной полисахарид.
Зрелые клетки гиф первого типа содержат цитозоль умеренной электронной плотности, богатый свободными рибосомами. Плазмалемма трехслойная, плотно прилегает к тонкой (0,3 мкм), светлой, однослойной клеточной стенке, имеющей слабо развитую сеть фибрилл.
Ядра (1,8x0,6 мкм) в зрелых клеток гиф второго типа одиночные, эллипсоидальной формы (Рис. 1.2 в; 2 з), приурочены к клеточной стенке. В клетке присутствует одна светлая центральная вакуоль, лишенная каких-либо включений. Митохондрии в умеренном числе, локализуются по периферии клетки, довольно мелкие (0,2-0,3 мкм). По форме они сходны с таковыми зрелых клеток субстратного мицелия первого типа, однако, отличаются по строению: в их светлом матриксе имеется небольшое число редких, беспорядочно ориентированных, светлых крист. Зрелые клетки гиф этого типа лишены запасных веществ.
Цитозоль — умеренной электронной плотности, с небольшим числом свободных рибосом. Клеточная стенка тонкая (0,3 мкм), однослойная, снаружи покрыта толстым (1,2 мкм), темным и плотным фибриллярным слоем (Рис. 2 з) варьирующей толщины (0,2x0,5 мкм). Отметим, что клеточные стенки такого строения были характерны для зрелых клеток остальных трех типов.
В зрелых клетках гифов третьего типа отмечали попарно сближенные ядра (2,0 мкм) неправильной формы (Рис. 1.2 г; 2 и). Уровень вакуолизации -средний. Вакуоли — светлые, средних размеров и мелкие. Митохондрии многочисленные, часто собраны в группы, крупные (0,5-6,0 мкм), разнообразной фор-
мы, часть их концентрируется вблизи ядра (Рис. 1.2 г). Кристы — густые, длинные, светлые, матрикс ор-ганелл довольно плотный (Рис. 2 к). Просмотр серийных срезов клеток такого типа показывает присутствие в них митохондриального ретикулума. Основной объем клеток этого типа занимают запасные вещества в виде многочисленных липидных включений варьирующего размера (0,2-0,6 мкм). Мелкие липидные включения отличаются умеренной электронной плотностью, тогда как более крупные — темные, с тонким светлым периферическим ободком одинаковой толщины в пределах одного включения. Липидные включения встречаются в клетке повсеместно. Увеличение электронной плотности липидных включений происходило параллельно с увеличением их размеров. Не исключено, что это связано с синтезом и аккумуляцией в них пигментов, обуславливающих большое разнообразие оттенков колоний этого вида аспергилла. Известно, что A. versicolor способен синтезировать пигменты из группы антроквинонов и ксантонов [4].
Другой специфической особенностью строения содержимого зрелых клеток этого типа было наличие так называемого «кольчужного» ретикулума (Рис. 2 л, м), расположенного вблизи клеточной стенки и представляющего собой скопление синусоидально извитых агранулярных цистерн. Среди грибов такой тип ретикулума был описан в зооспорах Pythium aphanidermatum [18] и клетках вегетативного мицелия A. fumigaLus [2]. В научной литературе [19] развивается представление о том, что этот тип ретикулума появляется в связи с необходимостью интенсивного синтеза в клетке сложных протеидов.
Ядра в зрелых клетках гиф четвертого типа располагаются по одному, форма их неправильная (Рис. 1.2 д; 3 а, в), диаметр равен 1,6 мкм. Вакуоли, встречающиеся редко, средних размеров и мелкие, со светлым содержимым и сильно извилистым высоко контрастным тонопластом.
Митохондрии — в большом числе, преобладающая часть их сконцентрирована около ядер (Рис. За), крупные (0,6-6,5 мкм), округлой, сильно удлиненной или неправильной формы, содержат матрикс умеренной электронной плотности, густые длинные светлые кристы и многочисленные мелкие темные интрамитохондриальные гранулы.
Ультраструктуру клеток этого типа определяют многочисленные запасные вещества в виде небольшого числа липидных включений и многочисленных розеток гликогена, равномерно распределенных по площади среза клетки. Липидные включения имеют варьирующий диаметр (0,3-0,6 мкм) и умеренную электронную плотность (Рис. 3 а, в). Как правило, они находятся в окружении мелких (0,10-0,15 мкм), светлых розеток гликогена (Рис. 3 в).
В содержимом зрелых клеток гиф пятого типа отмечали одиночные ядра (2,0 х 0,9 мкм) со слегка волнистым контуром (Рис. 1.2 е; 3 д). Степень вакуолизации содержимого клеток — средняя. Вакуоли
— мелкие, с одной крупной (0,3-0,4 мкм), темной по-лифосфатной гранулой, приуроченной к тонопласту (Рис. 3 г, е).
Запасные вещества встречались в умеренном числе и были сосредоточены в промежутках между ядрами и вблизи клеточной стенки. Они представлены липидными включениями, розетками гликогена и полифосфатными гранулами.
Липидные включения равномерно распределены по площади среза клетки, варьирующего диаметра (0,2-0,5 мкм) и равномерно электронно-светлые. Полифосфатные гранулы в цитозоле расположены в местах скопления розеток гликогена, варьирующего диаметра (0,07-0,2 мкм), одиночные, округлые и темные (Рис. 3 е). Розетки гликогена — мелкие (0,1-
0,2 мкм), светлые, в основном, сосредоточены вблизи клеточной стенки (Рис. 3 е).
Клетки вегетативного мицелия изучаемого штамма A. versicolor отделены друг от друга светлыми клиновидными септами (Рис. 3 ж) с толщиной у латеральной клеточной стенки 0,12 (0,10-0,14) мкм, а в средней части соответственно — 0,09 (0,07-0,11) мкм. В центре септ наблюдали сквозную пору диаметром 0,10 (0,08-0,12) мкм, на некотором удалении от которой локализовались тельца Воронина в числе от одного до четырех. Они имели плоско-гексагональную форму и размеры 0,04 (0,02-0,06) х 0,10 (0,09-0,11) мкм. Содержимое телец Воронина умеренной электронной плотности, ограничивающая мембрана отличается высоким контрастом. По мере старения клеток вегетативного мицелия в просвете септальной поры появлялись мелкие темные гомогенные пробки неправильной формы. Сходная возрастная динамика изменений качественного состава порового аппарата септ была выявлена нами и для патогенных штаммов таких видов аспергиллов, как A. niger [1], A. jumigatus [2] uA.flavus [3].
У A. versicolor завершающие этапы морфогенеза клеток гиф воздушного и субстратного мицелия проходят сходно и заключаются в усилении уровня вакуолизации (Рис. 1.3 a-ж), сокращении объема ядер, уменьшении числа органелл и свободных рибосом, а также в просветлении цитозоля. В целом, процессы роста и дифференциации клеток гиф мицелия в пределах колоний изученного штамма A. versicolor протекали в центростремительном направлении, а процессы старения и отмирания, напротив, — в центробежном. Такая направленность морфогенетических процессов была показана нами ранее и для клеток вегетативного мицелия A. niger [1], A. jumigatus
[2] uA.flavus [3].
Данные настоящей работы показывают, что ранее выявленная нами для A. niger [1], A. jumigatus [2] и A.flavus [3] общая картина ультраструктурной организации зрелых клеток культур в системе субстратный—»воздушный мицелий повторяется и колониях штамма такого вида аспергилла, как A. versicolor. Речь идет об однообразии ультраструктуры, бедности органеллами и запасными веществами содержи-
ЭКСПЁРИМЁНТДЛЬНАЯ ^ПІКОЛОГ^ІЯ
мого клеток воздушного мицелия, а также большом разнообразии структуры, богатстве и многообразии типов запасных веществ таковых субстратного. При этом характерно, что синтез большого количества запасных веществ клетками гифов субстратного A. versicolor отмечали перед началом конидиального спороношения, что было показано и для патогенных штаммов ранее изученных трех видов аспергиллов
[1-3]. ' • ■ ■
ВЫВОДЫ
1. Для зрелых клеток гиф мицелия A. versicolor характерно присутствие четырех слабо хроматизиро-ванных интерфазных ядер.
2. Для зрелых клеток гиф воздушного мицелия A. versicolor выявлено однообразие ультраструктуры, бедность органеллами и запасными веществами. В
противовес им, клетки субстратного мицелия отличались разнообразием структуры, богатством и многообразием типов запасных веществ.
3. Описано шесть типов зрелых клеток гиф субстратного мицелия A. versicolor по: 1) размерам и форме ядер; 2) степени вакуолизации; 3) числу, размерам и строению митохондрий; 4) уровню развития и структуре ЭР; 5) наличию, отсутствию, типу и сочетанию запасных веществ; 6) наличию или отсутствию микротелец; 7) толщине и строению латеральных клеточных стенок.
4. Клетки мицелия A. versicolor отделены друг от друга однослойными светлыми клиновидными септами. В качестве компонентов порового аппарата септ выявлены тельца Воронина в форме плоских шестиугольников, а также мелкие пробки неправильной формы.
&ІЗ .я*í- ° ;> ^ ok ~ «BP о «Р Оч 40IC 3 Ü ¿y В X¿>y^SN'.'v o Ы я ? Й о С 1 |о а
м ГВ фу
/То t ^ rtolö- (воо <ч • ' '—У Q¡0¡ V« — он> 1 í і°|0\ JO 0(0/
Яд
Ul > *<• oV>* ,) щоЬ в <qo С—, JOop/
Z16
\ OÖ V у ЯОг 41 C2Z& 1 С fet—г
А г м і
Ч* ^7"—
Пф м
в' r*''*boloí
1 2 3
Рис. 1. Схематическое изображение ультраструктуры гиф воздушного (а) и субстратного (б-е) мицелиев Aspergillus versicolor, апикальная (1), зрелая (2) и стареющая (3) клетки гифы. Условные обозначения (здесь и на рис. 2 и 3).
В - вакуоль; Г - гликоген; КС - клеточная стенка; ЛВ - липидное включение; М - митохондрия; СП - пора; Пз - пузырьки; Пф - полифосфатная гранула; С - септа; ТВ - тельце Воронина; ФС - фибриллярный слой снаружи клеточной стенки; ФТ - фиброзиновое тельце; ЭР - эндоплазматический ретикулум; Я - ядро; Яд
- ядрышко.
Рис. 2. Ультраструктура зрелых клеток воздушного (а) и субстратного (6-м) мицелиев Aspergillus versi-
а - апикальная часть концевой клетки гифы воздушного мицелия; б - фрагмент клетки первого типа с ядром, вакуолями, митохондриями и фиброзиновым тельцем; в-ж - фиброзиновые тельца разной морфологии в клетках первого типа; з - фрагмент клетки второго типа с ядром, вакуолью и митохондриями; и - фрагмент клетки третьего типа с ядром, вакуолями и липидными включениями; к - строение митохондрии в клетке третьего типа; л, м - агрегаты «кольчужного» ретикулума в клетках третьего типа.
Ув.: а, б - ХІ4000; в-ж - хЗОООО; з -х20000; к, л, м - ХІ8000.
ЭКСДЕРИМШ1АДЬ1НМ]ШК0Д0Р4Я
Рис. 3. Фрагменты зрелых клеток субстратного шицеАия Aspergillus versicolor.
a-в - фрагменты клеток четвертого (а, в) и пятого (б) типов с ядром, митохондриями и запасными веществами; г - общий вид клетки пятого типа; д - ядро, митохондрии и липидные включения в клетке пятого типа; е - вакуоли, митохондрии и запасные вещества в клетке пятого типа; ж - строение септы и телец Воронина. Ув.: а, б - хЗОООО; в, е - х20000; г, д -х15000; ж - х50000
ЛИТЕРАТУРА
1. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток Aspergillus nigervan Thieghem. Вегетативный мицелий // Ж.
Проблемы мед. микологии. - 2003.- Т. 5, №4. - С. 32-39.
2. Степанова А.А., Синицкая И.А. Субмикроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus fumigatus
Fres. //Ж. Проблемы мед. микологии. - 2004. - Т. 6, №3. - С. 34-40.
3. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток вегетативного мицелия Aspergillus flavus Link, выращенно-
го in vitro //Ж. Проблемы мед. микологии. - 2005. - Т. 8, №1. - С. 40-45.
4. Билай В.И., Коваль 3.3. Аспергиллы. Определитель. — Киев: «Наукова думка», 1988.- 204 с.
5. Черноморцева Н.И. Атлас сапрофитной и паразитной микрофлоры и микрофауны патологически измененной кожи
человека.- Минск: Изд. «Вышэйшая школа», 1968.- С.7.
6. Liu Z., Hou Т. et al. Osteomyelitis of sacral spine caused by Aspergillus versicolor with neurologic deficits// Clin. Med. J.-
1996. -Vol. 108. — P. 472-475.
7. Torres-Rodriguez J.M., Madrenys-Brenut N, et al. Aspergillus versicolor as cause of onychomycosis: report of 12 cases and
susceptibility testing to antifungal drugs// J. Acad. Dermatol. Venereol. - 1998. — Vol. 11. — P. 25-31.
8. Блинов Н.П., Митрофанов B.C., Чернопятова P.M. Аспергиллезная инфекция: подходы к ее диагностике и лече-
нию// Ж. Проблемы мед. микологии.- 2002. - Т. 4, №1. - С. 4-16.
9. Sumi Y., Nagura Н., Tekeuchi М., Miyakawa М. Granulomatous lesions in the lung induced by inhalation of mold spores//
Virchows Arch. -1994. - Vol. 424, №6. - P. 661-668.
10. Митрофанов B.C., Козлова Я.И. Плесени в доме (обзор) //Ж. Проблемы мед. микологии, 2004. - Т.6, №2. - С. 1018.
11. Гребенчук Е.А., Плотникова Ю.М. Строение и ультраструктура конидий возбудителя мучнистой росы // Микол, и фитопатол. - 1981. - Т.5, №3. - С. 190-192.
12. Васильев А.Е., Камалетдинова Ф.И. О фиброзиновых тельцах грибных клеток// Докл. АН СССР. - 1988. - Т. 301, №4. - С. 982-984.
13. Harder D.E. Electron microscopy of Puccinia coronata and P. graminis// Can. J. Bot. - 1976. - Vol.54, №9. - P. 10101019.
14. Mims C.W. Ultrastructure of teliospore formation in the cedar-apple rust fungus Gymnosporangium juniperi-virginianael/ Can. J. Bot. - 1997. - Vol. 55. - P. 2319-2329.
15. Heath M.C., Bonde M.R. Ultrastructural observations of the rust fungus Physopellaceae in Zea maysll Can. J. Bot. - 1983. - Vol. 61, №8. - P. 2231-2242.
16. Hassan Z.M., Littlefield L.L. Ontogeny of the uredium of Melampsorn lini // Can. J. Bot. - 1979. - Vol. 57, №6. - P. 639641.
17. Васильева H.B., Степанова A.A., Синицкая И.А. Ультраструктура капсул зрелых клеток штаммов Cryptococcus neoformans in vitro и in vivo //Ж. Проблемы мед. микологии.- 2006.- Т. 8, №2.- С. 25.
18. Grove S.W., Bracker С.Е. Protoplasmic during zoospore encystment and cyst germination in Pythium aphanidermatum //Exper. Mycology.- 1978,- Vol.2, №1,- P. 51-98.
19. Габараева Н.И. О месте синтеза предшественников спорополленина в развивающихся пыльцевых зернах представителей семейства Magnoliaceae // Бот. журнал.- 1990.- Т. 75, №6.- С. 783-791.
Поступила в редакцию: 30.08.2006 Рецензент: В.А. Мельник
