CC BY
11УДК 57.086:582.282.123.4
ЦИТОЛОГИЯ КЛЕТОК ВЕГЕТАТИВНОГО МИЦЕЛИЯ ASPERGILLUS FUMIGATUS FRES., ИЗОЛИРОВАННЫХ ИЗ ТКАНИ ЛЕГКИХ МЫШЕЙ
Степанова А.А. (зав. лаб.)*, Васильева Н.В. (директор института, зав. кафедрой), Босак И.А. (сн.О
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина, Санкт-Петербург, Россия
Впервые представлены данные по ультраст-руктуре клеток вегетативного мицелия штамма (PKnrF-1172) A. fumigatus, выделенного из легких мышей, на среду Чапека. Показано наличие пяти основных типов зрелых клеток гиф вегетативного мицелия по: 1) размерам и форме ядер; 2) уровню развития и строению вакуома, хондриома и эндоплазматического ретикулума (ЭР); 3) наличию, отсутствию, числу и строению микротелец; 4) наличию, отсутствию и типу запасных веществ и другим признакам. Установлено, что после инфицирования легких мышей клетки вегетативного мицелия изученного штамма возвращаются в исходное состояние (репариру-ют), для них опять становится типичным полиморфизм ультраструктуры между смежными клетками вегетативного мицелия.
Ключевые слова: Aspergillus fumigatus, вегетативный мицелий, in vitro, репарация, ультраструктура
CYTOLOGY OF THE GROWING IN VITRO CELLS OF VEGETATIVE MYCELIUM OF ASPERGILLUS FUMIGATUS FRES., ISOLATED FROM MURINE LUNG
Stepanova А.А. (head of the laboratory), Vasilyeva N.V. (director of the institute, head of the department), Bosak I.A. (senior scientific collaborator)
North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, Kashkin Research Institute of Medical Mycology, St. Petersburg, Russia
At the first time the data regarding the ultrastructure of the cells of vegetative mycelium of A. fumigatus strain's (PKnrF-1172), which isolated from murine lung on Czapek medium were presented. Five main types of mature cells of vegetative mycelium were recognized according: 1) the sizes and form of nucleus; 2) level of development and structure of vacuoles, mitochondria and endoplasmic reticulum; 3) presence or absence, numbering and structure of microbodies; 4) presence or absence and types of storage substances and another features. It is shown that after infection of murine lung the cells of the vegetative mycelium of the studied strain return to the original state (undergo reparation), for them again were typical the polymorphism in the ultrastructure between adjacent mature cells of the vegetative mycelium.
Key words: Aspergillus fumigatus, in vitro, reparation, ultrastructure, vegetative mycelium
Контактное лицо: Степанова Амалия Аркадьевна, e-mail: amaliya.stepanova@szgmu.ru
ВВЕДЕНИЕ
Ультраструктурные аспекты морфогенеза клеток вегетативного мицелия A. fumigatus изучали in vitro [1, 2] и in vivo [3-6 и др.]. Однако один из кардинальных вопросов морфогенеза патогенных грибов на ультраструктурном уровне: закрепляются ли происходящие при переходе в тканевую форму изменения в строении клеток вегетативного мицелия или он способен подвергаться репаративным изменениям и возвращаться в характерную до инфицирования «форму» до сих пор оставался открытым.
Цель исследования - на примере модельного объекта проанализировать ультраструктуру клеток вегетативного мицелия A. fumigatus у штамма, использованного для изучения тканевой формы гриба в эксперименте на примере легких мышей [3], после его последующего выделения в культуру, а также сравнить изменяется ли и каким образом строение клеток вегетативного мицелия до начала эксперимента (in vitro), при переходе его в тканевую форму (легкие мышей) и вновь после изоляции из легких мышей в культуре.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Использованный штамм (PKnrF-1172) A. fumigatus Fres. изначально был выделен из промывных вод больного аспергиллезом (В.В., 9.03.1999 г.). Культуру гриба использовали в эксперименте для инфицирования мышей, подробные детали проведения которого были опубликованы нами ранее [3]. Для исследования культуру гриба изолировали из легких инфицированных мышей через 5 дней после начала эксперимента, выращивали на среде Чапека в термостате при температуре 27 °С и изучали через 10 и 20 дней после посева. Методика подготовки материала для просвечивающей электронной микроскопии была описана нами ранее [3].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В целом дифференциация клеток гиф мицелия в пределах колоний изученного штамма A. fumigatus протекала в центростремительном направлении, тогда как процессы старения и отмирания - в центробежном. Такая закономерность морфогенеза был описана нами для клеток вегетативного мицелия ряда видов аспергиллов [7, 8 и др.].
В исследуемых колониях диаметр гиф варьировал от 2,5 до 3,5 мкм. В пределах одной гифы строение зрелых клеток было однотипным, однако между зрелыми клетками разных гиф были выявлены существенные различия.
Можно выделить пять основных типов строения зрелых клеток гиф. Отметим, что общими признаками строения зрелых клеток гиф вегетативного мицелия было наличие 2-4-х интерфазных ядер хромоцен-трического типа, которые содержали одно крупное эксцентричное ядрышко округлой (0,4 мкм) или эллипсоидной (0,5 х 0,6 мкм) формы, состоящее из фибриллярного и гранулярного компонентов. Последний компонент доминировал. Зрелые клетки разных гиф различались по размерам и форме ядер, уровню развития и строению вакуома, хондриома и эндоплазмати-ческого ретикулума (ЭР), наличию, отсутствию и типу запасных веществ и другим признакам.
Зрелые клетки гиф первого типа содержали 2-4-х интерфазных ядра, расположенных в центральной их
части. Форма ядер округлая (в среднем 2,0 мкм, Рис. 1 а; 2 а), контур оболочки ядра слегка волнистый. Степень вакуолизация умеренная. Вакуоли в числе 3-4 на срезе клетки, средних размеров и мелкие, причем первые преобладали. Они округлой или слегка неправильной формы, содержали обрывки мембран, а также рыхло расположенные скопления тонко-фибриллярного материала. Для тонопласта характерен высокий контраст. Митохондрии в числе 8-10 на срезе клетки, округлой (0,2-0,5 мкм) или эллипсоидной (0,5 х 0,7 мкм) формы, с темным матриксом и многочисленными узкими светлыми кри-стами. ЭР развит слабо, представлен редкими, одиночными, агранулярными короткими, прямыми либо слегка извилистыми периферическими цистернами. Микротельца редкие, одиночные (Рис. 2 б), мелкие, округлой (0,2 мкм) или эллипсоидной (0,2 х 0,3 мкм) формы, умеренной электронной плотности, с тонко-фибриллярным матриксом и высококонтрастной ограничивающей мембраной. Мелкие одиночные светлые пузырьки вблизи клеточной стенки наблюдали крайне редко.
Рис. 1. Схематическое изображение ультраструктуры зрелых клеток разных гиф вегетативного мицелия (а-первый тип гиф, б - второй тип гиф, в - третий тип гиф,
г - четвертый тип гиф, д - пятый тип гиф) А. ^т1да№$, выращенного на среде Чапека. Микротельца и пузырьки на схеме не показаны. Условные обозначения (здесь и на рис. 2, 3): В - вакуоль; ВМ - внеклеточный матрикс; ГП - гранулы полифосфатов; Гл - гликоген; КС - клеточная стенка; ЛВ - липидное включение; М - митохондрия(и); Мт - микротельце; С - септа; ТВ - тельца Воронина; фВ - фибриллярное включение; ЭР - эндоплазматический ретикулум; Я - ядро; Яд - ядрышко.
Цитозоль в содержимом зрелых клеток всех изученных типов отличался умеренной электронной плотностью и был насыщен свободными рибосомами. Запасные вещества в виде многочисленных, уме-
ренной электронной плотности розеток а-гликогена, формирующих обширные скопления неправильной формы вблизи септ (Рис. 2 в).
Плазмалемма клеток гиф слегка извилистая, трехслойная. Клеточная стенка тонкая (0,10-0,15 мкм), двуслойная, со светлым гомогенным нижним слоем и верхним более темным фибриллярным (Рис. 2 г). Снаружи клеток гиф воздушного мицелия она несет слой варьирующей толщины (0,3-0,5 мкм), так называемый «внеклеточный матрикс», состоящий из тонкофибриллярного материала и темных сгустков различной конфигурации. Данное строение плазмалеммы и клеточной стенки характерно и для других нижеописанных клеток гиф вегетативного мицелия.
Для клеток гиф второго типа характерно наличие 2-4-х интерфазных ядер эллипсоидной формы (0,8 х 1,7 мкм, Рис. 1 б). Контур ядерной оболочки слегка волнистый (Рис. 2 д). Вакуом по уровню развития и строению сходен с таковым зрелых клеток вегетативного мицелия первого типа. Митохондрии в числе 7-9 на срезе клетки, одиночные либо собраны в группы, полиморфные, с матриксом умеренной электронной плотности и густыми светлыми кристами. ЭР такого же строения, что и в клетках гиф мицелия первого типа. Микротельца не обнаружены. Запасные вещества были в виде небольших скоплений умеренной электронной плотности розеток а-гликогена (Рис. 2 д), а также довольно крупных одиночных либо собранных в немногочисленные группы (Рис. 2 е) липидных включений варьирующего диаметра (0,2-0,4 мкм) и умеренной электронной плотности.
В клетках гиф третьего типа наблюдали два интерфазных ядра, локализующихся в их центральной части (Рис. 1 в, 2 ж). Для ядер характерна эллипсоидная (0,8 х 1,2 мкм) форма. Контур ядерной оболочки ровный. Мелкие и средних размеров вакуоли присутствовали в умеренном числе, одиночные или в небольших группах, содержащие плотно расположенные скопления темного фибриллярного материла. Митохондрии многочисленные, формировали скопления из большого числа продольно ориентированных протяженных профилей ор-ганелл (Рис. 2 з). При анализе серийных срезов клеток гиф третьего типа отмечали наличие в них митохондри-ального ретикулума - одной гигантской митохондрии. ЭР развит хорошо, состоял из довольно протяженных, собранных в группы по 7-10 агранулярных слабоволнистых цистерн (Рис. 1 и). Запасные вещества в виде немногочисленных скоплений темных крупных (0,5-0,6 мкм) глобул полифосфатов, характеризующихся наличием извилистого контура (Рис. 2 к).
Клетки гиф четвертого типа содержали четыре интерфазных ядра эллипсоидной формы (1,7 х 2,1 мкм, Рис. 1 г; 3 а). Оболочка ядра сильноизвилистая. Вакуоли двух типов: редкие крупные светлые и многочисленные мелкие с темными гомогенными включениями. Митохондрии в числе 9-12 на срезе клетки содержали матрикс и кристы умеренной электронной плотности. ЭР умеренно развит, в виде коротких агранулярных слабоизвилистых периферических цистерн. Микротельца обнаруживали редко, мелкие (0,3 мкм), округлой формы, одиночные. Запасные вещества представлены скоплениями из светлых розеток а-гликогена (0,1-0,2 мкм), приуроченных к клеточным стенкам, а также многочисленными одиночными, темными, го-
Рис. 2.Ультраструктура клеток вегетативного мицелия A. fumigatus, выращенного на среде Чапека. Фрагменты клеток гиф вегетативного мицелия первого (а-г), второго (д, е) и третьего типов (ж-к) с ядрами (a, д, ж), микротельцами (б), запасными веществами (в, е, к), митохондриями (з) и цистернами эндоплазматического ретикулума.
Рис. 3. Электронная микроскопия клеток вегетативного мицелия А. ^т/даШз, выращенного на среде Чапека. Фрагменты клеток гиф четвертого (а, б) и пятого (в-д) типов с ядрами (а, в, д, е), запасными. Особенности строения стареющей запасными веществами (б), центральной вакуолью (е) и компонентами порового аппарата септ (ж). Условные обозначения: В - вакуоль; ВМ - внеклеточный матрикс; ГП - гранулы полифосфатов; Гл - гликоген; КС - клеточная стенка; ЛВ - липидное включение; М - митохондрия(и); Мт - микротельце; С - септа; ТВ - тельца Воронина; ФВ - фибриллярное включение; ЭР - эндоплазматический ретикулум; Я - ядро; Яд - ядрышко.
могенными, округлой или неправильной формы гранулами полифосфатов в цитозоле (Рис. 3 б).
На срезе зрелых клеток гиф пятого типа можно было наблюдать два интерфазных ядра эллипсоидной (1,4 х 1,8 мкм) формы (Рис. 1 д; 3 в). Контур ядерной оболочки ровный. Вакуом развит умеренно, состоял из мелких вакуолей двух типов - с темным гомогенным и фибриллярным содержимым. Строение митохондрий сходно с аналогичным зрелых клеток гиф первого и четвертого типов, а ЭР - первых трех типов. Другие органеллы отсутствовали. Запасные вещества в виде электронно-плотных, гомогенных, глобулярных Рис. 1 д; 3 г), мелких, темных гранул, полифосфатных в вакуолях и крупных в цитозоле. Также в цитозоле встречали фибриллярные белковые включения (Рис. 3 д) разного размера, локализующиеся между ядром и клеточной стенкой.
Завершающие стадии морфогенеза клеток гиф вегетативного мицелия протекали однотипно. Существенно (почти в два раза) уменьшались размеры ядер и ядрышек. Из ядрышек исчезал гранулярный компонент. Вакуоли сливались между собой, формируя одну светлую центральную вакуоль (Рис. 3 е), которая занимала основную часть клетки. Заметно снижалась электронная плотность цитозоля, существенно сокращалась численность органелл, исчезали запасные вещества из цитозоля. Диаметр клеток стареющих гиф сильно уменьшался (до 0,5-0,6 мкм).
Поровый аппарат септ. Смежные клетки гиф вегетативного мицелия были отделены друг от друга поперечными светлыми клиновидными септами (Рис. 3 ж). Толщина септ вблизи латеральной клеточной стенки составляла в среднем 0,19 мкм, а в средней части -0,12 мкм. В их центре была расположена сквозная пора диаметром в среднем 0,12 мкм. Вблизи септальных пор наблюдали тельца Воронина в числе от 1 до 4, которые локализовались на некотором удалении от септальных пор. Форма телец Воронина округлая (в среднем 0,2 мкм, Рис. 3 ж). Для них характерно гомогенное содержимое умеренной электронной плотности и наличие темной трехслойной ограничивающей мембраны.
В данном исследовании нами впервые на примере модельного штамма РКПГБ-1172 была предпринята попытка изучить, каким образом изменяется структура гиф A. fumigatus при переходе его из культуральной [2] в тканевую форму [3] и наоборот [данные настоящей работы]. В итоге показано, что вегетативный мицелий анализируемого штамма A. fumigatus, как и до начала эксперимента на мышах [2], состоял из пяти основных типов зрелых гиф, клетки которых различались по размерам и форме интерфазных ядер, характеру вакуолизации, строению митохондрий, уровню развития ЭР, отсутствию, наличию и типу запасных веществ, отсутствию и наличию микротелец, их числу,
размерам и строению и другим признакам.
Отметим, что гифы вегетативного мицелия штамма РКПГБ-1172 в ткани легкого мышей через пять суток после начала эксперимента [3] не отличались между собой по ультраструктуре интерфазных ядер, митохондрий и компонентов эндомембранной системы, а различались только по качеству аккумулируемых запасных веществ. Выявили, что морфогенез клеток мицелия A. fumigatus в легких мышей сопровождался усилением уровня вакуолизации, аккумуляцией небольшого числа запасных веществ, формированием снаружи клеточных стенок широкого наружного темного гранулярного внеклеточного матрикса. Поскольку использованный штамм A. fumigatus, как было показано в работе Васильевой Н.В. с соавторами [9], относится к числу слабовирулентных, то, возможно, поэтому в клетках его тканевых форм мы не отмечали формирование митохондриально ретикулума - одной гигантской органеллы, ответственной за высокий уровень энергетических процессов, формирование которой происходит у тканевых форм дрожжевых клеток Cryptococcus neoformans [10] и в клетках гифах вегетативного мицелия высоковирулентного штамма Aspergillus spp. [11]. Актуально продолжить начатые исследования и изучить в экспериментальной модели трансформацию ультраструктурной организации клеток in vitro -in vivo -in vitro на примере высоковирулентного штамма A. fumigatus.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Электронно-микроскопическое изучение морфогенеза клеток вегетативного мицелия в культуре на примере шести видов рода Aspergillus [A. fumigatus: 2, A. niger. 7, A. versicolor: 12, A. flavus: 13, A. terreus: 14, A. candidus: 15] позволило выявить уникальную их особенность -полиморфность ультраструктуры гиф в пределах одной колонии. Актуальным было выяснить, характерна ли такая особенность для других видов мицелиальных грибов либо это прерогатива только представителей рода Aspergillus? Для решения этого вопроса мы исследовали морфогенез ряда патогенных видов из родов Tricho-phyton [T rubrum: 16; T. violaceum: 17 и др.], Lichtheimia spp. [18], Fusarium [Б oxysporum: 19], Scedosporium [S. aurantiacum: 20 и др.] и Pseudallescheria [P ellipsoidea: 21 и др.]. В итоге у данных представителей не было обнаружено варьирование в строении разных гиф одной колонии, то есть морфогенез протекал однотипно, по сценарию, характерному для клеток вегетативного мицелия микро- и макромицетов в классическом его понимании [22]. По нашему мнению, характерный только для зрелых клеток гиф вегетативного мицелия аспергиллов (в условиях культуры) полиморфизм ультраструктуры обусловливает их большую пластичность и способность колонизировать и разрушать разные типы субстратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Campbell C.K. Fine structure of vegetative hyphae of Aspergillus fumigatus. J. Gen. Microbiol. 1970; 64 (3): 373-376.
2. Степанова А.А., Синицкая И.А., Авдеенко Ю.Л. Субмикроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus fumigatus Fres. Проблемы медицинской микологии. 2004; 6 (3): 34-40. [Stepanova A.A., Sinickaya I.A., Avdeenko Y.L. Submikroskopicheskoe izuchenie kletok vegetativnogo miceliya Aspergillus fumigatus Fres. Problemy medicinskoj mikologii. 2004; 6 (3): 34-40 (In Russ)].
3. Степанова А.А., Босак И.А., Синицкая И.А. Цитологическое исследование Aspergillus fumigatus Fres. в легких мышей. Проблемы медицинской микологии. 2013; 15 (1): 52-58. [Stepanova A.A., Bosak I.A., Sinickaya I.A. Citologicheskoe issledovanie Aspergillus fumigatus Fres. v legkih myshej. Problemy medicinskoj mikologii. 2013; 15 (1): 52-58 (In Russ)].
4. Muszkieta L., Beauvais A, Pähtz V., et al. Investigation of Aspergillus fumigatus biofilm formation by various "omics" appro aches.
Front. Microbiol. 2013; 12 (4).
5. Степанова А.А., Васильева Н.В., Борзова Ю.В. и др. Электронно-микроскопическое изучение аспергиллеза легких человека на примере архивного материала. Проблемы медицинской микологии. 2014; 16 (3): 70-79. [Stepanova A.A., Vasileva N.V., Borzova Y.V. i dr. Elektronno-mikroskopicheskoe izuchenie asper-gilleza legkih cheloveka na primere arhivnogo materiala. Problemy medicinskoj mikologii. 2014; 16 (3): 70-79 (In Russ)].
6. Степанова A.A., Васильева Н.В., Чжан Ф.Н. и др. Ультраструктурная организация Aspergillus spp. в тканях легких пациентки. Проблемы медицинской микологии. 2018; 20 (2): 29-39. [Stepanova A.A., Vasileva N.V., Chzhan F.N. i dr. Ul'trastrukturnaya organizaciya Aspergillus spp. v tkanyah legkih pacientki. Problemy medicinskoj mikologii. 2018; 20 (2): 29-39 (In Russ)].
7. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток Aspergillus niger van Thieghem. Вегетативный мицелий. Проблемы медицинской микологии. 2003; 5 (4): 32-39. [Stepanova A.A., Sinickaya I.A. Ul'trastruktura kletok Aspergillus niger van Thieghem. Vegetativnyj micelij. Problemy medicinskoj mikologii. 2003; 5 (4): 32-39 (In Russ)].
8. Степанова А.А., Синицкая И.А. Электронно-микроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus terreus Thom. Проблемы медицинской микологии. 2007; 9 (3): 26-33. [Stepanova A.A., Sinickaya I.A. Elektronno-mikroskopicheskoe izuchenie kletok vegetativnogo miceliya Aspergillus terreus Thom. Problemy medicinskoj mikologii. 2007; 9 (3): 26-33 (In Russ)].
9. Васильева Н.В., Богомолова Т.С., Степанова А.А. и др. Особенности моделирования аспергиллеза легких у мышей в зависимости от вирулентности штаммов Aspergillus fumigatus. Проблемы медицинской микологии. 2014;16 (2): 50-51. [Vasileva N.V., Bogomolova T.S., Stepanova A.A. i dr. Osobennosti modelirovaniya aspergilleza legkih u myshej v zavisimosti ot virulentnosti shtammov Aspergillus fumigatus. Problemy medicinskoj mikologii. 2014;16 (2): 50-51 (In Russ)].
10. Васильева Н.В., Степанова А.А., Синицкая И.А. Электронно-микроскопическое изучение биологии развития клеток слабо и сильно вирулентного штаммов Cryptococcus neoformans in vitro и in vivo. Проблемы медицинской микологии. 2007; 9 (2): 47-48. [Vasileva N.V., Stepanova A.A., Sinickaya I.A. Elektronno-mikroskopicheskoe izuchenie biologii razvitiya kletok slabo i sil'no virulentnogo shtammov Cryptococcus neoformans in vitro i in vivo. Problemy medicinskoj mikologii. 2007; 9 (2): 47-48 (In Russ)].
11. Stepanova А.А., Vasilyeva N.V., Zhang F., et al. Electron-microscopic investigations of invasive asper-gillosis, caused with Aspergillus fumigatus. Problems in medical mycology. 2015; 17 (3): 38-41.
12. Степанова А.А., Синицкая И.А. Цитология клеток выращенного in vitro вегетативного мицелия Aspergillus versicolor (Vuill.) Tiraboshi. Проблемы медицинской микологии. 2006; 8 (3): 22-28. [Stepanova A.A., Sinickaya I.A. Citologiya kletok vyrashchennogo in vitro vegetativnogo miceliya Aspergillus versicolor (Vuill.) Tiraboshi. Problemy medicinskoj mikologii. 2006; 8 (3): 22-28 (In Russ)].
13. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток вегетативного мицелия Aspergillus flavus Link, выращенного in vitro. Проблемы медицинской микологии. 2006; 8 (1): 40-45. [Stepanova A.A., Sinickaya I.A. Ul'trastruktura kletok vegetativnogo miceliya Aspergillus flavus Link, vyrashchennogo in vitro. Problemy medicinskoj mikologii. 2006; 8 (1): 40-45 (In Russ)].
14. Степанова А.А., Синицкая И.А. Электронно-микроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus terreus Thom. Проблемы медицинской микологии. 2007; 9 (3): 26-33. [Stepanova A.A., Sinickaya I.A. Elektronno-mikroskopicheskoe izuchenie kletok vegetativnogo miceliya Aspergillus terreus Thom. Problemy medicinskoj mikologii. 2007; 9 (3): 26-33 (In Russ)].
15. Степанова А.А., Васильева Н.В., Чжан Ф., Тонг Д. Ультраструктурное исследование клеток вегетативного мицелия Aspergillus candidus Link, выращенных in vitro. Проблемы медицинской микологии. 2016; 18 (2): 23-27. [Stepanova A.A., Vasileva N.V., CHzhan F., Tong D. Ul'trastrukturnoe issledovanie kletok vegetativnogo miceliya Aspergillus candidus Link, vyrashchennyh in vitro. Problemy medicinskoj mikologii. 2016; 18 (2): 23-27 (In Russ)].
16. Савицкая Т.И., Васильева Н.В., Мартынов А.А. и др. Электронно-микроскопическое изучение выращенных in vitro клеток Trichophyton rubrum (Castell.) Semon. Проблемы медицинской микологии. 2007; 9 (1): 20-25. [Savickaya T.I., Vasileva N.V., Martynov A.A. i dr. EHlektronno-mikroskopicheskoe izuchenie vyrashchennyh in vitro kletok Trichophyton rubrum (Castell.) Semon. Problemy medicinskoj mikologii. 2007; 9 (1): 20-25 (In Russ)].
17. Степанова А.А. Ультраструктура клеток Trichophyton violaceum Sabour. ex E. Bodin, выращенных на агаре Чапека. Проблемы медицинской микологии. 2010; 12 (2): 36. [Stepanova A.A. Ul'trastruktura kletok Trichophyton violaceum Sabour. ex E. Bodin, vyrashchennyh na agare Chapeka. Problemy medicinskoj mikologii. 2010; 12 (2): 36 (In Russ)].
18. Степанова А.А., Хостелиди С.Н., Аравийский Р.А. и др. Электронно-микроскопическое исследование Lichtheimia spp. in vivo и in vitro. Проблемы медицинской микологии. 2012; 14 (4): 55-61. [Stepanova A.A., Hostelidi S.N., Aravijskij R.A. i dr. Elektronno-mikroskopicheskoe issledovanie Lichtheimia spp. in vivo i in vitro. Problemy medicinskoj mikologii. 2012; 14 (4): 55-61 (In Russ)].
19. Степанова А.А., Гагкаева Т.Ю. Цитологическое изучение клеток вегетативного мицелия Fusarium oxysporum Scltdl. Материалы международной научной конференции "Проблемы микологии и фитопатологии в XXI веке". СПб., 2013: 253-254. [Stepanova A.A., Gagkaeva T.Y. Citologicheskoe izuchenie kletok vegetativnogo miceliya Fusarium oxysporum Scltdl. Materialy mezhdunarodnoj nauchnoj konferencii "Problemy mikologii i fitopatologii v XXI veke". SPb., 2013: 253-254 (In Russ)].
20. Stepanova A.A., Yamaguchi M.M., Chibana H., et al. Comparative ultrastructural analysis of the in vitro growing hyphal cells of Scedosporium aurantiacum. Problems in medical mycology. 2017; 19 (3): 18-25.
21. Степанова А.А. Морфогенез клеток вегетативного мицелия Pseusallescheria ellipsoidea. Проблемы медицинской микологии. 2018; 20 (2): 118. [Stepanova A.A. Morfogenez kletok vegetativnogo miceliya Pseusallescheria ellipsoidea. Problemy medicinskoj mikologii. 2018; 20 (2): 118 (In Russ)].
22. Степанова А.А., Васильев А.Е. Ультраструктурные основы морфогенеза шляпочных грибов. Ашхабад: Изд. «Ылым», 1994: 263 с. [Stepanova A.A., Vasil'ev A.E. Ul'trastrukturnye osnovy morfogeneza shlyapochnyh gribov. Ashkhabad: Izd. «Ylym», 1994: 263 s. (In Russ)].
Поступила в редакцию журнала: 30.01.2019 г.
Рецензент: О.Д. Васильев
