CC BY
14УДК: 616. 211-002+616. 216-002: 611-018. 73
ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ НОСА ПРИ РИНОСИНУСИТАХ Е. В. Безрукова1, Н. М. Хмельницкая2, О. В. Калашникова1, М. И. Абсалямова1
CYTOLOGICAL CHANGING OF NASAL MUCOUS MEMBRANE IN RHINOSINUSITIS
E. V. Bezrukova, N. M. Khmelnitskaya, O. V. Kalashnikova, M. I. Absalyamova
1ГОУ ВПО Санкт-Петербургская медицинская академия им. И. И. Мечникова (Зав. каф. оториноларингологии - проф. А. Н. Пащинин) 2 ГОУ ДПО Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
(Зав. каф. патологической анатомии - проф. Н. М. Хмельницкая)
Цитохимическим методом определен уровень лизосомально-катионного белка в риноци-тограмме практически здоровых людей и больных различными формами риносинусита. Исследование проведено с целью оценить состояние неспецифической резистентности слизистой оболочки полости носа при риносинуситах и разработать на основании полученных данных диагностические критерии эффективности проводимого лечения. В результаты исследования было показано, что лизосомально-катионный тест может служить критерием контроля эффективности лечения острых и хронических риносинуситов.
Ключевые слова: лизосомально-катионный тест, катионные белки, риносинусит Библиография: 10 источников
Cytochemistry was used to study the level of lysosomal cationic proteins in nasal smear in healthy people and in patients with rhinosinusitis. The aim of investigation was to evaluate the state of nonspeciphic resistance of mucous membrane and work out diagnostic criteria of treatment efficiency. In result we can conclude that lysosomal cationic test can be used for control of treatment efficiency. Key words: lysosomal cationic test, cationic protein, rhinosinusitis Bibliography: 10 sources.
Слизистая оболочка носа и околоносовых пазух представляет собой труднопреодолимую преграду для проникновения чужеродных агентов, при условии адекватной функциональной активности всех ее структур (эпителия, клеток иммунной системы, кровоснабжения, иннервации и т. д.). Устойчивость слизистых оболочек к микробному заражению обеспечивается, прежде всего, механизмом колонизационной резистентности, препятствующей закреплению бактерий и других возбудителей на поверхности слизистых оболочек [5, 10].
Вторым этапом борьбы с патогенными микроорганизмами является иммунная защита. Только после того, как возбудителям удается преодолеть мукоцилиарную защиту, закрепиться на поверхности слизистой оболочки и начать размножаться, мобилизуются защитные силы иммунитета, подразделяемые на неспецифические и специфические. Неспецифическая резистентность срабатывает очень быстро (в течение нескольких часов) и осуществляется главным образом системой нейтрофильных гранулоцитов и мононуклеарных фагоцитов. При массивном размножении возбудителей одновременно развивается защитная воспалительная реакция. Именно по этому, в настоящее время особое внимание уделяется изучению
состояния эпителия и нейтрофильных гранулоцитов слизистой оболочки носа, которые являются важнейшими структурами, участвующими в поддержании адекватного функционирования мукозального иммунитета [3, 4].
Для изучения клеточного состава слизистой оболочки носа чаще всего применяется окраска по Романовскому-Гимзе [2]. Преимущество данной методики состоит в информативности, простоте и быстроте исполнения. По данным риноцитограмм можно определить количество и оценить состояние клеточных элементов: целостность клеток, способность нейтрофилов к фагоцитозу (наличие в цитоплазме неповрежденных бактерий, деструктивных нейтрофилов) [2, 7, 8]. Однако данная окраска не всегда позволяет оценить функциональное состояние клеток. С данной целью был предложен метод определения функциональной активности нейтрофилов крови с помощью лизосомально-катионного теста, разработанного В. Е. Пигаревс-ким [9]. Данный метод позволяет выявлять гранулы, содержащие катионные белки.
Катионные белки, открытые в 1960 г., обладают высокой антибактериальной, противовирусной и кандидоцидной активностью. Важной особенностью их функционирования является то, что к ним не развивается резистентность микроорганизмов и бактерицидным действием обладают концентрации белков, исчисляемые в микрограммах на 1мл. Катион-ные белки лишены ферментативной активности: их бактерицидное действие основано на нарушении структуры и функции мембран микробной клетки. В связи с этим данные вещества являются весьма важными в поддержании адекватной защиты слизистых оболочек и могут отражать функциональное состояние нейтрофилов [9].
В настоящее время исследованию функций нейтрофильных гранулоцитов и, в частности, определению катионных белков отводится определенное внимание. Известно, что ли-зосомально-катионный тест может служить диагностическим критерием различных патологических состояний и может быть использован для оценки эффективности лечения различных заболеваний, в том числе хронического простатита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и др. [1, 6].
Нами данная методика впервые применена для оценки функционального состояния нейтрофилов в мазках со слизистой оболочки полости носа.
Работа выполнена с целью оценить состояние неспецифической резистентности слизистой оболочки полости носа при риносинуситах и разработать на основании полученных данных диагностические критерии эффективности проводимого лечения.
Пациенты и методы исследования
Обследовано 58 больных, страдающих различными формами хронических заболеваний околоносовых пазух носа (из них - 10 человек с носительством St. aureus) и 29 лиц контрольной группы, у которых не было выявлено острых или хронических заболеваний ЛОРорганов.
Таблица 1
Характеристика изучаемых групп больных по половому составу
Нозология Количество больных Всего
мужчины женщины
I Контрольная группа 14 15 29
II Носительство St. aureus 6 4 10
III Острый гнойный риносинусит 10 12 22
IV Хронический гнойный риносинусит 14 12 26
Всего 44 43 87
Характеристика изучаемых групп больных по возрастному составу
Таблица 2
Нозология Возраст больных (лет)
мужчины женщины
I Контрольная группа 26+9 24+8
II Носительство St. aureus 30+6 32+10
III Острый гнойный риносинусит 32+7 39+12
IV Хронический гнойный риносинусит 54+12 59+10
Носительство St. aureus проявляло себя единственной жалобой на образование корок в носу или выявлено случайно среди лиц, предварительно включенных в группу контроля.
Для диагностики и оценки эффективности лечения проводилось клинико-инструмен-тальное обследование больных с первого по четырнадцатый день лечения. Всем больным, в зависимости от диагноза, проводилась традиционная терапия:
- антибактериальная с учетом чувствительности микроорганизмов,
- противоспалительная,
- десенсибилизирующая,
- пункции верхнечелюстных пазух,
- отсасывание по Зондерману,
- орошения носоглотки.
Для определения состояния слизистой оболочки носа применялся метод риноцитоло-гического исследования. Мазки со слизистой оболочки носа брали по стандартной методике [4, 7], окрашивали по Романовскому-Гимзе. микроскопия проводилась под иммерсией при увеличении 1000 (окуляр 10, объектив 100) и подсчитывалось 100 клеток. В назальных мазках определялись нейтрофилы, эозинофилы, цилиндрический эпителий, плоский эпителий, лимфоциты, кокковая микрофлора.
Для выявления количественных и качественных изменений в лейкоцитах, неопределяемых при обычных методах окраски, применялся лизосомально-катионный тест. Мазки со слизистой оболочки носа окрашивали спиртовым раствором прочного зеленого и азуром II по методике Пигаревского.
Состояние эпителиальных клеток оценивалось по степени деструкции, согласно классификации Л. А. Матвеевой [4]. Определяли класс деструкции реснитчатых клеток: 0,I, II, III, IV, средний показатель деструкции (СПД) и индекс цитолиза клеток.
100
, где
п 0 п 1 п 2 п 3 п 4
0 1 2 3 4 - номера классов деструкции, где
0 - нормальная структура
1 - частичное (не более 1/2) деструктивное повреждение, цитоплазмы нормальная структура ядра;
2 - значительная (более S, но неполная деструкция) цитоплазмы, частичное повреждение ядра;
3 - полная деструкция цитоплазмы, значительная деструкция ядра ;
4 - полная деструкция с распадом цитоплазмы и ядра;
п0, п1, п2,п3,п4 - количество клеток соответствующего класса ;
100 - количество исследованных клеток.
Содержание катионных белков в гранулоцитах определяли полуколичественным способом по формуле В. Е. Пигаревского:
1
2
3
4
2
4
п 4
СЦК (кат. б.)= За + + , где СЦК (кат. б) - средний цитохимический пока-
затель катионных белков; а - гранулы занимают всю цитоплазму клетки, б - гранулы занимают 3/4 части цитоплазмы, в - единичные гранулы, г - отсутствие гранул; п - количество подсчитанных клеток в препарате.
Результаты исследования
В контрольной группе здоровых людей, при отсутствии у них на момент исследования острой или хронической ЛОР-патологии, в мазках отмечалось достаточно низкое содержание клеточных элементов, среди которых встречались отдельно лежащие клетки реснитчатого цилиндрического эпителия и немногочисленные нейтрофилы с сохраненной цитоплазмой и четкими ядрами. Среднее количество нейтрофилов составило 11,3+2,7 на 100 клеток, СПД эпителиоцитов - 0,8+0,19, ИЦК - 0,19 + 0,02. В мазках, окрашенных прочным зеленым и азуром II, реснитчатый эпителий окрашивался в синий цвет, ядро и реснички в фиолетовый, выявлялись нейтрофилы с ядром синего цвета и цитоплазмой, полностью заполненной гранулами катионных белков ярко зеленого цвета, свободно лежащих гранул катионных белков в мазках не обнаружено (рис. 1). С помощью полуколичественного метода определен средний цитохимический показатель катионных белков нейтрофилов (СЦК), равный у здоровых людей 2,6+0,04.
В группе больных, с выявленным носительством золотистого стафилококка в мазках по Романовскому-Гимзе определялось значительное количество нейтрофилов, практически заполняющих все поле зрения и составляющих 67,2+7,4 на 100 клеток, СПД эпителия составил 1,07+0,01, ИЦК - 0,18+0,03. Все нейтрофилы содержали ярко-зеленые гранулы, заполняющие всю цитоплазму и множество гранул катионного белка, вышедших из клеток и свободно лежащих в мазке. СЦК катионных белков составил 2,9+0,5 (рис. 2). Возможно наличие золотистого стафилококка усиливает реакцию клеток местной иммунной системы, в частности нейтрофилов, вырабатывающих значительное количество биологически активного вещества, обладающего бактериостатическим действием, в результате которого, симптомов воспаления не развивается, но и элиминации возбудителя также не происходит.
У больных острым гнойным риносинуситом в мазках по Романовскому-Гимзе определялось значительной количество нейтрофилов - 82,8+11,9 на 100 клеток, в 45,3 +2,4% случаев в лейкоцитах определялись фагоцитированные микроорганизмы (рис. 3). В 20,2+2,4% случаев микроорганизмы свободно находились на поверхности эпителия и в разрушенных нейтрофилах, что свидетельствует о незавершенности фагоцитоза. Бактериологическое исследование выявило разнообразие микроорганизмов, преобладающими были St. Pneumonia (54%), St. Epidermidis (41%), другие (5 %).
При определении состояния эпителиальных клеток оценивался класс деструкции, рассчитывались коэффициенты: СПД эпителиоцитов, который составил - 1,22 + 0,3 (в 2,5 раза выше, чем у здоровых лиц), ИЦК также был повышен- 0,35 +0,1 (рис. 4, 5, 6).
При определении функциональной активности нейтрофилов выявлено значительное количество нейтрофилов, в цитоплазме которых количество гранул катионных белков было снижено, показатель СЦК составил 1,99+0,08, в некоторых нейтрофилах определялись микроорганизмы синего цвета и полное отсутствие гранул катионного белка.
По мере стихания воспалительного процесса количество нейтрофилов снижалось: через 4 дня после начала лечения до 20+0,3, через 7 дней после начала лечения до 12,2+0,2, при этом количество нейтрофилов, цитоплазма которых полностью заполнена гранулами кати-онного белка, возросло, СЦК составил 2,11+0,03 и 2,52+0,02 соответственно, отмечался выход катионных белков из клеток (рис 4, 5, 6, 7).
Интерес представляют случаи острого затяжного риносинусита (длительностью более 1 месяца), при котором цитохимический показатель катионных белков в нейтрофилах в течение лечения длительно оставался сниженным (1,98+0,02), выхода катионных белков за пределы цитоплазмы нейтрофилов не наблюдалось, при этом определялось множество клеток (42,3+9,2%) с разрушенными ядрами и выходом ядерных гистонов.
Рис. 4. Количество нейтрофилов в мазках у исследуемых групп больных.
Рис. 5. Индексы деструкции эпителия (СПД, ИЦК) у исследуемых групп больных
Рис. 6. СЦК катионных белков у исследуемых групп больных
Данные результаты свидетельствуют о том, что при развитии острого воспаления снижение функциональной активности нейтрофилов приводит к возникновению заболевания. В дальнейшем включаются дополнительные механизмы, направленные на элиминацию возбудителя, одним из которых является увеличение функциональной активности нейтрофилов и выброс ими высоко активных катионных белков. Катионные белки благодаря положительному заряду, контактируют с отрицательно заряженной внешней мембраной микробов, вызывая нарушение в структуре оболочки микроорганизмов, повышается её проницаемость, резистентность микроба резко снижается. Кроме того, катионные белки способствуют повышению проницаемости стенок микрососудов и действуют как сигнал для выброса медиаторов воспаления, прежде всего, гистамина [8].
У больных, страдающих хроническим гнойным риносинуситом (IV группа) в период обострения количество нейтрофилов составило -44,2+7,6 (данный показатель в 1,5 раза ниже, чем при остром воспалении), СПД эпителиоцитов составил 2,6 + 0,4, а ИЦК был значительно выше - 0,85 + 0,1 (рис. 5). В межприступный период отмечалось единичное количество нейтрофилов, выраженная деструкция (СПД - 2,15+ 0,11, ИЦК - 0,71+0,09), множественные «голые ядра», гипохромия ядер, наличие множества вакуолей в цитоплазме респираторного эпителия.
Лизосомально-катионный тест показал резкое снижение функциональной активности нейтрофилов, как в период обострения, так и в межприступный период, СЦК составил 1,64+0,03 и 1,97+0,04 соответственно. Отмечалось значительное количество 62,3+11,2% полностью разрушенных нейтрофилов, множество жизнеспособных (прокрашенных в синий цвет) микроорганизмов, свободно лежащих в мазке в цитоплазме разрушенных нейтрофи-лов, что говорит о незавершенности фагоцитоза, недостаточности выработки нейтрофила-ми катионных белков и как следствие этого, угнетение антимикробной защиты (рис. 8). Выводы:
1. При риноцитологическом исследовании острого гнойного ринусинусита выявлено повышенное количество нейтрофилов, функция которых по данным лизосомально-катионного теста снижена, при этом коэффициенты деструкции эпителия существенно не отличались от группы контроля. В результате лечения количество нейтрофилов уменьшилось, их функциональная активность увеличилась (увеличение СЦК до 2,52+0,03 через 7 дней после начала лечения), что свидетельствует об адекватной неспецифической резистентности слизистой оболочки полости носа, способствующей элиминации возбудителя и стиханию воспалительного процесса.
2. При затяжном течении остром риносинусита деструкция эпителиоцитов была более выражена, о чем свидетельствует повышение коэффициентов деструкции. Кроме того, не смотря на проводимое лечение, содержание катионных белков не изменилось: СЦК оставался низким, что указывает на недостаточную функциональную активность нейтрофилов. Таким образом, снижение СЦК до 1,98+0,02 и сохранение его значений на низком уровне в течение длительного времени может служить показанием для назначения иммунокорригирующей терапии.
3. При хроническом риносинусите выявлено угнетение клеточных структур неспецифической резистентности, как в период ремиссии, так и в период обострения болезни, проявляющееся в снижении СЦК катионных белков, увеличении индексов деструкции эпителиоцитов, появлении гиперхромии ядер и наличии голых ядер, что делает необходимым назначение иммунокоррегирующей терапии, как при обострении процесса, так и в межприступный период с целью профилактики рецидивов.
4. При увеличении СЦК до 2,8 +0,04 можно заподозрить носительство микроорганизмов в слизистой оболочки носа, что требует дополнительного микробиологического исследования.
5. Лизосомально-катионный тест может служить критерием контроля эффективности лечения острых и хроническихриносинуситов: при значениях СЦК катионных белков больше 2,11+0,03-лечение можно считать эффективным, меньше - 1,64+0,03 - неэффективным.
Научные статьи
ЛИТЕРАТУРА
1. Абрамова Т. В. Количество катионных белков в гранулах нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите // Медицинская иммунология. -2003. Т. 5. - №1-2. - С. 137-141.
2. Арефьева Н. А. Иммуноцитологические исследования в ринологии: Учебное пособие. - Уфа, 2005. - 56 с.
3. Занкеева А. Г. Оптимизация оценки эффективности лечения при рецидивирующем бронхите у детей с использованием микроэлектрофореза назальных эпителиоцитов: автореф. дис. ...канд. мед. наук. - Пермь, 2009. - 26 с.
4. Иммунология, иммунопатология и проблемы иммунотерапии в ринологии /Под ред. Н. А Арефьевой. - Уфа, БГМУ. - 1997. - 120 с.
5. Ковальчук Л. Р. Актуальные проблемы оценки иммунной системы человека на современном этапе // Иммунология. - 1990. № 5. С. 4-7.
6. Леонтьев И. Г. Перекисное окисление липидов и содержание катионных белков при лечении хронического уретрогенного простатита лазеромагнитоэлектростимуляцией: автореф. дис. . канд. мед. наук. - Тюмень, 2006. - 24 с.
7. Матвеева Л. А. Местная защита респираторного тракта у детей - Томск: Изд-во Том. ун-та, 1993. - 276 с
8. Матвеева Л. А. Осин А. Я. Местный иммунитет при болезнях легких у детей. - Томск, 1986. - 104 с.
9. Пигаревский В. Е., Зернистые лейкоциты и их свойства.: М. Медицина, 1978, 78 с
10. Рязанцев С. В. Роль слизистой оболочки в защите ЛОРорганов от потенциально патогенных для организма антигенных факторов // Вестн. оторинолар. N 3. - 2000, С. 60-64
Безрукова Евгения Валерьевна - к. м. н., доцент каф. оториноларингологии СПбГМА им. И. И. Мечникова.
195298, СПб., пр. Пискаревский, дом 47, пав. №19, тел. 8-812- 543-94-13, ban_@mail.ru; Хмельницкая Наталия
Михайловна - профессор, д. м. н, зав. каф. патологической анатомии им. О. К. Хмельницкого СПбМАПО. 193015,
Санкт-Петербург, ул. Кирочная, д. 41. Тел. 8-812-303-50-72, k6180@yandex.ru; Калашникова Ольга Вадимовна -
клинический ординатор курса СПбГМА им. И. И. Мечникова. 195298, СПб., пр. Пискаревский, дом 47, пав. №19,
тел. 8-812-543-94-13; Абсалямова Милауша Ибрагимовна - студентка 6 курса СПбГМА им. И. И. Мечникова.
195298, СПб., пр. Пискаревский, дом 47, пав. №19, тел. (812) 543-94-13.
УДК: 616. 28-008: 577. 125
АУДИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ РИСКА РАЗВИТИЯ СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ТУГОУХОСТИ У РАБОТНИКОВ ПРОИЗВОДСТВА С ВЫСОКИМ УРОВНЕМ ШУМА С. Г. Бойко1, А. М. Канева2, Н. Н. Потолицина2, Е. Р. Бойко2, Ю. К. Янов3. AUDIOLOGICAL PECULIARITIES AND BIOLOGICAL INDICES OF SENSONEURAL HEARING LOSS RISK DEVEKOPMENT IN WORKERS WITH HIGH LEVEL OF NOISE
S. G. Boiko, A. M. Kaneva, N. N. Potolitsina, E. R. Bojko, Yu. K. Yanov
1 - Коми филиал ГОУ ВПО «Кировская государственная медицинская академия» в г. Сыктывкаре
(Зав. курсом оториноларингологии - к. м. н. С. Г. Бойко)
2 - Учреждение РАН Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар Директор - академик РАН Ю. С. Оводов)
3 - ФГУ «Санкт-Петербургский НИИ ЛОР Минздравсоцразвития России» (Директор - Засл. врач РФ, проф. Ю. К. Янов)
В работе проведено исследование состояния слуховой функции в зависимости от содержания в организме витаминов А и Е, а также уровня сывороточного апопротеина Е у здоровых лиц, работающих на производстве с уровнем шума на рабочем месте 90Дб. Установлено, что неудовлетворительное содержание витамина А и Е на момент обследования у этих лиц не коррелировало с объективными данными аудиологического обследования и показателями им-педансометрии. Показано, что пониженный или нормальный уровень апопротеина Е у работ-
