CC BY
9КЛИНИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ ф
Новости клинической цитологии России Russian News of Clinical Cytology
2023, т.27, №4, с. 15-18 2023, vol.27, №4, pp. 15-18
https://doi.org/10.24412/1562-4943-2023-4-0003
ЦИТОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛИ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ. КЛИНИЧЕСКИЙ СЛУЧАЙ
Т.Л. ПОЛОЗ1И, С.Е. ТИТОВ23, Ю.А. ВЕРЯСКИНА2, Н.Ю. ИЗУПОВА1, А.А. ДЫМОВ14
1АО МЦ Авиценна, группы компании Мать и дитя, Россия, Новосибирск 2Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Россия, Новосибирск 3ЗАО «Вектор-Бест», Россия, Новосибирск
4ГБУЗ НСО Городская клиническая больница №1, Россия, Новосибирск
Резюме
Цитологическое исследование материала тонкоигольной аспирационной биопсии узлов щитовидной железы позволяет провести морфологичекую верификацию на дооперационном этапе и определить или скорректировать тактику ведения пациента. Особую проблему представляет собой дифференциальная диагностика онкоцитарных опухолей ЩЖ: онкоцитарной фолликулярной опухоли и онкоцитарной карциномы. В статье представлен клинический случай диагностики онкоцитарной карциномы щитовидной железы у женщины 42 лет. Представлены данные цитологического исследования материала ТИАБ, молекулярно-генети-ческого исследования на цитологическом материале -анализ экспрессии миРНК с помощью ПЦР с обратной транскрипцией и детекцией результатов в режиме реального времени (миР-14бЬ-5р, -187-3р, -205-5р, -221-3р, -551Ь-3р, -375, -183-5р, -199Ь-5р), а также данные гистологического и иммуногистохимического исследования удаленной опухоли. Использование молекулярных маркеров при исследовании цитологического материала позволило установить правильный диагноз на дооперационном этапе, что свидетельствует о перспективности применения данного подхода для разрешения сомнительных или спорных случаев при цитологическом анализе.
Ключевые слова: щитовидная железа, тонкоигольная пункционная биопсия, цитологическое исследование, миРНК.
Информация об авторах: Полоз Т.Л. - https://orcid.org/0000-0003-4006-7560 Титов С.Е. - https://orcid.org/0000-0001-9401-5737 Веряскина Ю.А. - https://orcid.org/0000-0002-3799-9407 Изупова Н.Ю. - https://orcid.org/0009-0003-2079-2260 Дымов А.А. - https://orcid.org/0009-0005-3444-9521
Автор, ответственный за переписку:
Полоз Татьяна Львовна - e-mail: dkbcyto@mail.ru
Как цитировать:
Полоз Т. Л., Титов С.Е., Веряскина Ю.А., Изупова Н.Ю., Дымов А.А. Цитологическая диагностика опухоли щитовидной железы. Клинический случай. Новости клинической цитологии России. 2023;27(4):15-18. https:// doi.org/10.24412/1562-4943-2023-4-0003
Введение
Цитологическое исследование материала тонкоигольной аспирационной биопсии (ТИАБ) узлов щитовидной железы (ЩЖ) обусловлено необходимостью верификации патологического процесса и дифференциальной диагностики между доброкачественными узловыми образованиями и злокачественными опухолями на дооперационном этапе [1- 5].
Особую проблему представляет собой дифференциальная диагностика онкоцитарных опухолей ЩЖ (опухолей из клеток Гюртле или В-клеток). Онкоциты характеризуются накоплением огромного количества аномальных митохондрий. Они могут присутствовать при всех типах тиреоидита (наиболее часто - при аутоиммунном тиреоидите), узловом зобе, аденоме, фолликулярной карциноме, папиллярной карциноме, низкодифференци-рованной карциноме щитовидной железы, и только при анапластической карциноме встречаются крайне редко. При цитологическом исследовании онкоцитарной фолликулярной опухоли и он-коцитарной карциномы материал представлен исключительно клетками онкоцитарного типа с обильной тонко гранулированной цитоплазмой, увеличенными, центрально или эксцентрически расположенными круглыми ядрами, заметными ядрышками. Клетки расположены отдельно или в синцитиальных пластах. Размер онкоцитов варьирует от гигантских клеток до небольших мо-номорфных клеток с высоким ядерно/цитполаз-матическим отношением. В клетках отмечают выраженный анизонуклеоз: большие гиперхром-ные ядра, с неровным контуром ядерной мембра-
ны, иногда с ядерными бороздами и псевдовключениями. Однако ядерная атипия онкоцитов сама по себе не является критерием злокачественности опухоли. Онкоцитарные пролифераты необходимо дифференцировать между неопухолевыми процессами (тиреоидит Хашимото и многоузловой зоб) и другими опухолями, в том числе папиллярной карциномой, медуллярным раком и опухолями паращитовидной железы.
Онкоцитарная опухоль может быть выявлена с помощью оценки соотношения митохондриаль-ной и ядерной ДНК, а онкоцитарная карцинома -с помощью исследования BRAF миР-221.
ОФО и ОК в гистологической классификации эндокринных и нейроэндокринных опухолей под редакцией ВОЗ (WHO Classification of Tumors (2021)) были выделены в отдельные от фолликулярных опухолей (ФО) нозологические единицы, что связано с морфологическим и генетическим различием этих новообразований. Характерной особенностью онкоцитарных опухолей, является отсутствие связи между клеточной атипией и злокачественностью. Существуют серьезные проблемы дифференциальной диагностики между он-коцитарными опухолями, фолликулярной карциномой, папиллярной карциномой, медуллярной карциномой и паратиреоидными опухолями. По классификации The Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology (BSRTC) 2022, онкоцитар-ные фолликулярные опухоли и онкоцитарные карциномы отнесены к категории IV: «Подозрение на фолликулярную опухоль», при которой рекомендовано выполнение молекулярно-гентического анализа (МГА) или гемитиреоидэктомия, являющаяся в данной ситуации, диагностической операцией.
Согласно клиническим рекомендациям 2020 года по диагностике и лечению дифференцированного рака щитовидной железы для дифференциальной диагностики опухолей ЩЖ в рамках цитологического заключения III, IV и V категорий системы Thyroid Bethesda System 2009 и 2017 г.г. рекомендовано молекулярно-генетическое исследование мутаций в гене BRAF и иных мутаций (RAS, RET/PTC, PAX8/PPAR-y., TERT и т. д.).
Исследования последнего десятилетия показывают, что микроРНК (миРНК) - короткие (1824 нуклеотида) молекулы РНК, играющие важную роль в регуляции экспрессии множества генов на посттранскрипционной стадии, могут быть использованы в качестве надежных биологических онкомаркеров [6,7]. Содержание многих миРНК существенно изменяется при развитии самых разнообразных опухолей, в том числе и новообразований ЩЖ [4, 8, 9]. Возможность выделять и анализировать экспрессию миРНК из материала препаратов, приготовленных и использованных для цитологического исследования узлов ЩЖ, позволяет дополнить цитологический метод диагностики и повысить его диагностическую точность.
Клинический случай
Женщина, 42 года. По данным ультразвукового исследования щитовидной железы: структура железы неоднородная; в левой доле лоцируется гипо-эхогенное образование размерами 23*20*18мм, с нечетким контуром; при ЦДК - со смешанным типом кровотока. Пациентке выполнена ТИАБ узла под контролем УЗИ.
При цитологическом исследовании в препаратах, полученных при ТИАБ, окрашенных по методике Май-Грюнвальд-Гимза, материал - клеточный, коллоид отсутствует, присутствуют многочисленные преимущественно разрозненно расположенные крупные и мелкие клетки, с относительно обильной зернистой цитоплазмой, с четкими контурами, центрально, или эксцентрически расположенными крупными округлыми ядрами; в цитоплазме отдельных клеток имеются крупные оксифильные включения, такие же оксифильные фрагменты встречаются внеклеточно (амилоид?) (вклейка 2, рис. 1,2). Цитологическое заключение: цитологическая картина подозрительна по наличию медуллярного рака щитовидной железы. Bethesda V (предположительно ЗНО).
Проведен анализ экспрессии миРНК с помощью ПЦР с обратной транскрипцией и детекцией результатов в режиме реального времени [10]. Для выделения миРНК цитологический препарат соскребали со стекла в пробирку и добавляли 600 мкл лизирующего буфера (4 М гуанидин изотио-цианат, 25 мМ цитрат натрия, 0,3% саркозил, 3% ДТТ), расфасованного в бескислородной атмосфере (ЗАО "Вектор-Бест", Россия). Пробирки помещали в термошейкер на 10 мин при 65° С. Раствор центрифугировали 2 мин. при 10 000 g, переносили супернатант в новые пробирки и добавляли к нему равный объем изопропанола, перемешивали и оставляли при комнатной температуре на 5 мин. Центрифугировали 10 мин при 12 000 g, суперна-тант сливали, осадок промывали: 500 мкл 70% этанола, затем 300 мкл ацетона. Осадок растворяли в 200 мкл деионизованной воды.
МиРНК для классификации опухолей ЩЖ были выбраны, исходя из литературных данных: миР-146Ь-5р, -187-3р, -205-5р, -221-3р [10-12]-551Ь-3р, -375, -183-5р [11,13-15], -199Ь-5р [15]. Нормализацию данных проводили на миР-197-3р.
Таким образом, при проведении молекулярно-генетического анализа материала, смытого с цитологических препаратов, были выявлены маркеры злокачественности, профиль молекулярных маркеров соответствовал фолликулярной опухоли, мутация V600E в гене
BRAF не выявлена, отношение митохондриаль-ной и ядерной ДНК выше нормы. Таким образом молекулярный профиль опухоли соответствовал онкоцитарной карциноме (риск злокачественности 85%).
Пациентке была выполнена тиреоидэктомия. По результатам патологанатомического исследования удаленной опухоли выдано следующее заключение: онкоцитарная карцинома щитовидной
железы с инвазией в сосуды (вклейка 2, рис.3.). При иммуногистохимическом исследовании материала опухоли отмечена экспрессия Calcitonin, CEA, CK5 клетками опухоли; экспрессия клетками опухоли Thyroglobulin и CK8 - слабо положительная
Обсуждение
К онкоцитарным опухолям щитовидной железы относятся ОФО и ОК. Цитологическая картина аденомы и карциномы из онкоцитов идентична и диагноз может быть определен только после гистологического исследования удаленного узла. В связи с этим использование в качестве дополнительных опухолевых маркеров мРНК может сделать исследование материала ТИАБ более точным для определения последующей клинической тактики и прогноза для пациента. Следует отметить, что уровень экспрессии миРНК может изменяться в зависимости от типа новообразования, и в описанном случае профиль экспрессии миРНК не соответствовал медуллярному раку, превышение нормы отношения митохондриальной и ядерной ДНК свидетельствовало в пользу онкоцитарной опухоли.
Этот пример показывает, что использование молекулярных маркеров при исследовании цитологического материала может позволить установить или уточнить диагноз на дооперационной стадии, при разрешении спорных случаев цитологического исследования.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Ali S. Z., Cibas E. S. The Bethesda system for reporting thyroid cytopathology. Springer NewYork, 2010;37-87.
2. Baloch ZW, LiVolsi VA, Asa SL, Rosai J, Merino MJ, Randolph G, Vielh P, DeMay RM, Sidawy MK, Frable WJ. Diagnostic terminology and morphologic criteria for cytologic diagnosis of thyroid lesions: a synopsis of the National Cancer Institute Thyroid Fine-Needle Aspiration State of the Science Conference. Diagn Cytopathol. 2008 Jun;36(6):425-37. https://doi.org/10.1002/dc.20830
3. Montone KT, Baloch ZW, LiVolsi VA. The thyroid Hurthle (oncocytic) cell and its associated pathologic conditions: a surgical pathology and cytopathology review. Arch Pathol Lab Med. 2008 Aug;132(8):1241-50. https://doi.org/10.5858/2008-132-1241-tthoca
4. Pallante P, Battista S, Pierantoni GM, Fusco A. Deregulation of microRNA expression in thyroid neoplasias. Nat Rev Endocrinol. 2014 Feb;10(2):88-101. https://doi.org/10.1038/nrendo.2013.223
5. Patology and Genetics of Tumours of Endocrine Organs. Delellis R.A., Lloyd R.V., Heitz P.U., Eng C., editors, Lyon, 2004.
6. Lagos-Quintana M, Rauhut R, Lendeckel W, Tuschl T. Identification of novel genes coding for small expressed RNAs. Science. 2001 Oct 26;294(5543):853-8. https://doi.org/10.1126/science.1064921
7. Wang J, Chen J, Sen S. MicroRNA as Biomarkers and Diagnostics. J Cell Physiol. 2016 Jan;231(1):25-30. https://doi.org/10.1002/jcp.25056
8. Cancer Genome Atlas Research Network. Integrated genomic characterization of papillary thyroid carcinoma. Cell. 2014 Oct 23;159(3):676-90. https://doi.org/10.1016/j.cell.2014.09.050
9. Swierniak M, Wojcicka A, Czetwertynska M, Stachlewska E, Maciag M, Wiechno W, Gornicka B, Bogdanska M, Koperski L, de la Chapelle A, Jazdzewski K. In-depth characterization of the microRNA transcriptome in normal thyroid and papillary thyroid carcinoma. J Clin Endocrinol Metab. 2013 Aug;98(8):E1401-9. https://doi.org/10.1210/jc.2013-1214
10. Titov SE, Ivanov MK, Karpinskaya EV, Tsivlikova EV, Shevchenko SP, Veryaskina YA, Akhmerova LG, Poloz TL, Klimova OA, Gulyaeva LF, Zhimulev IF, Kolesnikov NN. miRNA profiling, detection of BRAF V600E mutation and RET-PTC1 translocation in patients from Novosibirsk oblast (Russia) with different types of thyroid tumors. BMC Cancer. 2016 Mar 9;16:201.
https://doi.org/10.1186/s12885-016-2240-2
11. Dettmer M, Perren A, Moch H, Komminoth P, Nikiforov YE, Nikiforova MN. Comprehensive MicroRNA expression profiling identifies novel markers in follicular variant of papillary thyroid carcinoma. Thyroid. 2013 Nov;23(11):1383-9. https://doi.org/10.1089/thy.2012.0632
12. Nikiforova MN, Tseng GC, Steward D, Diorio D, Nikiforov YE. MicroRNA expression profiling of thyroid tumors: biological significance and diagnostic utility. J Clin Endocrinol Metab. 2008 May;93(5):1600-8. https://doi.org/10.1210/jc.2007-2696
13. Abraham D, Jackson N, Gundara JS, Zhao J, Gill AJ, Delbridge L, Robinson BG, Sidhu SB. MicroRNA profiling of sporadic and hereditary medullary thyroid cancer identifies predictors of nodal metastasis, prognosis, and potential therapeutic targets. Clin Cancer Res. 2011 Jul 15;17(14):4772-81. https://doi.org/10.1158/1078-0432.ccr-11-0242
14. Hudson J, Duncavage E, Tamburrino A, Salerno P, Xi L, Raffeld M, Moley J, Chernock RD. Overexpression of miR-10a and miR-375 and downregulation of YAP1 in medullary thyroid carcinoma. Exp Mol Pathol. 2013 Aug;95(1):62-7.
https://doi.org/10.1016/j.yexmp.2013.05.001
15. Rossing M, Borup R, Henao R, Winther O, Vikesaa J, Niazi O, Godballe C, Krogdahl A, Glud M, Hjort-Sorensen C, Kiss K, Bennedbsk FN, Nielsen FC. Down-regulation of microRNAs controlling tumourigenic factors in follicular thyroid carcinoma. J Mol Endocrinol. 2012 Jan 25;48(1):11-23. https://doi.org/10.1530/jme-11-0039
CYTOLOGICAL DIAGNOSTICS OF A THYROID TUMOR. A CASE REPORT
T.L. POLOZ1M, S.E. TITOV23, YU.A. VERYASKINA2, N.YU. IZUPOVA4, A.A. DYMOV4
1Medical HospitalAvicenna, Novosibirsk, Russia.
2Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia. 3CJSC "Vector-Best", Novosibirsk, Russia.
4Municipal budget healthcare institution Municipal Clinical Hospital №1", Novosibirsk, Russia.
Abstract
Cytological examination of fine-needle aspiration biopsy material of thyroid nodules allows for morphological verification at the preoperative stage and determines or adjusts patient management tactics. A special problem is the differential diagnosis of oncocytic thyroid tumors: oncocytic follicular tumor vs oncocytic carcinoma. The article presents a clinical case of diagnosis of oncocytic thyroid carcinoma in a 42-year-old woman. FNAB cytology, a molecular genetic analysis on cytological material (analysis of miRNA expression using PCR with reverse transcription and detection of results in real time -miR-146b-5p, -187-3p, -205-5p, -221 -3p, -551b-3p, -375, -183-5p, -199b-5p), as well as histology and immunohistochemical studies of the excised tumor are presented. The use of molecular markers made it possible to establish the correct diagnosis at the preoperative stage, which indicates the promise of using this approach to resolve doubtful or controversial cases.
Keywords: thyroid gland, fine-needle biopsy, cytological examination, miRNA.
Information about the author:
Poloz T.L. - https:// orcid.org/0000-0003-4006-7560 Titov S.E. - https://orcid.org/0000-0001-9401-5737 Veryaskina Yu.A. - https://orcid.org/0000-0002-3799-9407 Izupova N.Yu. - https://orcid.org/0009-0003-2079-2260 Dymov A.A. - https://orcid.org/0009-0005-3444-9521
Corresponding author:
Poloz Tatiana Lvovna - e-mail: dkbcyto@mail.ru To cite this article:
Poloz T.L., Titov S. E., Veryaskina YU.A., Izupova N. YU., Dymov A. A. Cytological diagnostics of the thyroid neoplasm. A case report. Russian News of Clinical Cytology. 2023;27(4):15-18. https://doi.org/10.24412/1562-4943-2023-4-0003
The authors declare no conflict of interest.
Иллюстрации к статье «ЦИТОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛИ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ. КЛИНИЧЕСКИЙ СЛУЧАЙ». Полоз Т. Л., Титов С.Е., Веряскина Ю.А., Изупова Н.Ю., Дымов А.А., стр. 15
Illustrations for the article «CYTOLOGICAL DIAGNOSTICS OF A THYROID TUMOR. A CASE REPORT». Poloz T.L., Titov S.E., Veryskina YU.A., Izupova N.YU., Dymov A.A., page 15
Рис. 1-2. Материал ТИАБ образования щитовидной железы. Присутствуют многочисленные, преимущественно разрозненно расположенные, крупные и мелкие клетки, с относительно обильной зернистой цитоплазмой, с четкими контурами, центрально, или эксцентрически расположенными крупными округлыми ядрами; в цитоплазме отдельных клеток имеются крупные ок-сифильные включения, такие же оксифильные фрагменты встречаются внеклеточно (амилоид?) Окрашивание по Паппенгейму, х 100.
Fig. 1-2. FNAB of thyroid neoplasm. There are numerous predominantly scatteredly located large and small cells, with relatively abundant granular cytoplasm, with clear contours, centrally or eccentrically located large rounded nuclei; in the cytoplasm of individual cells there are large oxyphilic inclusions; the same oxyphilic fragments are found extracellularly (amyloid?) Pappenheim staining, х 100.
Рис. 3. Гистологический препарат. Онкоцитарная карцинома щитовидной железы. Окрашивание гематоксилином и эозином, х 400. Fig. 3. Histological slide. Oncocytic carcinoma of the thyroid gland. Hematoxylin-eosin staining, х 400.
