CC BY
39
Перспективы использования микробной экотехнологии для переработки отходов птицеферм // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. 2011. №6. С.30-32. 3. Тремасов М.Я., Иванов А.А. Новые технологии в утилизации органических отходов и реабилитации почвы // Ветеринарный врач. 2008. №1. С.2-4. 4. Тюрин В.Г. Экологический мониторинг территорий животноводческих предприятий // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве» -Чебоксары, 2004. С.240-244.
ИЗУЧЕНИЕ ОБЕЗВРЕЖИВАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ -
ДЕСТРУКТОРОВ
Матросова Л.Е.
Резюме
Выявлена антагонистическая активность микроорганизмов, используемых для деградации органического сырья. На модельных лабораторных опытах установлено обезвреживающее действие данных изолятов в отношении энтеробактерий.
STUDY NEUTRALIZES THE ACTION OF MICROORGANISMS-DESTRUCTORS
Matrosova L.E.
Summary
Antagonistic activity of microorganisms is revealed, used for the degradation of organic raw materials. On modeling laboratory trials it is revealed neutralizing action of data microorganisms concerning enterobacteria.
УДК: 577:231
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ДРОЖЖЕВОЙ КУЛЬТУРЫ
*Матросова Л.Е. - зав. сектором; Шамилов Н.М. - к.в.н.
* Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности
Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана
e-mail: M.Lilia.Evg@yandex.ru
Ключевые слова: дрожжи, лабораторные животные, токсичность, безвредность.
Keywords: yeast, laboratory animals, toxicity, innocence.
Последние десятилетия характеризуются возрастанием интереса использования биотехнологий во многих сферах деятельности человека. Биопрепараты широко используются в сельском хозяйстве в качестве альтернативы химических фунгицидов, для реабилитации почвы в условиях техногенеза, в ветеринарии и медицине и т.п.
Среди разнообразия микроорганизмов, используемых в качестве объекта биотехнологии, привлекают внимания дрожжевые грибы. Большинство дрожжей непатогенные, быстро адаптируются и способны выживать в экстремальных условиях. Преимущество дрожжей заключается в «технологичности» - высокая скорость роста на дешевых субстратах.
Дрожжевые организмы находят применение при создании систем биодеградации углеводородов и ксенобиотиков, а также очистки окружающей среды от тяжелых металлов [1, 4, 5]. Дрожжевые культуры используются и в качестве средств - для ускоренной деструкции различного вида органического сырья [2, 3].
Крайне важным критерием применимости микроорганизмов в качестве объекта микробной технологии является безопасность для человека и животных.
В связи с этим цель данной работы заключалась в токсикологической оценке аскомицетной дрожжевой культуры Candida krusei-96, используемого в составе консорциума для деструкции органического сырья.
Материалы и методы. В опытах на белых мышах массой тела 18-20 г при однократном введении изучена вирулентность, токсичность, токсигенность исследуемого микроорганизма.
Для исследования вирулентности использовали микробную суспензию суточной культуры, смытой с питательной среды 0,9 %-ным раствором натрия хлорида. Полученную взвесь микроорганизмов вводили белым мышам (n=10) в дозе от 105 до 1010 КОЕ/жив однократно внутрибрюшинно и пятикратно перорально (по одной дозе ежедневно в течение 5 дней).
Схема постановки опытов исследования токсичности изолята идентична исследованию вирулентности. Отличие состояло в инактивации (прогревание в течение 1 ч при 1000С) микробной суспензии.
Токсигенность штамма изучали при внутрибрюшинном введении центрифугата белым мышам (n=10), который получали центрифугированием культуральной жидкости в течение 15 мин при 3000 g. Контролем служила группа мышей, получавших стерильный бульон Сабуро.
Наблюдения за животными проводили на протяжении 7 суток после окончания курса инъекций или перорального введения.
На следующем этапе работы оценивалось возможное раздражающее действие.
Раздражающее действие на слизистую оболочку глаз оценивали путем закапывания 1 капли взвеси живой культуры, содержащей 1х10! КОЕ/мл, в конъюнктивальный мешок правого глаза кроликов однократно. В левый глаз (контроль) закапывали аналогичное количество стерильного бульона Сабуро.
Опыты по оценке дермальной токсичности исследуемого штамма проведены на 30 белых крысах живой массой 180-200 г., разделенных по принципу аналогов на 3 группы. Определение дермальной токсичности проводили путем однократной накожной аппликации на выстриженный участок кожи салфетки, пропитанной суспензией исследованных организмов в дозе 1010 КОЕ/мл. Крысам второй группы суспензию наносили многократно в течение 7 суток в аналогичной дозе. Крысы 3 группы служили контролем, им накожно наносили стерильную питательную среду в эквивалентном объеме.
После последней аппликации микробной суспензии часть животных 2 группы убивали для оценки возможных гемато-биохимических и гистологических изменений.
С целью более полного изучения безопасности микроорганизма, были испытаны высокие дозы изолятов при многократном (30 сут)
4 3 8
интраназальном (10 КОЕ/м ) и пероральном (10 КОЕ/мл) введении белым крысам (п=10). При длительном воздействии штамма изучали общетоксическое действие (динамика массы тела, гемато-биохимические показатели крови), специфические показатели взаимодействия микроорганизм-макроорганизм (дисбиотическое действие и диссеминация во внутренние органы).
Диссеминационный эффект в остром и хроническом экспериментах определяли методом отпечатка легких, сердца, печени, селезенки и почек и посевом крови на агаризованную среду (агар Сабуро) с последующим микроскопированием выросших колоний.
Результаты исследований. Однократное внутрибрюшинное и многократное пероральное введение инактивированной и неинактивированной микробной суспензии исследуемого штамма не приводило к гибели подопытных животных и видимым изменениям клинического состояния, что свидетельствует об отсутствии вирулентных и токсичных свойств. В течение всего периода наблюдения животные оставались активными, хорошо поедали пищевые рационы, не теряли в весе.
Штамм не проявляет токсигенных свойств, введение центрифугата не приводило к гибели животных и видимым отклонениям в клиническом состоянии.
Нанесение на слизистую оболочку глаза микробной суспензии и питательной среды приводило к слезотечению, проходящему в течение нескольких минут. В дальнейшем признаков раздражения слизистой
оболочки глаз, выражающихся в инъецировании сосудов конъюнктивы, гиперемии конъюнктивы и роговицы, отечности век не отмечалось, что свидетельствует об отсутствии раздражающих свойств Candida krusei-96.
Однократное и многократное нанесение микробной суспензии не приводило к функциональным нарушениям кожи (эритема, отек, трещины, изъязвления, повышение температуры).
Патологоанатомических изменений в гистологических препаратах внутренних органов и кожи белых крыс не обнаружено (см. рис.). В гистосрезе кожи не отмечалось нарушение целостности рогового слоя и его десквамации, набухание, отёчность клеток эпидермиса, гомогенизации и набухания соединительнотканных структур глубоких слоев кожи.
Рис - Кожа крысы, при многократном нанесении культуральной жидкости, Candida krusei-96 окраска гематоксилином и эозином, х210
Многократное интраназальное и пероральное введение исследуемого микроорганизма не приводило к изменению интегральных показателей состояния организма экспериментальных животных, оцениваемых по динамике массы тела в процессе эксперимента и в восстановительном периоде. У подопытных животных отмечался более высокий прирост массы.
Бактериологические исследования микрофлоры кишечника показали, что на фоне хронического воздействия Candida krusei-96 не происходит значимого изменения (дисбаланса) микробиоценоза кишечника крыс. Не отмечалось изменений концентрации и частоты высеваемости E.coli и других представителей условно-патогенной микрофлоры, а также снижения содержания бифидобактерий и лактобацилл, поддерживающих гомеостаз микроэкологии кишечника.
Статистически достоверной разницы в гемато-биохимических показателях крови подопытных и контрольных крыс не обнаружено.
Исследуемый микроорганизм не обладал способностью к диссеминации в кровь и внутренние органы подопытных животных.
Заключение. В опытах на лабораторных животных при различных путях введения Candida krusei-96 не выявлено общетоксического действия, о чем свидетельствуют результаты клинического наблюдения, гемато-биохимического анализа крови, патоморфологической картины внутренних органов и кожи, показателей микробиоценоза кишечника.
Полученные результаты по безвредности исследуемого микроорганизма являются предпосылкой для его использования в биотехнологической промышленности.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Гаранин Р.А., Лыков И.Н. Использование
дрожжей Saccharomyces cerevisiae в качестве биосорбента и биоаккумулятора катионов тяжелых металлов // АГРО XXI ВЕК. 2008. №46. С.42-43. 2. Иванов А.А., Матросова Л.Е., Тремасов М.Я. Биопрепарат для обезвреживания и очистки сточных вод // Достижения науки и техники АПК. 2012. №3. С.83-84. 3. Матросова Л.Е., Тремасов М.Я., Иванов А.А. Утилизация птичьего помета // Ветеринария. 2012. №10. С. 42-43. 4. Bankar A., Kumar A., Zinjarde S. Environmental and industrial applications of Yarrowia lipolytica // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2009. №4. P.847-865. 5. Production of eight different hydride complexes and nitrite release from 2,4,6-trinitrotoluene by Yarrowia lipolytica / A. Ziganshin, R. Gerlach, T. Borch et al. // Appl. Environ. Microbiol. 2007. V.73. №24. doi:10.1128/AEM.01296-07.
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ДРОЖЖЕВОЙ КУЛЬТУРЫ
Матросова Л.Е., Шамилов Н.М.
Резюме
В опытах на лабораторных животных установлена безвредность дрожжевой культуры Candida krusei-96, использованной в составе консорциума для деградации органического сырья.
THE TOXICOLOGIC AL EVALUATION OF YEST CULTURE
Matrosova L.E., Shamilov N.M.
Summary
In tests on laboratory animals established harmless yeast culture Candida krusei-96, used in the consortium for the degradation of organic raw materials.
УДК 619:631.145+637.12
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЕТЕРИНАРНОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ КРУПНЫХ МОЛОЧНЫХ КОМПЛЕКСОВ
Махиянов А.Р. - к.в.н.; Пичугина М.В. - аспирант;
Акмуллин А.И. - д.в.н., зав. кафедрой Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана
тел. (843) 273-97-15
Ключевые слова: рабочее время, ветеринарное обслуживание,
