CC BY
22
ТЕМА
ИННОВАЦИОННЫЕ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ПРОДУКЦИИ
УДК 634.85:57.088:577.212.3
Технологии ДНК-аутентификации в мониторинге качества продукции алкогольной промышленности
Е.Г. Лазарева; Х.Х. Гильманов; И.А. Ржанова; А.В. Бигаева*; С.В. Тюлькин, канд. с.-х. наук
ВНИИ пивоваренной, безалкогольной и винодельческой промышленности - филиал ФНЦ пищевых систем им. В. М. Горбатова РАН, Москва
Дата поступления в редакцию 17.06.2019 'tulsv@mail.ru
Дата принятия в печать 25.09.2019 © Лазарева Е.Г., Гильманов Х.Х, Ржанова И.А., Бигаева А.В., Тюлькин С.В, 2019
Реферат
Фальсификация продукции с заменой традиционных компонентов на более дешевые аналоги - одна из актуальных проблем алкогольной промышленности. При этом классические методологические базы оценки качества алкогольной продукции в большинстве случаев не располагают потенциалом распознавания множества современных «технологических решений». Соответственно весьма своевременен вопрос о разработке новых способов идентификации напитков, в том числе с применением технологии ДНК-аутентификации. Последнее предполагает проверку подлинности основного растительного ингредиента посредством молекулярно-генетического анализа остаточных количеств нуклеиновых кислот в сырье и в конечной готовой продукции. При этом основная проблема внедрения ДНК-аутентификации заключается в недостаточном развитии методологических основ выделения остаточных количеств нуклеиновых кислот из поликомпонентных биологических систем. Соответственно, основная цель работы состояла в анализе научно-методической литературы по методам экстракции остаточных нуклеиновых кислот из вина и пива, а также глобальная оценка фактической применимости ДНК-технологий для мониторинга фальсифицированной алкогольной продукции. Анализ научно-технического материала показал, что для выделения остаточной ДНК из вин в мировой практике широкое распространение получили три метода: Pereira, Savazzini and MartineLLi и Nakamura. Технологически выделение нуклеиновых кислот из пива возможно путем модификации одного из перечисленных выше способов, применяемых к вину. В статье исследованы генетические мишени, применяемые к исходному сырью: пивоваренным сортам ячменя и техническим сортам винограда.
Ключевые слова
вино; виноград; ДНК; идентификация; маркер; пиво; ПЦР; ячмень. цитирование
Лазарева Е.Г, Гильманов Х.Х., Ржанова И.А., Бигаева А.В, Тюлькин С.В. (2019) Технологии ДНК-аутентификации в мониторинге качества продукции алкогольной промышленности // Пиво и напитки. 2019. № 3. С. 6-9.
DNA Authentication Technologies in Monitoring the Quality of Alcohol Products
E.G. Lazareva; Kh.Kh. Gilmanov; I.A. Rzhanova; A. V. Bigaeva*; S. V. Tyulkin, Candidate of Agricultural Science All-Russian Scientific Research Institute of Brewing, Beverage and Wine Industry — Branch of V.M. Gorbatov Federal Research Center for Food Systems of RAS, Moscow
Received: June 17,2019 'tulsv@mail.ru
Accepted: September 25,2019 © Lazareva E. G, Gilmanov Kh. Kh, Rzhanova I A, Bigaeva A. V, Tyulkin S. V, 2019
Abstract
One of the urgent problems of the alcohol industry is the falsification of products with the replacement of traditional components with cheaper analogues. At the same time, the classical methodological bases for assessing the quality of alcoholic beverages in most cases do not have the potential to recognize many modern «technological solutions». Accordingly, the issue of developing new methods for identifying beverages, including using DNA authentication technology, is very timely. The latter involves the verification of the authenticity of the main plant ingredient by means of a molecular genetic analysis of the residual amounts of nucleic acids in the raw materials and in the final finished product. At the same time, the main problem with the introduction of DNA authentication is the insufficient development of the methodological basis for the extraction of residual amounts of nucleic acids from multicomponent biological systems. Accordingly, the main purpose of the work was to analyze the scientific and methodological literature on methods for extracting residual nucleic acids from wine and beer, as well as a global assessment of the actual applicability of DNA technologies for monitoring counterfeit alcoholic beverages. Analysis of scientific and technical material shows that in the world practice, three methods are widely used to isolate residual DNA from wines: Pereira, Savazzini & Martinelli, and Nakamura. Technologically, the selection of nucleic acids from beer is possible by modifying one of the above methods applied to wine. The article examines genetic targets applied to the initial raw materials: brewing barley varieties and technical grape varieties.
Key words
wine; grape; DNA; identification; marker; beer; PCR; barley. Citation
Lazareva E. G., Gilmanov Kh. Kh., Rzhanova I A, Bigaeva A. V, Tyulkin S. V. (2019) DNA Authentication Technologies in Monitoring the Quality of Alcohol Products // Beer and Beverages = Pivo i Napitki. 2019. No. 3. P. 6-9.
ПИВО и НАПИТКИ / BEER and BEVERAGES
3•2019
"инновационные методы контроля качества продукции
Введение. Алкогольная промышленность имеет большое значение для экономики Российской Федерации [1]. Значительный объем выпускаемой продукции приходится на винодельческую и пивоваренную отрасли.
Наличие на рынке большого количества продуктов-фальсификатов актуализирует вопрос о разработке новых методик оценки качества и безопасности продукции. При этом классические методологические базы оценки качества алкогольной продукции в большинстве случаев не располагают потенциалом распознавания множества современных «технологических решений». Соответственно, ключевая задача заключается в расширении области оценочных критериев более современной методологической базой, в частности технологиями ДНК-аутентификации.
ДНК-аутентификация алкогольной продукции — процесс проверки подлинности готового напитка посредством идентификации основного рас-
тительного ингредиента при помощи молекулярно-генетического анализа остаточных нуклеиновых кислот, экстрагируемых из клеточного дебриса продукта [2, 3].
Цель работы — анализ научно-методической литературы по методам экстракции остаточных нуклеиновых кислот из вина и пива, а также глобальная оценка фактической применимости ДНК-технологий для мониторинга фальсифицированной алкогольной продукции.
Результаты исследования. Анализ литературы по экстракции остаточной ДНК из клеточного дебриса вина указывает на следующие ключевые методы: Pereira [4], Savazzini and Martinelli [5] и Nakamura [6], а также их модификации [3]. Упомянутые два первых метода имеют общий этап выделения, который заключается в осаждении растительного дебриса вина центрифугированием, используя седиментаторы: хлорид натрия, 2-пропанол, ацетат натрия по отдельности или в комбинации последних
1 ЭТАП Преципитация растительного дебриса вина
Смешивание 10 мл вина с 7 мл 2-пропанола и выдержка полученной смеси в течение 2-х недель
при -20 °С. Преципитация растительного дебриса вина центрифугированием при 4000 д в течение 30 мин при комнатной температуре
2 ЭТАП
Ресуспендирование осадка растительного дебриса вина и его лизис
Ресуспендирование осадка в 750 мкл лизирующего буфера [20 мМ ЭДТА, 10 мМ Трис-НС1 (рН 8.0), 1.4 М NaCl, 2 % (в/о) ЦТАБ, 1 % (о/о), 2-меркаптоэтанол, 2% (в/о) ПВП, 20 мг/мл протеиназа К]; инкубация полученной смеси при 65 °С в течение 60 мин
4 ЭТАП Удаление РНК
Обработка РНКазой А (10 мг/мл) при 37 °С в течение 30 мин
3 ЭТАП
Депротеинизация нуклеопротеидного комплекса
Органическая экстракция равным объемом хлороформ : изоамилового спирта (24 : 1). Извлечение водной фазы центрифугированием при 13 000 д в течение 15 мин при 4 °С
5 ЭТАП
Осаждение неочищенной ДНК
Смешивание смеси с холодным 2-пропанолом в соотношении 1 : 0,6. Инкубация при -20 °С в течение ночи. Центрифугирование при 10 000 д в течение 15 мин при 4 °С
6 ЭТАП
Ресуспендирование осажденной ДНК
Ресуспендирование осадка в 300 мкл элюционного буфера [10 мМ Трис-HCl (pH 8.0), 1 мМ ЭДТА]
8 ЭТАП Осаждение отобранной водной фазы Повторение этапа 5 - 7 ЭТАП Депротеинизация Экстракция равным объемом нейтрального фенола; извлечение водной фазы центрифугированием при 13 000 д в течение 15 мин при 4 °С
V
9 ЭТАП
Отмывка осажденной ДНК Экспозиция осажденной ДНК в отмывочном буфере (76% этанол, 10 мМ ацетат аммония) в течение 5 мин. Удаление отмывочного буфера и подсушивание осадка при комнатной температуре 10 ЭТАП Ресуспендирование осажденной ДНК Ресуспендирование осадка в 50 мкл элюционного буфера [10 мМ Трис-НС1 (рН 8.0), 0.1 мМ ЭДТА] при комнатной температуре. Хранение препарата при -20 °С
Этапы пробоподготовки и выделения ДНК Vitis vinifera L. из вина методом Pereira
двух реактивов [4, 5]. Метод экстракции остаточной ДНК, описанный в работе Регепа [4], имеет наибольшую эффективность за счет высокого выхода выделяемых остаточных нуклеиновых кислот (см. рисунок).
Известен способ выделения остаточных нуклеиновых кислот из пива [2], который представляет собой модификацию метода Шкатша [6] для экстракции ДНК из вина. Модифицированный способ характеризуется ступенчатым ферментативным гидролизом полисахаридов и полипептидов растворенного лиофилизата, множественной процедурой осаждения и ресуспендирования нуклеопро-теидного комплекса, в том числе с целью очистки ДНК от полифенолов; этапом удаления РНК с последующей экстракцией нуклеиновых кислот органическими растворителями, а также дополнительной очисткой ДНК адсорбцией на магнитных частицах [2].
Модификация способа экстракции нуклеиновых кислот, адаптированного для выделения ДНК из образцов пива, имеет ряд отличительных признаков:
• время ступенчатого ферментативного гидролиза полисахаридов а-амилазой и полипептидов про-теиназой К увеличивается до 3 ч;
• время предварительного осаждения негидролизованного клеточного дебриса центрифугированием при 8000 g уменьшается до 1 мин;
• следующее за ним осаждение ну-клеопротеидного комплекса осуществляется смешиванием супер-натанта двумя объемами холодного абсолютного этанола;
• при последующем осаждении ну-клеопротеидного комплекса, наряду со ступенчатым добавлением в предварительно перенесенный прозрачный супернатант 10 мкл 3 М ацетата натрия и двух объемов холодного изопропанола, дополнительно вносится 3 мкл линейного полиакриламида Ethachinmate;
• после этапов удаления РНК и де-протеинизации, впоследствии ре-суспендированый в элюционном буфере осадок нуклеиновых кислот подвергается дополнительному этапу очистки адсорбцией на магнитных частицах, что служит одним из ключевых элементов модификации способа экстракции остаточных количеств ДНК пивного сырья [2].
Маркеры, используемые для ДНК-аутентификации вина. Один
Z
ш
I
0
1
<
I ш Ь
3•2019
ПИВО и НАПИТКИ / BEER and BEVERAGES
инновационные методы контроля качества продукции*
ä ш
I
0
1
<
I ш I-
из способов идентификации сортов винограда в вине базируется на применении микросателлитных локусов ядерной ДНК (SSR) [3]. Для этого используют базу маркеров для паспортизации сортов и гибридов винограда.
SSR-маркеры подходят только для определения ограниченного ассортимента вин, так как ПЦР по анализируемым локусам Vitis vinifera L. в готовом продукте имеет низкий уровень воспроизводимости [7, 8].
Для ДНК-аутентификации вин, кроме микросателлитных локусов, применяют SNP-маркеры [9, 10]. Они обладают высоким идентификационным потенциалом благодаря возможности определения отдельных генотипов винограда как в моносортовых, так и в купажных винах [11]. Главное преимущество заключается в возможности идентификации при анализе фрагментированной нуклеиновой кислоты низкого качества [3].
Маркеры, используемые для ДНК-аутентификации пива. На примере идентификации остаточных нуклеиновых кислот винных сортов винограда Vitis vinifera L. рассмотрены микросателлитные локусы для ДНК-аутентификации пивоваренных сортов ячменя [12, 13]. Основная процедура идентификации — фрагментарный анализ амплифицированных ПЦР-продуктов.
Наряду с SSR-маркерами высокой идентификационной способностью обладают SNP-маркеры, используемые для геноидентификации сортов ячменя, в том числе пивоваренных [14, 15].
Известен ряд генетических мишеней, используемых в качестве молекулярных маркеров для идентификации сортов пивоваренного ячменя в целях ДНК-аутентификации коммерческого пива [2]. В частности, из не имеющих корреляционную связь с показателями качества готового продукта:
• полигалактуроназа — фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление а-1,4-гликозидных связей в пектинах. В качестве ДНК-мишени выбирается локус его гена (HvPGl);
• гордеины — полиморфные белки зерна ячменя, кодируемые 7 локусами HrdA-G, локализованными в коротком плече 5-й хромосомы Hordeum vulgare. Данный блок мишеней приоритетен для молекулярно-генетического анализа;
• амилоза в сорте Ийку-ячменя — один из основных полисахаридов, составляющий крахмал. Праймеры, подобранные для амплификации Ийку-локуса, обладают статусом положительного контроля ввиду генерации специфичного ПЦР-продукта во всех тестированных образцах ячменя и пива;
• а-амилаза — фермент, активирующийся в процессе соложения. Праймеры, разработанные на основании нуклеотидной последовательности локуса гена, кодирующего а-амилазу, инициируют амплификацию ПЦР-продукта у большинства исследованных сортов ячменя и образцов пива;
• (1-3, 1-4) р^-глюкан — полисахарид, определяющий твердость зерна ячменя. Процедура амплификации локуса гена нус$№6 с подобранной парой праймеров приводит к наработке специфичного ПЦР-продукта как у ряда американских и австралийских, так и японских сортов пивоваренного ячменя. Генетические мишени [2], имеющие корреляционную связь с показателями качества пива:
• протеины Z ячменя — основные белки пива, проявляющие корреляционную связь с показателями качества пива, в частности со стабильностью пены. Причем, протеины Z4 и Z7 могут быть использованы в качестве позитивных и негативных маркеров стабильности пены;
• липоксигеназа — железо-содер-жащие ферменты, катализирующие реакцию диоксигенации к полиненасыщенным жирным кислотам. Дефицитные сорта ячменя с пониженной или утраченной активностью генов ЬОХ оказывают положительное влияние на такие показатели качества, как вкус пива и стабильность пены. Соответствующий набор праймеров приводит к амплификации специфичного ПЦР-продукта у определенных сортов ячменя и образцов пива;
• белковые ингибиторы протеоли-тических ферментов играют важную роль в формировании гомео-статических реакций у растений. Подобранные праймеры к локусу гена ингибитора трипсина (Пг1) приводят к амплификации специфичного ПЦР-продукта у ряда сортов ячменя и образцов пива. Заключение. Анализ способов
выделения остаточных нуклеиновых
кислот из готовой алкогольной продукции указывает на актуальность и перспективность использования ДНК-аутентификации в качестве молекулярно-генетического метода контроля безопасности алкогольных напитков и выявления фальсификатов. Применение ДНК-технологий способствует ускорению определения подлинности продукции алкогольной промышленности. Системы молекулярного маркирования, пригодные для идентификации как основного растительного компонента пива — ячменного солода пивоваренных сортов Hordeum vulgare, так и вина — винных сортов винограда Vitis vinifera L., способны обеспечить прослеживаемость всего жизненного цикла готовой продукции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Оганесянц. Л.А. Мониторинг качества пищевых продуктов-базовый элемент стратегии / Л. А. Оганесянц, С. А. Хуршу-дян, А. Г. Галстян // Контроль качества продукции. — 2018. — № 4. — С. 56-59.
2. Nakamura, S. A novel method for the preparation of template DNA for PCR from beer to detect materials and to develop DNA markers to evaluate the quality of beer / S. Nakamura, R. Tsushima, K. Ohtsubo // Biosci. Bio-technol. Biochem. — 2013. — Vol. 77, № 4. — P. 820-831. DOI: 10.1271/bbb. 120969.
3. Catalano, V. Experimental Review of DNA-Based Methods for Wine Traceability and Development of a Single-Nucleotide Polymorphism (SNP) Genotyping Assay for Quantitative Varietal Authentication / V. Catalano, P. Moreno-Sanz, S. Lorenzi, [et al.] // J Agric Food Chem. — 2016. — Vol. 64, № 37. — P. 6969-6984. DOI: 10.1021/acs. jafc. 6b02560.
4. Pereira, L. An enhanced method for vitis vinifera L. DNA extraction from wines / L. Pereira, H. Guedes-Pinto, P. Martins-Lopes // Am. J. Enol. Vitic. — 2011. — Vol. 62, № 4. — P. 547-552. DOI: 10.5344/ajev. 2011.10022.
5. Savazzini, F. Development of methods for enhanced extraction and real-time poly-merase chain reaction quantification / F. Savazzini, L. Martinelli // Anal. Chim. Acta. — 2006. — Vol. 536, № 1-2. — P. 274-282. DOI: 10.1016/j. aca. 2005.10.078.
6. Nakamura, S. Novel preparation method of template DNAs from wine for PCR to differentiate grape (Vitis vinifera L.) cultivar / S. Nakamura, K. Haraguchi, N. Mitani, [et al.] // J. Agric. Food Chem. — 2007. — Vol. 55, № 25. — P. 10388-10395. DOI: 10.1021/ jf072407u.
7. Garcia-Beneytez, E. Application of a DNA analysis method for the cultivar identifica-
ПИВО и НАПИТКИ / BEER and BEVERAGES
3•2019
"инновационные методы контроля качества продукции
tion of grape musts and experimental and commercial wines of Vitis vinifera L. using microsatellite markers / E. Garcia-Beneytez, V. M. Maria, B. Joaquin, [et al.] // J. Agric. Food Chem. - 2002. - Vol. 50, № 21. - P. 60906096. DOI: 10.1021/jf0202077.
8. Siret, R. Analysis of grape Vitis vinifera L. DNA in must mixtures and experimental mixed wines using microsatellite markers / R. Siret, O. Gigaud, J. P. Rosec, [et al.]// J. Agric. Food Chem. - 2002. - Vol. 50, № 13. - P. 38223827. DOI: 10.1021/jf011462e.
9. Pereira, L. High Resolution Melting (HRM) applied to wine authenticity / L. Pereira, S. Gomes, C. Castro, [et al.] // Food Chem. -2017. - Vol. 216. - P. 80-86. DOI: 10.1016/j. foodchem. 2016.07.185.
10. Gomes, S. Alternative SNP detection platforms, HRM and biosensors, for varietal identification in Vitis vinifera L. using F3H and LDOX genes / S. Gomes, C. Castro, S. Barrias, [et al.] // Sci. Rep. - 2018. - Vol. 8, № 1. -P. 850. DOI:10.1038/s41598-018-24158-9.
11. Oganesyants, L.A. Prospects for DNA authentication in wine production monitoring / L. A. Oganesyants, R. R. Vafin, A. G. Gal-styan, [et al.]// Foods and Raw Materials. - 2018. - Vol. 6, № 2. - P. 438-448. DOI: http://doi.org/10.21603/2308-4057-2018-2-438448.
12. Lakhneko, O. R. SSR analysis in the study of genetic diversity and similarity of barley cultivars / O. R. Lakhneko, B.V. Morgun, R. M. Kalendar, [et al.] // Biotechnologia Acta. - 2016. - Vol. 9, № 3. - P. 61-68. DOI: 10.15407/biotech9.03.061.
13. Tomka, M. Potential of selected SSR markers for identification of malting barley / M. Tomka, D. Urminska, M. Chnapek, [et al.] // J. Microbiol. Biotech. Food Sci. - 2017. - Vol. 6, № 6. - P. 1276-1279. DOI: 10.15414/jmbfs. 2017.6.6.1276-1279.
14. Chiapparino, E. Genotyping single nucle-otide polymorphisms in barley by tetra-primer ARMS - PCR / E. Chiapparino, D. Lee, P. Donini, [et al.] // Genome. - 2004. -Vol. 47, № 2. - P. 414-420. DOI: 10.1139/ g03-130.
15. Hayden, M. J. Development and assessment of simple PCR markers for SNP genotyping in
barley / Hayden M. J., Tabone T., Mather D. E. // Theor. Appl. Genet. - 2009. - Vol. 119, № 5. - P. 939-951. DOI: 10.1007/s00122-009-1101-7.
REFERENCES
1. Oganesyanc LA, Hurshudyan SA, Galsty-an AG. Monitoring kachestva pishchevyh produktov-bazovyj ehlement strategii [Food quality monitoring as the basic strategic element]. Kontrol» kachestva produkcii [Product quality control], 2018, no. 4, pp. 56-59. (In Russ.)
2. Nakamura S, Tsushima R, Ohtsubo K. A novel method for the preparation of template DNA for PCR from beer to detect materials and to develop DNA markers to evaluate the quality of beer. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2013, vol. 77, no. 4, pp. 820-831. DOI: 10.1271/bbb. 120969.
3. Catalano V, Moreno-Sanz P, Lorenzi S, Gran-do MS. Experimental Review of DNA-Based Methods for Wine Traceability and Development of a Single-Nucleotide Polymorphism (SNP) Genotyping Assay for Quantitative Varietal Authentication. J Agric Food Chem. 2016, vol. 64, no. 37, pp. 6969-6984. DOI: 10.1021/acs. jafc. 6b02560.
4. Pereira L, Guedes-Pinto H, Martins-Lopes P. An enhanced method for vitis vinifera L. DNA extraction from wines. Am. J. Enol. Vi-tic. 2011, vol. 62, no. 4, pp. 547-552. DOI: 10.5344/ajev. 2011.10022.
5. Savazzini F, Martinelli L. Development of methods for enhanced extraction and realtime polymerase chain reaction quantification. Anal. Chim. Acta. 2006, vol. 536, no. 1-2, pp. 274-282. DOI: 10.1016/j.aca. 2005.10.078.
6. Nakamura S, Haraguchi K, Mitani N, Oht-subo K. Novel preparation method of template DNAs from wine for PCR to differentiate grape (Vitis vinifera L.) cultivar. J. Agric. Food Chem. 2007, vol. 55, no. 25, pp. 1038810395. DOI: 10.1021/jf072407u.
7. Garcia-Beneytez E, Maria VM, Joaquin B, Maria CP, Javier I. Application of a DNA analysis method for the cultivar identification of grape musts and experimental and commercial wines of Vitis vinifera L. using
microsatellite markers. J. Agric. Food Chem. 2002, vol. 50, no. 21, pp. 6090-6096. DOI: 10.1021/jf0202077.
8. Siret R, Gigaud O, Rosec JP, This P. Analysis of grape Vitis vinifera L. DNA in must mixtures and experimental mixed wines using microsatellite markers. J. Agric. Food Chem. 2002, vol. 50, no. 13, pp. 3822-3827. DOI: 10.1021/ jf011462e.
9. Pereira L, Gomes S, Castro C, Eiras-Dias JE, Brazao J, Graça A, [et al.]. High Resolution Melting (HRM) applied to wine authenticity. Food Chem. 2017, vol. 216, pp. 80-86. DOI: 10.1016/j.foodchem.2016.07.185.
10. Gomes S, Castro C, Barrias S, Pereira L, Jorge P, Fernandes JR, [et al.]. Alternative SNP detection platforms, HRM and biosensors, for varietal identification in Vitis vinifera L. using F3H and LDOX genes. Sci. Rep. 2018, vol. 8, no. 1, pp. 5850. DOI:10.1038/s41598-018-24158-9.
11. Oganesyants LA, Vafin RR, Galstyan AG, Semi-pyatniy VK, Khurshudyan SA, Ryabova AE. Prospects for DNA authentication in wine production monitoring. Foods and Raw Materials, 2018, vol. 6, no. 2, pp. 438-448. DOI: http://doi.org/10.21603/2308-4057-2018-2-438448.
12. Lakhneko OR, Morgun BV, Kalendar RM, Stepanenko AI, Troianovska AV, Rybalka OI. SSR analysis in the study of genetic diversity and similarity of barley cultivars. Biotechnologia Acta. 2016, vol. 9, no. 3, pp. 61-68. DOI: 10.15407/biotech9.03.061.
13. Tomka M, Urminskâ D, Chnapek M, Gâlovâ Z. Potential of selected SSR markers for identification of malting barley. J. Microbiol. Biotech. Food Sci. 2017, vol. 6, no. 6, pp. 1276-1279. DOI: 10.15414/jmbfs. 2017.6.6.1276-1279.
14. Chiapparino E, Lee D, Donini P. Genotyping single nucleotide polymorphisms in barley by tetra-primer ARMS - PCR. Genome. 2004, vol. 47, no. 2, pp. 414-420. DOI: 10.1139/g03-130.
15. Hayden MJ, Tabone T, Mather DE. Development and assessment of simple PCR markers for SNP genotyping in barley. Theor. Appl. Genet. 2009, vol. 119, no. 5, pp. 939-951. DOI: 10.1007/s00122-009-1101-7. <S
£ ш
2 0
1
<
2 ш b
Авторы Authors
Лазарева Екатерина Германовна; Ekaterina G. Lazareva;
Гильманов Хамид Халилович; Khamid Kh. Gilmanov,
Ржанова Ирина Владимировна; Irina V. Rzhanova;
Бигаева Алана Владиславовна; Alana V. Bigaeva;
Тюлькин Сергей Владимирович, канд. с.-х. наук Sergey V. Tyulkin, Candidate of Agricultural Science
ВНИИ пивоваренной, безалкогольной и винодельческой AU-Russian Scientific Research Institute of Brewing, Beverage and Wine
промышленности - филиал ФНЦ пищевых систем Industry - Branch of V.M. Gorbatov Federal Research Center for Food
им. В. М. Горбатова РАН, Systems of RAS,
119021, Россия, Москва, ул. Россолимо, д. 7, 7 Rossolimo Str., Moscow, 119201, Russia,
lkg1996@mail.ru, gilmanov.xx@mail.ru, rzh.irina@mail.ru, lkg1996@mail.ru, gilmanov.xx@mail.ru, rzh.irina@mail.ru,
ada14-5@yandex.ru, tulsv@mail.ru ada14-5@yandex.ru, tulsv@mail.ru
3•2019
ПИВО и НАПИТКИ / BEER and BEVERAGES
