CC BY
72DOI: 10.24412/2226-079Х-2022-12445
Таргетная терапия болезни Паркинсона
А.Э. Копытова1, Т.С. Усенко1, 2, А.К. Емельянов1, 2, Г.В. Байдакова3, Е.В. Григорьева4, Г.Н. Рычков1, Ф.М. Ибатуллин1, Е.Ю. Захарова3, С.М. Закиян4, С.Н. Пчелина1, 2
1 ФГБУ "Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова" НИЦ "Курчатовский институт"(Гатчина) 2 ФГБОУВО "Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова"Минздрава России
3 ФГБНУ "Медико-генетический научный центр им. акад. Н.П. Бочкова" (Москва)
4 ФГБНУ "Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики
Сибирского отделения Российской академии наук" (Новосибирск)
Отсутствие нейропротективной терапии для лечения болезни Паркинсона (БП) обусловлено полиэтиологичностью данного заболевания и отсутствием ясного представления о триггерах нейродегенеративного процесса. Открытие молекулярных основ развития наследственных форм БП позволило обозначить молекулярные мишени для создания препаратов направленного действия - таргетных препаратов. С учетом распространенности и инвалидизирующего течения заболевания вывод на фармацевтический рынок таргетных нейропротективных препаратов для лечения БП является важнейшей задачей фундаментальной медицины.
Наиболее распространенными наследственными формами БП, для которых описан молекулярный триггер заболевания, являются аутосом-но-доминантная форма БП, обусловленная мутациями в гене обогащенной лейциновыми повторами киназы 2 ^ШХ2), и БП, ассоциированная с мутациями в гене лизосомного фермента глюкоцереброзидазы ^ВА), LRRK2-БП и GBA-БП соответственно. За последние 10 лет патогенез данных наследственных форм БП был довольно хорошо охарактеризован. Показано, что мутации в гене LRRK2 приводят к повышению киназной активности фермента, а мутации в гене GBA, напротив, снижают способность GBA расщеплять сфинголипиды, что приводит к накоплению лизосфинголипидов в клетке и может нарушать процесс аутофагии. Нами и другими авторами показано, что GBA-БП характеризуется снижением активности GBA и накоплением глюкозилсфингозина в плазме крови пациентов [1-4]. Кроме того, дисфункция GBA играет клю-
чевую роль в патогенезе одной из наиболее распространенных лизосомных болезней накопления - болезни Гоше (БГ). При данном заболевании ферментативная активность GBA резко снижается (до 5-15% ферментативной активности в норме), что приводит к выраженному нарушению метаболизма лизосфинголипидов с их последующим накоплением в лизосомах клеток, в первую очередь в макрофагах [5]. Общность патогенеза заболеваний человека, связанных с дисфункцией GBA, а именно БГ и GBA-БП, позволяет говорить о том, что разрабатываемые таргет-ные препараты, направленные на повышение активности GBA, могут быть эффективны при обеих нозологиях.
Препараты, ингибирующие активность LRRK2 и повышающие активность GBA, в настоящее время находятся на 1-й и 2-й фазах клинических испытаний [6] и существенно доминируют среди всех таргетных нейропротективных средств, разрабатываемых на сегодняшний день (таблица). В наших исследованиях по разработке подходов к созданию новых лекарственных препаратов, действие которых направлено на повышение ферментативной активности GBA, мы используем комплексный подход, объединяющий усилия ряда коллективов России и сочетающий использование методов молекулярного моделирования взаимодействия химических соединений с белками-мишенями, химического синтеза соединений и биологических методов исследования препаратов in vitro на пациентспе-цифичных клетках. В качестве последних используются как первичные культуры макрофагов, так и дофаминергические нейроны (ДН),
Тим терапии Механизм действия Название препарата Клиническое исследование Когорта Фаза
GBA-БП
Субстрат- редуцирующая терапия Ингибирование глюкозилцерамидсинтазы Венглустат (GZ/SAR402671) N01^2906020 GBA-БП 2
Фармакологический шаперон Активация GBA Амброксол N011)2941822, N0102914366 GBЛ-БП, БП, БП с деменцией 2
ЕП-291 - GBЛ-БП 2
Генная терапия Замена мутантной копии GBA на копию гена дикого типа PR001 NCT04127578 GBЛ-БП 1/2а
Индуктор аутофагии Ингибирование рапамицинкиназного комплекса I (TORC1) RTB101 ЛСТ^ 12619000372189 БП 1Ь
LRRK2-БП
Ингибитор LRRK2 Ингибирование киназной активности LRRK2 DNL201 NCT03710707 БП 1Ь
DNL151 NCT05348785 БП 2
полученные из индуцированных плюрипотент-ных стволовых клеток (ИПСК).
Весьма перспективным подходом таргетной терапии при дисфункции вВЛ является поиск химических соединений, способствующих правильному фолдингу и транспорту вВЛ в лизосо-му, - фармакологических шаперонов (ФШ) [7]. Необходимо отметить важность поиска ФШ вВЛ, не связывающихся с активным сайтом фермента (ингибирующих ФШ), а имеющих сайты связывания на поверхности вВЛ; такие ФШ получили название аллостерические активаторы.
В настоящее время для разработки потенциальных лекарственных средств важным шагом является использование методов молекулярного моделирования т sUko. Считается, что использование данного подхода может применяться на различных стадиях разработки лекарственных препаратов и позволяет снизить затраты до 50% [8, 9]. На модели гликозилированного белка вВЛ дикого типа обнаружили 8 потенциальных поверхностных сайтов связывания, один из которых является активным центром фермента (рис. 1, размещенный на 3-й обложке).
Методами молекулярной динамики и докинга нами впервые был описан сайт связывания ФШ вВЛ и амброксола. Показано, что амброксол относится к ФШ смешанного типа, который может связываться как с активным сайтом вВЛ, так и с аллостерическим сайтом на поверхности фермента [10]. Также нами разработаны системы
скрининга ФШ вВЛ на первичной культуре макрофагов пациентов с дисфункцией вВЛ (БГ, вВЛ-БП) с последующей оценкой в сухом пятне макрофагов активности фермента и концентрации субстрата [11] (рис. 2) и на ДН, полученных из ИПСК пациентов (рис. 3, размещенный на 3-й обложке).
На первичной культуре макрофагов пациентов с БГ и вВЛ-БП, а также пациентспецифичных нейронах, полученных от пациентов с вВЛ-БП, нами была проведена оценка эффективности ФШ амброксола в восстановлении ферментативной активности вВЛ (рис. 4) и снижении концентрации субстрата [10]. В первичной культуре макрофагов пациентов с БГ применение ФШ амброксола приводило к увеличению ферментативной активности вВЛ в 3,3 раза и снижению концентрации субстрата в 2,1 раза по сравнению с необработанными клетками (р < 0,0001 и р = 0,0003 соответственно) (см. рис. 4а, 4б). Показано также, что амброксол в первичной культуре макрофагов пациентов с БГ индуцирует транслокацию вВЛ в лизосомы, оцениваемую по колокализации вВЛ с маркером лизосом ЬЛМР2 (р < 0,0001) и увеличению количества белка вВЛ в 2,5 раза (см. рис. 4д, 4е) (р = 0,0003) [10]. Применение ФШ амброксола в первичной культуре макрофагов пациентов с вВЛ-БП приводило к увеличению ферментативной активности вВЛ в 3,5 раза и снижению концентрации субстрата в 1,6 раза (р < 0,0001 и р = 0,001 соот-
ветственно) (см. рис. 4в, 4г). Использование амб-роксола при культивировании пациентспеци-фичных ДН приводило к увеличению активности GBA в 2,9 раза (см. рис. 4ж).
Активно ведется поиск соединений, способных выступать в качестве аллостерических активаторов GBA. На данный момент описано лишь несколько ФШ аллостерического типа (Э-181, амброксол, NCGC607, NCGC758 и Ш-291) [3, 4, 7, 12-18], и лишь для S-181 и амброксола имеются данные литературы, содержащие информацию о принципе действия этих соединений [10, 18, 19].
Нами предложены химические модификации ФШ N07 - соединения N2 и N3. Данные модификации направлены на повышение константы связывания ФШ с ферментом GBA и увеличение растворимости соединений. Соединение N07 и его модификации были получены путем химического синтеза. Проведена оценка эффективности аллостерического ФШ N07 и его модификаций на первичной культуре макрофагов пациентов с БГ и GBA-БП, а также ИПСК-ДН, полученных от пациентов с GBA-БП. Показано, что в первичной культуре макрофагов пациентов с БГ ФШ N07 повышает ферментативную активность GBA в 1,8 раза по сравнению с необработанными клетками (р = 0,024) (рис. 5а). В группе пациентов с GBA-БП воздействие ФШ N07 не оказывает влияния на активность GBA (см. рис. 5а). При оценке эффективности химических модификаций соединения N07 (N2 и N3) в первичной культуре макрофагов пациентов с БГ не было выявлено статистически значимых различий, в то время как в группе пациентов с GBA-БП модификация N2 приводила к повышению активности GBA в 2,4 раза по сравнению с необработанными клетками (р = 0,042) (см. рис. 5а).
В группе пациентов с GBA-БП, носителей "легкой" мутации GBA (N370S), использование ФШ N07 и его модификаций N2 и N3 приводило к увеличению ферментативной активности GBA в 2,6; 3,1 и 2,5 раза на первичной культуре макрофагов (р = 0,008; р = 0,050; р = 0,008 соответственно) (см. рис. 5а). В группе пациентов с GBA-БП, носителей "тяжелой" мутации GBA (Ь444Р), ФШ N07 и его модификации N2 и N3 не оказывали влияния на восстановление ферментативной активности GBA в первичной культуре макрофагов.
При исследовании эффективности ФШ N07 и его модификаций N2 и N3 у лиц контрольной
Образцы периферической крови пациентов с БГ и GBA-БП
Наслаивание периферической Центрифугировать крови на фиколл в течение 40 мин
т
Периферическая кровь + PBS
1
Фиколл , ,
Выделение мононуклеарной фракции
Плазма Мононуклеары Фиколл Эритроциты ^
I
Мононуклеарная фракция
Дифференцировка моноцитов в макрофаги с использованием M-CSF
ФШ
Измерение активности GBA и концентрации HexSph в сухих пятнах макрофагов с помощью ЬС-МЭ/МЭ |
А
PI-5500 QTrap mass spectrometer
Рис. 2. Схема использования первичной культуры макрофагов в качестве модели для изучения патологий, связанный с мутациями гена GBA, и скрининга ФШ GBA.
0
(а)
т
(б)
250
.и Ё
^н- 200
I 150
а юо
I
I 50 ¡2
1г
+АВХ
+АВХ
(в)
±
(г)
.ч Й
л" &
сл и
100
80
60
40
20
_1_
¡3
тг
+АВХ
+АВХ
(д)
Контроль БГ 4
- + - +
БГ 10 БГ 14
- + - +
БГ 8
+ ЛБХ ОБЛ ОЛРБН
(е) £
о
о
е
2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0
(ж)
150
- т
а юо £
о
й
в 50
и
0 +АВХ
0
т
Контроль ОВА-БП Ю708/\УТ
■ 0
□ АВХ = 50 мкМ
группы показано равнозначное увеличение активности ОБЛ (см. рис. 5а). Кроме того, использование модификаций N2 и N3 в первичной культуре макрофагов пациентов с ОБЛ-БП приводило к снижению концентрации HexSph в 2,8 и 1,9 раза по сравнению с клетками без добавления ФШ (р = 0,012 и р = 0,043 соответственно) (рис. 5б).
Нами показано, что в первичной культуре макрофагов пациентов с БГ ФШ N07 и его модификации N2 и N3 повышают эффективность транслокации ОБЛ в лизосому (N07 в 1,15 раза, N2 в 1,3 раза и N3 в 1,23 раза (р < 0,0001)). При этом наиболее эффективным было соединение N2 как по сравнению с исходным соединением, так и с N3 (р < 0,0001).
Болезнь Паркинсона характеризуется гибелью ДН черной субстанции головного мозга. Нами была разработана модель для изучения дисфункции ОБЛ на пациентспецифичных клетках, полученных от пациентов с ОБЛ-БП (ИПСК-ДН), с последующей оценкой в сухом остатке клеток активности фермента. Была проведена оценка эффективности ФШ ОБЛ амброксола, N07 и его модификаций N2 и N3 в отношении восстановления ферментативной активности ОБЛ и увеличения степени транслокации ОБЛ в лизосому в ИПСК-индуцированных ДН, дифференцированных из мононуклеаров пациента с ОБЛ-БП (гетерозиготный носитель мутации N370S гена ОБА).
При оценке эффективности ФШ N07 и его модификаций N2 и N3 нами показано восстановление ферментативной активности ОБЛ до значений ферментативной активности ОБЛ в контроле (рис. 6).
При оценке влияния ФШ ОБЛ на степень транслокации фермента в лизосому в ИПСК-ин-дуцированных ДН, дифференцированных из
Рис. 4. Оценка эффективности амброксола (ЛБХ) на первичной культуре макрофагов пациентов с БГ и ОБЛ-БП и пациентспецифичных ДН пациента с ОБЛ-БП. Активность ОБЛ (а) и концентрация HexSph (б) в первичных макрофагах пациентов с БГ в присутствии ЛБХ и без ЛБХ. Активность ОБЛ (в) и концентрация HexSph (г) в первичных макрофагах пациентов с ОБЛ-БП в присутствии ЛБХ и без ЛБХ. Относительный уровень белка ОБЛ в первичной культуре макрофагов пациентов с БГ в присутствии АВХ и без ЛБХ (д, е). Активность ОБЛ в пациентспецифичных ДН при воздействии ЛБХ (ж).
(а) 100 г
s
Я <
g 10
g
о
s
(6)
1 0
100
Контроль n = 5
GBA-БП N370S/WT n = 3
GBA-БП L444P/WT n = 3
БГ "легкие мутации GBA" n = 3
БГ "тяжелые мутации GBA" n = 5
£
Контроль n = 5
GBA-БП N370S/WT n = 3
GBA-БП L444P/WT n = 3
БГ "легкие мутации GBA" n = 3
БГ "тяжелые мутации GBA" n = 5
□ 0 □ N07 = 4 mkM □ N2 = 4 мкМ BN3 = 4MKM
Рис. 5. Оценка влияния ФШ N07 и его модификаций (N2 и N3) на активность GBA и уровень лизосфинго-липидов в первичных макрофагах пациентов с БГ и GBA-БП. Показаны активность GBA (а) и концентрация HexSph (б) в первичных макрофагах в зависимости от типа мутаций в гене GBA. Активность GBA и концентрация HexSph в первичных макрофагах пациентов с БГ и GBA-БП представлены в виде среднего значения ± SEM.
S Я
ä о
Ü о
150
100
50
□ о
□ N07 = 4 мкМ ■ N2 = 4 мкМ
□ N3 = 4 мкМ
Контроль
GBA-БП
N370S/WT
Рис. 6. Оценка влияния ФШ N07 и его модификаций (N2 и N3) на активность ОБЛ в ИПСК-индуци-рованных ДН, дифференцированных из мононук-леаров пациента с ОБЛ-БП (гетерозиготный носитель мутации N370S гена ОБА).
ч
и,
0,8
0,6
0,4
0,2
Г
р< 0,001
г
р < 0,001
0 АВХ= N07= N2= N3 = = 50 мкМ = 4 мкМ = 4 мкМ = 4 мкМ
Рис. 7. Оценка влияния ФШ амброксола (АВХ), N07 и его модификаций - N2 и N3 на увеличение колокализации GBA и маркера лизосом LAMP2 в ИПСК-индуцированных ДН, дифференцированных из мононуклеаров пациента с GBA-БП методом иммуногистохимического окрашивания. Представлен коэффициент Пирсона, рассчитанный для ИПСК-индуцированных ДН, дифференцированных из мононуклеаров пациента с GBA-БП в присутствии ФШ амброксола N07 и его модификаций - N2 и N3.
мононуклеаров пациента с вВЛ-БП, нами показано статистически значимое повышение степени транслокации вВЛ при воздействии амбро-ксолом (р = 0,024) и предложенными нами модификациями N2 (р < 0,001) и N3 (р = 0,009) по сравнению с необработанными клетками (рис. 7). Исходное соединение N07 не оказывало эффекта на степень транслокации вВЛ в лизосо-му (см. рис. 7).
Еще одним из направлений развития таргет-ной терапии при БП является разработка ингибиторов киназной активности LRRK2. Мутации в гене LRRK2 (наряду с GBA) являются наиболее распространенными среди пациентов с БП с частотой от 5 до 46% среди семейных случаев БП в зависимости от популяции [20]. Функции фермента LRRK2 остаются неизвестными. Предпо-
лагается, что данный фермент участвует во внутриклеточном транспорте цитоплазматических молекул к лизосоме для последующей деградации, а также может участвовать в процессах, связанных с метаболизмом сфинголипидов, и контролировать функции лизосом путем фосфо-рилирования семейства белков Rab [21, 22]. Одна из стратегий лечения LRRK2-БП заключается в фармакологическом снижении киназной активности белка LRRK2 [23]. Так, например, вещества DNL201 и DNL151, являющиеся ингибиторами киназы LRRK2, показали свою эффективность на доклиническом этапе и успешно прошли 1-ю фазу клинических исследований (планируется 2-я фаза). Для оценки эффективности действия ингибитора обычно изучают уровень фосфорилированной LRRK2 и ее субстрата Rab10.
Последние данные говорят о возможном функциональном взаимодействии между ферментом вВЛ и киназой LRRK2. Так, в недавнем исследовании было показано, что ингибирова-ние киназной активности LRRK2 ингибитором MLi-2 при гетерозиготном носительстве мутаций в гене GBA на модели ИПСК-ДН человека приводило не только к снижению активности LRRK2, оцениваемого по накоплению фосфори-лированного белка Rab10, но и к увеличению активности фермента вВЛ [24].
Мы впервые разработали систему оценки действия ингибитора киназной активности LRRK2 МН-2 (аЬ254528, ЛЬсат, иК) на первичной культуре макрофагов периферической крови человека. В результате методом вестерн-блоттин-га было показано дозозависимое увеличение уровня белка Rab10 (аЬ237703, ЛЬсат, иК) и снижение уровня фосфорилированного белка RaЫ0 (аЬ230261, ЛЬсат, иК) при культивировании первичной культуры макрофагов периферической крови человека в присутствии ингибитора MLi-2 (рис. 8). Более того, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) было показано дозозависимое увеличение активности как вВЛ, так и других лизосомных ферментов - а-глюкозидазы (вЛЛ), галактоцереброзидазы (вЛЬС), сфингомиелина-зы (ASMase) и а-идуронидазы (IDUЛ) (рис. 9). Наши результаты, с одной стороны, подтверждают предыдущие исследования о влиянии активности LRRK2 на активность вВЛ [24], а с дру-
50
100
Концентрация MLi-2 (нМ) 0 Rab10
pT73-Rab10
GAPDH
Рис. 8. Анализ содержания белка ЯаЬ10 и фосфо-рилированного белка ЯаЫ0 (рТ73-КаЬ10) в лиза-тах первичной культуры макрофагов периферической крови человека, полученных в присутствии ингибитора МЬ1-2 в различной концентрации.
(г1
К g
S о.
и>
о S
25 50 75 100
Концентрация MLi-2, нмоль
Ферменты
—•— AS Mase —GAA --о- GALC —+— GBA ■ GLA * IDUA
Рис. 9. Активность лизосомных ферментов в первичной культуре макрофагов периферической крови человека при культивировании в присутствии ингибитора MLi-2 в различной концентрации. GLA - а-галактозидаза.
гой - впервые показывают влияние ингибитора киназной активности LRRK2 MLi-2 не только на активность GBA, но и на активность других лизосомных ферментов. Таким образом, несмотря на отсутствие селективного действия в отноше-
нии восстановления активности GBA ингибитором киназной активности LRRK2 MLi-2, следует рассмотреть возможность сочетанного действия ФШ GBA и MLi-2 для восстановления активности GBA в группе пациентов с GBA-БП и БГ.
Заключение
В настоящее время несколько классов таргет-ных препаратов для лечения БП проходят 2-ю фазу клинических исследований. Прорыв в их разработке стал возможен благодаря пониманию молекулярных основ развития наследственных форм БП. Максимальное продвижение в текущих клинических исследованиях получили два класса препаратов: ФШ GBA для лечения GBA-БП и ингибиторы киназы LRRK2 для лечения LRRKZ-БП.
В наших исследованиях была разработана полноатомная модель мутантной формы GBA человека, позволяющая in silico проводить скрининг потенциальных ФШ GBA. Также отработаны системы скрининга данных соединений как на первичной культуре макрофагов от пациентов с дисфункцией GBA (БГ, GBA-БП), так и на па-циентспецифичных ДН. Используя предложенную схему подбора потенциальных ФШ GBA, нами предложено два новых ФШ данного фермента. Впервые было показано увеличение активности GBA в первичной культуре макрофагов от пациентов с GBA-БП в результате воздействия другим таргетным препаратом, ингибитором киназы LRRK2. Проделанные исследования открывают перспективу разработки терапии БП сочетанием препаратов разных классов.
Исследование поддержано грантом РФФИ № 20-315-90105.
Список литературы
1. Pchelina S et al. Blood lysosphingolipids accumulation in patients with Parkinson's disease with glucocerebrosidase 1 mutations. Mov. Disord. 2018;33(8):1325-30.
2. Fernandes HJR et al. ER stress and autophagic perturbations lead to elevated extracellular a-synuclein in GBA-N370S Parkinson's iPSC-derived dopamine neurons. Stem Cell Reports. 2016;6(3):342-56.
3. Yang SY et al. A human neural crest stem cell-derived dopaminergic neuronal model recapitulates biochemical abnormalities in GBA1 mutation carriers. Stem Cell Reports. 2017;8(3):728-42.
4. McNeill A et al. Ambroxol improves lysosomal biochemistry in glucocerebrosidase mutation-linked Parkinson disease cells. Brain. 2014;137(Pt 5):1481-95.
5. Ferreira CR, Gahl WA. Lysosomal storage diseases. Transl. Sci. Rare Dis. 2017;2(1-2):1-71.
6. Senkevich K et al. New therapeutic approaches to Parkinson's disease targeting GBA, LRRK2 and Parkin. Neuropharmacology. 2022;202:108822.
7. Han TU et al. Small molecule chaperones for the treatment of Gaucher disease and GBA1-associated Parkinson disease. Front. Cell Dev. Biol. 2020;8:271.
8. Macalino SJY et al. Role of computer-aided drug design in modern drug discovery. Arch. Pharm. Res. 2015;38(9):1686-701.
9. Xiang M et al. Computer-aided drug design: lead discovery and optimization. Comb. Chem. High Throughput Screen. 2012;15(4):328-37.
10. Kopytova AE et al. Ambroxol increases glucocerebrosidase (GCase) activity and restores GCase translocation in primary patient-derived macrophages in Gaucher disease and Parkinsonism. Parkinsonism Relat. Disord. 2021;84:112-21.
11. Николаев М.А. и др. Макрофаги периферической крови человека как модель изучения дисфункции глюкоцереброзидазы. Цитология. 2018;60(12):1022-8.
12. Aflaki E et al. A new glucocerebrosidase chaperone reduces a-synuclein and glycolipid levels in iPSC-derived dopa-minergic neurons from patients with Gaucher disease and Parkinsonism. J. Neurosci. 2016;36(28):7441-52.
13. Patnaik S et al. Discovery, structure-activity relationship, and biological evaluation of noninhibitory small molecule chaperones of glucocerebrosidase. J. Med. Chem. 2012;55(12):5734.
14. Burbulla LF et al. A modulator of wild-type glucocerebro-sidase improves pathogenic phenotypes in dopaminergic neuronal models of Parkinson's disease. Sci. Transl. Med. 2019;11(514):eaau6870.
15. Mullin S et al. Ambroxol for the treatment of patients with Parkinson disease with and without glucocerebrosidase gene mutations: a nonrandomized, noncontrolled trial. JAMA Neurol. 2020;77(4):427-34.
16. den Heijer JM et al. A randomized single and multiple ascending dose study in healthy volunteers of LTI-291, a centrally penetrant glucocerebrosidase activator. Br. J. Clin. Pharmacol. 2021;87(9):3561-73.
17. Tran ML et al. Second-generation pharmacological chaperones: beyond inhibitors. Molecules. 2020;25(14):3145.
18. Maegawa GHB et al. Identification and characterization of ambroxol as an enzyme enhancement agent for Gaucher disease. J. Biol. Chem. 2009;284(35):23502-16.
19. Zheng J et al. ß-glucocerebrosidase modulators promote dimerization of ß-glucocerebrosidase and reveal an allosteric binding site. J. Am. Chem. Soc. 2018;140(18):5914-24.
20. Tolosa E et al. LRRK2 in Parkinson disease: challenges of clinical trials. Nat. Rev. Neurol. 2020;16(2):97-107.
21. Inoshita T et al. Vps35 in cooperation with LRRK2 regulates synaptic vesicle endocytosis through the endosomal pathway in Drosophila. Hum. Mol. Genet. 2017;26(15):2933-48.
22. Ferrazza R et al. LRRK2 deficiency impacts ceramide metabolism in brain. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2016;478(3):1141-6.
23. Lobbestael E et al. Pharmacological LRRK2 kinase inhibition induces LRRK2 protein destabilization and proteaso-mal degradation. Sci. Rep. 2016;6:33897.
24. Ysselstein D et al. LRRK2 kinase activity regulates lyso-somal glucocerebrosidase in neurons derived from Parkinson's disease patients. Nat. Commun. 2019;10(1):5570.
Иллюстрация к статье "Таргетная терапия болезни Паркинсона", авторы А.Э. Копытова, Т.С. Усенко, А.К. Емельянов, Г.В. Байдакова, Е.В. Григорьева, Г.Н. Рычков, Ф.М. Ибатуллин, Е.Ю. Захарова, С.М. Закиян, С.Н. Пчелина (стр. 103-110)
Контроль
GBA-БП
Рис. 1. Трехмерная структура молекулы GBA с мутацией N370S. Обнаружено 8 потенциальных сайтов связывания малых молекул (области связывания выделены цветом). 1 — обозначен активный сайт фермента, 2 — сайт связывания вблизи аминокислотного остатка N370, 3 — сайт связывания вблизи аминокислотного остатка L444.
Иллюстрация к статье "Оценка ранних клинико-биохимических маркеров болезни Паркинсона с помощью позитронно-эмиссионной томографии", авторы Е.А. Катунина, В.Е. Блохин, М.Р. Нодель, Э.Р. Москалец, М.В. Угрюмов (стр. 82-86)
у ч. : (^ т *
3 / к* t
Рис. 3. Иммунофлуоресцентное окрашивание нейронов, полученных от пациентов с GBA-БП и контрольных ИПСК, на нейронный маркер рШ-тубулин (ТШ1, зеленый сигнал) и маркеры ДН — тирозингидрокси-лазу (ТН, красный сигнал) и LMX1A (красный сигнал) на 61-й день дифференцировки нейронов.
Иллюстрация к статье "Новые возможности
использования когнитивных вызванных потенциалов высокого разрешения в оценке прогрессирования болезни Гентингтона", авторы Г.Р. Уразгильдеева, Н.В. Пономарева, Е.П. Колесникова, Н.Ю. Абрамычева, С.А. Клюшников, С.Н. Иллариошкин (стр. 205-208)
(б)
(в).
Рис. 4. Изменения дофаминового обмена по данным ПЭТ а — одностороннее снижение накопления радиофармпрепарата в области задних отделов скорлупы справа. б — незначительное одностороннее снижение накопления радиофармпрепарата в области задних отделов скорлупы слева.
Рис. 4. Локализация источников компонента N2 КВПСП у здорового испытуемого
27 лет (а), носителя мутации в гене НТТ
28 лет, 41 повтор СAG, преклиническая стадия БГ (б) и носителя мутации в гене НТТ 28 лет, 55 повторов CAG, дебют БГ (в).
