Субпопуляции В-лимфоцитов у больных ревматоидным артритом и влияние на них ингибитора рецепторов интерлейкина 6 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Субпопуляции В-лимфоцитов у больных ревматоидным артритом и влияние на них ингибитора рецепторов интерлейкина 6

Герасимова Е.В.1, Попкова Т.В.1, Алексанкин А.П.1, Мартынова А.В.1, Насонов Е.Л.12

1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт ревматологии им. В.А. Насоновой», Москва, Россия; 2ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет), кафедра ревматологии Института профессионального образования, Москва, Россия 1115522 Москва, Каширское шоссе, 34А; 2119991 Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2

1V.A. Nasonova Research Institute of Rheumatology, Moscow, Russia; 2Department of Rheumatology, Institute of Professional Education, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Ministry of Health of Russia, Moscow, Russia 134A, Kashirskoe Shosse, Moscow 115522; 28, Trubetskaya St., Build. 2, Moscow 119991

Контакты: Елена Владимировна Герасимова; gerasimovaev@list.ru

Contact: Elena

Gerasimova;

gerasimovaev@list.ru

Поступила 05.07.18

При хорошо изученной клинической эффективности и безопасности данные о влиянии терапевтического ингибирования интерлейкина 6 (ИЛ6) на В-клетки малочисленны и противоречивы. Предварительные сообщения показали, что функция В-клеток и гуморальный иммунный ответ могут быть модулированы под влиянием ингибитора рецепторов ИЛ6.

Цель исследования — оценить влияние 12-месячной терапии тоцилизумабом (ТЦЗ) на фенотип B-клеток и экспрессию генов при РА и проанализировать связь между субпопуляциями B-клеток и активностью РА. Материал и методы. Обследовано 24 пациента с РА (20 женщин и 4 мужчины); медиана возраста составила 55 [49; 64] лет; продолжительности болезни — 72 [24; 108] мес; DAS28 — 5,8 [5,3; 6,3]; все больные были серо-позитивны по ревматоидному фактору (РФ), 87% — по антителам к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП). Пациенты получали ТЦЗ из расчета 8 мг/кг каждые 4 нед. После 12 мес лечения согласно критериям эффективности EULAR (DAS28) хороший эффект был достигнут у 54%, удовлетворительный — у 46% больных РА. Контрольная группа состояла из 29 добровольцев (21 женщина и 8 мужчин; медиана возраста — 58,5 [53,0; 62,0] года).

Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови проводили при включении в исследование и через 12 мес. Абсолютное и относительное количество CD19+B-лимфоцитов, B-клеток памяти (CD19+CD27+), непереключенных (CD19+IgD+CD27+) и переключенных (CD19+IgD-CD27+) В-клеток памяти, наивных (CD19+IgD+CD27-), двойных негативных (CD19+IgD-CD27-), транзиторных (CD19+IgD+CD10+CD38++CD27) B-клеток, плазмоцитов (CD19+CD38+) и плазмобластов (CD19+CD38+++IgD-CD27+CD20-) определялось методом многоцветной проточной цитофлуорометрии. Результаты и обсуждение. У больных РА относительное и абсолютное количество B-клеток памяти (CD19+CD27+) (1,3 [0,9; 1,7]%, 0015 [0,001; 0,003]-10'/л), переключенных В-клеток памяти (CD19+IgD-CD27+) (6,8 [3,6; 11,6]%, 0,01 [0,005; 0,02]-10'/л) и абсолютное число транзиторных В-клеток (CD19+CD38++CD10+IgD+CD27-) (0,00009 [0; 0,00028]-10'/л) оказалось ниже, чем у доноров: 2,2 [1,1; 3,0]%, 0,003 [0,001; 0,007]-10'/л; 12,8 [9,3; 17,0]%, 0,02 [0,01; 0,04]-10'/л; 0,0001 [0; 0,0003]-10'/л соответственно (p<0,05 для всех случаев). Через 12 мес после начала терапии ТЦЗ определялось снижение относительного и абсолютного количества плазмобластов (CD19+CD38+++CD27+IgD-CD20-) с 0,15 [0,1; 0,3] до 0,1 [0,01; 0,1]% и с 0,0003 [0,00007; 0,004]-10'/л до 0,0001 [0; 0,0003]-10'/л соответственно (p<0,05). При этом относительное и абсолютное количество B-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) у пациентов с РА оставалось ниже, чем у доноров: 1,0 [0,7; 1,2] и 2,2 [1,1; 3,0]%; 0,001 [0,006; 0,003]-10'/л и 0,003 [0,001; 0,007]-10'/л; 3,1 [1,1; 4,2] и 12,8 [9,3; 17,0]%; 0,003 [0,002; 0,006]*10'/л и 0,02 [0,01; 0,04]*10'/л соответственно (p<0,05 для всех случаев). Численность других субпопуляций В-лимфоцитов через 12 мес существенно не изменилась. У больных РА при включении в исследование были выявлены корреляции между абсолютным количеством B-клеток памяти (CD19+CD27+) и уровнем С-реактивного белка (r=0,50; p<0,05); абсолютным количеством плазмобластов (CD19+CD38+++CD27+IgD-CD20-) и содержанием РФ (r=0,41 и r=0,52; p<0,05). Корреляций субтипов В-клеток с клинико-лабораторными показателями через 12 мес после назначения ТЦЗ не отмечалось. Заключение. Иммунофенотипирование субтипов В-лимфоцитов периферической крови показало уменьшение относительного и абсолютного количества B-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных B-клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) у больных РА по сравнению со здоровыми донорами. Выявленные корреляции между числом В-клеток памяти, плазмобластов и значениями лабораторных показателей у больных с высокой активностью РА могут свидетельствовать об участии В-лимфоцитов в патогенезе РА. Наблюдалось снижение уровня плазмобластов после 12 мес терапии ТЦЗ.

Ключевые слова: ревматоидный артрит; ингибитор рецепторов интерлейкина 6; тоцилизумаб; CD19+В-клет-ки; В-клетки памяти; наивные В-клетки; двойные негативные В-клетки; проточная цитофлуорометрия. Для ссылки: Герасимова ЕВ, Попкова ТВ, Алексанкин АП и др. Субпопуляции В-лимфоцитов у больных ревматоидным артритом и влияние на них ингибитора рецепторов интерлейкина 6. Научно-практическая ревматология. 2018;56(6):731-738.

B-LYMPHOCYTE SUBPOPULATIONS IN PATIENTS WITH RHEUMATOID ARTHRITIS AND THE EFFECT OF AN INTERLEUKIN-6 RECEPTOR INHIBITOR ON THEM Gerasimova E.V.1, Popkova T.V.1, Aleksankin A.P.1, Martynova A.V.1, Nasonov E.L.1, 2

The clinical efficacy and safety of interleukin-6 (IL-6) receptor blockade have been well studied, but the data on the impact of therapeutic inhibition of IL-6 on B cells are scarce and contradictory. Preliminary reports have shown that B cell function and a humoral immune response may be modulated by an IL-6 receptor inhibitor. Objective: to assess the effect of 12-month tocilizumab (TCZ) therapy on B-cell phenotype and gene expression in RA and to analyze the association between B-cell subsets and RA activity.

Subjects and methods. Examinations were made in 24 active RA patients (20 women and 4 men) (median age, 55 [49; 64] years; disease duration, 72 [24; 108] months; DAS28 5.8 [5.3; 6.3]; the patients were seropositive for rheumatoid

factor (RF) (100%) and for anti-cyclic citrullinated peptide antibodies (87.3%). The patients received TCZ 8 mg/kg every 4 weeks. After 12 months of therapy, 54% of patients were categorized as good responders, 46% as moderate responders according to the EULAR response criteria. A control group consisted of 29 volunteers (21 women and 8 men; median age, 58.5 [53.0; 62.0] years).

Peripheral blood lymphocytes were immunophenotyped at the time of enrollment and after 12 months. The absolute and relative counts of CD19+B lymphocytes, memory B cells (CD19+CD27+), non-switched memory B cells (CD19+IgD+CD27+), switched memory B cells (CD19+IgD-CD27+), naive (CD19+IgD+CD27-), double-negative (CD19+IgD-CD27-), transitional (CD19+IgD+CD10+CD38++CD27) B cells, plasma cells (CD19+CD38+), and plasmablasts (CD19+CD38+++IgD-CD27+CD20-) were estimated using multicolor flow cytometry. Results and discussion. The relative and absolute counts of memory B cells (CD19+CD27+) (1.3 [0.9; 1.7]%, 0015 [0.001; 0.003]-109/l), switched memory B cells (CD19+IgD-CD27+) (6.8 [3.6; 11.6]%, 0.01 [0.005; 0.02]-10'/l), and the absolute number of transitional B cells (CD19+CD38++CD10+IgD+CD27-) (0.00009 [0; 0.00028]-10'/l) were found to be lower in RA patients than in donors: 2.2 [1.1; 3.0]%, 0.003 [0.001; 0.007]*10'/l; 12.8 [9.3; 17.0]%, 0.02 [0.01; 0.04]-10'/l; 0.0001 [0; 0.0003]-10'/l, respectively (p<0.05 for all cases). After 12 months of TCZ therapy initiation, there were decreases in the relative and absolute counts of plasmablasts (CD19+CD38+++CD27+IgD-CD20-) from 0.15 [0.1; 0.3] to 0.1 [0.01; 0.1]% and from 0.0003 [0.00007; 0.004]-10'/l to 0.0001 [0; 0.0003]-10'/l, respectively (p<0.05). At the same time, the relative and absolute counts of memory B cells (CD19+CD27+) and switched memory B cells (CD19+CD27+IgD-) remained lower in RA patients than in donors: 1.0 [0.7; 1.2] and 2.2 [1.1; 3.0]%; 0.001 [0.006; 0.003]-10'/l and 0.003 [0.001; 0.007]-10'/l; 3.1 [1.1; 4.2] and 12.8 [9.3; 17.0]%; 0.003 [0.002; 0.006]-109/l and 0.02 [0.01; 0.04]-10'/l, respectively (p<0.05 for all cases). Following 12 months of TCZ therapy, the numbers of other B-cell subpopulations were not considerably altered. When included in the study, the patients with RA showed correlations between the absolute count of memory B cells (CD19+CD27+) and the level of C-reactive protein (r=0.50; p<0.05); between the absolute count of plasmablasts (CD19+CD38+++CD27+IgD-CD20-) and the level of RF (r=0.41 and r=0.52; p<0.05). There were no correlations of B cell subsets with clinical and laboratory findings after 12 months of TCZ initiation.

Conclusion. Immunophenotyping of peripheral blood B lymphocyte subsets showed the lower relative and absolute counts of memory B cells (CD19+CD27+) and switched memory B cells (CD19+CD27+IgD-) in RA patients than in healthy donors. The found correlations between the counts of memory B cells and plasmablasts and the values of laboratory parameters in patients with high RA activity may suggest that B lymphocytes are involved in the pathogenesis of RA. There was a decline in plasmablast levels after 12 months of TCZ therapy.

Keywords: rheumatoid arthritis; interleukin-6 receptor inhibitor; tocilizumab; CD19+ B cells; memory B cells; naive B cells; double negative B cells; flow cytometry.

For reference: Gerasimova EV, Popkova TV, Aleksankin AP, et al. B-lymphocyte subpopulations in patients with rheumatoid arthritis and the effect of an interleukin-6 receptor inhibitor on them. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2018;56(6):731-738 (In Russ.).

doi: 10.14412/1995-4484-2018-731-738

Ревматоидный артрит (РА) — иммуновоспалитель-ное (аутоиммунное) ревматическое заболевание, характеризующееся тяжелым прогрессирующим поражением суставов и внутренних органов, развитие которого определяется сложным взаимодействием факторов внешней среды и генетической предрасположенности, ведущих к глобальным нарушениям в системе гуморального и клеточного иммунитета [1]. В основе развития РА лежит активация В-клеток, которая приводит как к антителозависимым, обусловливающим образование ревматоидного фактора (РФ) и антител к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП), так и неантителозависимым реакциям, включающим стимуляцию артритогенных Т-клеток и продукцию цитокинов [2—4]. Среди широкого спектра «провоспалительных» медиаторов, принимающих участие в патогенезе РА, важная роль принадлежит интерлейки-ну 6 (ИЛ6) [5, 6]. ИЛ6 — плейотропный цитокин, который синтезируется многими клетками, включая В-лимфоциты [7], и проявляет широкий спектр «провоспалительных» биологических эффектов. Он вызывает поликлональную активацию В-клеток, плазмоцитоз и В-клеточную неопла-зию [8].

Успех анти-В-клеточной терапии вызвал интерес к изучению влияния на субпопуляции В-лимфоцитов препаратов, направленных против воспалительных медиаторов [9]. Для лечения пациентов с высокой активностью РА с успехом применяются ингибиторы рецепторов ИЛ6, оказывающие быстрый положительный эффект в отношении широкого спектра клинических проявлений и лабораторных нарушений [6]. При хорошо изученной клинической эффективности и безопасности данные об их влиянии на В-клетки малочисленны и противоречивы [10, 11].

Цель настоящего исследования — уточнить влияние ингибитора рецепторов ИЛ6 на основные субпопуляции В-лимфоцитов периферической крови у пациентов с РА.

Материал и методы

В исследование включено 24 пациента (20 женщин и 4 мужчины) с достоверным диагнозом РА, установленным согласно критериям Американской коллегии ревматологов / Европейской антиревматической лиги (ACR/EULAR) 2010 г. Медиана возраста составила 55 [49; 64] лет, длительности РА — 72 [24; 108] мес. Все больные были серопозитивны по IgM РФ, 64% — по АЦЦП. Развернутая стадия РА зафиксирована у 8 (33%), поздняя — у 16 (67%) больных. Больные РА имели высокую степень активности заболевания: медиана DAS28 — 5,8 [5,3; 6,3], SDAI — 31 [24; 34], CDAI - 29 [24; 32] баллов; функциональное состояние пациентов по индексу HAQ — 1,6 [1,3; 2,1]. Внесу-ставные проявления выявлены у 38% больных. Общая характеристика пациентов с РА представлена в табл. 1.

У 42% пациентов отмечена неэффективность, у 58% — непереносимость предшествовавшей терапии БПВП (МТ, ЛЕФ, ССЗ). При включении в исследование ГК принимали 54% больных, НПВП — 75% (см. табл. 1). Терапия ГИБП до включения в исследование не проводилась. Всем пациентам в течение 12 мес проводилось лечение тоцилизумабом (ТЦЗ) в дозе 8 мг/кг, 11 из них (46%) получали его в виде монотерапии, 13 (54%) — в комбинации с МТ (медиана дозы 17,5 [15; 20] мг/нед). Контрольная группа состояла из 29 здоровых добровольцев (21 женщина и 8 мужчин, медиана возраста 58,5 [53; 62] года).

Для исследования использовали цельную кровь из локтевой вены в количестве 2,7 мл, которую собирали в вакуумную пробирку с добавлением солей ЭДТА в концентрации 1,6 мг/мл (S-monovette, 2,7 ml K3E; Sarstedt, Германия). Иммунофенотипирование В-лимфоцитов периферической крови, включавшее определение В-клеток (CD19+), общей популяции В-клеток памяти (CD19+CD27+), непереключенных (CD19+IgD+CD27+) и переключенных (CD19+IgD-CD27+) В-клеток памяти,

наивных (CD19+IgD+CD27-), двойных негативных клеток (CD19+IgD-CD27) и транзиторных (CD19+IgD+CD10+CD38++CD27-) В-клеток, плазмоци-тов (CD19+CD38+) и плазмобластов

(CD19+CD38+++IgD-CD27+CD20-), проводилось методом многоцветной проточной цитофлуорометрии. Использовались конъюгированные мышиные моноклональ-ные антитела (мАТ): CD19-ECD (R Phycoerythrin-Texas Red®-X, IgG1, фикоэритрин техасский красный); CD45-РС7 (R Phycoerythrin Cyanin 7, IgG1, фикоэритрин цианин 7), CD38-PC5 (R Phycoerythrin Cyanin 5.1, IgG1, фикоэритрин цианин 5.1); CD20-PC5 (Beckman Coulter, США); CD10-PE (IgG1, HI 10a), CD27-PE (IgG1, MT271; Becton Dickinson, США), а также человеческие мАТ: IgD-FITC (fluorescein isothiocyanate, IA62, флюоресцеин-изотиоциа-нат; Becton Dickinson, США). Изотипический (негативный) контроль проводился для определения границ неспецифического связывания рецепторов В-лимфоцитов с мАТ с помощью набора реагентов Simultest IMK Plus Kit (CD45-FITC, CD14-PE, CD3-FITC, CD19-PE, CD4-FITC, CD8-PE) и IgG1-FITC, IGG2а-PE (Becton Dickinson, США).

Для каждого пациента использовались две полипропиленовые пробирки Coulter (12x75 мм; Beckman Coulter, США). К 50 мкл (1*106 клеток) образцов крови добавляли 5 мкл меченых мАТ и помещали в темное место при комнатной температуре. После 15-минутной инкубации эритроциты лизировали с помощью коммерческого набора IOTest 3 Lysing Solution (Beckman Coulter, США). В полученную суспензию лимфоцитов вносили 50 мкл Flow-Count™ Fluorospheres и проводили оценку результатов пя-тицветного окрашивания лимфоцитов на анализаторе NAVIOS. Для каждого анализа было подсчитано 50 000 событий. Клеточные популяции идентифицировали c помощью программного обеспечения CXP (Beckman Coulter, США).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием компьютерной программы Statistica 8.0 (StatSoft Inc., США). Для параметров, распределение которых отличалось от нормального, при сравнении двух групп использовали U-критерий Манна—Уитни. Результаты представлены в виде медианы (Ме) с интер-

квартильным размахом [25-й; 75-й перцентили]. Различия считались значимыми при р<0,05.

Результаты

В отличие от здоровых доноров, у пациентов с РА на момент включения в исследование были выявлены более низкие уровни общей популяции В-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных В-клеток памяти (CD19+IgD-CD27+; р<0,05; табл. 2, рис. 1 и 2). Кроме того, у пациентов с РА, в отличие от группы контроля, отмечено достоверное снижение абсолютного числа транзитор-

Таблица 1 Общая характеристика пациентов с РА (n=24)

Показатель Значение

Возраст, годы, Ме [25-й; 75-й перцентили] 55 [49; 64]

Пол, женщины/мужчины, п (%) 20 (83) / 4 (17)

Длительность заболевания, мес, 72 [24; 108]

Ме [25-й; 75-й перцентили]

Стадия, п (%):

развернутая 8 (33)

поздняя 16 (67)

Внесуставные проявления, % 38

РАБ28, Ме [25-й; 75-й перцентили] 5,8 [5,3; 6,3]

РФ+, % 100

АЦЦП+, % 64

БРА!, Ме [25-й; 75-й перцентили] 31 [24; 34]

СРА!, Ме [25-й; 75-й перцентили] 29 [24; 32]

Ме [25-й; 75-й перцентили] 1,6 [1,3; 2,1]

Неэффективность трех и более БПВП, % 42

Непереносимость БПВП, п (%) 14 (58)

в том числе:

МТ 9 (38)

МТ+ЛЕФ 3 (12)

МТ+ЛЕФ+ССЗ 2 (8)

Прием ГК, % 54

Прием НПВП, % 75

Примечание. БПВП - базисные противовоспалительные препараты, МТ - ме-тотрексат, ЛЕФ - лефлуномид; ССЗ - сульфасалазин, ГК - глюкокортикоиды, НПВП - нестероидные противовоспалительные препараты. * - р=0,03.

Таблица 2 Численность основных субпопуляций В-лимфоцитов у больных РА и здоровых доноров, (%) / абсолютное количество (И09/л)

Субпопуляция

Доноры (n=29)

РА (n=24)

исходно

через 12 мес

СР19+ В-клетки

В-клетки памяти (СР19+СР27+)

Непереключенные В-клетки памяти

(С019+С027+!д0+)

Переключенные В-клетки памяти

(С019+С027+!д0-)

Двойные негативные В-клетки

(С019+С027-!дй-)

Наивные В-клетки

(С019+С027-!дй+)

Транзиторные В-клетки

(С019+С038++С010+!дР+С027-)

Плазмобласты

(СР19+С038+++С027+!дО-С020-)

8,5 (7,2-11,0) / 0,2 (0,1-0,2) 2,2 (1,1-3,0) */ 0,003 (0,001-0,007)* 7,4 (3,7-11,1) / 0,01 (0,005-0,02)

12,8 (9,3-17,0)* / 0,02 (0,01-0,04)*

13,3 (7,1-19,3) / 0,02 (0,01-0,02)

64,7 (57,6-72,4) / 0,1 (0,06-0,1) 0,1 (0-0,1) / 0,0001 (0-0,0003)*

8,4 (6,0-10,5) / 0,11 (0,1-0,2) 1,3 (0,9-1,7)* / 0,0015(0,001-0,003)* 7,5 (5,1-11,4) / 0,01 (0,006-0,01)

6,8 (3,6-11,6)* / 0,01 (0,005-0,02)*

15,1 (11,9-18,1) / 0,02 (0,01-0,03)

70,9 (62,5-75,6) / 0,095 (0,07-0,1) 0 (0-0,1) / 0,00009 (0-0,00028)*

8,7 (7,7-12,1) / 0,15 (0,1-0,3) 1,1 (0,7-1,2)* / 0,001 (0,01006-0,003)* 7,0 (4,8-9,9) / 0,01 (0,006-0,01)

3,1 (1,1-4,2)* / 0,003(0,002-0,006)*

11,4 (7,7-18,4) / 0,02 (0,01-0,03)

76,9 (69,3-82,9)* / 0,1 (0,07-0,2) 0,05 (0-0,1) / 0,00003 (0-0,0001)

0,1 (0,1-0, 2) / 0,0002 (0,0001-0,0004) 0,2 (0,1-0,3)** / 0,0003 (0,0001-0,0004)** 0,1 (0,01-0,1)** / 0,0001 (0-0,0003)*

Примечание. * - р<0,05 между донорами и пациентами с РА; ** - р<0,05 между пациентами с РА в начале исследования и после 12 мес терапии ТЦЗ.

ных В-клеток (CD19+CD38++CD10+ IgD+CD27-; р<0,05; рис. 3). Уровни CD19+В-клеток, непереключенных В-кле-ток памяти, наивных В-клеток, двойных негативных В-кле-ток и плазмобластов у больных РА и доноров достоверно не различались (р>0,05).

У больных РА при включении в исследование была выявлена корреляция между абсолютным числом В-клеток памяти (CD19+CD27+) и концентрацией С-реактивного белка (СРБ) (1=0,50, р<0,05); абсолютным числом плазмобластов (CD19+СD38+++CD27+IgD-CD20-) и уровнем РФ (г=0,52; р<0,05; рис. 4).

После 12 мес терапии ТЦЗ согласно критериям эффективности ЕиЬАЯ ^А828) хороший эффект достигнут у 54%, удовлетворительный — у 46% больных РА. Отмечено снижение активности РА по индексам DAS28, SDAI, CDAI, острофазовых показателей (СОЭ, СРБ), улучшение функционального состояния пациентов по НАф. К окончанию исследования у 54% пациентов отмечена ремиссия заболевания (DAS28 <2,6), у 46% — низкая активность (DAS28 — 3,2—2,6). Кроме того, в два раза снизилось число больных, получающих ГК (с 54 до 29%; р>0,05), и в три раза - НПВП (с 75 до 25%; р=0,05; табл. 3).

Отмечалось достоверное снижение относительного и абсолютного количества плазмобластов (CD19+СD38+++CD27+IgD-CD20-; р<0,05; см. табл. 2).

Выявленная тенденция к снижению относительного числа переключенных В-клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) и общей популяции В-клеток памяти (CD19+CD27+) не достигла статистической значимости (р>0,05). Изменений других субпопуляций В-клеток у больных РА на фоне 12 мес терапии ТЦЗ не наблюдалось.

Анализ исходного уровня субпопуляций В-лимфоци-тов, а также их динамики в зависимости от эффективности проводимой терапии и достижения ремиссии или низкой активности заболевания к 12-му месяцу наблюдения каких-либо закономерностей не выявил.

По сравнению с донорами у пациентов с РА к концу исследования сохранялось более низким относительное и абсолютное количество переключенных В-клеток памяти (CD19+CD27+IgD-). У больных РА после 12 мес терапии ТЦЗ зафиксирована более низкая относительная и абсолютная численность общей популяции В-клеток памяти (CD19+CD27+) и высокое процентное содержание наивных В-клеток (CD19+CD27-IgD+) по сравнению с данными показателями здоровых доноров. Численность других субпопуляций В-клеток у пациентов с РА после 12 мес терапии ТЦЗ не отличалась от таковой от контрольной группы.

Корреляций субтипов В-клеток с клинико-лабора-торными показателями РА у пациентов в конце наблюдения обнаружено не было.

=

=

м -1- .

РА Доноры

Группы

0,012

0,010

0,008

о

о 0,006

:г

о 0,004

А

0,002

0,000

0,002

РА

Доноры

Группы

Рис. 1. Сравнение относительного и абсолютного количества В-клеток памяти (С019+С027+) у больных РА в начале исследования (п=24) и здоровых доноров (п=29), Ме [25-й; 75-й перцентили]

£ ^

.........

......=Р.....

■ \ \ —

±

РА

Доноры

0,06

0,05

0,04

о

о 0,03

:г

о 0,02

А

0,01

0,00

0,01

РА

Доноры

Группы

Группы

Рис. 2. Сравнение относительного и абсолютного количества переключенных В-клеток памяти (СШ9+!д0-С027+) у больных РА в начале исследования (п=24) и здоровых доноров (п=29), Ме [25-й; 75-й перцентили]

Обсуждение

Участие В-клеток в иммунопа-тогенезе РА реализуется за счет нескольких взаимосвязанных механизмов: синтеза аутоантител и «провос-палительных» цитокинов, антиген-презентирующей и иммунорегулиру-ющей функций, приводящих к активации аутореактивных Т-клеток [2-4]. Активация В-клеток наблюдается у пациентов с РА уже в «прекли-ническую» и раннюю стадии болезни [12]. У лиц с высоким риском развития РА отмечена тенденция к ассоциации между позитивностью по АЦЦП

0,0006 0,0005 0,0004 § 0,0003

г

б 0,0002 А

0,0001 0,0000

-0,0001

РА Доноры

Группы

Рис. 3. Сравнение абсолютного числа транзиторных В-клеток (Ст9+С038++С010+!д0+С027-) у больных РА в начале исследования (п=24) и здоровых доноров (п=29), Ме [25-й; 75-й перцентили]

и увеличением числа CD19+ В-клеток в лимфатических узлах [13]. Показано, что в крови и синовиальной жидкости пациентов с РА присутствуют цитруллинин-реактив-ные В-клетки [14, 15]. Наиболее важная роль в поддержании хронического воспаления принадлежит В-клеткам памяти, которые обеспечивают быстрый иммунный ответ и выработку большого количества иммуноглобулинов при повторном введении антигена [16, 17]. Полагают, что активация В-клеток при РА происходит в синовиальной оболочке и лимфатических узлах. При высокой активности заболевания отмечается их накопление с изменениями концентраций отдельных субпопуляций в периферической крови [17—19].

В нашем исследовании наблюдалось значимое уменьшение относительной и абсолютной численности общей популяции В-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных В-клеток памяти (CD27+IgD-) у больных РА по сравнению с донорами при неизмененных показателях непереключенных В-клеток памяти (CD27+IgD+) и наивных В-клеток (CD27-IgD+).

Исследование Е.В. Супоницкой и соавт. [20] по им-мунофенотипированию субпопуляций В-лимфоцитов в периферической крови у доноров и больных РА выявило снижение процентного содержания общего количества В-клеток памяти (CD19+CD27+; р=0,038) у больных РА и отсутствие различий по уровням переключенных и непереключенных В-клеток памяти, наивных и транзи-торных В-лимфоцитов, плазмобластов. О более низком относительном количестве IgM В-клеток памяти в периферической крови больных РА (n=22) по сравнению с донорами свидетельствуют и результаты работы S. Nakayamada и соавт. [21]. В исследовании J. Lübbers и соавт. [22] обнаружено снижение уровней CD27+ B-клеток памяти и активированных CD80+ B-клеток у 89 пациентов с ранним нелеченым РА по сравнению с донорами (n=37).

В работе P. Roll и соавт. [10] у больных РА выявлена абсолютная В-клеточная лимфопения, поэтому и абсолютное количество переключенных (CD27+IgD-) и непере-ключенных (CD27+IgD+) В-клеток памяти и наивных клеток (CD27-IgD+) было более низким, чем у здоровых доноров. Анализ же относительного количества В-клеток в группе больных РА определил увеличение доли переключенных (CD27+IgD-) и непереключенных (CD19+CD27+) В-клеток памяти, а также уменьшение процентного содержания наивных В-клеток (CD27-IgD+) по сравнению с донорами.

Вклад непереключенных В-клеток памяти (CD19+CD27+IgD+) в развитие РА представляется спорным. Процентное содержание этих клеток в периферической крови у больных РА либо сопоставимо с их уровнем у здорового контроля [18], что согласуется с нашими данными, либо снижено [10, 23].

Напротив, преобладание в В-клеточной субпопуляции двойных негативных В-клеток, которые чаще относят к В-клеткам памяти [16, 17], может отражать активацию В-клеток при ревматоидном воспалении. Об этом свидетельствует ряд исследований [11, 21, 24], продемонстрировавших увеличение относительного числа этих клеток в популяции В-лимфоцитов периферической крови у больных с высокой активностью РА. Фенотипиче-ский анализ двойных негативных В-клеток (CD19+CD27-IgG-) у больных РА (n=44) показал, что их

количество было выше, чем в группе здоровых доноров (п=45), и они были представлены гетерогенной смесью клеток, экспрессировавших IgA, ^М и, особенно, IgG [24]. В работе португальских исследователей Я. Моига и соавт. [11] у пациентов с ранним нелеченым РА (п=13) и больных, получающих МТ (п=20), также обнаружено увеличение относительного количества двойных негативных В-клеток (CD27-IgD-), относительное и абсолютное число других субтипов В-клеток не отличалось от группы здорового контроля.

-0,0001 0,0000 0,0001 0,0002 0,0003 0,0004 0,0005 0,0006 0,0007 Абс. число плазмобластов (CD19+CD38+++CD27+IgD-CD20-)

Рис. 4. Корреляции между абсолютным общим содержанием В-клеток памяти и уровнем СРБ, количеством плазмобластов и содержанием РФ у больных РА в начале исследования

Таблица 3 Динамика индексов активности

(DAS28, SDAI, CDAI), функционального статуса (HAQ), лабораторных показателей у больных РА на фоне терапии ТЦЗ, Ме [25-й; 75-й перцентили]

Индекс Исходно Через 12 мес

DAS28 6,2 [5,3; 8,3] 2,2 [1,8; 2,5] *

SDAI 31 [24; 34] 5 [3; 6] *

CDAI 29 [24; 32] 3 [2; 5] *

HAQ 1,6 [1,3; 2,1] 1,1 [0,9; 1,5] *

СОЭ, мм рт. ст. 50 [30; 67] 8 [4; 16] *

СРБ, мг/л 28 [11; 82] 0,5 [0,2; 0,8] *

Примечание. * - p<0,05.

В то же время данные исследования D. Adlowitz и со-авт. [17] свидетельствуют об отсутствии увеличения числа В-клеток данного типа в крови больных РА по сравнению с донорами. В нашей работе некоторое увеличение относительного количества двойных негативных В-клеток (CD19+CD27-IgD-), отмечавшееся в периферической крови больных РА по сравнению с донорами, не достигло статистической значимости. Ожидается, что продолжающиеся исследования, в том числе и наше, позволят получить более определенную информацию и выявить признаки активации В-клеток памяти при РА.

Процесс активации и пролиферации В-клеток завершается созреванием и дифференцировкой активированных В-лимфоцитов в плазматические клетки, продуцирующие антитела. Для пациентов с РА не характерно увеличение числа плазмоцитов и их предшественников плазмобластов в периферической крови [10]; таких изменений не наблюдалось и в нашем исследовании. В отличие от РА, увеличение количества (CD38highCD19lowIgD-) плазмобластов обнаружено у пациентов с обострением системной красной волчанки (СКВ) с восстановлением их до нормального уровня при ингибировании ИЛ6 [25]. В работе А.А. Меснянкиной и соавт. [26] у пациентов с высокой активностью СКВ отмечено достоверное повышение относительного и абсолютного числа плазмоцитов (CD19+СD38+) и двойных негативных В-клеток (CD19+CD27-IgD-) по сравнению с группой здоровых доноров.

Идентификация незрелых транзиторных В-клеток периферической крови (CD19+CD38++CD10+IgD+CD27-) позволяет оценить активность аутоиммунных заболеваний [27]. Важно отметить, что накопление транзиторных В-кле-ток, в отличие от богатых CD38+++ плазмобластов, может наблюдаться во вторичных лимфоидных органах, в первую очередь, в лимфатических узлах. Этим фактом можно объяснить выявленное в нашем исследовании снижение абсолютного количества транзиторных В-клеток (CD38++CD10+IgD+CD27-) у больных активным РА по сравнению с донорами.

Влияние ингибитора рецепторов ИЛ6 на В-клетки. ИЛ6 играет важную роль в дифференцировке клеток периферической крови и является наиболее значимым цитоки-ном, влияющим на хемотаксис В-клеток и выработку антител плазматическими клетками [28, 29].

Основное влияние ингибиторы рецептора ИЛ6 оказывают на популяцию В-клеток памяти [10]. Особенно восприимчивы к их действию непереключенные (IgD+CD27+) и переключенные (IgD-CD27+) В-клетки памяти [30].

В нашем исследовании после 12 мес терапии ТЦЗ относительное и абсолютное количество В-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) оказалось ниже у пациентов с РА по сравнению с донорами. При сравнении численности субпопуляций В-клеток у больных до и после 12 мес терапии ТЦЗ мы наблюдади снижение только относительного и абсолютного количества плазмобластов, в то же время снижение числа переключенных В-клеток памяти не достигло статистической значимости. Об участии переключенных В-клеток памяти и плазмобластов в поддержании ревматоидного воспаления может свидетельствовать выявленная в настоящем исследовании корреляция их числа с характерными для РА лабораторными нарушениями (повышение уровней СРБ, РФ).

В ранее проведенном исследовании P. Roll и соавт. [10] у больных РА после 24 нед терапии ТЦЗ отмечено снижение относительного и абсолютного числа переключенных В-клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) и абсолютного количества непереключенных В-клеток памяти (CD19+CD27+IgD+), в то время как содержание плазмобластов не менялось. Снижение относительного количества непереключенных В-клеток памяти коррелировало с уменьшением DAS28, абсолютное число наивных В-кле-ток (CD19+CD27-IgD+) у больных РА через 24 нед после начала терапии ТЦЗ увеличилось, а их процентное содержание оставалось неизменным.

J. Kikuchi и соавт. [31], изучая изменения процентного содержания В-клеток у 39 больных РА после 52 нед терапии ТЦЗ, отметили увеличение числа наивных и уменьшение общего количества В-клеток памяти. В нашем исследовании, несмотря на то что абсолютное число наивных В-клеток (CD19+CD27-IgD+) у больных в ходе наблюдения не менялось, относительное их количество несколько увеличилось к концу наблюдения и превысило аналогичный показатель в группе контроля. Кроме того, были выявлены тенденции к изменению соотношения В-клеток памяти и наивных В-клеток в сторону увеличения процентного содержания последних (р>0,05). Поэтому у больных РА после 12 мес терапии ТЦЗ относительная и абсолютная численность общей популяции В-клеток памяти оказалась выше, а относительное содержание наивных В-клеток — ниже, чем в группе контроля.

Р. Roll и соавт. [10], в отличие от полученных нами результатов, выявили увеличение относительного и абсолютного количества транзиторных В-клеток (CD38highIgD+CD10+) на фоне терапии ТЦЗ, что может указывать на улучшение регенерационной способности, «ювенилизацию» периферических В-клеток и уменьшение нагрузки на В-клетки памяти при ингибировании ИЛ6.

В исследовании японских авторов [21] под влиянием 24-недельной терапии ТЦЗ снизился относительный уровень двойных негативных В-клеток и отмечалась тенденция к снижению числа плазмобластов, изменений других подтипов В-клеток не обнаружено. В нашей работе прослеживалась тенденция к уменьшению двойных негативных В-клеток при достоверном снижении относительного и абсолютного содержания плазмобластов.

В работе Z. Mahmood и соавт. [24] через 12, 24, 48 нед после назначения ТЦЗ больным РА (n=44) наблюдалось снижение относительного количества двойных негативных В-клеток и мутировавших иммуноглобулино-вых рецепторов на них. Проведенный логистический регрессионный анализ показал, что процентное содержание этого типа В-клеток у больных РА до назначения ТЦЗ обратно коррелирует с последующим хорошим ответом на терапию по критериям EULAR (отношение шансов — ОШ — 1,48; 95% доверительный интервал — ДИ — 1,05—2,06; р=0,024). Это позволило авторам рассматривать процентное содержание двойных негативных В-кле-ток (CD19+CD27-IgD-) периферической крови в качестве предиктора ответа на ТЦЗ.

R. Moura и соавт. [11] при назначении ТЦЗ 11 больным РА в среднем через 8 мес отмечали восстановление относительного количества двойных негативных В-клеток (CD27-IgD-) до уровня контрольной группы. В данной работе не выявлено ассоциаций субтипов В-клеток с возрастом и клинико-лабораторными параметрами РА.

S. Fleischer и соавт. [32] обнаружили, что выработка цитокинов B-клетками заметно ухудшалась у пациентов с активным РА при недостаточной эффективности терапии БПВП и увеличивалась после назначения ТЦЗ. В работе не обнаружено существенных различий межу экспрессией ИЛ6 и ИЛ10 в В-клетках больных РА и здорового контроля, но было выявлено нарушение регуляции выработки ИЛ8 и цитокина семейства ФНО TRAIL, что, предположительно, может способствовать прогрессирова-нию болезни. Показано, что ассоциация между клинической эффективностью ТЦЗ и продуцированием В-клетка-ми таких хемокинов, как макрофагальный воспалительный белок 1|3 и трансформирующий фактор роста в, свидетельствует о нарушении выработки цитокинов в В-клет-ках при РА.

R. Moura и соавт. [11] после лечения ТЦЗ также обнаружили повышение экспрессии некоторых маркеров В-клеток, таких как TACI, TLR9, CD5, CD95 и HLA-DR, в то время как экспрессия CXCL13, sCD23 и BAFF существенно не менялась.

Недавние исследования [33] показали, что мик-роРНК-155, важный регулятор активации В-клеток, в большом количестве содержится в В-клетках периферической крови, особенно в В-клетках памяти (IgD-CD27-), у АЦЦП-позитивных пациентов, что может поддерживать хроническую активацию В-клеток при РА. Нормализация содержания IgD-CD27- B-клеток в периферической крови после лечения ТЦЗ может указывать на важную роль этой субпопуляции В-клеток, способствующих активации Т-клеток, синтезу цитокинов и антител.

Таким образом, ингибиторы рецепторов ИЛ6, блокируя один из важнейших «провоспалительных» цитокинов, позитивно влияют на иммуновоспалительные процессы, лежащие в основе развития РА. Экспериментальная работа Y. Wu и соавт. [34] продемонстрировала выраженное подавление иммунных ответов В-клеток, особенно снижение уровней IgG1, IgG2a и IgG3, при иммунизации Т-клеточ-но-зависимым антигеном мышей, лишенных рецепторов

ЛИТЕРАТУРА

1. Насонов ЕЛ. Проблемы иммунопатологии ревматоидного артрита: эволюция болезни. Научно-практическая ревматология. 2017;55(3):277-94 [Nasonov EL. Problems of rheumatoid arthritis immunopathology: evolution of the disease. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2017;55(3):277-94 (In Russ.)]. doi: 10.14412/19954484-2017-277-294

2. Leslie D, Lipsky P, Notkins AL. Autoantibodies as predictors of disease. J Clin Invest. 2001;108:1417-22. doi: 10.1172/JCI14452

3. Leandro M. B cells and rheumatoid factors in autoimmunity. Int J Rheum Dis. 2015;18:379-81. doi: 10.1111/1756-185X.12690

4. Lino AC, Dorner T, Bar-Or A, Fillatreau S. Cytokine-producing B cells: a translational view on their roles in human and mouse autoimmune diseases. Immunol Rev. 2016;269:130-44.

doi: 10.1111/imr.12374

5. Насонов ЕЛ, Лила АМ. Ингибиция интерлейкина 6 при иммуновоспалительных ревматических заболеваниях: достижения, перспективы и надежды. Научно-практическая ревматология. 2017;55(6):590-9 [Nasonov EL, Lila AM. Inhibition of interleukin 6 in immune inflammatory rheumatic diseases: achievements, prospects, and hopes. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2017;55(6):590-9 (In Russ.)]. doi: 10.14412/1995-44842017-590-599

ИЛ6. Вероятно, ИЛ6 имеет большое значение для индукции созревания и/или поддержания жизнедеятельности плазматических клеток, которые продуцируют эти имму-ноглобулиновые подклассы. Действительно, мАТ, которые блокируют опосредуемую рецепторами ИЛ6 сигнализацию, оказались эффективными в лечении РА [6].

Заключение

Иммунофенотипирование субтипов В-лимфоцитов периферической крови показало уменьшение относительного и абсолютного количества B-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных B-клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) у пациентов с РА. Выявленные ассоциации между содержанием В-клеток памяти, плазмобла-стов и значениями лабораторных показателей у больных с высокой активностью РА могут свидетельствовать об участии В-лимфоцитов в патогенезе заболевания. Снижение уровня плазмобластов на фоне терапии ТЦЗ может указывать на возможное влияние блокады ИЛ6 на дифференци-ровку активированных В-лимфоцитов. Существенных изменений других субпопуляций В-клеток после 12 мес терапии ТЦЗ обнаружено не было. Однако, учитывая малое число включенных в исследование пациентов, необходимо продолжить изучение влияния ингибитора рецепторов ИЛ6 на фенотипический состав В-лимфоцитов для оценки возможности прогнозирования эффективности данного ГИБП при лечении РА.

Прозрачность исследования

Исследование не имело спонсорской поддержки. Авторы несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и других взаимоотношениях

Все авторы принимали участие в разработке концепции статьи и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за статью.

6. Scott LJ. Tocilizumab: A Review in Rheumatoid Arthritis. Drugs. 2017 Nov;77(17):1865-79. doi: 10.1007/s40265-017-0829-7

7. Yeo L, Toellner KM, Salmon M, et al. Cytokine mRNA profiling identifies B cells as a major source of RANKL in rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis. 2011 Nov;70(11):2022-8.

doi: 10.1136/ard.2011.153312

8. Mihara M, Hashizume M, Yoshida H, et al. IL-6/IL-6 receptor system and its role in physiological and pathological conditions. Clin Sci (Lond). 2012 Feb;122(4):143-59.

doi: 10.1042/CS20110340

9. Burmester GR, Feist E, Dö rner T. Emerging cell and cytokine targets in rheumatoid arthritis. Nat Rev Rheumatol. 2014 Feb;10(2):77-88. doi: 10.1038/nrrheum.2013.168

10. Roll P, Muhammad K, Schumann M, et al. In vivo effects of the anti-interleukin-6 receptor inhibitor tocilizumab on the B cell compartment. Arthritis Rheum. 2011 May;63(5):1255-64.

doi: 10.1002/art.30242

11. Moura RA, Quaresma C, Vieira AR, et al. B-cell phenotype and IgD-CD27- memory B cells are affected by TNF-inhibitors and tocilizumab treatment in rheumatoid arthritis. PLoS One. 2017 Sep 8;12(9):e0182927. doi: 10.1371/journal.pone.0182927

12. Lubbers J, Vosslamber S, van de Stadt LA, et al. B cell signature contributes to the prediction of RA development in patients with arthralgia. Ann Rheum Dis. 2015;74:1786-8.

doi: 10.1136/annrheumdis-2015-207324

13. Van Baarsen LGM, de Hair MJH, Ramwadhdoebe TH, et al. The cellular composition of lymph nodes in the earliest phase of inflammatory arthritis. Ann Rheum Dis. 2013;72:1420-4.

doi: 10.1136/annrheumdis-2012-202990

14. Amara K, Steen J, Murray F, et al. Monoclonal IgG antibodies generated from joint-derived B cells of RA patients have a strong bias toward citrullinated autoantigen recognition. J Exp Med. 2013;210:445-55. doi: 10.1084/jem.20121486

15. Li S, Yu Y, Yue Y, et al. Autoantibodies from single circulating plasmablasts react with citrullinated antigens and Porphyromonas gingivalis in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 2016;68:614-26. doi: 10.1002/art.39455

16. Muhammad K, Roll P, Einsele H, et al. Delayed acquisition of somatic hypermutations in repopulated IGD+CD27+ memory B cell receptors after rituximab treatment. Arthritis Rheum. 2009;60:2284-93. doi: 10.1002/art.24722

17. Adlowitz DG, Barnard J, Biear J, et al. Expansion of Activated Peripheral Blood Memory B Cells in Rheumatoid Arthritis, Impact of B Cell Depletion Therapy, and Biomarkers of Response. PLoS One. 2015 Jun 5;10(6):e0128269.

doi: 10.1371/journal.pone.0128269

18. Fekete A, Soos L, Szekanecz Z, et al. Disturbances in B- and T-cell homeostasis in rheumatoid arthritis: suggested relationships with antigen-driven immune responses. J Autoimmun. 2007;29:154-63. doi: 10.1016/j.jaut.2007.07.002

19. Moura RA, Graca L, Fonseca JE. To B or not to B the conductor of rheumatoid arthritis orchestra. Clin Rev Allergy Immunol. 2012 Dec;43(3):281-91. doi: 10.1007/s12016-012-8318-y

20. Супоницкая ЕВ, Алексанкин АП, Александрова ЕН и др. Определение субпопуляций В-лимфоцитов периферической крови методом проточной цитофлуорометрии у здоровых лиц и больных ревматическими заболеваниями. Клиническая лабораторная диагностика. 2015;60(6):30-33 [Suponitskaya EV, Aleksankin AP, Alexandrova EN, et al. Characterization of peripheral blood b-cell subset in patients with systemic lupus erythe-matosus. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2015;60(6):30-3 (In Russ.)].

21. Nakayamada S, Kubo S, Yoshikawa M, et al. Differential effects of biological DMARDs on peripheral immune cell phe-notypes in patients with rheumatoid arthritis. Rheumatology (Oxford). 2018 Jan 1;57(1):164-74. doi: 10.1093/rheumatol-ogy/kex012

22. Lübbers J, van Beers-Tas MH, Vosslamber S, et al. Changes in peripheral blood lymphocyte subsets during arthritis development in arthralgia patients. Arthritis Res Ther. 2016;18(1):205.

doi: 10.1186/s13075-016-1102-2

23. Moura RA, Weinmann P, Pereira PA, et al. Alterations on peripheral blood B-cell subpopulations in very early arthritis patients. Rheumatology (Oxford). 2010;49:1082-92. doi: 10.1093/rheumatol-ogy/keq029

24. Mahmood Z, Muhammad K, Schmalzing M, et al. CD27-IgD-memory B cells are modulated by in vivo interleukin-6 receptor

(IL-6R) blockade in rheumatoid arthritis. Arthritis Res Ther. 2015 Mar 14;17:61. doi: 10.1186/s13075-015-0580-y

25. Illei GG, Shirota Y, Yarboro CH, et al. Tocilizumab in systemic lupus erythematosus: data on safety, preliminary efficacy, and impact on circulating plasma cells from an open-label phase I dosage-escalation study. Arthritis Rheum. 2010;62:542-52.

doi: 10.1002/art.27221

26. Меснянкина АА, Соловьев СК, Александрова ЕН и др. Динамика субпопуляции В-лимфоцитов у больных системной красной волчанкой на фоне терапии генно-инженерными биологическими препаратами. Научно-практическая ревматология. 2017;55(3):252-60 [Mesnyankina AA, Solovyev SK, Aleksandrova EN, et al. The time course of changes in B lymphocyte subpopulations in patients with systemic lupus erythematosus during therapy with biological agents. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2017;55(3):252-60 (In Russ.)].

doi: 10.14412/1995-4484-2017-252-260

27. Marie-Cardine A, Divay F, Dutot I, et al. Transitional B cells in humans: characterization and insight from B lymphocyte reconstitution after hematopoietic stem cell transplantation. Clin Immunol. 2008;127:14-25. doi: 10.1016/j.clim.2007.11.013

28. Fonseca JE, Santos MJ, Canhao H, Choy E. Interleukin-6 as a key player in systemic inflammation and joint destruction. Autoimmun Rev. 2009;8:538-42. doi: 10.1016/j.autrev.2009.01.012

29. Jourdan M, Cren M, Robert N, et al. IL-6 supports the generation of human long-lived plasma cells in combination with either APRIL or stromal cell-soluble factors. Leukemia. 2014 Aug;28(8):1647-56. doi: 10.1038/leu.2014.61

30. Muhammad K, Roll P, Seibold T, et al. Impact of IL-6 receptor inhibition on human memory B cells in vivo: impaired somatic hypermutation in preswitch memory B cells and modulation of mutational targeting in memory B cells. Ann Rheum Dis. 2011;70:1507-10. doi: 10.1136/ard.2010.141325

31. Kikuchi J, Hashizume M, Kaneko Y, et al. Peripheral blood CD4(+)CD25(+)CD127(low) regulatory T cells are significantly increased by tocilizumab treatment in patients with rheumatoid arthritis: increase in regulatory T cells correlates with clinical response. Arthritis Res Ther. 2015 Jan 21;17:10.

doi: 10.1186/s13075-015-0526-4

32. Fleischer S, Ries S, Shen P, et al. Anti-interleukin-6 signalling therapy rebalances the disrupted cytokine production of B cells from patients with active rheumatoid arthritis. Eur J Immunol. 2018 Jan;48(1):194-203. doi: 10.1002/eji.201747191

33. Alivernini S, Kurowska-Stolarska M, Tolusso B, et al. MicroRNA-155 influences B-cell function through PU.1 in rheumatoid arthritis. Nat Commun. 2016 Sep 27;7:12970. doi: 10.1038/ncomms12970

34. Wu Y, El Shikh ME, El Sayed RM, et al. IL-6 produced by immune complex-activated follicular dendritic cells promotes germinal center reactions, IgG responses and somatic hypermutation. IntImmunol. 2009;21:745-56. doi: 10.1093/intimm/dxp041