CC BY
13
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
и 595. Появление устойчивости к действию противовирусных препаратов у реципиентов алло-ГСК считается редким событием (менее 4% случаев), однако данные литературы крайне скудны.
Цель работы. Определение мутаций в гене вирусной фосфо-трансферазы (ЦЕ97), ассоциированных с устойчивостью к действию ганцикловира у реципиентов аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.
Материалы и методы. В исследование были включены 9 образцов ДНК ЦМВ, выделенной из периферической крови 8 реципиентов алло-ГСК с ЦМВ-инфекцией, проходивших лечение в клиниках ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России с 2016 по 2017 г. Соотношение мужчин/женщин — 2/6. Медиана возраста составила 39 (диапазон 24—64) лет. Все пациенты демонстрировали лабораторные признаки резистентной формы ЦМВИ, согласно следующим критериям (выполнение более одного из условий): 1) более 1 месяца положительных результатов определения ДНК ЦМВ (при условии регулярного мониторинга не меньше 1 раза в 2 недели); 2) вирусная нагрузка в образцах >10 000 копий геном-эквивалент на 10 000 ядросо-держащих клеток (коп); 3) раннее выявление ДНК ЦМВ (до 30 дней) после алло-ГСК. Определение мутаций осуществлялось с помощью секвенирования по методу Сэнгера.
Результаты и обсуждение. У всех пациентов, включенных в исследование, до трансплантации в крови были выявлены анамнестические анти-ЦМВ антитела класса G, что указывало на факт инфицирования вирусом еще до операции. Другими словами, ни в одном случае не было зафиксировано первичной ЦМВ-ин-
фекции в результате трансплантации. Мутации были обнаружены в 4 из 9 образцов, 2 из которых принадлежали одному пациенту, т.е. у 3 из 8 пациентов. Мутация C592G была обнаружена в 2 из 4 образцов, в двух других образцах были выявлены мутации C603W и C607F. В образцах одного пациента были выявлены разные мутации (C592G и C603W). Вирусная нагрузка в крови была статистически значимо выше у пациентов-носителей штамма с мутацией в изучаемом регионе гена (рис. 1). Также замечено, что у пациентов с мутантным штаммом ЦМВ вирусная ДНК выявляется в крови на более поздних сроках после алло-ТГСК и более длительно, при этом вирусная нагрузка в большинстве случаев оказывается в области высоких значений (рис. 2). Потенциально возможным методом лечения при резистентных к терапии ганцикловиром формах ЦМВИ является использование ЦМВ-специф ичных лимфоцитов донора. Работа в этом направлении ведется, однако это требует дальнейшего изучения.
Заключение. Показано, что частота детекции вирусных штаммов с мутациями, потенциально ведущими к устойчивости к действию ган-цикловира и его производных, довольно высока — три случая из восьми. Были обнаружены следующие ранее описанные мутации, ассоциированные с устойчивостью к действию противовирусных препаратов: C592G, C607F и C603W. Наличие и характер мутации влияет на вирусную нагрузку и длительность выявления в крови реципиентов ДНК ЦМВ. Потенциально возможным методом лечения при резистентных к терапии ганцикловиром формах ЦМВ является использование ЦМВ-специф ичных лимфоцитов донора. Работа в этом направлении ведется, однако это требует дальнейшего изучения.
Трацевская Ж. В., Ковригина А. М., Чеботарев Д. И., Меликян А. Л., Абдуллаев А. О., Судариков А. Б.
СТРУКТУРА Ph-НЕГАТИВНЫХ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПО ДАННЫМ ФГБУ «НМИЦ ГЕМАТОЛОГИИ» МИНЗДРАВА РОССИИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В структуре РЬ-негативных миелопролиферативных заболеваний (РЬ- МПЗ) выделяют истинную полицитемию (ИП), первичный миелофиброз (ПМФ), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и миелопролиферативное заболевание, неклассифицируемое (МПЗ-Н). В рамках комплексной диагностики РЬ- МПЗ в главные критерии выведено гистологическое исследование трепанобиоптата костного мозга с использованием гистохимических методов окраски для оценки степени ретикулинового и коллагенового фиброза стромы. Особой сложностью характеризуется диагностика ранних стадий РЬ- МПЗ.
Цель работы. Установить частоту диагностики нозологических форм в группе РЬ-МПЗ и частоту обнаружения мутаций JAK2,
CALR, MPL.
Материалы и методы. На основе базы данных патологоана-томического отделения НМИЦ гематологии исследований тре-панобиоптатов костного мозга, с учетом клинико-лабораторных и молекулярных данных, были проанализированы случаи диагностики РЬ- МПЗ у пациентов, проходивших обследование и лечение в НМИЦ гематологии, и пациентов из других медицинских учреждений с января 2014 г. по июнь 2017 г. Гистологическое и гистохимическое исследования проводились на срезах с парафиновых блоков трепанобиоптатов костного мозга (фиксированный материал в формалине или консультативный материал, присланный в виде готовых парафиновых блоков, с предоставлением необходимых клинико-ана-мнестических, лабораторных данных). Молекулярное исследование
на наличие/отсутствие драйверных мутаций JAK2, CALR, MPL было проведено в лаборатории молекулярной гематологии НМИЦ гематологии (зав. лаб. Судариков А.Б.). Детекция мутаций ЗАК2 иМРЕ была проведена с использованием количественной аллель-специфической (АС) ПЦР РВ, мутации САЕК исследовали фрагментным анализом с последующим сиквенсом по Сэнгеру (у части пациентов было проведено молекулярное определение 1-го и 2-го типов мутации САЕК).
Результаты и обсуждение. Диагноз РЬ- МПЗ был установлен у 1611 пациентов, соотношение муж:жен 1:1,8, медиана возраста 76 лет (18—94). Диагноз ИП установлен у 654 (40,6%) пациентов, ЭТ у 258 (16%) пациентов; ПМФ у 429 (26,6%) пациентов, из них префи-брозная/ранняя стадия — у 161 (10,0%) пациента, фиброзная — у 268 (16,6%) пациентов; МПЗ-Н — у 270 (16,8%) пациентов. Преобладающей является драйверная мутация ЗАК2, которая была обнаружена при ИП в 100% случаев, при ПМФ — 53%, при ЭТ — 60% наблюдений. Мутация САЕК была выявлена у 36% пациентов с ПМФ и 27% пациентов с ЭТ. Мутация МРЕ выявлена в 4% случаев при ПМФ и отсутствовала при ЭТ. Трипл-негативные случаи составили 7% наблюдений при ПМФ и 13% при ЭТ.
Заключение. Среди всех случаев в группе РЬ- МПЗ ИП диагностируется в 40,6% случаев, ПМФ — в 26,6%, ЭТ — только в 16%. По данным различных исследовательских групп, МПЗ-Н составляет от 10—15 до 30% от всех РЬ- МПЗ. По нашим данным, МПЗ-Н составляет 16,8% случаев и характеризуются преимущественно ранними стадиями РЬ- МПЗ.
