CC BY
17
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
имитация воздействия ВИП-светом. Оценивались количество, адгезивная и агрегационная способность тромбоцитов (Тр), средний объем тромбоцита (СОТр); экспрессия мембранных маркеров и фагоцитарная активность лейкоцитов; количество, скорость оседания эритроцитов, уровень насыщения НЬ кислородом, а также парциальное давление кислорода (рО ) капиллярной крови и уровень антитромбина III (АТ III). Применялась статистическая программа Statistica 21.0.
Результаты и обсуждение. Изменения крови через 24 часа после облучения ВИП-светом: в эритроцитарном звене отмечалось возрастание количества клеток (на 15±4,7%), уменьшение СОЭ (с 11±3,9 до 8±2,7 мм/час), повышение связывания НЬ кислорода (97±1,5 против 94±1,8%), быстрое кратковременное повышение рО (через 0,5 часа после облучения — с 80±2,5 до 86±2,9 мм рт. ст.); в тромбоци-тарном звене отмечалось снижение адгезивных (на 17±5, 1%) и агре-гационных свойств (на 33±6,4% при индукции АДФ, на 22±4,9% — коллагеном), уменьшение СОТр (с 7,21±0,08 до 7,06±0,05 фл); в лейкоцитарном звене наблюдалось снижение количества лей-
коцитов с мембранным рецептором готовности к апоптозу CD95+ (с 26,3±3,4 до 19,6±2,1%), усиление фагоцитарной активности моноцитов (с 58±12 до 108±16 отн. ед.) и нейтрофилов (с 46±9 до 112± 14 отн. ед.); повышение уровня антикоагуляционной активности отмечено по содержанию АТ III (на 15±3,6%). В основе биологических свойств ВИП-света лежат молекулярные механизмы активации ферментных комплексов (НАДФН-оксидазы, NO-синтазы) с образованием высокореакционных радикалов и молекул. Каскад активных форм О2 и NO модифицирует рецепторные комплексы клеток и трансмембранную трансляцию биохимических сигналов, что реализуется в системных и местных эффектах.
Заключение. Исследование показало значимое влияние ВИП-света на функциональное состояние клеток крови и антикоагуля-ционную активность как in vivo, так и in vitro, что следует учитывать в оценке эффективности лечения и противопоказаний. Полученные данные показывают новые подходы в изучении данного феномена при различных физиологических и патологических процессах.
Теляшов М. А., Галузяк В. С., Щербакова А. А., Васильева В. А., Кузьмина Л. А., Апарцева В. К., Гальцева И. В., Давыдова Ю. О., Капранов Н. М., Никифорова К. А., Дроков М. Ю., Камельских Д. В., Гапонова Т. В.
СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ МОБИЛИЗАЦИИ И СБОРА В РАЗЛИЧНЫЕ ДНИ У ДОНОРОВ АЛЛОГЕННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ДВУХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНЫХ АФЕРЕЗОВ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Мировой тенденцией является увеличение числа трансплантаций аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (ал-ло-ТГСК) в том числе от неродственных доноров. По результатам исследований ряда отечественных и зарубежных авторов количество CD34+ гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в периферической крови прямо коррелирует с вероятностью заготовки оптимального для успешной трансплантации количества CD34+ клеток (>5х106/кг массы реципиента). В НМИЦ гематологии в настоящее время для ал-логенных неродственных доноров применяется протокол мобилизации и сбора ГСК с проведением первого афереза на 4-й день от начала стимуляции гранулоцитарным колониестимулирующим ростовым фактором (Г-КСФ в дозе 5 мкг/кг х 2 р/сутки подкожно) и проведением процедур афереза в последующие дни в случае недостаточной эффективности первого афереза. При этом количество аллогенных неродственных доноров, у которых оптимальное для успешной трансплантации число CD34+ клеток было заготовлено при проведении афе -реза только на 4-й день от начала стимуляции составляет не более 25% от общего числа аллогенных неродственных доноров
Цель работы. Определить оптимальный день афереза у доноров аллогенных ГСК.
Материалы и методы. Ретроспективный анализ эффективности мобилизации и афереза на сепараторе SpectraOptia (Terumo BCT, Япония/США) осуществлен у 17 неродственных доноров аллогенных ГСК, которым было проведено 34 процедуры афереза на 4-й и 5-й день от начала стимуляции Г-КСФ соответственно. Детальные характеристики доноров представлены в таблице 1. Подсчет CD34+ ГСК в образцах проводился в соответствии с протоколом International Society of Hematotherapy and Graft Engineering (ISHAGE) на проточном ци-тометре BD FACSCanto II (Becton Dickinson, США). Статистический анализ данных проводился с использованием статистического пакета IBM SPSS v.23 (США). Для проверки нормальности распределения
исследуемых выборок был использован критерий Шапиро—Уилка. Учитывая распределение, отличное от нормального, в дальнейшем для оценки различий между двумя зависимыми выборками был использован W-критерий Вилкоксона. Для анализа таблиц сопряженности, учитывая малые выборки, был использован точный тест Фишера. Данные представлены посредством медианы, минимального и максимального значения.
Результаты и обсуждение. Не было выявлено значимых различий в количестве лейкоцитов в периферической крови на 4-й и 5-й дни стимуляции Г-КСФ, а содержание CD34+ клеток в периферической крови и количество CD34+ клеток в продуктах афереза на 5-й день от начала стимуляции оказалось значимо большим.
Заключение. Проведенное исследование показало, что при мобилизации ГСК по схеме Г-КСФ 5 мкг/кг х 2р/сут. проведение процедуры афереза на 5-й день позволяет достичь большего процента CD34+ клеток в лейкоконцентрате.
Таблица 1. Результаты исследования
Параметр День от начала стимуляции Г-КСФ Р
4 день J 5 день
Возраст, лет (медиана) 32 (22-43)
Пол жен. 12 (70,6%) >0,05
муж. 5 (29,4%)
Рост, см (медиана) 170 (156-192)
Вес, кг (медиана) 75 (54-92)
Лейкоциты в периферической крови в день афереза, х109/л (медиана) 40,5 (27,02-70,29) 47,74 (17,7-70,39) >0,05
С034+ в периферической крови в день афереза, % (медиана) 0,05 (0,02-0,119) 0,110 (0,05-0,170) <0,001
С034+ в мкл. периферической крови в день афереза (медиана) 20,25 (6,48-61,07) 43,47 (16,8-85,17) <0,001
С034+ в лейкоконцентрате, % (медиана) 0,436 (0,024-0,7) 0,464 (0,26-0,71) <0,05
Тихомиров Д. С., Демин М. В., Дроков М. Ю., Бидерман Б. В., Судариков А. Б., Туполева Т. А., Филатов Ф. П., Паровичникова Е. Н.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ Ш97 ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА, АССОЦИИРОВАННЫХ С УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ДЕЙСТВИЮ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ, У РЕЦИПИЕНТОВ АЛЛОГЕННЫХ СТВОЛОВЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК
'ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; 2ФГБНУ «НИИВС им. И.И. Мечникова»
Введение. Инфекция, вызываемая цитомегаловирусом (ЦМВ), является серьезной проблемой для реципиентов аллогенных гемопоэ-тических стволовых клеток. В ходе естественного мутационного процесса, а также при проведении длительной специфической противовирусной терапии, вирус может приобрести устойчивость к действию противовирусных препаратов, что не только осложняет течение инфекционного эпизода, но и требует изменения терапевтической
тактики. Анти-ЦМВ препараты прямого действия, зарегистрированные в России для клинического применения, представлены в основном ганцикловиром и его производными. В большинстве случаев возникновение у вируса устойчивости обусловлено появлением мутаций в вирусном гене UL97, кодирующем фосфотрансферазу. Примерно 95% ганцикловир-устойчивых штаммов ЦМВ содержат одну или более мутаций в этом гене, причем в 70% случаев в кодонах 460, 594
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
и 595. Появление устойчивости к действию противовирусных препаратов у реципиентов алло-ГСК считается редким событием (менее 4% случаев), однако данные литературы крайне скудны.
Цель работы. Определение мутаций в гене вирусной фосфо-трансферазы (ЦЕ97), ассоциированных с устойчивостью к действию ганцикловира у реципиентов аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.
Материалы и методы. В исследование были включены 9 образцов ДНК ЦМВ, выделенной из периферической крови 8 реципиентов алло-ГСК с ЦМВ-инфекцией, проходивших лечение в клиниках ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России с 2016 по 2017 г. Соотношение мужчин/женщин — 2/6. Медиана возраста составила 39 (диапазон 24—64) лет. Все пациенты демонстрировали лабораторные признаки резистентной формы ЦМВИ, согласно следующим критериям (выполнение более одного из условий): 1) более 1 месяца положительных результатов определения ДНК ЦМВ (при условии регулярного мониторинга не меньше 1 раза в 2 недели); 2) вирусная нагрузка в образцах >10 000 копий геном-эквивалент на 10 000 ядросо-держащих клеток (коп); 3) раннее выявление ДНК ЦМВ (до 30 дней) после алло-ГСК. Определение мутаций осуществлялось с помощью секвенирования по методу Сэнгера.
Результаты и обсуждение. У всех пациентов, включенных в исследование, до трансплантации в крови были выявлены анамнестические анти-ЦМВ антитела класса G, что указывало на факт инфицирования вирусом еще до операции. Другими словами, ни в одном случае не было зафиксировано первичной ЦМВ-ин-
фекции в результате трансплантации. Мутации были обнаружены в 4 из 9 образцов, 2 из которых принадлежали одному пациенту, т.е. у 3 из 8 пациентов. Мутация C592G была обнаружена в 2 из 4 образцов, в двух других образцах были выявлены мутации C603W и C607F. В образцах одного пациента были выявлены разные мутации (C592G и C603W). Вирусная нагрузка в крови была статистически значимо выше у пациентов-носителей штамма с мутацией в изучаемом регионе гена (рис. 1). Также замечено, что у пациентов с мутантным штаммом ЦМВ вирусная ДНК выявляется в крови на более поздних сроках после алло-ТГСК и более длительно, при этом вирусная нагрузка в большинстве случаев оказывается в области высоких значений (рис. 2). Потенциально возможным методом лечения при резистентных к терапии ганцикловиром формах ЦМВИ является использование ЦМВ-специф ичных лимфоцитов донора. Работа в этом направлении ведется, однако это требует дальнейшего изучения.
Заключение. Показано, что частота детекции вирусных штаммов с мутациями, потенциально ведущими к устойчивости к действию ган-цикловира и его производных, довольно высока — три случая из восьми. Были обнаружены следующие ранее описанные мутации, ассоциированные с устойчивостью к действию противовирусных препаратов: C592G, C607F и C603W. Наличие и характер мутации влияет на вирусную нагрузку и длительность выявления в крови реципиентов ДНК ЦМВ. Потенциально возможным методом лечения при резистентных к терапии ганцикловиром формах ЦМВ является использование ЦМВ-специф ичных лимфоцитов донора. Работа в этом направлении ведется, однако это требует дальнейшего изучения.
Трацевская Ж. В., Ковригина А. М., Чеботарев Д. И., Меликян А. Л., Абдуллаев А. О., Судариков А. Б.
СТРУКТУРА Ph-НЕГАТИВНЫХ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПО ДАННЫМ ФГБУ «НМИЦ ГЕМАТОЛОГИИ» МИНЗДРАВА РОССИИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В структуре РЬ-негативных миелопролиферативных заболеваний (РЬ- МПЗ) выделяют истинную полицитемию (ИП), первичный миелофиброз (ПМФ), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и миелопролиферативное заболевание, неклассифицируемое (МПЗ-Н). В рамках комплексной диагностики РЬ- МПЗ в главные критерии выведено гистологическое исследование трепанобиоптата костного мозга с использованием гистохимических методов окраски для оценки степени ретикулинового и коллагенового фиброза стромы. Особой сложностью характеризуется диагностика ранних стадий РЬ- МПЗ.
Цель работы. Установить частоту диагностики нозологических форм в группе РЬ-МПЗ и частоту обнаружения мутаций JAK2,
CALR, MPL.
Материалы и методы. На основе базы данных патологоана-томического отделения НМИЦ гематологии исследований тре-панобиоптатов костного мозга, с учетом клинико-лабораторных и молекулярных данных, были проанализированы случаи диагностики РЬ- МПЗ у пациентов, проходивших обследование и лечение в НМИЦ гематологии, и пациентов из других медицинских учреждений с января 2014 г. по июнь 2017 г. Гистологическое и гистохимическое исследования проводились на срезах с парафиновых блоков трепанобиоптатов костного мозга (фиксированный материал в формалине или консультативный материал, присланный в виде готовых парафиновых блоков, с предоставлением необходимых клинико-ана-мнестических, лабораторных данных). Молекулярное исследование
на наличие/отсутствие драйверных мутаций JAK2, CALR, MPL было проведено в лаборатории молекулярной гематологии НМИЦ гематологии (зав. лаб. Судариков А.Б.). Детекция мутаций ЗАК2 иМРЕ была проведена с использованием количественной аллель-специфической (АС) ПЦР РВ, мутации САЕК исследовали фрагментным анализом с последующим сиквенсом по Сэнгеру (у части пациентов было проведено молекулярное определение 1-го и 2-го типов мутации САЕК).
Результаты и обсуждение. Диагноз РЬ- МПЗ был установлен у 1611 пациентов, соотношение муж:жен 1:1,8, медиана возраста 76 лет (18—94). Диагноз ИП установлен у 654 (40,6%) пациентов, ЭТ у 258 (16%) пациентов; ПМФ у 429 (26,6%) пациентов, из них префи-брозная/ранняя стадия — у 161 (10,0%) пациента, фиброзная — у 268 (16,6%) пациентов; МПЗ-Н — у 270 (16,8%) пациентов. Преобладающей является драйверная мутация ЗАК2, которая была обнаружена при ИП в 100% случаев, при ПМФ — 53%, при ЭТ — 60% наблюдений. Мутация САЕК была выявлена у 36% пациентов с ПМФ и 27% пациентов с ЭТ. Мутация МРЕ выявлена в 4% случаев при ПМФ и отсутствовала при ЭТ. Трипл-негативные случаи составили 7% наблюдений при ПМФ и 13% при ЭТ.
Заключение. Среди всех случаев в группе РЬ- МПЗ ИП диагностируется в 40,6% случаев, ПМФ — в 26,6%, ЭТ — только в 16%. По данным различных исследовательских групп, МПЗ-Н составляет от 10—15 до 30% от всех РЬ- МПЗ. По нашим данным, МПЗ-Н составляет 16,8% случаев и характеризуются преимущественно ранними стадиями РЬ- МПЗ.
