CC BY
18
фенотипического состава Т-лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии с использованием моно-клональных антител CD3, CD28, aßTCR и ySTCR на приборе Cytomics FC500 (Beckman Coulter, d±IA). В качестве негативного контроля использовались IgG. Aнализ образца составил 50000-75000 клеток.
Результаты. Исследована популяция aß+ и уб+ T-клеток в здоровом человеческом эпидермисе и дерме [3]. Обнаружено 2,7%±0,76 и 0,26 i 0,09 соответственно уб+ T-клеток в коже по сравнению с кровью. Субпопуляция aß+ T-клеток составила (10,29%±3,4 и 65,7%±11,3 соответственно). Эпидермальные CD3+CD28+aß+(79,2%±7,9 и 5,4%±1,77) и CD3+CD28+y6+(71,3%±10,5 и 4,6%±1,21 ) клетки экспрессируют высокие уровни CLA по сравнению с клетками крови. Процесс заживления нарушается при хронических ранах, в связи со сниженным количеством резидентных T-клеток в коже или функционально дефектных. Не было обнаружено существенных различий в соотношении aß+ к уб+ T-клеткам при хронических ранах по сравнению с острыми. Однако, анализ абсолютных значений обнаружил, что 2890± 254 aß и 283 ± 31 уб Т клеток/см2 в нормальном эпидермисе и 10 860± 512aß и 300± 57 уб T клеток/см 2 при острых и хронических ранах соответственно. В месте ран обнаружены в основном aß Т-клетки (p <0,001), тогда как Т-клетки уб, являются популяцией кожи.
Таким образом обнаруженная дисфункция Т-клеток может быть вызвана повышенной экспрессией ингиби-рующих рецепторов, таких как апоптоз, которая усиливается в ответ на тяжелые повреждения. Идентификация эквивалента Т-клеток кожи человека позволит получить представление о механизме эффективного восстановления острых ран и выявит новые мишени для терапевтического вмешательства при лечении хронических ран. С клинической точки зрения, повреждение Т-клеток на ранней стадии процесса заживления раны может быть прогностическим фактором для формирования хронической раны.
Литература:
1. Boyman O, Conrad C, Tonel G, et al. Trends Immunol. 2007. V.
28. P. 51-57.
2. Гольцов С.В., Костоломова Е.Г., Суховей Ю.Г. и др. Пат.
РФ № 2630607 C1, MПK G01N 33/53. 2017.
3. Суховей Ю.Г., Костоломова Е.Г., Унгер И.Г., Aкунеева Т.В.
РИЖ, 2017. Т. 11(20). № 3. С. 521-523.
ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМНОГО ВЛИЯНИЯ КЛЕТОК ЖИРОВОЙ ТКАНИ, НАХОДЯЩИХСЯ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ АДИПОГЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ
Н.В. Костюк, М.Б. Белякова, М.В. Черноруцкий, М.Б. Петрова
ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава РФ, Тверь, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: жировая ткань, мезенхимные стромаль-ные клетки, зрелые адипоциты, адипогенная дифференци-ровка, сокультивирование.
Нарушение нормального функционирования клеток жировой ткани лежит в основе патогенеза различных заболеваний, в том числе ожирения, диабета и т. д. Учитывая широкий спектр биологически активных молекул, продуцируемых этой тканью, можно предполагать
ключевую роль сдвига паракринных взаимодействий в развитии патологии. Цель настоящей работы — оценить in vitro взаимное влияние клеток жировой ткани, находящихся на разных этапах адипогенной дифференцировки.
В работе использовали клетки жировой ткани разной локализации, полученные от человека, крысы, кролика. Мезенхимные стромальные клетки (МСК) и зрелые адипоциты выделяли в соответствии со стандартными протоколами. Адипогеную дифференцировку МСК индуцировали добавлением смеси инсулина, дексамета-зона и изобутилметилксантана с последующей заменой на питательную среду, содержащую инсулин. От монокультуры к совместным культурам переходили через 0, 2, 5, 7 дней от начала индукции, моделируя разные стадии адипогенеза. Сокультивирование вели с использованием двухуровневой системы, где легко адгезирующие клетки локализованы на дне сосуда, а зрелые адипоци-ты — на «потолке» [1]. В ходе эксперимента оценивали долю жизнеспособных и липид-содержащих клеток, фиксировали время появления первых липидных капель, характер их распределения в цитоплазме, относительное количество липидов в культуре. Общее время наблюдения — 14 дней. Контролем служили индуцированные и неиндуцированные монокультуры МСК.
В целом адипоциты в совместной культуре оказывают стимулирующее действие на дифференцировку МСК, сокращая время появления первых липидных капель, увеличивая долю запасающих клеток и количество три-глицеридов в них. Эффект присутствия зрелых клеток тем значительнее, чем на более ранней стадии находятся дифференцирующиеся клетки. Обратного влияния МСК и преадипоцитов на зрелые адипоциты отмечено не было. Полученные результаты подтверждают важную роль паракринной регуляции внутри жировой ткани.
Литература:
1. Kostiuk N.V., Ве1уа1«^а M.B., Egorova E.N. et al. Seien. heritage.
2017. N. 13. P. 3.
СТРОМАЛЬНО-ВАСКУЛЯРНАЯ ФРАКЦИЯ ЛИПОАСПИРАТА В РЕЖИМЕ МОНОТЕРАПИИ И СОЧЕТАННОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ С ПРЕПАРАТОМ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ В ЛЕЧЕНИИ ГОНАРТРОЗА
М.А. Котова, Е.Я. Шевела, Т.Р. Глебова, Н.А. Ница, Г.А. Ахметова, Ю.А. Кожевников, И.В. Меледина, Е.Р. Черных
ФГБНУ НИИ фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: стромально-васкулярная фракция, липо-аспират, гиалуроновая кислота, остеоартрит, ВАШ, KOOS.
Остеоартрит (ОА) — наиболее частая форма артрита, характеризующаяся болями и тугоподвижностью суставов, приводящими к ухудшению качества жизни. Современные варианты лечения ОА нацелены на купирование болевого синдрома и повышение вязкости суставов с помощью внутрисуставного введения препаратов гиалуроновой кислоты (ГлК) [1]. Однако длительное применение некоторых из этих препаратов может вызывать серьезные побочные эффекты. Одно из новых направлений в лечении ОА связано с использованием клеточных технологий, в том числе стромально-васкулярной фракции (СВФ) жировой ткани. Клетки СВФ оказывают
противовоспалительный и иммуномодулирующий эффекты, а также способны дифференцироваться в клетки соединительной ткани.
Цель данного исследования: оценка безопасности и эффективности аутологичной СВФ у пациентов с го-нартрозом, в том числе в комбинации с препаратом гиа-луроновой кислоты.
Материалы и методы. В исследование были рекрутированы 32 пациента с ОА коленных суставов (гонартроз) (Rg стадия 2-3 по Kellgren-Lawrence) (NCT 02967874, clinicaltrials.gov). СВФ выделяли из жировой ткани пациентов. Пациентам выполняли внутрисуставную инъекцию: препарата гиалуроновой кислоты Ферматрон Плюс 1,5% 2,0 мл (ГлК) (группа 1, 10 пациентов), аутологичных клеток СВФ (группа 2, 16 пациентов), СВФ + ГлК (группа 3, 6 пациентов). Оценивали выраженность болевого синдрома по ВАШ и функциональный статус пораженных суставов по шкале KOOS.
Результаты. Пациенты исследуемых групп были сопоставимы по давности и тяжести основного заболевания, характеру сопутствующей патологии, выраженности болевого синдрома, а также нарушению функций коленных суставов. Внутрисуставное введение клеток СВФ было хорошо переносимым и не вызывало развития каких-либо серьезных нежелательных явлений. У пациентов группы 1 введение ГлК приводило к снижению выраженности болевого синдрома и основных симптомов заболевания на протяжении 6 мес после введения ГлК, с постепенным ухудшением состояния до исходного уровня через 12 мес. У пациентов группы 2 улучшение функции суставов по ВАШ и KOOS выявлялось как на ранних сроках (1 мес), так и в отдаленном периоде (12 мес) после терапии. В то же время положительный клинический эффект комбинированного введения СВФ и ГлК у пациентов группы 3 был сопоставим с эффектом СВФ.
Таким образом, внутрисуставное введение аутоло-гичных клеток СВФ у пациентов с выраженными проявлениями ОА приводит к значимо более выраженному и длительному клиническому улучшению основных симптомов заболевания по сравнению с ГлК. Полученные предварительные данные свидетельствуют также об отсутствии значимого влияния Глк на терапевтические эффекты СВФ.
Литература:
1. Honvo G., Reginster J.Y., Rannou F., et al. Drugs Aging. 2019. Vol. 36, N Suppl. 1. P. 101-127.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУЛЬПЫ И ПЕРИОДОНТА
А.В. Котова1, 2 3, А.А. Лобов1, Ю.А. Домбровская2, Е.М. Приходько2, 3, В.И. Санникова1, Н.А. Рюмина3, П. Клаузен1, А.Л. Шаварда4, А.Б. Малашичева1, Н.И. Енукашвили1, 2 3
1 ФГБУН Институт цитологии, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБОУ ВО СЗГМУ им. ИИ. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
3 ООО «Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург, Россия
4 Ресурсный центр РМиКТ, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: стволовые клетки нервного гребня, стволовые клетки пульпы, протеом, остеогенная дифференци-ровка, масс-спектрометрия.
Стволовые клетки (СК) из разных тканей зуба, несмотря на общее происхождение от клеток нервного гребня, гетерогенны по своим свойствам. Они выполняют разные функции и, как следствие, обладают разными функциональными возможностями. Предполагается, что эти различия обусловлены влиянием на клетки их микроокружения — ниши.
Цель работы: оценка различий между СК пульпы (СКП) и СК периодонта (СКПд) по их морфофункциональным характеристикам, экспрессии маркеров плюрипотент-ности, остеогенной/одонтобластной дифференцировки и протеомному профилю в ходе данной диффренцировки.
Объектом исследования выступили пары культур клеток пульпы и периодонта, полученные от каждого из исследуемых доноров (всего 12 пар). Оказалось, что популяции СКП и СКПд обладают сходным набором поверхностных маркёров мезенхимных стволовых клеток, но отличаются по уровню экспрессии мРНК не-стина (маркёра нейроэктодермального происхождения), по уровню экспрессии эмбриональных маркеров, морфологии, скорости пролиферации и транскрипции генов остео-/одонтобластной дифференцировки. мРНК 0СТ4 была обнаружена в СКП и СКПд, в то время как белок 0СТ4 присутствовал только в ядрах СКП. Однако транскрипция мРНК 0СТ4 в СК зубов была в 100010 000 раз ниже, чем в бластоцистах человека. СКП пролиферировали медленнее и обладали формой, близкой к полигональной, но они активнее реагировали на остеогенные стимулы по сравнению со СКПд. мРНК П111\1Х2 была обнаружена с помощью кПЦР в обоих типах стволовых клеток, но в ходе протеомного анализа белок П111\Х2 оказался только в СКПд. Гены-маркёры одонто-бластного типа остеогенной дифференцировки ОБРР и 0МР1 транскрибировались в СКП, но не в СКПд.
Таким образом, мы показали различия стволовых клеток пульпы зуба и периодонта в экспрессии некоторых нейроэпителиальных и эмбриональных маркёров, морфологии клеток, пролиферативной активности, а также описали особенности остеогенной дифференцировки и отличия протеомных профилей во время неё. Поскольку СКП обладают гораздо более выраженным остеогенным потенциалом, они могут использоваться для ускорения восстановительных процессов в костной ткани и пери-одонте, а быстро пролиферирующие СКПд могут стать основой клеточных продуктов для других целей. Работа поддержана Министерством науки и высшего образования РФ (Соглашение № 075-15-2021-1063 от 28.09. 2021).
МОДИФИКАЦИЯ АЛЬГИНАТНОГО ГИДРОГЕЛЯ УГЛЕРОДНЫМИ НАНОТРУБКАМИ
С.В. Кравченко1, В.В. Мясникова1, 2, С.Н. Сахнов1, 2
1 Краснодарский филиал ФГАУ НМИЦ МНТК Микрохирургия глаза им. С.Н. Федорова Минздрава России, Краснодар, Россия
2 ФГБОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Краснодар, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: биосовместимые гели, углеродные на-нотрубки, гидрогель, альгинат натрия, токопроводящий биосовместимый гель, альгинатный гидрогель, орган на чипе.
Альгинатные гидрогели применяются в тканевой инженерии и регенеративной медицине благодаря
