Стандартизация лиофилизированной лекарственной формы димерного макроциклического танина Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

стандартизация лиофилизированной лекарственной формы димерного мАкроцикличЕСкого танина

З.С. Шпрах1, Е.в. игнатьева1, и.в. Ярцева1, С.А. Сасов1, о.л. орлова1, А.П. Полозкова1, д.А. хоченков1, А.м. Королев2, Н.м. малютина2

1ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478 Москва, Каширское ш., 24; 2ФГБНУ«Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе»; Россия, 119021 Москва, ул. Большая Пироговская, 11

Контакты: Елена Владимировна Игнатьева [email protected]

Введение. В последнее время наблюдается устойчивый интерес к скринингу противоопухолевых и антиангиогенных веществ, блокирующих несколько механизмов активации ангиогенеза в опухоли. В качестве ингибиторов ангиогенеза большое внимание уделяется разработке эффективных и малотоксичных лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья. Настоящая статья посвящена стандартизации лекарственной формы димерного макроциклического танина (ДМТ), выделенного в ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России из соцветий кипрея узколистного Chamerion angustifolium (L.) Holub и представляющего значительный интерес в качестве антиангиогенного средства.

Цель исследования — выбор критериев качества для стандартизации препарата «ДМТ, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100мг».

Материалы и методы. В работе использованы лекарственная форма «ДМТ, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100мг» и субстанция ДМТ. Методы исследования: спектрофотометрия, инфракрасная спектроскопия, высокоэффективная жидкостная хроматография, потенциометрия, поляриметрия.

Результаты. С учетом требований Государственной фармакопеи РФ XIII издания к препаратам для инъекций выбраны критерии качества лиофилизированной лекарственной формы ДМТ и разработаны методики их определения. Выводы Путем лабораторных исследований показано, что выбранные критерии качества и разработанные для их определения методики позволяют корректно контролировать качество лекарственной формы «ДМТ, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100 мг».

Ключевые слова: димерный макроциклический танин, физико-химические характеристики, стандартизация, количественный анализ

DOI: 10.17650/1726-9784-2017-16-4-67-73

STANDARDIZATION OF LYOPHILIZED DOSAGE FORM OF DIMERIC MACROCYCLIC TANNIN

Z . S. Shprakh1, E. V Ignat'eva1, I. V Yartseva1, S.A. Sasov1, O. V Orlova1, A. P. Polozkova1, D.A. Hochenkov1, A. M. Korolev2, N. M. Malyutina2

1N.N.. Blokhin National Medical Research Center of Oncology; 24 Kashyrskoe Sh., Moscow 115478, Russia;

2G.F. Gause Institute of New Antibiotics; 11 Bol'shaya Pirogovskaya St., Moscow 119435, Russia

Background. Over the last years the studies have increased interest in screening antitumor and anti-angiogenic substances that block several mechanisms of angiogenesis activation in tumors. A great attention is paid to development of effective and low toxic drugs as inhibitors of angiogenesis which are derived from herbal raw material. The article is devoted to the results of standardization of the dosage form of dimeric macrocyclic tannin (DMT) obtained from Chamerion angustifolium (L.) Holub in N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, which has a great potential as an antiangiogenic agent.

Objective: to determine quality criteria for standardization of the drug "DMT, lyophilisate for preparation of solution for injections 100 mg".

Materials and methods. The study used "DMT, lyophilisate for preparation of solution for injections 100 mg" and DMT substance. Methods: spectrophotometry, infrared spectroscopy, high performance liquid chromatography, potentiometry, polarimetry. Results. Quality criteria for lyophilized DMT dosage form were determined with the account of Russian State Pharmacopoeia (XIII edn.) requirements to the drugs for injections and methods for their evaluation were defined.

68

Оригинальные статьи

Conclusions. Laboratory studies demonstrated that the determined quality criteria and the defined methods for their evaluation are feasible for adequate quality control of dosage form "DMT, lyophilisate for preparation of solution for injections 100 mg".

Key words: dimeric macrocyclic tannin, physicochemical characteristics, standardization, quantitative analysis

Введение

В настоящее время активно разрабатываются новые подходы к лекарственному лечению злокачественных новообразований, такие как антиангиоген-ная терапия, основанная на подавлении роста в опухоли новых сосудов, и васкулярная терапия, направленная на уничтожение уже сформированных опухолевых микрососудов. Обнаружение молекулярных маркеров, дающих возможность адекватно оценивать активность ангиогенеза опухоли, и идентификация сигнальных систем, регулирующих неоангиогенез опухоли, способствуют выявлению новых молекулярных мишеней для разработки противоопухолевых лекарственных препаратов, нацеленных на подавление ангиогенной активности опухоли [1]. В последнее время наблюдается устойчивый интерес к скринингу противоопухолевых и антиангиогенных веществ, блокирующих несколько механизмов активации опухолевого ангиогенеза. В качестве ингибиторов ангиогенеза большое внимание уделяется разработке и внедрению в практику здравоохранения эффективных и малотоксичных лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья [2, 3]. Для получения достоверных результатов доклинических и клинических исследований необходимо, чтобы отобранные в результате скрининга соединения и разработанные на их основе лекарственные формы обладали определенными точно измеренными физическими и химическими параметрами, т. е. были стандартны.

Цель исследования — выбор критериев качества для стандартизации лекарственной формы (ЛФ) димерного макроциклического танина (ДМТ), выделенного в ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» («НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина») Минздрава России из соцветий кипрея узколистного Chamerion angustifolium (L.) Holub [4] и представляющего значительный интерес в качестве антиангиогенного средства.

Материалы и методы

Препараты и реактивы. Субстанция-порошок ДМТ и ЛФ «ДМТ, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100 мг» (ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России); железа (III) хлорид, ацетонитрил 99,9 % HPLC-gra-dient grade PAI-ACS для ультрафиолетовой спектроскопии при длине волны 210 нм, муравьиная

кислота 98 % PA-ACS (PanReac AppliChem, Испания); вода деионизированная (Milli-Q Water Purification System, США).

Приборы. Спектрофотометр Cary-100 (Varian, США), инфракрасный (ИК) Фурье-спектрометр Nicolet-iS10 (детектор DTGS, светоделитель KBr) (Thermo Fisher Scientific, США), поляриметр Unipol L (Schmidt + Haensch GmbH & Co., Германия), жидкостный хроматограф LC-20 Prominence серии AD с фотодиодно-матричным детектором (Shimadzu Corporation, Япония), весы аналитические Sartorius 2405 (Sartorius AG, Германия), рН-метр рН-211 (Hanna Instruments, Германия), электрошкаф сушильный ED 23 (Binder, Германия).

Методика определения содержания родственных примесей (метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)). Для приготовления испытуемого раствора около 6,25 мг (точная навеска) ЛФ ДМТ помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в воде дистиллированной и доводили водой до метки. В качестве раствора стандартного образца (СО) использовали раствор субстанции ДМТ в том же разведении. Растворы использовали свежеприготовленными. Перед введением в петлю растворы разводили в 2 раза подвижной фазой А.

Определение содержания примесей проводили с использованием аналитического жидкостного хроматографа LC-20 Prominence серии AD с фотодиод-но-матричным детектором. Хроматографирование проводили на колонке Kromasil (AkzoNobel, Швеция) С-18, 5 мкм, длина 250 мм, внутренний диаметр 4 мм. Градиент AB: 100 % А (0 мин) - 0 % B (15 мин), 0 % А (15 мин) — 100 % B (25 мин). Подвижная фаза А — смесь вода—ацетонитрил—кислота муравьиная в соотношении 900: 99,96: 0,04 (по объему), подвижная фаза Б — смесь вода—ацетонитрил—кислота муравьиная в соотношении 300: 699,72: 0,28 (по объему). Скорость потока элюента — 1,0 мл/мин, температура колонки — 25 °С; детектирование проводили при длине волны 263 нм. Объем анализируемой пробы составил 20 мкл, время хроматографиро-вания — 25 мин, время удерживания основного пика ДМТ — 12,40 ± 0,50 мин.

Результаты анализа считали достоверными, если выполнялись требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы», который проводили, хроматографируя не менее 5 раз раствор СО.

Хроматографическую систему признавали пригодной, если выполнялись следующие условия:

Оригинальные статьи 69

OH ♦ разрешение между пиком примеси с относительным временем удерживания около 1,59 и пиком основного вещества не менее J 1 OH 11,9 мин; ♦ эффективность хроматографической колон- HO JL ° / | 1 ки, рассчитанная по пику основного веще- || ТГ"" O=\ . ства, не менее 5506 теоретических тарелок; ° я \ 0 н° Т^ к т-°н / ♦ относительное стандартное отклонение пло- \_/ щади пика основного вещества не более 2 %; ° ° / °н и ] O HO HO O ♦ фактор асимметрии пика не более 1,4. -—7—' Содержание любой единичной примеси в препа- | jf °—.¿--7——Z—° ° 1 рате (Х, %) рассчитывали по формуле S он / \ ^^ ^^^^ Х - „ „ 1 „ ^ 100, но—\ } Т он S , + S + ... + S , °н где S1 — площадь пика любой единичной примеси но он на хроматограмме испытуемого раствора, S, + S + .•• t ^ „„т r r J r г ' 1 2 рис. 1. Химическая структура ДМ! + S1 — суммарная площадь пиков на хроматограмме испытуемого раствора. лиофилизата для приготовления раствора для инъ- методика количественного определения дмт екций, не содержащая вспомогательных веществ. в лф (метод спектрофотометрии). Для приготовления Химико-фармацевтическое изучение ЛФ ДМТ испытуемого раствора содержимое флакона раство- выполняли с учетом требований нормативной доку-ряли в дистиллированной воде, переносили в мер- ментации к сухим ЛФ для инъекций [5—7]. Исследо-ную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем вания проводили на 3 сериях препарата. Все образцы раствора до метки водой, затем 1 мл полученного представляли собой сухую пористую массу белого раствора переносили в мерную колбу вместимостью цвета с желтоватым оттенком, без запаха. Средняя 50 мл и доводили объем раствора до метки водой. масса содержимого флакона составляла от 0,105 В качестве раствора СО использовали раствор 100 мг до 0,113 г, отклонение массы каждого флакона ДМТ в том же разведении. Растворы использовали от средней массы флакона не превышало ± 10 %, свежеприготовленными. что соответствует требованиям Государственной фар-Измерение оптической плотности испытуемого макопеи (ГФ) РФ XIII издания. Содержимое флакона раствора проводили параллельно с измерением оп- образцов ЛФ ДМТ растворяли в 20 мл воды в течение тической плотности раствора СО относительно воды 30 с [8]. Полученные растворы были прозрачны, ин-в максимуме при длине волны 265 ± 2 нм в кювете тенсивность их окраски не превышала интенсивность с толщиной слоя 10 мм. окраски эталона Y6. При наблюдении в проходящем Содержание ДМТ (Х, мг) во флаконе вычисляли свете в испытуемых растворах не обнаруживались по формуле частицы вещества, а величина рН находилась в пре-Dj х a0 х Р делах от 3,5 до 3,6. Все серии ЛФ ДМТ прошли испы-Х D х 100 , тания на наличие механических включений [9]. 0 ДМТ является полифенольным соединением (см. где Dj — оптическая плотность испытуемого раство- рис. 1), поэтому для подтверждения подлинности ра, D0 — оптическая плотность раствора СО, а0 — на- препарата использовали электронные спектры по-веска СО (мг), Р — содержание ДМТ в растворе глощения (ЭСП) [10], ИК-спектры [11] и цветную СО (%). качественную реакцию на полифенолы [12]. ДМТ легко окисляется солями окисного железа, образуя Результаты и обсуждение окрашенные продукты (при добавлении к водному ДМТ, выделенный в ФГБУ «НМИЦ онкологии раствору ЛФ раствора железа (III) хлорида появляет-им. Н.Н. Блохина» Минздрава России из соцветий ся темно-синее окрашивание). кипрея узколистного Chamerion angustifolium (L.) Ho- Ароматические циклы, входящие в состав молеку-lub [4], представляет собой комплекс макроцикличе- лы ДМТ, ответственны за поглощение излучения ских танинов, основной частью (около 90 %) кото- в ультрафиолетовом диапазоне длин волн. ЭСП рого является димерный танин со структурной 0,002 % водных растворов образцов ЛФ ДМТ в области формулой, представленной на рис. 1. от 200 до 350 нм имели максимумы поглощения В ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» при длинах волн 215 ± 2 и 265 ± 2 нм и полностью Минздрава России разработана ЛФ ДМТ в виде совпадали с ЭСП раствора субстанции ДМТ (рис. 2, 3).

4 2017 том 16 I vol. 16 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ I RUSSIAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

70 Оригинальные статьи

200

220

240 260 Длина волны, нм

280

300

Рис. 2. ЭСП водного раствора субстанции ДМТ

1,5-

\о <

1,0-

0,5-

200 220 240 260 280 Длина волны, нм

300

320

Рис. 3. ЭСП раствора ЛФ ДМТ серии 1

ИК-спектры образцов ЛФ ДМТ в области от 4000 до 400 см1 содержат полосы поглощения, связанные с различными колебаниями связей замещенных бензольных циклов [1616, 1508, 1452, 870, 833, 745, 729 см1], полосы поглощения, связанные с углеводным циклом [1197, 1033, 600 см-1] и указывающие на присутствие в молекуле пиранозного кольца в конформации С1 [910, 765 см-1]; в ИК-спектре ДМТ

имеются полосы, соответствующие валентным и деформационным колебаниям связи О—Н [3317, 1318, 1196, 1033 см-1], а также валентным колебаниям карбонильной группы, характерным для альдегидов, карбоновых кислот и сложных эфиров [1729 см-1].

ИК-спектры образцов ЛФ ДМТ (0,5 мг в 100 мг калия бромида) идентичны ИК-спектрам его субстанции, записанным в тех же условиях, имеют специфический рисунок и подтверждают структуру ДМТ (рис. 4).

ДМТ является оптически активным веществом. Величина угла оптического вращения может служить показателем подлинности и качества препарата. Результаты, полученные для исследуемых образцов ЛФ, в которых содержание основного действующего вещества составляло 87-90 % в пересчете на высушенное вещество, укладывались в интервал от +300° до +315°.

ДМТ выделен из растительного сырья и даже при очень тщательной очистке содержит примеси полифенольной природы (галловую и валониевую кислоты, их ангидриды и др.). Определение содержания примесей в ЛФ ДМТ проводили методом ВЭЖХ. На хроматограммах были обнаружены пики основного вещества — ДМТ — с временем удерживания (retention time, RT) 12,4 ± 0,5 мин, пик основной примеси с RT 19,5 ± 0,5 мин и несколько малоинтенсивных пиков с RT от 22 до 24 мин (рис. 5). Основная примесь к ДМТ была выделена с помощью ВЭЖХ. Пик на хроматограмме был уширенным, и его исследование методом масс-спектрометрии показало, что примесь неиндивидуальна и содержит 3 основных вещества с массами m/z 1699,7605; 1556,6610; 1394,5975 [M]+. Следует отметить, что, в отличие от ДМТ, вещества из этой смеси не образуют отрицательных ионов, т. е. не содержат карбоксильные группы.

Содержание единичной примеси в препарате рассчитывали методом внутренней нормализации.

Рис. 4. ИК-спектр ЛФ ДМТ серии 2

150

х

с: 100

50

0

■I 4 а ДМТ

1

| 3 т*

05 10 15 20 25

Таблица 1. Потеря в массе ЛФ ДМТпри высушивании до постоянной массы над Р2О5 при комнатной температуре и остаточном давлении 7ммрт. ст.

№ серии Масса навески, г Время высушивания, сут Потеря в массе, %

Серия 1 0,11556 0 0

0,11201 7 3,07

Серия 3 0,10879 0 0

0,10502 7 3,46

Время, мин

Рис. 5. ВЭЖХ-хроматограмма ЛФ ДМТ

Для всех представленных для анализа серий ЛФ содержание основной примеси с RT 19,5 ± 0,5 мин находилось в пределах от 4 до 6 %, суммарное содержание примесей не превышало 12 %.

ДМТ содержит большое число гидроксильных и карбоксильных групп и способен образовывать с низкомолекулярными соединениями (водой, растворителями) вандерваальсовые и ковалентные связи. Изучение условий высушивания ДМТ показало, что в мягких условиях препарат очень медленно теряет массу (табл. 1), однако легко высушивается в течение 3 ч при нагревании при атмосферном давлении в сушильном шкафу при температуре 125 °С (табл. 2). Потеря в массе для образцов ЛФ в этих условиях не превышала 3,5 % от массы исходной навески.

Вещество, высушенное таким образом, сохраняет характеристический ИК-спектр (см. рис. 4, 6). Высушивание при более высокой температуре приводит к окислительной деструкции препарата.

Для количественного определения основного действующего вещества в ЛФ ДМТ был выбран метод прямой спектрофотометрии, который прост в исполнении, требует незначительного количества

Таблица 2. Потеря в массе ЛФ ДМТ при высушивании в течение 3 ч при нагревании и атмосферном давлении

№ серии Потеря в массе, %

60 С 80 С 105 С 125 С

Серия 1 отсутствует 1,5 2,6 3,1

Серия 2 отсутствует 1,3 2,2 2,6

Серия 3 отсутствует 1,5 2,7 3,3

анализируемого вещества, отличается достаточной точностью (относительная ошибка не превышает ± 2 %) и чувствительностью [10].

В ЭСП водного раствора субстанции ДМТ в области от 200 до 350 нм, как было указано выше, максимумы поглощения наблюдаются при длинах волн 215 ± 2 и 263 ± 2 нм и совпадают с максимумами в ЭСП ЛФ ДМТ (см. рис. 2, 3). Известно, что чем в более коротковолновой области спектра расположена полоса поглощения, тем сильнее (при прочих равных условиях) искажения из-за немонохроматичности излучения [12], поэтому в качестве аналитического сигнала выбран максимум при длине волны 265 нм.

«00 3500 3000 25® ЯМ0 1НЮ 10ОО 500

ВиионЬчмпоКы'Ч

Рис. 6. ИК-спектр ЛФ ДМТ серии 2 после нагревания при температуре 125 °С

72

Оригинальные статьи

Для проверки соблюдения закона Бугера-Ламберта—Бе-ра при данном максимуме поглощения готовили растворы субстанции ДМТ в воде в диапазоне концентраций от 0,03 до 0,01 мг/мл. График зависимости оптической плотности от концентрации раствора представлен на рис. 7.

Из графика видно, что во всем исследуемом диапазоне концентраций наблюдается линейная зависимость оптической плотности от концентрации раствора, т. е. закон Бугера— Ламберта—Бера соблюдается при данном максимуме поглощения. Рабочей концентрацией раствора ДМТ выбрали концентрацию 0,006—0,008 мг/мл; при этом величина оптической плотности укладывалась в интервал, рекомендуемый ГФ РФ [6]. ЛФ ДМТ не содержит вспомогательных веществ, которые могли бы оказывать влияние на спектральные характеристики действующего вещества, поэтому в качестве раствора сравнения использовали воду. Для снижения систематических и случайных ошибок при определении действующего вещества в спектрофотометрическую методику ввели способ расчета по СО. В качестве

0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025 0,03 Концентрация ДМТ, мг/мл

0,035

Рис. 7. Зависимость оптической плотности от концентрации раствора ДМТ

СО использовали субстанцию ДМТ, из которой произведены серии испытуемой ЛФ. Ошибка определения ДМТ в ЛФ по данной методике составила около 1 %, что указывает на достаточную точность разработанной методики анализа (табл. 3).

Экспериментальные данные, полученные в результате проведенной работы, представлены в табл. 4.

Таблица 3. Результаты количественного определения ДМТ в его ЛФ

Показатель № образца

1 2 3 4 5 6

Оптическая плотность 0,856 0,871 0,863 0,851 0,869 0,866

Содержание ДМТ в ЛФ, мг 99,6 101,4 100,5 99,0 101,1 100,8

Метрологические характеристики п = 6, f = 5, х = 100,4, S2 = 0,852, S = 0,92 304, ¿Х = е = 0,96 % 0,37683,Р = 95 %, 1р, , = 2,57, ДХ = 0,969,

Примечание. Масса навески СО = 105,912 мг, содержание ДМТ в СО (Р) = 84,07 %, оптическая плотность СО = 0,765.

Таблица 4. Показатели качества ЛФ «ДМТ, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100 мг»

№ серии Средняя масса во флаконе, г Прозрачность раствора Цветность раствора рН Родственные примеси (сумма), %* УДельное вращение [а] 2°в Потеря в массе при высушивании, % Количественное содержание дмт, мг

Серия 1 0,105 Раствор содержимого флакона в 20 мл воды прозрачен Интенсивность окрашивания раствора, полученного в испытании на прозрачность, не превышает эталон Y6 3,6 10,2 +307,0 3,1 97,2

Серия 2 0,110 То же То же 3,5 9,6 +307,0 2,6 100,4

Серия 3 0,113 То же То же 3,5 11,0 +305,0 3,3 98,2

*Данные ФГБНУ«Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе».

Выводы

Полученные в настоящей работе данные позволяют выбрать критерии качества лиофилизи-рованной ЛФ ДМТ в соответствии с требованиями ГФ РФ к препаратам для инъекций. Разработана методика определения содержания примесей в ЛФ ДМТ методом ВЭЖХ. Для количественного анализа ЛФ ДМТ разработана спек-трофотометрическая методика с использованием

СО, позволяющая с достаточно высокой точностью определять содержание действующего вещества в ЛФ.

Выбранные критерии дают возможность корректно контролировать качество ЛФ ДМТ. Полученный экспериментальный материал использован для составления спецификации и фармакопейной статьи предприятия ЛФ «ДМТ, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 100 мг».

Л И Т Е Р А Т

1. Карамышева А.Ф. Антиангиогенная терапия: надежды и разочарования. Сигнальные системы, регулирующие ангиогенез опухоли, и их изменение при опухолевой прогрессии. Saarbrucken: Lambert Academic Publishing, 2013. 250 c.

2. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Григорьева И.Н., Барышников А.Ю. Оценка антиангиогенной активности экстрактов растений и их фракций, произрастающих на территории России. Российский биотерапевтический журнал 2009;8(2):56.

3. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Абрамов М.Е. и др. Ингибиторы ангиоге-неза растительного происхождения: перспективы использования в клинической онкологии. Российский биотерапевтический журнал 2010;9(4):3.

УРА / R E F E

4. Сасов СА., Толкачев В.Н., Ярцева И.В., Толкачев О.Н. Макроциклические танины кипрея узколистного. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2010;10:24-9.

5. ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».

6. Государственная фармакопея Российской Федерации. 13-е изд. Т. 1, 2. М., 2015.

7. Федеральный Закон № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств» от 24 марта 2010 г.

8. Игнатьева Е.В., Ярцева И.В., Дми-тричева Н.А. и др. Оценка качества лиофилизированной лекарственной формы ДМТ. Материалы XIII Всероссийской научно-практиче-

R E N C E S

ской конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва. Российский биотерапевтический журнал 2017;16(спецвы-пуск):40-1.

9. ОФС 1.4.2.0005.15 «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

10. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа. 5-е изд., пе-рераб. Л.: Химия, 1986. 431 с.

11. Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М.: Мир, 1976. С. 200-234.

12. Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т. Органический анализ. Л.: Химия, 1981. С. 75.