CC BY
79
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ... 1 25
УДК 615.277.3.014.24
A.B. Ланцова, Е.В. Санарова, H.A. Оборотова, А.П. Полозкова, О.Л. Орлова, 3. С. Шпрах, М.П. Киселева, И. Д. Гулякин, 3. С. Смирнова РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ
ПОЛУЧЕНИЯ ИНЪЕКЦИОННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НА ОСНОВЕ ОТЕЧЕСТВЕННОЙ СУБСТАНЦИИ ПРОИЗВОДНОЙ ИНДОЛОКАРБАЗОЛА - ЛХС-1208
ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина» ФАНО, Москва Контактная информация
Ланцова Анна Владимировна, кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО
адрес: 115478 Москва, Каширское шоссе, 24; тел: +7(499)612-81-92 e-mail: lantsova1979@mail.ru
Статья поступила 17.07.2014, принята к печати 08.09.2014. Резюме
Несмотря на достаточно большие возможности основных методов лечения злокачественных новообразований, продолжается поиск новых эффективных подходов и методов воздействия на опухоль. Среди таких подходов, интенсивно разрабатываемых в последние годы, наиболее перспективными являются биотерапия, фотодинамическая терапия, а также применение технологии направленного транспорта различных противоопухолевых агентов к тканям-мишеням (иммуно-, термолипосомы и др. ). Одной из наиболее многообещающих групп противоопухолевых лекарственных препаратов являются индолокарбазолы и их производные. Однако создание рациональной лекарственной формы затруднено практической нер-римостью этих соединений в воде.
Целью данной работы являлось создание инъекционной лекарственной формы отечественного гидрофобного противоопухолевого соединения из класса индолокарбазолов - ЛХС-1208. Субстанция ЛХС-1208 синтезирована в лаборатории химического синтеза ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» РАМН. В рамках проведенного исследования изучена р-римость субстанции производного индолокарбазола с использованием различных солюбилизаторов. Технологические исследования показали невозможность р-рения субстанции ЛХС-1208 с использованием только сор-рителей. В связи с хорошей р-римостью ЛХС-1208 в ДМСО, определили максимально возможную концентрацию субстанции в данном органическом р-рителе. Она составила порядка 7 %, что позволило вводить в состав ЛФ минимальное количество ДМСО. После проведения комплекса биофармацевтических исследований для дальнейшего изучения отобрана наиболее стабильная модель лекарственной формы с Kollidon 17PF, для которой разработана методика лиофилизации.
Выводы: Разработана оптимальная технология получения и состав лекарственной формы ЛХС-1208 в виде лиофилизата для приготовления р-ра для инъекций. Лиофилизированная ЛФ передана для проведения дальнейших исследований с целью выбора параметров качества и изучения стабильности.
Ключевые слова: индолокарбазолы, р-римость, солюбилизаторы, лиофилизация.
A.V. Lantsova, E.V. Sanarova, N.A. Oborotova, A.P. Poloskova, O.L. Orlova,
Z.S. Shprakh, M.P. Kiseleva, I.D. Gulyakin, Z.S. Smirnova
DEVELOPMENT OF TECHNOLOGY
FOR INJECTABLE DOSAGE FORM BASED
ON THE NATIONAL SUBSTANCE FROM
THE CLASS OF INDOLOCARBAZOLES - LHS-1208
FSBSI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center» FASO, Moscow
Abstract
Although the high possibility of the main methods of treatment of malignant disease to search for new effective approaches and methods of influence on the tumor. Among these approaches, intensively developed in recent years, photodynamic therapy, biotherapy, and employment of targeted transport technology of various anticancer agents to tissues (immuno-, thermo liposomes etc.) are the most promising. One of the most promising groups of antineoplastic drugs are indolocarbazoles and derivatives thereof. However, the creation of rational dosage form is difficult for these compounds, because they are insolubility in water. The aim of this work was to create an injection dosage form for national hydrophobic anticancer compound from the class of indolocarbazoles - LHS-1208. The substance of LHS-1208 synthesized in chemical synthesis laboratory FSBI «N.N. Blokhin RCRC» RAMS. In this study the solubility of a substance indolocarbazole derivative using different solubilizers was investigated. Technological research has shown the impossibility of LHS-1208 dissolution using only the co-solvents. Due to the good solubility LHS-1208 in DMSO its maximum possible concentration in the organic solvent has been determined. It was about 7%, what permitted to include minimum quantity of DMSO into the dosage form. After the complex of biopharmaceutical researches the most stable model dosage form with Kollidon 17PF was selected for further investigations. Technique of freeze-drying for this model dosage form has been carried out. The optimal technology of LHS-1208 as a lyophilisate for solution for injection has been developed. Lyophilized dosage form has been transferred for quality parameters determination and stability investigations.
Key words: indolocarbazoles, solubility, solubilizers, lyophilisation.
№ 3/tom 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
Введение
Несмотря на достаточно большие возможности основных методов лечения злокачественных новообразований результаты терапии до сих пор далеки от желаемых. В течение долгого времени в клинике доминировали хирургическое и лучевое лечение онкологических заболеваний.
Применение химиотерапии позволило добиться значительных успехов в лечении ряда злокачественных опухолей, хотя проблема повышения эффективности действия химиопрепаратов по-прежнему остается крайне актуальной [11; 18; 36].
Известно, что для классических противоопухолевых химиопрепаратов повышение дозовой интенсивности является главной детерминантой эффективности лечения, однако увеличению терапевтических доз препятствуют серьезные побочные эффекты, а также феномен множественной лекарственной устойчивости опухолей [11; 18].
В связи с этим представляется актуальным поиск новых эффективных подходов и методов воздействия на опухоль [2; 3; 15].
Терапевтические свойства противоопухолевых препаратов могут быть в значительной мере улучшены за счет их адресного транспорта к опухолевым клеткам. Среди таких подходов, интенсивно разрабатываемых в последние годы, наиболее перспективными являются фотодинамическая терапия, биотерапия, а также применение технологии направленного транспорта различных противоопухолевых агентов (иммуно-, термо липосомы и др.) к тканям-мишеням [1; 4-9; 19; 22; 25-27; 40; 43; 44; 50-52; 56; 57]. Создание таких препаратов позволяет реализовывать персонализированный подход в лечении, с учетом индивидуальных (наследуемых и приобретенных) факторов риска развития того или иного заболевания у различных подгрупп пациентов, приводя к максимально эффективному результату [32-35; 37; 46; 47]. Благодаря интенсивным усилиям учёных, за последние 15 лет в клиническую практику внедрены около двух десятков специфических молекулярных ингибиторов [10; 12; 41; 42; 48; 53; 59-62]. Ещё более сотни инновационных препаратов в настоящий момент проходят различные стадии клинических испытаний [20; 21; 28-30; 37; 49].
Одной из многообещающих групп противоопухолевых лекарственных препаратов являются индолокарбазолы и их производные [14; 16; 23; 24; 31; 38; 39; 45]. В лаборатории химического синтеза ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» проводится скрининг среди вновь синтезированных производных индолокарбазола [31]. Мишенями для индолокар-базолов, обладающих противоопухолевой активностью, являются: топоизомеразы, ДНК и киназы [54; 55]. Особенностью механизма действия соединений этого класса является их способность взаимодействовать с несколькими мишенями и, следовательно, индуцировать различные пути гибели опухолевых клеток [17; 58-60]. Однако разработка ЛФ данного производного индолокарбазолов осложнена тем, что выбранная субстанция практически нер-рима в воде и большинстве органических р-рителей [13; 14; 16; 23; 24; 31].
Целью данной работы является создание инъекционной ЛФ для отечественного гидрофобного противоопухолевого соединения из класса индолокарбазолов - ЛХС-1208, которая, вероятно, откроет новые возможности в лечении злокачественных новообразований различного генеза.
Материалы и методы
Субстанция ЛХС-1208 (аминоиндолокарба-зол) - аморфный порошок оранжевого цвета без запаха - синтезирована в лаборатории химического синтеза ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» РАМН. ВВ:
Cremophor ELP® (полиоксил-35-касторовое масло), Kolliphor HS15® (полиоксил -15-гидроксистеарат), Kollidon 17 PF® (поливинилпирролидон, повидон), Kollisolv-PEG 400® и Lutrol E-400 ® (полиэтиленг-ликолъ 400). ВВ получены от фирмы BASF The Chemical Company, Германия. Диметилсулъфоксид (ДМСО), чда (Acros Organics, USA).
Все использованные вспомогательные вещества и р-рители отвечали требованиям соответствующей нормативной документации.
Оборудование
В работе использованы весы аналитические Sartorius 2405 (Sartorius AG, Германия); весы лабораторные Sartorius LA1200S (Sartorius AG, Германия); установка сублимационной сушки "Edwards Minifast DO.2" (Ero Electronic S.p.A., Италия); спектрофотометр Cary-100 (Varian, Inc., Австралия); pH-метр HANNA 211 (Hanna Instruments, Германия); установка для фильтрации инъекционных р-ров под вакуумом (фирма "Millipore", Франция); дозатор Dispensette (BRAND, Германия); полуавтомат для обжима колпачков на флаконах, ЗМ-00-0ПС Жда-новский ЗТО; мешалка верхнеприводная механическая RZR 2021 Heidolph с пропеллерным перемешивающим элементом PR 30 Heidolph (Heidolph, Германия).
Упаковочный материал
Для упаковки использовали флаконы из трубки стеклянной для лекарственных средств из стекла НС-1 вместимостью 20 мл по ИСО 8362-1, которые укупоривали резиновыми пробками по ИСО 8362-2, с обкаткой алюминиевыми колпачками по ИСО 8362-3.
Стерилизующая фильтрация
Стерилизующую фильтрацию р-ров ЛХС-1208 проводили под вакуумом с использованием фильтрационной системы Stericup GP Millipore Express Plus с полиэфирсульфоновыми фильтрами, имеющими размер пор 0,22 мкм, также применяли нейлоновые (Pall Corporation, США; ООО Палл Евразия, Россия) и мембранные фильтры из ацетата целлюлозы (фильтрационная система Corning).
Лиофилизацию проводили на сублимационной сушке Minifast DO.2 (Edwards, Великобритания).
Спектрофотометрия
Стабильность р-ров ЛХС-1208 в присутствии ВВ определяли методом УФ-спектрофотометрии на спектрофотометре Cary 100 (Varian, Inc., Австралия) при X 320 нм.
Метод потенциометрии
Для измерения активности ионов водорода р-ров ЛХС-1208 использовали pH-метр HANNA 211 (Hanna Instruments, Германия).
Результаты и обсуждение
В онкологической практике для лечения больных наиболее применяемыми являются ЛФ в виде р-ров. Поскольку субстанция ЛХС-1208 не-
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
растворима в воде и большинстве органических растворителей, для получения р-ров препарата использовали сорастворители, разрешенные в фармации для перорального и парентерального использования: мицеллообразующие - Cremophor ELP, Kollisolv PEG-400/ Lutrol E-400, Kolliphor HS15 и комплексообразующие - Kollidon 17 PF [13; 25; 26].
Для растворения субстанции готовили водные р-ры перечисленных выше сорастворителей с концентрацией 100; 200; 300; 400 и 500 мг/мл. Р-римость определяли визуально при температуре 20±2 °С (ГФ XII, C. 92). Получить истинные р-ры ЛХС-1208 удалось лишь с применением марок по-лиэтиленгликоля-400 (Kollisolv PEG-400/Lutrol E-400), которые используются только в ЛФ для перорального применения [13; 26]. Однако предварительные биологические исследования на мышах и крысах показали отсутствие значимого терапевтического эффекта моделей лекарственных форм ЛХС-1208 при пероральном введении [38].
Для получения инъекционной лекарственной формы ЛХС-1208 определяли максимальную возможную концентрацию субстанции в 100 %-ном ДМСО, который применяется в лекарственных препаратах как для перорального, так и парентерального введения [61]. При этом готовили р-ры ЛХС-1208 в ДМСО в концентрациях от 1 до 10 %. Полное р-рение активного вещества наблюдали в р-рах с концентрацией 1-7 % (10^70 мг ЛХС-1208 в 1 мл ДМСО). При превышении этой концентрации и хранении р-ра в течение 1-2 ч выпадал осадок.
В дальнейшем для получения моделей ЛФ использовали минимально возможный объем ДМСО, учитывая, что для проведения биологических исследований с внутривенным введением препарата концентрация ЛХС-1208 в р-ре должна составлять не менее 2 мг/мл.
При выборе состава модели лекарственной формы ЛХС-1208 для внутривенного введения первоначально использовали неионногенный солюби-лизатор Cremophor ELP в концентрации 150^300 мг/мл в водном р-ре. При этом содержание ЛХС-1208 варьировало от 2 до 4 мг/мл, а содержание ДМСО составляло не более 110 мг/мл (табл. 1).
Данные, представленные в табл. 1, показывают, что оптимальным для получения стабильного р-ра является массовое соотношение ЛХС-1208/Cremophor ELP не менее 1/80 (составы 2; 4). Состав с максимальным содержанием действующего вещества (2,5 мг/мл), минимальной концентрацией ДМСО (55 мг/мл) и соотношением ЛХС-1208 / Cremophor ELP равным 1/80 (состав 4) выбран в качестве модели для дальнейших технологических и биологических исследований.
Использование в качестве сор-рителя неион-ногенного солюбилизатора Kolliphor HS 15 позволило получить модель ЛФ, стабильную в течение двух часов. Однако данная модель лекарственной формы оказалась токсичной - ее внутривенное введение интактным мышам вызвало 100 %-ную гибель лабораторных животных.
Kollidon 17 PF (низкомолекулярный повидон (Мм 7000-11000) в отличие от Cremophor ELP и Kolliphor HS 15 является солюбилизатором, повышающим р-римость гидрофобных веществ за счет формирования комплексов, устойчивых в кислой среде.
Поскольку для повышения стабильности лекарственной Формы впоследствии планировалась лиофилизация препарата, Kollidon 17 PF использовали в концентрации не менее 100 мг/мл, что необ-
ходимо для формирования структуры лиофилизата. Концентрация ЛХС-1208 в модельных составах составила 3 и 5 мг/мл, а концентрация ДМСО - 55 мг/мл (табл. 2).
Анализ приведенных в ней данных свидетельствует о возможности получения стабильного р-ра ЛХС-1208 для парентерального применения при массовом соотношении субстанция:
ЛХС-1208 : Kollidon 17 PF равном 1 : 67 (состав 3, концентрация ЛХС-1208 - 3 мг/мл).
Уменьшение этого соотношения до 1 : 50 (состав 2) приводит к появлению опалесценции р-ра при хранении в течение 2 ч. Снизить соотношение субстанция ЛХС-1208 : ДМСО (состав 5) также не удалось в связи с нестабильностью данного состава во времени.
На основании проведенных химико-фармацевтических и предварительных биологических исследований для дальнейших экспериментов отобраны два состава: с Cremophor ELP (ЛФ-1) и Kollidon 17PF (ЛФ-2).
Перед оценкой стабильности выбранных моделей ЛФ изучили влияние процесса стерилизующей фильтрации с использованием полиэфирсульфоно-вых (фильтрационная система Stericup GP Millipore Express Plus), нейлоновых (Pall Corporation, США; ООО Палл Евразия, Россия) и мембранных фильтров из целлюлозы ацетата (фильтрационная система Corning) на содержание ЛХС-1208 в р-ре.
Специально проведенными исследованиями показано, что применение для фильтрации мембран из ацетата целлюлозы, обладающих низкими адсорбционными характеристиками, и полиэфир-сульфоновых мембран, обеспечивающих высокую скорость потока и используемых в широком диапазоне значений рН (2-12), практически не повлияло на содержание активного вещества в р-ре.
Для снижения потерь пои получении р-ра ЛХС-1208 дополнительно исследовали основные критические параметры технологического процесса: скорость добавления р-ра ЛХС-1208 в ДМСО к водному р-ру Kollidon 17PF; скорость перемешивания получаемого р-ра. Показано, что наиболее приемлемыми являются следующие параметры технологического процесса: скорость добавления р-ра ЛХС-1208 в ДМСО к водному р-ру Kollidon 17PF -5-10 мл/мин; скорость вращения пропеллерной мешалки 400-800 rpm.
Фильтрация р-ров моделей ЛФ через нейлоновые мембраны, которые гидрофильны и химически устойчивы, привела к снижению концентрации ЛХС-1208 в обеих моделях ЛФ более чем на 10 %, что, вероятно, связано со значительной адсорбцией субстанции на данном типе фильтров. В дальнейших экспериментах для фильтрации использовали полиэфир-сульфоновые мембранные фильтры.
Стабильность выбранных моделей ЛФ исследовали при хранении при температуре 4±2 °С. Оценку стабильности р-ров проводили по параметрам: внешний вид, значение рН, содержание ЛХС-1208 (%).
Проведенные исследования показали, что хотя внешний вид р-ра ЛФ-1, содержащего Cremophor ELP, сохраняется в течение 1 мес и более, концентрация активного вещества в данной ЛФ через 7 сут. снижается на 10 % от теоретической. ЛФ-2, содержащая в своем составе Kollidon 17PF, стабильна по указанным выше параметрам в течение 7 суток.
Для оценки стабильности ЛФ-2 в течение более длительного срока получали р-ры модельной ЛФ-2 ЛХС-1208, которые хранили при температуре + 4 °С в течение 4 месяцев (табл. 3).
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
28 | ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
Модельные лекарственные формы ЛХС-1208 с Cremophor ELP
Таблица 1
Состав модельной ЛФ Внешний вид водного р-ра Значение pH водного р-ра
№ После получения При хранении в течение 2 ч*
1 ЛХС-1208 20 мг ДМСО 550 мг Cremophor ELP® 1500 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный р-р красного цвета выпадение осадка 4,7
2 ЛХС-1208 20 мг ДМСО 550 мг Cremophor ELP® 2000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный р-р желтого цвета прозрачный р-р желтого цвета 4,0
3 ЛХС-1208 25 мг ДМСО 880 мг Cremophor ELP® 2200 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р р-р желтого цвета, со слабой опалесценцией 4,2
4 ЛХС-1208 25 мг ДМСО 550 мг Cremophor ELP® 2000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный р-р желтого цвета прозрачный р-р желтого цвета 3,8
5 ЛХС-1208 30 мг ДМСО 1100 мг Cremophor ELP® 3000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р р-р желтого цвета, со слабой опалесценцией 4,2
6 ЛХС-1208 30 мг ДМСО 880 мг Cremophor ELP® 2000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р опалесцирующий р-р оранжевого цвета 4,3
7 ЛХС-1208 40 мг ДМСО 1100 мг Cremophor ELP® 3000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р мутный р-р красного цвета 4,6
* хранение при комнатной температуре
Модельные составы лекарственных фо рм ЛХС-1208 с Kollidon 17 PF Таблица 2
№ Состав модельной ЛФ Внешний вид водного р-ра Значение pH
после получения при хранении в течение 2 ч* водного р-ра
1 ЛХС-1208 30 мг ДМСО 550 мг Kollidon 17PF 1000 мг Вода для инъекций до 10 мл мутный оранжевый р-р мутный оранжевый р-р 4,4
2 ЛХС-1208 30 мг ДМСО 550 мг Kollidon 17PF 1500 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р оранжевый р-р со слабой опалесценцией 3,7
3 ЛХС-1208 30 мг ДМСО 550 мг Kollidon 17PF 2000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р прозрачный оранжевый р-р 3,9
4 ЛХС-1208 30 мг ДМСО 550 мг Kollidon 17PF 2500 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р прозрачный оранжевый р-р 4,1
5 ЛХС-1208 50 мг ДМСО 550 мг Kollidon 17PF 3000 мг Вода для инъекций до 10 мл прозрачный оранжевый р-р оранжевый р-р со слабой опалесценцией 4,1
хранение при комнатной температуре
Таблица 3
Показатели качества модели ЛФ-2 ЛХС-1208 в процессе хранения_
Срок хранения, мес Показатели качества раствора ЛФ-2 ЛХС-1208
Внешний вид Значение pH Концентрация ЛХС-1208, мг/мл
0 прозрачный оранжевый р-р 3,9 2,95
1 3,9 2,95
2 3,9 2,93
3 3,8 2,90
4 3,9 2,87
№ 3/том 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
Представленные в ней данные дают право утверждать, что хранение разработанной ЛФ-2 в форме р-ра не позволяет обеспечить сохранение всех параметров качества на первоначальном уровне. В частности, при неизменном внешнем виде и значении pH, за 4 месяца концентрация ЛХС-1208 в р-ре незначительно, но снижается. Этот факт обуславливает необходимость применения высокотехнологичного метода стабилизации р-ров - лиофи-лизации, который используется для сохранения физико-химических свойств и фармакологической активности гидролитически неустойчивых, термолабильных веществ в течение длительного времени; позволяет легко переводить их в исходное состояние, удобное для применения, после введения соответствующего р-рителя (вода, физиологический р-р и др.), тем более, что концентрация Kollidon 17 PF в выбоанной модели (200 мг/мл) позволяет сформировать структуру лиофилизата [52; 56; 57]. От дальнейшего исследования ЛФ-1 пришлось отказаться, так как наличие в составе Cremophor ELP не позволяет лиофилизировать ЛФ.
В связи с этим разрабатывали оптимальный режим сублимационной сушки ЛФ-2 с Kollidon 17PF. Для этого проводили ряд экспериментальных сушек с применением различных режимов и последующего физико-химического контроля готового продукта.
При разработке оптимального режима сушки ЛХС-1208 с Kollidon 17PF прежде всего исследовали влияние температурного режима на качество, внешний вид, сохранность свойств вещества готового продукта. При этом учитывали данные по температуре эвтектики, замораживания, а также начальной температуры сушки.
Для разработки режима сублимационной сушки проводили экспериментальные наработки модельной лекарственной формы ЛХС-1208 с Kollidon 17PF. При этом р-р ЛХС-1208 (концентрация 3 мг/мл) разливали во флаконы вместимостью 20 мл (ИСО 8362-1) по 3 мл. Данный объем наполнения флаконов выбран на основании расчетной дозы ЛХС-1208 необходимой для проведения биологических испытаний, а также серий дополнительных исследований, показавших, что такой объем наполнения флаконов не ухудшает качество готового препарата.
Испытаны режимы сушек с разной начальной температурой препарата, разным временем выдержки при минусовой температуре, интенсивностью нагрева и различной температурой досушивания препарата. Установлено, что изменение режима замораживания не оказывает значительного влияния на качество готового препарата. Этот факт позволяет охлаждать препарат непосредственно на полках сублимационной сушки.
На основании экспериментальных сушек выбран следующий режим лиофилизации: флаконы помещали на полки сублимационной установки и начинали замораживание, которое проводили при температуре (-40 -г- -45) °С. После достижения заданной температуры препарат выдерживали в тече-
Литература
ние 18-20 ч. После включения вакуумного насоса, выравнивания вакуума и температуры конденсатора выдерживали еще около 3 ч и начинали нагрев полок. Максимально возможная скорость подъема температуры 2 °С/ч. Через 1 ч после достижения температуры полок + 20 °С, включали инжекцию воздуха и доводили остаточное давление в камере до значения 40-50 Па. Температура препарата при досушивании не превышала + 20 °С. Продолжительность досушивания - от 2 до 3 ч. Общее время сушки препарата во флаконах вместимостью 20 мл составляет 65-75 ч.
Лиофилизированная модель лекарственной формы ЛХС-1208 передана в лабораторию химико-фармацевтического анализа ФГБУ «РОНЦ им.H.H. Блохина» РАМН для выбора критериев и показателей качества и изучения стабильности полученных серий модели лекарственной формы.
Заключение
В рамках проведенного исследования изучена растворимость новой перспективной субстанции производного индолокарбазола с использованием различных солюбилизаторов (Cremophor ELP, Kollisolv PEG-400/ Lutrol E-400, Kolliphor HS 15, Kollidon 17 PF). Достичь полного р-рения субстанции без добавления органического р-рителя удалось при применении Kollisolv PEG-400/ Lutrol E-400, которые используются только для местного и перорального применения.
Однако при оценке эффективности модельной пероральной лекарственной формы с Kollisolv PEG-400/Lutrol E-400 на животных с экспериментальными опухолями не выявлено значимого терапевтического эффекта.
Для получения инъекционной лекарственной формы ЛХС-1208 определена максимальная возможная концентрацию субстанции в 100 %-ном ДМСО, который применяется в лекарственных препаратах как для перорального, так и в парентерального введения. Полное растворение активного вещества наблюдали в р-рах с концентрацией от 1 до 7 %, что позволило вводить в состав ЛФ минимальное количество ДМСО (55 мг/мл).
На основании экспериментальных технологических исследований подобраны составы моделей лекарственных форм ЛХС-1208 с использованием солюбилизаторов Cremophor ELP, Kolliphor HS 15, Kollidon 17PF, обеспечивающие концентрацию активного вещества 2-3 мг/мл и стабильные в р-ре в течение 1 суток. Исследование состава, содержащего Kolliphor HS 15 на интактных мышах, выявило его высокую токсичность.
Изучение стабильности р-ров ЛХС-1208 с Cremophor ELP и Kollidon 17PF показало необходимость использования лиофилизации для стабилизации модели ЛФ с Kollidon 17PF. Разработан режим лиофилизации выбранной модели лекарственной формы. Для лиофилизированной модели ЛФ проводится выбор критериев и параметров качества и исследование стабильности.
1. Афанасьева Д., Барышникова М.А., Соколова З.А. и др. Разработка липосомальной конструкции, содержащей лизат опухолевых клеток // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, №2. -С. 5.
2. Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов // Вестник РАМН. - 2012. - №3. - С. 23-30.
3. Барышников А.Ю., Блохина Н.Г., Кадагидзе З.Г. и др. Моноклональные антитела ИКО-1 против кон-
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
стантной части Ia-подобных антигенов // Экспериментальная онкология. - 1984. - № 6. - С. 123-5.
4. Барышников А.Ю., Оборотова H.A. Иммунолипосомы - новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 4.
5. Барышников А.Ю., Тупицын H.H., Крыжанов М.А. и др. Панель моноклональных антител и антисывороток для диагностики гемобластозов человека // Доклады АН СССР. - 1985. - Т. 282, №3. - С. 753-9.
6. Барышникова М.А., Ахматова Н.К., Карамзин A.M. и др. Иммуномодулирующая активность сублин-гвальной формы галавита // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 2. - С. 55-8.
7. Барышникова М.А., Барышников А.Ю. Иммунолипосомы и мишени их действия // Журнал Российского химического общества им. Д.И.Менделеева. - 2012. - Т. LVI, № 3-4. - C. 60-7.
8. Барышникова М.А., Зангиева М.Т., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных капсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
9. Безруков Д.А., Королева А.И., Ланцова A.B. и др. Оптимизация метода получения стерически стабилизированных термочувствительных липосом с активной загрузкой доксорубицином. // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 4. - С. 79-83.
10. Блохин Д.Ю., Чмутин Е.Ф., Иванов П.К. и др. Молекулярные мишени для противоопухолевой терапии: факторы роста, ангиогенеза и апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3 - С. 25-30.
11. Горбунова В.А., Орел Н.Ф., Зарук В.А. и др. Новые рекомендации по оценке эффективности лечения солидных опухолей и принципы работы по «качественной практике» // Вопросы онкологии. - 2001. -Т. 47, № 6. - С. 718-22.
12. Григорьева И.Н., Харатешвили Т.К., Барышников А.Ю. Васкулогенная мимикрия: альтернативный механизм кровоснабжения опухоли? // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3.
- С. 25-30.
13. Гулякин И.Д., Оборотова H.A., Печенников В.М. Солюбилизация гидрофобных противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2014. - Т. 48, № 3. - С. 46-50.
14. Гулякин И.Д., Санарова Е.В., Ланцова A.B. и др. Разработка наноструктурированной модели лекарственной формы производного индолкарбазола - ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал.
- 2014. - Т. 13, №1. - С. 78.
15. Дмитриева М.В., Оборотова H.A., Санарова Е.В. и др. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. - С. 21-27.
16. Зверева С.О., Краснюк И.И., Миникер Т.Д. и т.д. Поиск и изучение р-рителей для внутривенного введения ЛХС-1208, обладающего противоопухолевой активностью // Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 23-27 апреля 2012 г.). - 2012. -С. 379.
17. Калюжный Д.Н., Татарский В. В., Бондарев Ф.С. и др. Взаимодействие с ДНК как фактор цитоток-сичности нового гликозидного производного индолокарбазола // Доклады РАН. - 2006. - Т. 411, № 6. -С. 833-6.
18. Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2012 году (заболеваемость и смертность), 2014. - 250 с.
19. Кортава М.А., Палкина Т.Н., Толчева Е.В. и др. Подходы к созданию иммунолипосом на примере доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 1. - С. 6.
20. Краснополъский Ю.М., Балабанян В.Ю., Шаболов Д.Л. и др. Липосомальные лекарственные препараты в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 48.
21. Краснополъский Ю.М., Степанов А.Е., Щвец В.И. и др. Липосомальные препараты для вспомогательной терапии в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 3. - С. 29.
22. Ланцова A.B., Оборотова H.A., Перетолчина Н.М. и др.Сравнительное изучение противоопухолевой активности липосомальных лекарственных форм препаратов производных нитрозоалкилмочевины // Сибирский онкологический журнал. - 2005. - № 2. - С. 25-9.
23. Ланцова A.B., Полозкова А.П., Орлова О.Л. и др. Разработка композиции для внутривенного введения гидрофобной субстанции производной индолокарбазола ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 50.
24. Ланцова A.B., Санарова Е.В., Полозкова А.П. и др. Разработка ЛФ производного индолокарбазола ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 104.
25. Ланцова A.B., Полозкова А.П., Орлова О.Л. и др. Разработка парентеральной лекарственной формы для оригинальной отечественной субстанции АКВ-12 -агониста аденозиновых рецепторов // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 51.
26. Ланцова A.B., Полозкова А.П., Орлова О.Л. и др. Создание пероральной лекарственной формы с оригинальной отечественной субстанцией АКВ-12 -агониста аденозиновых рецепторов // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 51.
27. Ланцова A.B., Сапрыкина Н.С., Санарова Е.В. и др. Изучение противоопухолевой активности наноструктурированной липосомальной формы лизомустина in vivo // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 32.
28. Левачева И.С., Барышникова М.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов липосо-мами // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 32.
29. Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: Липосомы в ФДТ // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 3-8.
30. Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: Липосомальные формы для создания фотоактивируемых липосомальных препаратов в фотобиологических исследованиях // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 6-12.
31. Мельник С.Я., Горюнова О.В., Эктова Л.В. и др. Способ получения N-гликозидов индоло[2,3-
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,6-дионов, обладающих цитотоксической и противоопухолевой активностью. Патент № 2427585 РФ от 10.11.2009.
32. Оборотова Н.А. Достижения в области современных лекарственных форм противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 61.
33. Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.
34. Оборотова Н.А., Лопатин П.В., Барышников А.Ю. Биофармацевтические аспекты создания лекарственных форм противоопухолевых соединений // Российский онкологический журнал - 2002. - № 5. -С. 8-11.
35. Оборотова Н.А., Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов // Российский химический журнал. - 2012. - Т. LVI., № 3-4. - С. 33-40.
36. Платинский Л.В, Соколова В.Д. Химиотерапия злокачественных опухолей головы и шеи в амбулаторных условиях // Вопросы онкологии. - 2001. - Т. 47, № 6. - С. 744-7.
37. Рапопорт Н.Я. Направленный таргеттинг химиотерапевтических средств в полимерных мицеллах и наноэмульсиях: мифы и реальность // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. -С. 122.
38. Смирнова З.С., Борисова Л.М., Киселева М.П. и др. Противоопухолевая активность соединения ЛХС-1208 (N-гликозилированные производные индоло[2,3-а]карбазола) // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 2. - С. 79.
39. Смирнова З.С., Борисова Л.М., Киселева М.П. и др. Противоопухолевая эффективность прототипа лекарственной формы соединения ЛХС-1208 для внутривенного введения // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 49.
40. Соколова Д.В., Тазина Е.В., Картава М.А. и др. Ahth-MUC-1 иммунолопосомальная конструкция доксорубицина для направленной доставки в опухоль // Российский биотерапевтический журнал. -2011. - Т. 10, № 3. - С. 99-103.
41. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Абрамов М.В. и др. Ингибиторы ангиогенеза растительного происхождения: перспективы использования в клинической онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 4. - С. 3-10.
42. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии. - 2010 - Т. 120, № 6. - С. 599.
43. Тазина Е.В., Костин КВ., Оборотова Н.А. Особенности инкапсулирования лекарственных препаратов в липосомы // Химико-фармацевтический журнал. - 2011. - Т. 45, № 8. - С. 30-40.
44. Тазина Е.В., Оборотова Н.А. Селективная доставка препаратов в опухоль с помощью термочувствительных липосом и локальной гипертермии // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. - Т. 7, № 3. - С. 4-12.
45. Татарский В.В., Плихтяк И.Л., Мельник С.Я. и др. Механизмы противоопухолевого действия нового производного индолокарбазолов // Вопросы онкологии. - 2006. - Т. 52. - С. 38-9.
46. Толчева Е.Н., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-СБ5-иммунолипосомы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к СБ5+клеткам // Российский биотерапевтический журнал. - 2005. - Т. 4, № 4. - С. 38-43.
47. Толчева Е.В., Оборотова Н.А. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 1. - С. 54-61.
48. Франциянц Е.М., Комарова Е.Ф., Верескунова М.И. Состояние некоторых маркеров ангиогенеза и пролиферации в ткани опухолей репродуктивной системы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. -Т. 11, № 2. - С. 58.
49. Цибулькина Е.А. Иммунолипосомальные системы направленного транспорта малых интерферирующих РНК в клетки-мишени: Автореф. дис. канд. хим. наук, 2008. -24 с.
50. Чан Тхи Хай Иен, Поздеев В.И., Меерович Г.А. и др. Липосомальная лекарственная форма фотодита-зина // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 2. - С. 105-7.
51. Шадрина А.В., Перетолчина Н.М., Полозкова А.П. и др. Биофармацевтические исследования липо-сомального лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, №1. - С. 49-53.
52. Arshinova O.Y., Sanarova E.V., Lantsova A.V. et al. Drug synthesis methods and manufacturing technology: ly-ophilization of liposomal drug forms (Review) // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2012. - 46(4). - P. 228-33.
53. Goekjian P.G., JirousekM.R. Protein kinase С inhibitors as novel anticancer drugs // Expert Opin. Investig. Drugs. - 2001. - 10. - P. 2117.
54. Kaluzhny D.N., Tatarskiy V.V. Jr, Dezhenkova L.G. et al. Novel antitumor L-arabinose derivative of indolo-carbazole with high affinity to DNA // ChemMedChem. - 2009. - 4(10). - P. 1641-8.
55. Kaluzhny D.N., Borisova O.F., Shchyolkina A.K. et al. Novel antitumor L-arabinose derivative of indolocar-bazole with high affinity to the duplex and telomeric G-quadruplex DNA. // Second International Meeting on Quadruplex DNA. - 2009, Louisville, KY. - P. 60.
56. Lantsova A., Kotova E., Sanarova K. et al. Biopharmaceutical study of nanostructured formulation of the anticancer drug derivative of nitrosoalkylurea Lysomustine // Journal of Drug Delivery Science and Technology. - 2012. - 22(6). - P. 469-72.
57. Oborotova N.A., Polozkova A.P., Lapatin V.P. et al. Technical and chemical pharmaceutical characterization of the new antitumor cytoplatam in lyophilized form for antravenus infision // Pharmaceutical chemistry Journal. - 2001. - 35(8). - P. 442-8.
58. Tatarskiy V.V. Kaluzhny D.N., Jr., Shchyolkina A.K. et al. High antitumor activity of novel glycosylated indolocarbazole is determined by strong intercalation into DNA // Proc. 14th Euroconference on Apoptosis 'Death or Survival: Fate in Sardinia', Chia, Italy. - 2006. - P. 230.
59. Farago A., Nishizuka Y. Protein kinase С in transmembrane signaling // FEBS Lett. - 1990. - 268. - P. 350.
№ 3/tom 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
32 | ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ...
60. Shtil A.A. Signal transduction pathways and transcriptional mechanisms as targets for prevention of emergence of multidrug resistance in human cancer cells (invited review) // Curr. Drug Targets. - 2001. - 2. - P. 57.
61. Strub R., McKim A.S. Dimethyl Sulfoxide USP, PhEur in Approved Pharmaceutical Products and Medical Devices // Pharmaceutical Technology. - May, 2008. http://www.pharmtech.com
62. VartanianA.A., BaryshnikovA.Yu. Crosstalk between apoptosis and antioxidants in melanoma vasculogenic mimicry // Advances in Experimental Medicine and Biology. - 2007. - 601. - P. 145-53.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ЛФ - лекарственной формы
ВВ - вспомогательные вещества
НАУЧНЫЕ ЖУРНАЛЫ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН
№ 3/том 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
