CC BY
45
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ... ^ЕЛШ
УДК 616.24-006.25:615.277.3:615.011.5 М.П. Киселева1, З.С. Шпрах1, Л.М. Борисова1, И.Ю. Кубасова1, Л.Г. Деженкова2, Д.Н. Калюжный3, А.В. Ланцова1, Е.В. Санарова1, А.А. Штиль1, Н.А. Оборотова1, З.С. Смирнова1, А.Ю. Барышников1 ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНОГО N-ГЛИКОЗИДА ИНДОЛКАРБАЗОЛА ЛХС-1208. СООБЩЕНИЕ II 1ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва 2ФГБНУ Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе, Москва 3Институт молекулярной биологии имени В.А. Энгельгардта РАН, Москва Контактная информация Киселева Марина Петровна, научный сотрудник лаборатории экспериментальной химиотерапии НИИ ЭДиТО адрес: 115478 Москва, Каширское шоссе, 24; тел: +7(499)612-87-86 e-mail: [email protected] Статья поступила 08.05.2015, принята к печати 10.06.2015/ Резюме Представлены результаты доклинического изучения противоопухолевой активности производного N-гликозида индолокарбазола ЛХС-1208 на эпидермоидной LLC и исследованы механизмы противоопухолевого действия. При изучении избирательности противоопухолевого действия ЛХС-1208 на LLC рассчитан терапевтический индекс ТИ50, равный 2,8. Оценка действия на метастазирование LLC в легкие мышей ЛХС-1208 в дозах 125 мг/кг и 150 мг/кг показывает, что применение соединения в качестве адъювантной химиотерапии (ТРМ=45 % и 44 % соответственно) более эффективно, чем при неоадъювантной химиотерапии (ТРМ=33 % и 31% соответственно). Установлено преимущество ЛХС-1208 по длительности противоопухолевого действия в сравнении с иринотеканом: в течение 20 дней после окончания лечения ТРО составляет 95 % - 52 % и 94 % - 27% соответственно. Комбинация ЛХС-1208 с иринотеканом в дозах, составляющих половину от терапевтической дозы комбинатов (75 мг/кг и 33 мг/кг соответственно) вызывает синергический противоопухолевый эффект. Механизм противоопухолевого действия обусловлен интеркаляцией ЛХС-1208 в двухцепочечную ДНК и ингибированием активности топоизомеразы I. Ключевые слова: производное индолокарбазола, ЛХС-1208, противоопухолевая активность, эпидермо-идная карцинома легкого, интеркаляция, ДНК, топоизомераза I.
M.P. Kiseleva1, Z.S. Shprakh1, L.M. Borisova1,1.Yu. Kubasova1, L.G. Dezhenkova, D.N. Kaluzhny3, A.V. Lantsova1, E.V. Sanarova1, A.A. Shtil1, N.A. Oborotova1, Z.S. Smirnova1, A.Yu.Baryshnikov1 PRECLINICAL STUDY OF ANTITUMOR ACTIVITY OF INDOLOCARBAZOLES N-GLYCOSIDES DERIVATIVE LCS-1208. REPORT II 1FSBI «N.N. Blokhin RCRC», Moscow 2FSBSI G.F. Gause Institute of New Antibiotic, Moscow 3V.A. Engelhardt Institute of Molecular Biology of RAS, Moscow Abstract The report presents the results of preclinical study of N-glycoside indolocarbazole derivative LCS-1208 antitumor activity in epidermoid LLC; mechanisms of antitumor action were studied as well. Therapeutic index TI50 equal to 2.8 was calculated during evaluation of LCS-1208 antitumor selective action on LLC. The assessment of LCS-1208 effect on metastasis in lungs in doses 125 mg/kg and 150 mg/kg shows that the agent is more effective as adjuvant chemotherapy (MGI=45% and 44%, respectively) than neoadjuvant chemotherapy (MGI=33% and 31%, respectively). LCS-1208 had the proved advantage of antitumor effect duration compared to irinotecan: TGI was 95% - 52% and 94% -27%, respectively, for 20 days after completed therapy. Combination of LCS-1208 with irinotecan in half doses of those combined agents (75 mg/kg and 33 mg/kg, respectively) resulted in synergic antitumor effect. Mechanism of antitumor action is determined by LCS-1208 intercalation in the two-stranded DNA and inhibition of topoisomerase I function. Key words: indolocarbazole derivative, LCS-1208, antitumor activity, epidermoid Lewis lung carcinoma (LLC), intercalation, DNA, topoisomerase I. ствия производного N-гликозида индолокарбазола Введение ЛХС-1208. Установлена зависимость противоопухолевой активности препарата от дозы и режима В сообщении I [8] представлены результаты применения на моделях опухолей разного гистоге-доклинического изучения противоопухолевого дей- неза. Так, на лимфобластозах (лейкоз Р-388 и лим-
№ 3/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
42 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ...
фаденоз Фишера L5178Y) показана высокая эффективность ЛХС-1208 (25 мг/кг) при ежедневном внутривенном введении в течение 5 дней (УПЖ=76 % и 83 % соответственно). На модели лимфаденоза Фишера в 33 % случаев наблюдается полное излечение животных, проживших 90 дней без признаков опухолевого процесса. На моделях солидных опухолей - LLC и рака шейки матки РШМ-5 - ЛХС-1208 эффективен при однократном внутривенном введении в дозе 150 мг/кг (ТРО=95 % - 81 % и ТРО=74 % - 56 % в течение 9 дней соответственно). При исследовании противоопухолевого действия ЛХС-1208 на развившуюся опухоль LLC показано статистически значимое торможение роста опухоли: 51 % и 47 % на 3 и 7 дни соответственно, после однократного внутривенного введения в дозе 150 мг/кг.
Сравнительное изучение эффективности лекарственной формы ЛХС-1208 и субстанции на модели LLC при внутрибрюшинном введении показало преимущество лекарственной формы препарата в дозе 110 мг/кг. Лекарственная форма вызывала торможение роста опухоли на 74 % - 75 % в течение 8 дней после окончания лечения, а субстанция на 39 % - 8 %.
Изучение механизма противоопухолевого действия и выявление клеточных мишеней, наряду с основными критериями оценки противоопухолевой активности, - обязательное требование к доклиническому исследованию новых препаратов [1-3; 10]. Известно, что соединения класса N-гликозидов индолокарбазолов взаимодействуют с различными внутриклеточными мишенями: интеркалируют в ДНК, что приводит к изменению конформации и повреждению двойной спирали [17; 25-27; 29; 33]; снижают активность протеинкиназ: циклинзависи-мой киназы CDK-1, протеинкиназы С, топоизоме-раз. Эти мишени важны для индукции гибели клеток [9; 12; 15; 16; 20-22; 28; 30-32]. Кроме того, под действием производных индолокарбазола отмечена вакуолизация цитоплазмы, связанная с активацией вакуолярной АТФазы [14].
Цель настоящего исследования - продолжение доклинического изучения противоопухолевой активности производного N-гликозида индолокар-базола ЛХС-1208 на эпидермоидной карциноме легкого Lewis и изучение механизма его противоопухолевого действия.
Материалы и методы
Исследования in vivo проведены на модели эпидермоидной карциномы легкого мышей Lewis, полученной из Банка опухолевых штаммов ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина». В опытах использованы иммунокомпетентные мыши-самцы линии C57Bl/§j (доноры опухолевого материала) и гибриды первого поколения BDFi (C57Bl/6j x DBA/2) массой 20 -22 г. Мышей получали из питомника лабораторных животных «Столбовая» и содержали в конвенциональных условиях на брикетированном рационе кормления [4].
LLC перевивали животным по стандартной методике. При перевивке опухолевую ткань измельчали ножницами до гомогенной консистенции, добавляли среду 199 до соотношения 1:10 и 0,5 мл полученной суспензии (около 50 мг опухолевых клеток) вводили подкожно в область правой подмышечной впадины. Лечение начинали через 48 ч после перевивки [13].
Лекарственная форма ЛХС-1208 - лиофили-зат для приготовления раствора для инъекций следующего состава: субстанция 9,2 мг; ДМСО 165 мг; Kollidon 17PF 600 мг.
Перед введением животным лиофилизат ре-гидратировали в 2,8 мл воды для инъекций и вводили внутривенно однократно в дозах 125 мг/кг и 150 мг/кг.
Для оценки избирательности противоопухолевого действия ЛХС-1208 рассчитывали терапевтический индекс ТИ50, как соотношение дозы, вызывающей гибель 50 % мышей, к эффективной дозе, вызывающей ТРО мышей также на 50 %. ЛХС-1208 вводили в диапазоне доз от 50 мг/кг до 170 мг/кг. Значение ТИ50 для эффективных препаратов должно быть > 2 [10].
В качестве препарата сравнения использовали ингибитор топоизомеразы I - коммерческий препарат иринотекан (Кампто, производитель: Пфайзер (Перт) Пти Лтд., Австралия) [5; 19; 23; 24].
Препарат вводили внутривенно трехкратно в дозе 40 мг/кг с интервалом 72 ч и однократно в дозе 66 мг/кг, то есть в эквивалентных дозах и режимах введения, которые применяются в клинике при монотерапии немелкоклеточного рака легкого [6; 11; 18].
Изучение эффективности ЛХС-1208 проводили также в комбинации с иринотеканом. Комби-нанты вводили в дозах, составляющих 1/2 от терапевтической дозы препаратов. В качестве положительного контроля вводили ЛХС-1208 и ириноте-кан в терапевтических дозах, что позволяло при равном противоопухолевом эффекте в сравниваемых группах оценить терапевтический эффект комбинации (ЭК) [10]. Дозы и режимы введения указаны в табл. 2 и 4.
Опухоли измеряли каждые 3 - 4 дня в зависимости от скорости роста опухоли. Объем опухоли (V) вычисляли перемножением трех максимальных взаимно перпендикулярных размеров (длина l, ширина b, высота h) у каждого животного.
Критериями оценки противоопухолевой активности служили: ТРО, % и УПЖ, % опытных животных по сравнению с контрольными [10].
Торможение роста опухоли вычисляли по формуле:
TPO(%) = ^^ х100, где Vk
W - средний объем опухолей в контрольной группе (мм3),
Vо - средний объем опухолей в опытной группе (мм3).
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ... 43
Увеличение продолжительности жизни вы- буфера (pH 7,8) и 100 мМ NaCl, применяя метод числяли по формуле: спектрального анализа. Реагенты приобретали в компании Хеликон (Москва). По изменению спек-(СПЖо — СПЖк) тров поглощения определяли взаимодействие ис-УПЖ (%) — х100, где следуемого соединения с ДНК. Кроме того, иссле-СПЖк довали концентрацию связанного и концентрацию не связавшегося (свободного) соединения. На осно-СПЖк - средняя продолжительность жюни жшютньк в вании этих данных строили изотерму связывания в контрольной группе (дни); ^ „ координатах Скэтчарда. По полученным показате-СПЖо - средняя продолжительность жизни животных в r r J опытной группе (дни) лям судили о параметрах связывания молекул ЛХС-1208 с дуплексной ДНК. Для изучения влияния ЛХС-1208 на метаста-зирование LLC в легкие, мышей подвергали эвтана- Результаты и обсуждение зии на 30-й день после гибели 1-й мыши в контрольной группе и оценивали торможение роста метаста- Изучение избирательности противоопухоле- зов по средней массе легких в опытных группах и вого действия ЛХС-1208 на LLC показало, та доза, контроле. Опухолевый узел удаляли на 9 день после вызывающая гибель 50 % мышей, составляла 170 перевивки LLC, препарат вводили на 10 день. мг/кг; доза вызывающая ТРО ~50 %, составила 60 Критерием оценки способности ингибировать мг/кг (табл. 1). Терапевтический индекс ТИ50 = 2Д метастазирование в легкие служило торможение Данные, представленные в табл. 2, показы- роста спонтанных метастазов (ТРМ, %) при подкож- вают, что ЛХС-1208 в дозе 150 мг/кг обладал более ной перевивке LLC в присутствии первичного опу- высоким противоопухолевым действием по срав- холевого узла и на фоне удаленной опухоли [7]. нению с иринотеканом в дозе 66 мг/кг по длитель-Торможение роста метастазов вычисляли по ности торможения роста LLC (ТРО=95 % - 52 % и формуле: ТРО=94 % - 27 % в течение 20 дней после окончания лечения соответственно). Иринотекан при (МЛ МЛ ) трехкратном введении в дозе 40 мг/кг проявлял TPM(%) — х100 где кратковременный и слабый противоопухолевый МЛк эффект (ТРО=61%). Как видно из табл. 3, при сохраненном опу-МЛк - средняя масса легких животных в контрольной холевом узле ЛХС-1208 вызывал статистически группе (мг); значимое торможение роста метастазов LLC как в МЛо - средняя масса легких животн^1х в опытной группе дозе 125 мг/кг, так и в терапевтической дозе 150 (мг). мг/кг: ТРМ 33% и 31 % соответственно. При введении ЛХС-1208 в тех же дозах после удаления пер- Полученные данные обрабатывали статисти- вичного опухолевого узла препарат оказывал более чески с использованием доверительных интервалов высокий эффект по ТРМ: 45 % и 44 % соответст- средних сравниваемых величин по стандартному венно. В то же время ТРМ, равное 30 % в группе с методу Стьюдента. Для оценки достоверности раз- хирургическим удалением первичного опухолевого личий определяли критерий Т (/-тест), значимыми узла, оказалось статистически недостоверным по считали различия при p<0,05. отношению к контролю. Для изучения влияния ЛХС-1208 на катали- Из данных табл. 4 следует, что комбинация тическую активность топоизмеразы 1 реакционную ЛХС-1208 с иринотеканом на модели LLC прояв- смесь, содержащую суперскрученную ДНК плаз- ляла длительную противоопухолевую активность в миды рBR322 (ДНКсс; «ферментас», Литва) инку- течение 20 дней после окончания лечения: бировали с 1 ЕД топоизомеразы 1 в отсутствии ТРО=94 % - 51 %. В то же время ЛХС-1208 в дозе (контроль) и присутствии ЛХС-1208 (0,5-20 мкМ) т« / - .. 75 мг/кг вызывал противоопухолевый эффект толь- при 37 °С в ^w^ Л0 буф,ере, с°держащГ ко в течение 9 дней (ТРО=82 % - 48 %), равный 35 мМ Трис-HCl (pH 8,0), 72 мМ KCl, 5 мМ MgCl2, - 111 F ' " ' i действию иринотекана в дозе 33 мг/кг в те же сроки 5 мМ дитиотрейтола, 2 мМ спермидина, 0,1 мг/мл наблюдения (ТРО=86 % - 52 %). Следовательно, бычьего сывороточного альбумина. Реакцию оста- комбинация ЛХС-1208 с иринотеканом в дозах, навливали внесением додецилсульфата натрия (до составляющих половину от терапевтической дозы 1%). Добавляли протеиназу К и инкубировали комбинантов (75 мг/кг и 33 мг/кг), проявила синер-смесь 30 мин при 37 °С. Электрофорез ДНК прово- гический противоопухолевый эффект на LLC, то дили в 1% агарозном геле (состав буфера: 40 мМ есть терапевтический эффект комбинации оказался Трис-основания, 1 мМ ЭДТА, 30 мМ ледяной ук- меньше суммарного эффекта, но больше, чем при сусной кислоты); гели окрашивали раствором бро- введении равных по эффекту комбинантов. мистого этидия и визуализировали в Уф-свете. на рис. 1 приведена электрофореграмма Взаимодействие ЛХС-1208 с ДНК изучали в продуктов релаксации ДНКсс под действием то- присутствии 13,7 мкМ пар оснований ДНК тимуса поизомеразы I. В отсутствие ЛХС-1208 плазмида теленка (Sigma-Aldrich, США). Измерения прово- Dn,»» v 6 ' ' , , рВR322 мигрирует в геле относительно быстро дили в растворе, содержащем 10 мМ фосфатного (трек ДНКсс)
№ 3/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
44
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ..
Таблица 1
Избирательность противоопухолевого действия ЛХС-1208 на LLC при однократном внутривенном введении
№№ групп Доза (мг/кг) ТРО, % Гибель от токсичности, %
Дни после окончания лечения
5 8 12 15 19
1 50 37 14 15 16 12 0
2 60 54 36 30 23 14 0
3 75 76 58 37 22 15 0
4 100 96* 68* 50* 38 21 0
5 150 99* 96* 64* 57* 50* 0
6 170 93* 91* 63* 57* 49* 50
*р<0,05 по отношению к контролю
Таблица 2
Сравнительное изучение противоопухолевой активности ЛХС-1208 и терапевтического действия иринотекана при в/в введении на LLC
Препарат №№ групп Доза(мг/кг)/интервал (час) х число введений ТРО, % УПЖ, %
Дни после окончания лечения
5 8 12 15 20 25
ЛХС-1208 1 150x1 95** 74 64* 50* 52* 43 20
2 155x1 97 91 74 59 40 41 15
Ирино-текан 3 40/72x3 61** 30 9 2 8 6 14
4 66x1 94 73 44* 31* 27* 28 15
*р<0,05 между группами 1 и 4; **р<0,05 между группами 1 и 3.
Таблица 3
Изучение влияния ЛХС-1208 на метастазирование LLC в легкие при однократном в/в введении
Группа Доза, мг/кг Масса тела, г Масса легких, мг ТРМ, %
Исходная После эвтаназии
Контроль - 24,6±2,1 29,3±2,4 447,9±148,9 -
Хирургическое удаление опухоли - 25,5±1,8 23,9±2,3 314,1±102,7 30
ЛХС-1208 125 24,1±2,5 26,1±6,3 298,3±66,8 33*
150 25,3±2,4 26,2±5,0 310,4±88,5 31*
Удаление опухоли + ЛХС-1208 125 24,0±1,4 24,1±4,0 247,5±39,8 45*
150 25,2±1,9 23,8±2,5 252,6±49,8 44*
*р<0,05 по отношению к контролю
Таблица 4
Изучение эффективности ЛХС-1208 в комбинации с иринотеканом на LLC при однократном внутривенном введении
Группа №№ групп Доза, мг/кг ТРО, % УПЖ, %
Дни после окончания лечения
5 9 13 16 20 23
ЛХС-1208 1 75 82* 48* 35* 27* 36* 17 17
2 150 92 66 56 57 50 36 13
Иринотекан 3 33 86* 52* 33* 27* 28* 21 14
4 66 93 80 53 48 43 28 14
ЛХС-1208 + иринотекан 5 75 + 33 94* 85* 59* 54* 51* 35 17
*р<0,05 - различия достоверны между группами 5 и 1; 5 и 3
В присутствии ЛХС-1208 плазмидная ДНК изменяет конформацию: релаксирует с образованием набора топоизомеров, мигрирующих в геле медленнее ДНСсс (трек Топо I). С увеличением концентрации ЛХС-1208 количество медленно мигрирующих (ре-лаксированных) молекул ДНК уменьшается, что свидетельствует о частичном торможении релаксации ДНК. При концентрациях ЛХС-1208 >5 мкМ актив-
ность топоизомеразы I ингибирована: присутствует только конформация ДНКсс. Как видно из рис. 2, при взаимодействии с двухцепочечной ДНК изменяются спектры поглощения ЛХС-1208 (сплошная линия - 1 мкМ свободного ЛХС-1208, пунктирная - в присутствии 13,7 мкМ пар оснований ДНК). Такой характер спектров характерен для интеркаляционного типа комплексов низкомолекулярных соединений с ДНК.
ЛХС-1208
Топоизомеры
Ш
ДНКсс ТопоI _0,5_
10
20
КОНЦЕНТРАЦИЯ ВЕЩЕСТВА, мкМ
Рис. 1. Влияние ЛХС-1208 на релаксацию плазмидной ДНК, опосредованную топоизомеразой I. Сокращения и пояснения - в тексте.
Рис. 2. Взаимодействие ЛХС-1208 с дуплексной ДНК. 2.5-10
2.0-10
г 1.5-10
О
0.2
Рис. 3. Изотерма связывания ЛХС-1208 с дуплексной ДНК:
По оси абсцисс - среднее количество молекул ЛХС-1208 (г) на один нуклеотид; по оси ординат - соотношение среднего количества молекул ЛХС-1208 к концентрации несвязанного ЛХС-1208 (г/С &ее).
46 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ...
По концентрациям связанного и свободного вает статистически значимое ТРМ, равное 33 % и ЛХС-1208 построена изотерма связывания ЛХС- 31 % соответственно, и, следовательно, перспекти-1208 с ДНК в координатах Скэтчарда (рис. 3), ап- вен для неоадъювантной химиотерапии. При вве-проксимированная уравнением МакГи-фон Хиппе- дении ЛХС-1208 в тех же дозах после удаления ля. Установлены параметры связывания: опухолевого узла ТРМ составляет 45 % и 44 % со-К=(2,4±0,5)х106 М-1, n=4,5±0,5. Последний показа- ответственно. Возможно, применение ЛХС-1208 тель означает, что одна молекула ЛХС-1208 зани- для адъювантной химиотерапии окажется более мает участок в дуплексе ДНК, соответствующий 4 эффективным. - 5 нуклеотидным остаткам. Комбинация ЛХС-1208 с иринотеканом в дозах, составляющих половину от терапевтической Заключение дозы комбинантов (75 мг/кг и 33 мг/кг соответственно), проявляет синергический противоопухоле- В результате исследований противоопухоле- вый эффект на модели LLC: результат применения вого эффекта производного N-гликозида индоло- комбинации меньше суммарного эффекта, но карбазола ЛХС-1208 в широком диапазоне доз от больше, чем при введении равных по эффекту ком-50 мг/кг до 170 мг/кг на модели LLC показана из- бинантов. Можно предположить, что введение бирательность противоопухолевого действия: тера- ЛХС-1208 с иринотеканом в меньших, чем при мо-певтический индекс ТИ50 = 2,8. нотерапии, дозах не приведет к суммации побоч- При сравнительном изучении противоопухо- ных эффектов. левого эффекта ЛХС-1208 и иринотекана при одно- Соединение ЛХС-1208 интеркалирует в кратном внутривенном введении в терапевтических двухцепочечную ДНК с образованием высокоаф-дозах 150 мг/кг и 66 мг/кг соответственно, установ- финных комплексов. Одна молекула ЛХС-1208 за-лено, что ЛХС-1208 достоверно превосходит дей- нимает участок, соответствующий 4-5 нуклеотид-ствие иринотекана по длительности торможения ным остаткам. Вызываемые комплексообразовани-роста LLC: ТРО=95 % - 52 % и ТРО=94 % - 27 % в ем нарушения конформации двойной спирали на-течение 20 дней после окончания лечения соответ- рушают матричные синтезы. Действительно, ЛХС-ственно. 1208 в микромолярных концентрациях ингибирует При оценке действия на метастазирование топоизомеразу I. Таким образом, установлены ми-LLC в легкие мышей установлено, что ЛХС-1208 шени и молекулярные механизмы, обусловливаю-(125 мг/кг и 150 мг/кг, однократное внутривенное щие противоопухолевую эффективность производ-введение) при сохраненном опухолевом узле вызы- ного N-гликозида индолокарбазола ЛХС-1208. Литература 1. Барышникова М.А., Барышников А.Ю. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И. Менделеева. - 2012. - Т. LVI, № 3-4. - С. 60-7. 2. Блохин Д.Ю., Чмутин Е.Ф., Иванов П.К. Молекулярные мишени для противоопухолевой терапии: факторы роста, ангиогенеза, апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3. - С. 25-30. 3. Блохин Д.Ю., Чмутин Е.Ф., Иванов П.К. Молекулярные мишени для противоопухолевой терапии: пути передачи сигнала и эпигенетические модуляторы // Российский биотерапевтический журнал. -2011. - Т. 10, № 4. - С. 81-8. 4. Большаков О.П., Незнанов Н.Г., Бабаханян Р.В. Дидактические и этические аспекты проведения исследований на биомоделях и на лабораторных животных // Качественная клиническая практика. -2002. - С. 1-53. 5. Борисов К.Е. Место ингибиторов топоизомеразы I в лечении мелкоклеточного рака легкого (обзор) // Онкология. Журнал имени П.А. Герцена. - 2014. - № 3. - С. 88-96. 6. Гарин А.М., Базин И.С. Кампто (иринотекан) препарат с широким спектром противоопухолевого действия // Фарматека. - 2002. - Т. 63, №12. - С. 9. 7. Зуева Е.П., Козлов А.М., Герасимова Г.К. и др. Методические указания по доклиническому изучению средств, обладающих способностью ингибировать процесс метастазирования и повышать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей. В кн.: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под общей ред. член-корр. РАМН проф. Р.У. Хабриева. - 2 изд., переработанное и доп.- М.: ОАО изд. «Медицина», 2005. - С. 674-82. 8. Киселева М.П., Шпрах З.С., Борисова Л.М. и др. Доклиническое изучение противоопухолевой активности производного N-гликозида индолокарбазола ЛХС-1208. Сообщение I // Российский биотерапевтический журнал. - 2015. - Т. 14, № 2. - С. 71-7. 9. Киселева М.П., Шпрах З.С., Деженкова Л.Г. и др. Действие производного индолокарбазолов ЛХС-1208 на топоизомеразу I // Материалы XII Всероссийской научно-практической конференции с меж-
№ 3/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
дународным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» Москва, 31 марта - 1 апреля 2015 г. Российский биотерапевтический журнал. - 2015. - Т. 14, № 1. - С. 89.
10. Методические рекомендации по доклиническому изучению противоопухолевой активности лекарственных средств. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - С. 640-54.
11. Переводчикова Н.И., Горбунова В.А. (ред.) Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний. М.: Практическая медицина, 2015. - 686 с.
12. Смирнова З.С., Борисова Л.М., Киселева М.П. и др. Поиск ингибиторов топоизомераз I и /или II среди N- гликозидов производных индоло [2,3-а] карбазолов для лечения злокачественных опухолей // «Результаты фундаментальных и прикладных исследований для создания новых лекарственных средств». Материалы симпозиума. Москва, 9 - 11 июня 2008 г. - М.: Фирма «Слово», 2008. - С. 1912.
13. Софьина З.П., Сыркин А.Б. (СССР), Голдин А., Кляйн А. (США) (ред.). Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. - М.: Медицина, 1980. - С. 71-112.
14. Татарский В.В. Механизмы гибели опухолевых клеток при действии новых углеводных производных индолокарбазолов. Автореф. дисс. ... канд. биол. наук. - М., 2010. - 108 с.
15. CHAMPOUX J.J. DNA TOPOISOMERASES: STRUCTURE, FUNCTION, AND MECHANISM // ANNU. REV. BIOCHEM. - 2001. - 70. - P. 369-413.
16. Chillemi G., Fioranil P., Benedetti P. et al. Protein concerted motions in the DNA-human topoisomerase I complex // Nucleic Acids Res. - 2003. - 31. - P. 1525-35.
17. Denny W.A. Emerging DNA topoisomerase inhibitors as anticancer drugs // Expert Opin. Emerg. Drugs. -2004. - 9. - P. 105-33.
18. Fukuoka M., Negoro S., Masuda N. et al. Final results of phase III study of irinotecan (CPT-11) plus cis-platin versus vindesine plus cisplatin versus CPT-11 alone in advanced non-small cell lung cancer. Program and abstracts of the 25th Congress of the European Society for Medical Oncology; October 13-17, 2000; Hamburg, Germany. Abstract 485.
19. Garcia-Carbonero R., Supko J.G. Current perspectives on the clinical experience, pharmacology, and continued development of the camptothecins // Clinical Cancer Research. - 2002. - 8. - P. 641-61.
20. Gupta M., Fujimori A., Pommier Y. Eukaryotic DNA topoisomerases I // Biochem. Biophys. Acta. - 1995. -1262. - Р. 1-14.
21. Kaufmann S. DNA topoisomerases in chemotherapy // Cancer Cells. - 1991. - 3. - P. 24-7.
22. Liu L.F. DNA topoisomerase poisons as antitumor drugs // Ann. Rev. Biochem - 1989. - 58. - P. 351-75.
23. Mathijssen R.H.J., Loos W.J., Verweij J. et al. Pharmacology of topoisomerase I inhibitors Irinotecan (CPT-11) and topotecan // Current Cancer Drug Targets - 2002. - 2. - P. 103-23.
24. Meng L.-H., Liao Z.-Y., Pommier Y. Non-camptothecin DNA topoisomerase I inhibitors in cancer therapy // Current Topics in Medicinal Chem. - 2003. - 3(3). - P. 305-20.
25. Pabo C.O., SauerR.T. Transcription factors: structural families and principles of DNA recognition // Annu. Rev. Biochem. - 1992. - 61. - P. 1053-95.
26. Perini R., Caserta M., Di Mauro E. DNA tridimensional context affects the reactivity of eukaryotic DNA topoisomerase I // J. Mol. Biol. - 1993. - 231. - P. 634-45.
27. Pommier Y., Pourquier P., Fan Y. et al. Mechanism of action of eukaryotic DNA topoisomerase I and drugs targeted to the enzyme // Biochem. Biophys. Acta - 1998. - 1400. - P. 83-106.
28. STEWART L., IRETON G.C., CHAMPOUX J.J. THE DOMAIN ORGANIZATION OF HUMAN TOPOISOMERASE I// J. BIOL. CHEM. - 1996. - 271. - P. 7602-8.
29. Streltsov S.A., Grokhovskii S.L., Kudelina I.A. et al. The behavior of the DNA topoisomerase I Inhibitor in aqueous solution // J. Biomol. Struct.Dyn. - 2001. - 18(6). - P. 913-4.
30. WANG J.C. CELLULAR ROLES OF DNA TOPOISOMERASES: A MOLECULAR PERSPECTIVE // NATURE. - 2002. - 3. - P. 430-40.
31. Wong R.S. Apoptosis in cancer: from pathogenesis to treatment // J. Exp Clin Cancer Res. - 2011. - 26. - P. 30-87.
32. Yamashita Y., Fujii N., Murakata C. et al. Induction of mammalian DNA topoisomerase I mediated DNA cleavage by antitumor indolocarbazole derivatives // Biochemistry. - 1992. - 31. - P. 12069-75.
33. Zimmer C., Wahnert U. Nonintercalating DNA-binding ligands: specificity of the interaction and their use as tools in biophysical, biochemical and biological investigations of the genetic material // Prog. Biophys. Mol. Biol. - 1986. - 47. - P. 31-112.
48
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ..
Материалы XII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты»
Т.Н. Богатыренко1, З.В.Куроптева2, Л.Н.Байдер2, Т.Е.Сашенкова1, Д.В.Мищенко1, Н.П.Коновалова2 ЭКЗО- И ЭНДОГЕННЫЕ ИСТОЧНИКИ NO
ПРИ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКОМ ДЕЙСТВИИ ЦИТОСТАТИКОВ
1ИПХФРАН, Черноголовка 2ИБХФ РАН, Москва
Актуальность. Парадоксальная дихотомия воздействия N0 - в зависимости от его концентрации в организме приводящая либо к терапевтическому эффекту, либо к канцерогенезу была положена в основу настоящей работы.
Задача исследования. Изучить влияние экзогенных (нитрат натрия в разных концентрациях - 40 мг/кг, 30 мг/кг, 15 мг/кг) и эндогенных (аскорбиновая кислота - 15 мг/кг) источников N0 в зависимости от их концентрации в организме на химиотерапевтическое действие цитостатиков: цисплатина (сР^) циклофосфана (ЦФ). Материалы и методы представлены в статье [Т.Н.Богатыренко и д.р. Вопросы онкологии, 2013, 1, с94-99]. Результаты. Было показано, что добавление через 4 часа аскорбиновой кислоты (АК) к лечению cPt и ЦФ увеличивает СПЖ (среднюю продолжительность жизни) на 20-30 % по сравнению с монотерапией цитостатиками. Композиции №N03 с цитостатиками увеличивают СПЖ на 26 %, 38 %, 4 % в зависимости от концентрации вводимого №N03. Добавление к этим композициям АК изменяло СПЖ от увеличения на 16 % до ингибирова-ния на 40 %.
Выводы. Изменение количества экзогенно вводимого №N03, являющегося донором N0, в сочетании с эндогенным N0, индуцированным в организме АК, коррелирует с изменением активности исследуемых цитостати-ков.
А.А. Борунова, Г.З. Чкадуа, Т.Н. Заботина, О.В. Короткова, Д.В.Табаков, И.Н.Михайлова, З.Г.Кадагидзе Т ЛИМФОЦИТЫ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ ПРИ ВАКЦИНОТЕРАПИИ
ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина», Москва
Целью данной работы было выявить значение количественного нарушения Т лимфоцитов (CD3+CD19-CD16-) у онкологических больных до вакцинотерапии.
Материалы и методы. Был изучен иммунофенотип лимфоцитов периферической крови 30 больных диссеми-нированной меланомой кожи без клинических признаков заболевания (после хирургического удаления опухоли) до начала вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками и 20 здоровых доноров. Иммунофенотип лимфоцитов оценивали методом многоцветной проточной цитометрии.
Результаты. По данным иммунологического исследования больные были разделены на группы: две равные (по 14 пациентов) - с нормальным количеством Т-лимфоцитов 67,6%±6,1% и со сниженным - 46,6%±6,9%, и только у двух больных количество Т клеток до начала терапии было выше показателей нормы (84,8% и 81,9%). Интересным оказалось то, что на фоне проводимой терапии у всех больных с исходно низким количеством Т-клеток отмечалось прогрессирование основного заболевания. А в группе с нормальным содержанием Т-лимфоцитов только 9 пациентов на фоне вакцинотерапии оставались в ремиссии. При этом у 5 больных, несмотря на исходно нормально количество этих клеток, на фоне терапии отмечалось прогрессирование. Из двух больных с высоким количеством Т-лимфоцитов до начала лечения у одного выявлено прогрессирование заболевания, а другой оставался в ремиссии. Следует отметить, что в группе больных с низким содержанием Т-клеток отмечается еще одно нарушение, снижение иммунорегуляторного индекса - ИРИ (0,9±0,3). В группе больных с нормальным содержанием Т-клеток и безрецидивным течением заболевания, соотношение субпопуляций CD4+ и CD8+ лимфоцитов (ИРИ) также оставалось в пределах нормы (1,3±0,3), а у больных с прогресси-рованием показатель CD4+/CD8+ был снижен (0,9±0,3).
Выводы. Выявленная корреляция между низким количеством Т-лимфоцитов в периферической крови больных и прогрессированием основного заболевания на фоне вакцинотерапии позволяет рассматривать низкий уровень Т-клеток как фактор неблагоприятного прогноза, а в сочетании с низким значением ИРИ может служить противопоказанием для вакцинотерапии. Безрецидивное течение заболевания в процессе вакцинотерапии наблюдалось у больных не имеющих нарушений ни в количестве Т-клеток ни в соотношении субпопуляций CD4+ и CD8+ лимфоцитов.
