CC BY
104
ИММУНООНКОЛОГИЯ
увеличивает число моноцитов в крови. Более подробные исследования продемонстрировали, что лечебно-профилактический иммуноглобулин может выполнять не только функции иммуностимулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, но и иммуномодулятора, несколько ослабляя чрезмерный и не действуя на нормальный иммунный ответ.
Одним из возможных механизмов повышения активности фагоцитирующих клеток под действием препарата Иммуноферон является влияние на экспрессию Fc-рецепторов на фагоцитирующих клетках (в том числе для IgG). Воздействуя на Fc-рецепторы, стимулирует функции макрофагов: изменяет морфологию клеток, усиливает экспрессию поверхностных рецепторов и антигенов и фагоцитарную активность клеток.
Т аким образом, результаты исследований показали, что наиболее значительное повышение показателей
врожденного и адаптивного иммунитета организма отмечалось при применении препарата «Лечебнопрофилактический иммуноглобулин». Рекомендуется его применение для повышения иммунитета и профилактики иммунодефицитных состояний животных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Боряев Г. И., Блинохватов А. Ф., Федоров Ю. Н. и др. Влияние минеральных элементов на иммунный статус бычков // Ветеринария. - 1999. - № 12. - С. 36-38.
2. Морякина С. В. Патология репродуктивной функции у молочных коров // Зоотехния. - 2008. - № 2. - С. 16.
3. ОстровскийМ. Иммунитет телят // Животноводство России. - 2007. - № 2. - С. 49-50.
4. Петрянкин Ф. П., Петрова О. Ю. Использование иммуностимуляторов для повышения физиологического статуса молодняка // Ветеринар. консультант. - 2007. - № 20. - С. 18-20.
Поступила 02.02.11
ИММУНООНКОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012
УДК 616-006.364.04-053.2-092:612.017.1]-078.33
Т. В. Горбунова1, В. Г. Поляков1, И. Н. Серебрякова2, Т. В. Шведова2, В. Н. Тимошенко2, Н. Н. Тупицын2
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА
лимфоцитов костного мозга у детей при мелкоклеточных саркомах
'Учреждение РАМН НИИ ДОГ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва; "Учреждение РАМН НИИ КО РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
Цель нашего исследования - оценить количественные характеристики субпопуляций лимфоцитов костного мозга при мелкоклеточных саркомах у детей и сопоставить полученные данные с показателями в норме и известными факторами риска при этих опухолях.
Материалы и методы. В исследование включены 34 ребенка в возрасте от 1 года до 16 лет, страдающих опухолями семейства саркомы Юинга (ОССЮ) или рабдомиосаркомой, и 15 детей без патологии (группа сравнения).
Окраску лимфоидных популяций костного мозга проводили с использованием моноклональных антител (трехцветная флюоресценция).
Результаты. Содержание Т-цитотоксических клеток (CD3+, CD8+), NK-клеток (CD56+, CD3-) было достоверно более высоким у больных саркомой Юинга по сравнению с таковым в норме и с количеством этих клеток у пациентов с рабдомиосаркомой. Напротив, концентрация хелперных клеток CD4+ у больных саркомой Юинга оказалась ниже, чем в норме. У пациентов с рабдомиосаркомой наблюдались резкое повышение уровня TCRy/5 Т-клеток по сравнению с аналогичным показателем в норме. Выявили важную роль субпопуляций Т-клеток (Leu8), естественных киллеров и TCRY/5-клеток в процессах лимфогенного и гематогенного метастазирования у детей с рабдомиосаркомой. Наличие низкого уровня TCRYS-клеток у больных с ОССЮ связано с неблагоприятной локализацией опухоли, а снижение количества активированных Т-цитотоксических клеток коррелирует с большим объемом опухоли или большой протяженностью поражения длинной трубчатой кости.
Результаты нашей работы могут послужить основанием для дальнейшего изучения клинического использования противоопухолевых иммунных препаратов при мелкоклеточных саркомах у детей.
Ключевые слова: костный мозг, субпопуляции лимфоцитов, рабдомиосаркома у детей, саркома Юинга у детей
Gorbunova T.V., Polyakov V.G., Serebryakova I.N., Shvedova T.V., Timoshenko V.N., Tupitsyn N.N. THE COMPARATIVE ANALYSIS OF THE SUBPOPULATION COMPOSITION OF BONE MARROW LYMPHOCYTES IN CHILDREN PRESENTING WITH PUNCTUATE SARCOMAS
- 37 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
Aim. The objective of the present study was to elucidate the quantitative characteristics of bone marrow lymphocyte from the children presenting with punctate sarcomas and compare the results thus obtained with the analogous characteristics of such cells from healthy subjects with special reference to the known risk factors of these tumours.
Materials and methods. The study included 34 children at the age from 1 to 16 years presenting either with punctate sarcomas or with rhabdosarcomas. The control group was comprised of 15 children. monoclonal antibodies were used to stain lymphoid cells from bone marrow (the three-color fluorescence technique). Results. The number of T-cytotoxic cells (CD3+, CD8+) and NK-cells (CD56+ CD3-) in the patients presenting with Ewing's sarcoma was significantly greater than in the healthy subjects and in the patients with rhabdosarcoma. In contrast, the number of CD4+ helper-cells in the patients with Ewing's sarcoma was smaller than normal. The patients with rhabdosarcoma were characterized by the markedly elevated number of TCR y/б T-cells as compared with the healthy children. It was shown that the subpopulations of T-cells (Leu8), natural killers, and TCR y/б cells play an important role in the processes of lymphogenic and hematogenic metastasis in the children presenting with rhabdosarcoma. The low content of TCR y/б cells in the children with Ewing's sarcoma may be related to the unfavourable localization of the tumours while the small number of activated T-cytotoxic cells correlates with the large volume of the tumours or the extensive lesion in long tubular bones. It is concluded that the results of the present study provide a basis for the further evaluation of the possibility to use anti-tumour immune preparations for the treatment of punctate sarcomas in the children.
Key words: bone marrow, lymphocyte populations, rhabdosarcoma in children, Ewing s sarcoma in children
Введение. В группу мелкокруглоклеточных сарком, согласно Международной гистологической классификации опухолей, включены опухоли семейства саркомы Юинга (ОССЮ) и рабдомиосаркома. ОССЮ встречаются несколько реже, чем остеосаркома, составляя 3% всех опухолей у детей [1, 4]. Рабдомиосаркома - опухоль мягких тканей, третья по частоте среди сарком у детей и подростков, составляет до 5-8% всех злокачественных опухолей [1, 13, 14, 16, 49, 51]. В последние десятилетия отмечается рост мягкотканых сарком среди детского населения в Европе на 1,8% [27].
Благодаря успехам современной терапии злокачественных опухолей удалось повысить выживаемость у пациентов с данной патологией. Наряду с цитостатическими препаратами с целью повлиять на рост опухоли используют иммунотерапевтические средства, в том числе вакцины. Большинство современных противоопухолевых вакцин основано на стратегии стимулирования Th-специфического ответа при рабдомиосаркоме [26, 28, 30, 31, 45, 54]. Результаты недавних исследований университета в Теннеси демонстрируют высокую чувствительность клеток саркомы Юинга к NK-клеткам, а использование цитокин-активированных NK-клеток может повышать иммунную активность в отношении клеток опухоли [24, 52]. Дефекты иммунной системы костного мозга могут иметь значение уже на этапе возникновения саркомы Юинга, так как многие авторы доказывают в качестве источника происхождения опухоли мультипотентную мезенхимальную стволовую клетку, живущую в костном мозге. Знание одной из потенциальных мишеней иммунологической атаки белка, образующегося в результате специфической для саркомы Юинга транслокации t [11, 22], - способствует поиску специфических эффекторных клеток противоопухолевого иммунитета при саркоме Юинга [10, 18]. При этом остаются неизученными вопросы о состоянии врожденной и адаптивной иммунной системы пациента, страдающего злокачественной опухолью.
Для изучения иммунитета у детей и выявления возможных путей активации иммунных клеток в кост-
Горбунова Татьяна Викторовна - асп. отделения опухолей головы и шеи, тел. 8(495)324-43-47, e-mail: wasicsol@mail.ru
ном мозге при рабдомиосаркоме и ОССЮ мы провели иммунологическое исследование субпопуляций лимфоцитов костного мозга и сопоставили полученные результаты со значимыми факторами риска.
Факторы прогноза при рабдомиосаркоме у детей. К независимым факторам прогноза при рабдомиосаркоме у детей относят возраст, гистологический вариант, первичную локализацию и размер опухоли, местное распространение опухоли, инфильтрацию соседних органов и тканей, наличие отдаленных метастазов, проведение радикального удаления опухоли и лучевой терапии [40]. Достоверность отдельного прогностического фактора определена для гистологического типа (р = 0,01), первичной локализации (р = 0,002), размера опухоли (р = 0,049), радикальности хирургического лечения (р = 0,002) и проведения лучевой терапии (р = 0,001) [20, 49, 50]. Детей в возрасте до 1 года надо рассматривать как группу высокого риска [1, 36]. В этой возрастной группе высок риск неблагоприятных результатов и рецидивов, а уровень безрецидивной выживаемости не превышает 57% [36]. Клиническая разница между альвеолярным и эмбриональным вариантами рабдомиосаркомы, вероятно, обусловлена разными молекулярными повреждениями и биологическими механизмами развития опухоли [40]. При эмбриональном варианте 5-летняя безрецидивная выживаемость составляет от 50 до 80%, а при альвеолярном - 12% [41]. Альвеолярный вариант ассоциируется с метастазами в кости (р = 0,001) и неблагоприятной локализацией опухоли (конечности; р< 0,001) [12]. 5-Летняя безрецидивная выживаемость пациентов при размере опухоли менее 5 см по сравнению с таковой у больных, у которых опухоль большего размера, достоверно выше, что составляет 51 и 30% соответственно (р = 0,049) [53]. Наличие метастазов в кости тесно связано с поражением костного мозга (р = 0,002), и эти две области комбинируются в единую прогностическую категорию [12, 39]. Метастазы в костный мозг чаще выявляют при альвеолярном варианте рабдомиосаркомы [48]. Общая выживаемость достоверно ниже в группе детей с метастазами в костный мозг 47% против 92% (р = 0,01) [37].
Факторы прогноза при ОССЮ у детей. При сарко-
- 38 -
ИММУНООНКОЛОГИЯ
ме Юинга неблагоприятные факторы, такие, как большой объем опухоли (более 100 см3), поражение осевого скелета йили метастазы достоверно влияют на уровень выживаемости [2, 4]. 5-Летняя безрецидивная выживаемость пациентов с метастазами, выявляемыми при первичной диагностике, составляет 22%, а больных без метастазов - 55% (р = 0,001) [17]. Основные факторы прогноза при ОССЮ представлены в табл. 1.
У пациентов без метастазов уровень выживаемости зависит от первичной локализации - конечности или центральная локализация. Общая выживаемость для детей с локализованными стадиями составляет 70%. Свободная от болезни выживаемость коррелировала с объемом опухоли (плюс мягкотканный компонент - 33,2%; минус мягкотканный компонент - 57,7%), локализацией опухоли (конечности - 54%, туловище - 16,6%), видом местного лечения (хирургия - 59,1%, лучевая терапия -30,3%, их комбинация - 47,9%), наличием патологического перелома ^.Неудовлетворительные результаты терапии при локализованных опухолях коррелируют с большим размером опухоли [21], первичной локализацией в области таза и туловища, возрастом детей (старше 14 лет), повышением уровня ЛДГ [2, 35, 43] и плохим ответом на индукционную химиотерапию [1, 9, 17, 19, 32, 33, 40, 46]. Влияние факторов прогноза на выживаемость при ОССЮ у детей представлена в табл. 2.
Материалы и методы. В группу исследования были включены 34 пациента с ОССЮ и рабдомиосаркомой в возрасте от 1 года до 16 лет. В группу сравнения вошло 15 детей, которые находились под нашим наблюдением и проходили обследование в НИИ детской онкологии и гематологии, в ходе комплексного обследования у них были исключены диагноз злокачественной опухоли или иная гематологическая патология. Средний возраст детей 8,4 года (медиана 9 лет), диапазон от 1 года до 17 лет. Детей в возрасте до 3 лет - 4, от 3 до 15 лет - 8, старше 15 лет - 3. В анализируемой группе преобладали мальчики - 11.
У всех детей изучили морфологический состав костного мозга, а также субпопуляции зрелых лимфоцитов. Костный мозг (объем не более 0,5 мл, с тем чтобы избежать разбавления периферической кровью) получали при пункции в области spina iliaca anterior superior. Мазки костного мозга окрашивали по Романовскому-Гимзе и анализировали миелограмму.
Ядросодержащие клетки костного мозга выделяли путем стандартного лизиса эритроцитов (использова-
Таблица 1
факторы прогноза при саркоме Юинга у детей
Показатель Прогноз
благоприятный неблагоприятный
Локализация Дистальные отделы конечностей (большеберцовая и малоберцовая кости, лучевая и локтевая кости) Центрально расположенные очаги (особенно кости таза), проксимальные отделы конечностей (плечо, бедро), ребра
Размер Менее 8 см или менее 100-150 мл в расчетном объеме Опухоли более 8 см или более 100-150 мл в расчетном объеме
Мягкотканный Отсутствие Наличие мягкотканного
компонент рентгенологически видимого компонента компонента на рентгенограмме или по данным компьютерной томографии (КТ)
ли FACS Lysing solution, BD).
Окраску лимфоидных популяций костного мозга проводили с использованием моноклональных антител (трехцветная флюоресценция), панель антител представлена в табл. 3.
Клиническая характеристика детей с рабдомиосаркомой. Группу с рабдомиосаркомой составили 18 детей (8 мальчиков и 10 девочек) в возрасте от 1 года до 15 лет (средний возраст 7 лет). Дети младше 3 лет - 3, от 3 до 10 лет - 11, старше 10 лет - 4. Распределение больных в зависимости от первичной локализации опухоли представлено в табл. 4.
Гистологическое исследование провели у 15 пациентов, при этом выявили два наиболее распространенных гистологических варианта: эмбриональный у 11, альвеолярный у 4; не удалось определить вариант у 3 больных (диагноз установлен цитологически у 1, у 2 для уточнения варианта необходимо провести иммуногистохимическое исследование). В соответствии с долечебной классификацией TNM I стадия определена у 3 пациентов, II стадия - у 7, III стадия - у 3, IV стадия - у 4.
Регионарные метастазы к моменту постановки диагноза выявили у 7 больных (при параменингеальной локализации у 5); отдаленные метастазы - у 5 (при параменингеальной локализации первичной опухоли
Таблица 2
Влияние факторов прогноза на выживаемость при саркоме Юинга у детей (данные ЕТ-1, ЕТ-2, CESS81, CESS86; n = 975)
Показатель Наличие Отсутствие
5-летняя безрецидивная выживаемость, % Г
Метастазы 25,3 55,2 0,0001
Аксиальные опухоли 49,6 61,4 0,005
Возраст старше 15 лет 48,4 59,9 0,005
Включение ифосфамида в схему ПХТ:
локализованные опухоли 60,1 45,3 0,0001
метастатические опухоли 29,8 15,7 0,016
Крупнопольное облучение легких при метастазах 15-18 Гр 36 15 < 0,05
Низкий ответ на индуктивную химиотерапию 31 79 0,005
Рецидив ранее 2 лет 3,9 23,3 0,0001
- 39 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
Таблица 3
Панель моноклональных антител для изучения субпопуляций лимфоцитов костного мозга у детей
№ пробирки FITC PE PE/Cy5 (PerCP)
1 IgG2a IgG1 IgG1
2 IgG2a IgG1 CD45
3 CD3 CD56 CD45
4 CD19 CD5 CD45
5 IgG2a IgG1 CD3
6 CD4 Leu8 CD3
7 CD8 CD38 CD3
8 CD8 HLA-DR CD3
9 CD57 CD8 CD3
10 CD8 CD28 CD3
11 TCRaP CD25 CD3
12 TCRyS CD2 CD3
у 3). Метастазы в легких определили у 4 пациентов, костный мозг поражен у 3, у 1 поражение легких сочеталось с метастазом в мягкие ткани спины. Не выявлены метастазы при первичной диагностике у 11 больных. Большинству (n = 10) пациентов провели лечение по протоколу ДОРМС-06 с включением вин-кристина 1,5 мг/м2, циклофосфана 2,2 г/м2, дактино-мицина 0,045 мг/кг. Оперативное лечение выполняли на высоте максимально выраженного эффекта. Доза лучевой терапии зависела от радикальности проведенного оперативного лечения и составила от 30,6 до 50,4 Гр на первичную опухоль и от 40,8 до 48,6 Гр на лимфатические узлы шеи. Остальные больные получали те же химиопрепараты (винкристин, дактиноми-цин, циклофосфан) плюс ифосфамид, этопозид, кар-боплатин, а также лучевую терапию в зависимости от локализации опухоли. При возможности радикального удаления опухоли производили хирургическое вмешательство. Хирургическое лечение произведено у 9 пациентов (при параменингеальной локализации у 3). У 5 больных выявили II степень лечебного патомор-
Таблица 4
распределение детей с рабдомиосаркомой в соответствии с первичной локализацией опухоли
Локализация опухоли Частота %
Голова и шея 10 55,5
В том числе:
параменингеальная 4 22,2
параменингеальная с интракраниальным ростом 4 22,2
орбита 1 5,6
наружная локализация головы и шеи 1 5,6
Конечности 2 11,1
Малый таз 4 22,2
Паравертебральная локализация 1 5,6
Невыявленная первичная локализация 1* 5,6
Примечание. * - у 1 больного первичная локализация не выявлена, так как заболевание манифестировало с поражения костного мозга.
фоза, у 1 - III степень, у 1 признаки лечебного пато-морфоза отсутствовали. На первом этапе оперативное лечение выполнено у 2 пациентов, у всех остальных оно носило характер биопсии. Срок наблюдения больных составил от 2 до 62 мес. Полная регрессия опухоли достигнута у 8 пациентов, частичная - у 6, без эффекта - у 4. Рецидивы опухоли во время терапии отметили у 6 больных, после окончания лечения - у 1 (через 11 мес). Умерли 4 пациента (в результате прогрессии на лечении - 1, отказ от противорецидивного лечения - 1, инкурабельный больной - 1, инфекционный процесс на лечении - 1).
Клиническая характеристика пациентов с ОССЮ. В наше исследование были включены 16 детей (11 мальчиков и 5 девочек) в возрасте от 2 до 16 лет (средний возраст 10,5 года). Диагноз у мальчиков устанавливали в среднем в возрасте 10,9 года, у девочек - 9,8 года. Преобладали дети до 14 лет (n = 11), 5 были старше 14 лет. Диагноз устанавливали на основании результатов иммуногистологических и молекулярно-генетических исследований. Преобладала классическая саркома Юинга (n = 12), у 3 пациентов выявили ПНЭО, у 1 - опухоль Аскина. Локализованная стадия преобладала у 12 детей, изолированные метастазы в легкие наблюдали у 2, сочетание метастатического поражения легких с поражением лимфатических узлов средостения - у 2 (при опухоли Аскина и ПНЭО ребра). Центральное расположение опухоли и поражение конечностей выявляли одинаково часто, в каждой группе по 8 пациентов. При этом опухоль локализовалась в дистальных отделах конечностей у 6 больных, проксимальное расположение отметили у 2. Объем опухоли более 100 см3 зафиксировали у 4 детей, протяженность поражения опухолью длинной трубчатой кости более 8 см выявили у 3. Наличие внекостного компонента, по данным КТ определили у 8 пациентов. Всем больным провели лечение по протоколу ММСЮ-99, стандартный риск у 3, высокий - у 13. Лучевую терапию получили 16 пациентов, при этом суммарная очаговая доза соответствовала объему первичной опухоли и подбиралась с учетом группы риска. Крупнопольное облучение легких провели всем больным с метастазами в легкие. Оперативное лечение провели у 8 пациентов, у 2 выполнили радикальную операцию на первом этапе терапии. Патоморфоз IV степени установили у 4 больных, III степени - у 2. Период наблюдения составил от 2 до 60 мес. Полный эффект достигнут у 11 пациентов, частичный - у 3, стабилизация заболевания - у 1, прогрессия на лечении - у 1. Рецидивы отсутствовали. Умерли 2 больных (у 1 прогрессия на лечении, у 1 сепсис).
Сравнительный анализ уровня субпопуляций лимфоцитов костного мозга при мелкокруглоклеточных саркомах у детей. Мы провели исследование содержания активированных Т-клеток, Т-цитотоксических клеток, TCRaP и TCRyS, NK-клеток и В-лимфоцитов у детей при ОССЮ, рабдомиосаркоме и в группе сравнения. Данные, полученные при иммунологическом исследовании субпопуляций лимфоцитов костного мозга, приведены в табл. 5.
При рабдомиосаркоме отличия от нормы состояли в первую очередь в значимом увеличении субпопуляции активированных Т-клеток и Т-цитотоксических клеток (CD3+CD28+HLA-DR+), а также в увеличении пропорции зрелых Т-клеток, экспрессирующих на
- 40 -
ИММУНООНКОЛОГИЯ
мембране TCRyS. При том, что в норме Т-лимфоциты, экспрессирующие TCRyS, представлены в виде небольшой популяции (до 5%) [15, 22, 34]. Неожиданным оказалось снижение почти в 2 раза процентного содержания зрелых Т-клеток, коэкспрессирующих CD4 (Т-хелперы/индукторы) и адгезионную молекулу CD62L (Leu8). Если учесть, что процентное содержание зрелых Т-клеток (CD3) и цитотоксической субпопуляции (CD3+CD8+) среди лимфоцитов костного мозга у больных рабдомиосаркомой не отличалось от нормы, то повышение процента HLA-DR+ Т-цитотоксических клеток (в 3 раза) следует рассматривать как проявление активации клеток иммунной системы костного мозга. На сегодняшний день мы не можем с уверенностью говорить о том, что подобная активация происходит под действием опухольспецифических антигенов [44]. Однако исключить подобное предположение также не представляется возможным.
При ОССЮ различий в уровне зрелых Т-клеток, оцениваемых по маркерам CD3 и CD5, а также в концентрации В-лимфоцитов (CD19+) у детей, не имеющих онкологической патологии, и детей, страдающих саркомой Юинга, мы не установили. Не было различий и в содержании некоторых особых популяций В-клеток (CD19+CD5+) и Т-клеток (CD3+CD56+), а также в уровне Т-клеток, экспрессирующих ав- и уб-Т-клеточные рецепторы.
Вместе с тем субпопуляционный состав зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) костного мозга у больных с саркомой Юинга существенно отличался от нормы значительным повышением пропорции CD8+-цитотоксических лимфоцитов (68,5 ± 3,1 и 50,5 ± 2,4; р = 0,000) и снижением уровня CD4+ Т-хелперных клеток (26,9 ± 3,5 и 39,3 ± 2,8; р = 0,01). Это в свою очередь отразилось на вдвое более низких значениях иммунорегуляторного индекса - соотношении CD4/ CD8 - у пациентов с саркомой Юинга в сравнении с нормой: 0,4 ± 0,08 и 0,8 ± 0,09 (р = 0,002).
Содержание CD4+CD62L+-субпопуляции зрелых Т-лимфоцитов в костном мозге у больных рабдомиосаркомой и ОССЮ значимо снижено - практически в 2
раза в сравнении с нормой. При исследовании иммунного статуса периферической крови у пациентов молодого возраста (17-19 лет) при локализованной стадии саркомы Юинга выявлено снижение количества всех субпопуляций Т-лимфоцитов, преимущественно клеток, экспрессирующих CD4, и возрастание при генерализации процесса уровня клеток, несущих на своей поверхности рецепторы к интерлейкину-2 [3].
Мы детально изучили структуру пула Т-цито-токсических клеток костного мозга (CD3+CD8+) у больных саркомой Юинга в сравнении с таковой у детей, не имеющих оннкологической патологии, и установили ряд важных различий. В первую очередь отметили более высокий уровень активации Т-клеток (CD3+) и, в частности, Т-цитотоксических клеток (CD3+CD8+), на основании возрастания более чем в 3 раза HLA-DR-позитивной фракции (р = 0,001). Вместе с тем содержание зрелых Т-клеток (CD3+TCRaP+), экспрессирующих другой активационный маркер CD25, который представлен также на Т-регуляторных клетках, не отличалось от нормы. В других исследованиях выявили повышение уровня T у пациентов с метастазами по сравнению с таковым или у тех, кто имел локализованную стадию (50% против 3,3%; р = 0,01) [11].
Специфической особенностью Т-цитотоксических лимфоцитов костного мозга у больных саркомой Юинга стало достоверное возрастание в сравнении с нормой пропорции CD8+CD38+-клеток среди CD3-позитивных лимфоцитов - 55,5 ± 4,8 и 34,6 ± 3,7 (р = 0,004). Важно отметить, что процент CD38+-клеток среди всех зрелых лимфоцитов (CD3+) не отличался от нормы, т. е. отклонения касались лишь CD8-позитивной субпопуляции. При сравнении количества Т-лимфоцитов внутри опухоли и в микроокружении выявлено достоверное повышение содержания CD8+-цитотоксических клеток внутри опухоли. Предполагают критическую роль CD8+ в предотвращении опухолевой прогрессии [8]. Результаты исследования молекул HLA классов I и II показали полное отсутствие антигенов HLA-DR и выраженную экспрессию HLA-I на клетках саркомы Юинга [5].
Таблица 5
Количественная характеристика субпопуляций лимфоцитов костного мозга у детей с ОССЮ, рабдомиосаркомой и в группе сравнения (M± т)
Маркер Норма, %, n ОССЮ, %; n Р, Рабдомиосаркома, %, n Р2 Рз
CD3 60,8 ± 5,0; 15 54,3 ± 4,6; 16 0,3 59,9 ± 4,3; 18 0,89 0,38
CD3+CD8+ 50,5 ± 2,4; 14 68,5 ± 3,1; 16 0,000 50,5 ± 3,9; 16 0,99 0,001
CD3+CD4+ 39,3 ± 2,8; 14 26,9 ± 3,5; 16 0,01 33,0 ± 2,7; 15 0,12 0,18
CD5 59,2 ± 5,4; 13 48,7 ± 4,7; 14 0,16 62,8 ± 5,1; 15 0,63 0,054
CD56+CD3- 9,4 ± 1,7; 12 18,0 ± 3,7; 14 0,049 14,2 ± 3,5; 14 0,26 0,46
CD19 27,8 ± 4,5; 15 21,8 ± 3,5; 16 0,3 21,4 ± 4,4; 18 0,4 0,95
CD19+CD5+ 14,6 ± 4,2; 13 13,2 ± 2,4; 14 0,78 8,5 ± 2,4; 14 0,17 0,18
CD3+CD56+ 12,6 ± 5,5; 13 7,5 ± 2,0; 15 0,38 8,6 ± 3,3; 17 0,52 0,8
TCRaP 86,4 ± 1,5; 13 85,1 ± 2,4; 12 0,65 83,1 ± 1,9; 11 0,19 0,54
TCRyS 9,2 ± 1,4; 11 10,0 ± 1,2; 11 0,69 15,8 ± 1,6; 11 0,007 0,01
CD8+HLA-DR+ 8,9 ± 1,4; 11 33,8 ± 5,4; 14 0,001 28,7 ± 6,1; 10 0,004 0,55
CD3+HLA-DR+ 12,2 ± 1,9; 13 37,5 ± 6,3; 15 0,001 37,1 ± 6,3; 14 0,001 0,96
Примечание. При сравнении показателей: р, - при ОССЮ и в норме; р - при рабдомиосаркоме и в норме; р - при рабдомиосаркоме и ОССЮ.
- 41 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
Особого внимания, на наш взгляд, заслуживает увеличение количества (CD3+CD8+) CD57-позитивных Т-клеток (р = 0,022), и в частности Т-цитоксических клеток (р = 0,028), в костном мозге у больных саркомой Юинга в сравнении с таковым в норме. Данной субпопуляции придают важное значение у пациентов с солидными опухолями, и возрастание количества этих клеток, как правило, ассоциируется с неблагоприятным прогнозом.
У больных саркомой Юинга в 2 раза повышено процентное содержание NK-клеток (CD3+CD56+) среди лимфоцитов костного мозга в сравнении с аналогичным показателем в норме (18,0 ± 3,7 и 9,4 ± 1,7), различия статистически значимы (р = 0,049). При исследовании субпопуляций лимфоцитов костного мозга у пациентов с саркомой Юинга, проведенном P. Brinkrolf и соавт. [11], выявлено, что концентрация CD56 в костном мозге коррелировала с уровнем безрецидивной выживаемости. У больных с низким содержанием или отсутствием CD56 безрецидивная выживаемость была выше (69%), нежели у пациентов, у которых был высокий уровень этого маркера (30%) (р = 0,024). При низкой концентрации или отсутствии CD56 определяли локализованные стадии (за исключением костей таза) в 100%, в то время как при высокой - только в 40% (р = 0,02). Также обнаружено, что CD56 является независимым маркером у больных с локализованной стадией, указывающим на риск развития рецидива (р = 0,006) [7].
Еще один интересный факт связан с установлением факта значимого повышения концентрации особой субпопуляции Т-клеток - TCRyS-позитивных клеток -у пациентов с рабдомиосаркомой. Этому типу клеток придают особое значение в противоопухолевом иммунитете. TCRyS-лимфоциты распознают иные, нежели TCRaP-позитивные клетки, антигенные мишени на опухоли, и тем самым обеспечивают эффективную и быструю элиминацию злокачественных клеток [6, 23, 28, 34, 47]. Распознавание опухолевых антигенов и последующая деструкция злокачественных клеток осуществляются Т-лимфоцитами вне контекста классических молекул HLA классов I и II [34, 55]. Мишенями иммунного распознавания лимфоцитов являются родственные полипептидным цепям HLA класса I молекулы А и В (MICA/MICB), а также UL-16-связывающие белки 1-3 (ULBPl-3), которые экспрессированы на клетках многих опухолей. Доказано, что TCRyS-лимфоциты способны осуществлять цитотоксическое действие в отношении этих опухолей [22, 34, 42].
Субпопуляции Т-цитотоксических и TCRyS-клеток отражают своего рода напряжение иммунной системы при рабдомиосаркоме у детей, так как данные показатели увеличены в сравнении с нормативными.
Мы оценили взаимосвязь полученных иммунологических данных с некоторыми клиническими характеристиками опухолевого процесса. Особый интерес, на наш взгляд, представляют данные о взаимосвязи субпопуляцинного состава лимфоцитов костного мозга у больных рабдомиосаркомой с метастазировани-ем в регионарные лимфатические узлы и отдаленным метастазированием.
Значимые различия отмечены лишь для одной Т-клеточной субпопуляции (Leu8), клетки этого типа преобладали при наличии метастазов в регионарные
лимфатические узлы - 69,8 ± 8% против 35,5 ± 7,7% (р = 0,016). Та же тенденция сохранялась и в отношении CD4-позитивных Т-клеток, экспрессирующих CD62L: 27,0 ± 9,2% против 13,6 ± 2,5% (р = 0,08). Важно отметить, что содержание Т-лимфоцитов костного мозга с маркером Leu8 (в особенности CD4-позитивные) было существенно снижено при рабдомиосаркоме в сравнении с таковым в норме. В результате проведенного нами анализа установили, что это обусловлено в первую очередь показателями этих субпопуляций у пациентов, не имеющих поражения регионарных лимфатических узлов.
Не менее интересные данные получены и при анализе отдаленного метастазирования. В этом случае значимыми оказались три субпопуляции костномозговых лимфоцитов: NK-клетки (CD56+CD3-), TCRaP-и TCRyS-лимфоциты.
Количество NK-клеток при наличии отдаленных метастазов существенно снижалось - 6,9 ± 1,9% против 18,6 ± 4,8% (р = 0,039). Эти данные могут иметь важное практическое значение, так как позволяют выявить NK-клеточный иммунодефицит при рабдомиосаркоме. В последние годы доказано, что введение стимулированных NK-клеток может рассматриваться как средство улучшения результатов лечения у детей с рабдомиосаркомой [15, 25]. Здесь следует напомнить о том, что в целом у больных рабдомиосаркомой содержание ТСRy5-клеток достоверно более высокое, нежели у детей в группе сравнения (диагноз злокачественной опухоли у них исключен). По-видимому, эти различия отражают компенсаторные механизмы иммунитета у пациентов, не имеющих отдаленных метастазов, а при наличии последних содержание TCRyS-клеток резко падает - 18,5 ± 1,7% (n = 7) против 11 ± 1,7% (n = 4) (р = 0,019). Похожее наблюдение описано M. Nanno и соавт. [38], ими получен низкий уровень TCRyS (менее 5%), среди инфильтрирующих опухоль Т-лимфоцитов [38] Снижение концентрации этих клеток ведет к пропорциональному повышению содержания TCRaP-клеток при наличии отдаленных метастазов. Это вполне закономерно, так как Т-клетка не может одновременно экспрессировать TCRaP- и TCRyS-рецепторы - они находятся в реципрокных взаимоотношениях. В нашем исследовании коэффициент корреляции Пирсона между процентным содержанием TCRaP- и TCRyS-клеток был отрицательным (-0,82) (р = 0,002). Важно отметить, что в настоящее время появились препараты, позволяющие стимулировать активность TCRyS-клеток [29], и наши данные свидетельствуют о возможности формирования групп больных для их применения.
У детей при ОССЮ мы оценили иммунологические различия, сопоставив полученные данные с полом, локализацией и объемом опухоли или протяженностью поражения кости и наличием мягкотканного компонента. Мы провели сравнительную оценку содержания различных субпопуляций лимфоцитов в зависимости от объема опухолевой массы (более 100 см3 или протяженность поражения кости более 8 см; в группе сравнения опухоли меньшего размера).
При нарастании объема опухолевой массы (более 100 см3 или протяженность поражения кости более 8 см) отмечали резкое снижение количества активированных Т-цитотоксических клеток (CD3+CD8+CD38+)
- 42 -
ИММУНООНКОЛОГИЯ
в сравнении с таковым у пациентов, у которых опухолевая масса была меньшего размера: 41,7 ± 8,2% (n = 5) и 63,2 ± 4,3% (n = 9) соответственно (р = 0,024). Следует отметить, что именно данная субпопуляция клеток у больных с ОССЮ (в целом по группе) была повышена в сравнении с таковой в контрольной группе (дети, у которых диагноз злокачественной опухоли был исключен). Следовательно, повышение уровня активированных Т-цитотоксических клеток при саркоме Юинга можно, вероятно, рассматривать как реакцию на опухоль на ранних стадиях ее роста, а при большом размере опухоли этот показатель снижается.
Мы не выявили различий в субпопуляционном составе лимфоцитов костного мозга в зависимости от пола, а также от наличия или отсутствия мягкотканного компонента.
Интересное наблюдение получено в отношении низкого содержания TCRyS-клеток костного мозга у больных саркомой Юинга с поражением осевого скелета в сравнении с таковым у тех, у кого были поражены конечности: 7,6 ± 0,9% (n = 6) и 12,9 ± 1,6% (n = 5) соответственно (р = 0,016). В целом по группе саркомы Юинга уровень Т-клеток с yS-рецептором не отличался от нормы. Известно, что ОССЮ с локализацией в области осевого скелета имеют менее благоприятный прогноз.
Вывод
При сопоставлении количественных характеристик субпопуляций лимфоцитов костного мозга у детей с ОССЮ и рабдомиосаркомой по сравнению с таковыми в норме выявили достоверные различия в уровне субпопуляций лимфоцитов костного мозга в сравнении с нормой, а также в зависимости от нозологической формы заболевания. Содержание Т-цитотоксических клеток (CD3+, CD8+) оказалось достоверно более высоким у пациентов с саркомой Юинга по сравнению с таковым в норме и с уровнем этих клеток у больных рабдомиосаркомой - 68,5 ± 3,1% (n = 16); 50,5 ± 2,4% (n = 14) и 50,5 ± 3,9% (n = 16) соответственно (р = 0,000 и р = 0,001). Напротив, концентрация хелперных CD4+-клеток у пациентов с саркомой Юинга была ниже, чем в норме, - 26,9 ± 3,5% (р = 16) и 39,3 ± 2,8% (р = 14) (р = 0,01). Отмечен значительно более высокий уровень NK-клеток естественного иммунитета (CD56+, CD3-) у больных, страдающих саркомой Юинга, по сравнению с аналогичным показателем в норме - 18 ± 3,7% (n = 14) и 9,4 ± 1,7% (n = 12) (р = 0,049). Характерной особенностью стало резкое повышение содержания TCRy/S Т-клеток у больных рабдомиосаркомой по сравнению с таковым в норме - 15,8 ± 1,6% (n = 11) и 9,2 ± 1,4% (n = 11) (р = 0,007).
Мы установили особенности клеточного иммунитета - субпопуляций лимфоцитов костного мозга - у пациентов с рабдомиосаркомой и ОССЮ при сопоставлении с важными факторами риска при этих заболеваниях. Результаты работы свидетельствуют о важной роли ряда особых субпопуляций Т-клеток (Leu8, CD64L), естественных киллеров и TCRyS-клеток в процессах лимфогенного и гематогенного метастазирования у детей с рабдомиосаркомой. Наличие низкого уровня TCRyS-клеток, играющих важную роль в противоопухолевом иммунитете при мел-
коклеточных саркомах у детей, при ОССЮ связано с неблагоприятной локализацией опухоли - осевой скелет. Резкое снижение количества активированных Т-цитотоксических клеток коррелирует с неблагоприятным фактором прогноза при ОССЮ у детей - большим объемом опухоли или большой протяженностью поражения кости.
Результаты нашей работы могут послужить основанием для дальнейшего изучения клинического использования противоопухолевых иммунных препаратов при мелкоклеточных саркомах у детей.
ЛИТЕРАТУРА
1. Лучевая терапия в детской онкологии / Гальперин Э., Кон-стайн Л., Тарбел Н. и др. - М., 1999. - С. 382-420.
2. Иванова Н. М. Современные возможности и перспективы лечения детей с опухолями семейства саркомы Юинга: Дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2008.
3. Мачак Г. Н. Иммунный статус больных остеогенной саркомой и саркомой Юинга: Дис. ... канд. мед. наук. - М., 1992.
4. Птушкина Е. А. Лечение прогностически неблагоприятных форм саркомы Юинга у детей: Дис. ... канд. мед. наук. - М., 2002.
5. Тайлаков Б. Б. Разработка методов лечения локализованной формы саркомы Юинга: Дис. ... д-ра мед. наук. - М., 1996.
6. Allison J., RauletD. The immunobiology of gamma delta+ T cells // Semin. Immunol. - 1990. - Vol. 2, N 1. - P. 59-65.
7. Ash S., Luna D., Cohen I. et al. Excellent prognosis in subset of patients with Ewing sarcoma identified at diagnosis by CD56 using flow cytometry // Clin. Cancer Res. - 2011. - Abstr.
8. Berghuis D., Santos S., Baelde H. Pro-inflammatory chemokine-chemokin receptor interactions within the Ewing sarcoma microenvironment determine CD8(+) T-lymphocyte infiltration and affect tumor progression // J. Pathol. - 2011. - Vol. 223, N 3. - P. 347-357.
9. Bernstein M., Kovar H., Paulussen M. et al. Ewing’s sarcoma family of tumors: current management // Oncologist. - 2006. -Vol. 11, N 5. - P. 503-519.
10. Bremers A., Pamiani G. Immunology and immunotherapy of human cancer: present concepts and clinical developments // Crit. Rev. Oncol. / Hematol. - 2000. - Vol. 34. - P. 1-25.
11. Brinkrolf P., Landmeier S., Altvater B. et al. A high proportion of bone marrow T cells with regulatory phenotype (CD4+CD25hiFoxP3+) in Ewing sarcoma patients is associated with metastatic disease // Int. J. Cancer - 2009. - Vol. 15, N 4. -P. 879-886.
12. Carli M., Colombatti R., Oberlin O. et al. European Intergroup Studies (MMT4-89 and MMT4-91) on Children Metastatic Rhabdomyosarcoma: final resalts and analisis of prognostic factors // J. Clin. Oncol. - 2004. - Vol. 22, N 23. - P. 4787-4794.
13. Casanova M., Meazza C., Gronchi A. et al. Soft-tissue sarcomas of the extremities in patients of pediatric age // J. Child Orthop. -2007 - Vol. 1, N 3. - P. 195-203.
14. Cecchetto G., Bisogno G., De Corti F. et al. Biopsy or debulking surgery for locally advanced rhabdomyosarcomas in children? // Cancer. - 2007. - Vol. 110. - P. 2561-2567.
15. Cho D., Shook D., Shimasaki N. et al. Cytotoxicity of activated natural killer cell against pediatric solid tumors // Clin. Cancer Res. - 2010. - Vol. 16. - P 3001-3009.
16. Cleverton R., Takahama A., Nishimoto I. et al. Rhabdomyosarcoma of the head and neck: a clinicopathological and immuno-histochemical analysis of 29 cases // Braz. Dent. J. - 2010 - Vol. 21 N 1. - P. 68-73.
17. Cotterill S., Ahrens S., Paulussen M. et al. Prognostic factor in Ewing’s tumor of bone: analisis of 975 patients from the European Intergroup Cooperative Ewing’s sarcoma study group // J. Clin. Oncol. - 2000 - Vol. 18, N 17. - P 3108-3114.
18. CrystalL., Mackall C., EuniceH. et al. A pilot study of consolida-
- 43 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
tive immunotherapy in patients with high-risk pediatric sarcomas // Clin. Cancer Res. - 2008 - Vol. 14, N 15. - P. 4850-4858.
19. Galindo C., Tiebin L., KrasinM. et al. Analysis ofprognostic factors in ewing sarcoma family of tumors // Cancer. - 2007 - Vol. 110, N 2 - P. 375-378.
20. Giovana M., Guimaraes R., Oliveira K. et al. Rhabdomyosarcoma of the head and neck: 24 cases and literature review // Braz. J. Otorhinolaryngol. - 2010 - Vol. 76, N 4. - P. 533-537.
21. Gobel V., Jurgens H., Kemperdick H. et al. Prognostic significance of tumor volume in localized Ewing’s sarcoma of bone in children and adolescents // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 1987 -Vol. 113, N 2. - P. 187-191.
22. Groh V., Rhienehart R., Secrist H. et al. Broad tumor-associated ex pression and recognition by tumor-derived уД-T cells of MIC-A and MIC-B // Proc. Natl Acad. Sci USA. - 1999. - Vol. 96. - P. 6879-6884.
23. Halary F., Petard V., Dlubel D. et al. Shared reactivity of V^@ neg уД T cells against cytomegalovirus-infected cells and tumor intestinal epithelial cells // J. Exp. Med. - 2005. - Vol. 201, N 10. - P. 1567-1578.
24. HangM., Lucas K. Current therapeutic approaches in metastatic and recurrent Ewing’s sarcoma // Sarcoma. - 2011. - 863210.
25. Hongeng S., Petvises S., Worapongpaiboon S. et al. Generation of Cd3+CD56+ cytokine-induced killer cells and their in vitro cytotoxicity against pediatric cancer cell // Int. J. Hematol. -2003 - Vol. 77. - P. 175-179.
26. Hung K., Hayashi R., Lafond-Walker I. et al. The central Role of CD4+ T cell in the antitumor immune response // J. Exp. Med. -1998 - Vol. 188, N. 12 - P. 2357-2364.
27. Kaatsch P. Epidemiology of childhood cancer // Cancer Treat Rev. - 2010. - Vol. 36, N 4. - P. 277-285.
28. Kabelitz D., Wesch D., He W. Perspectives of T cells in tumor immunology // Cancer Res. - 2007. - Vol. 67. - P. 5-8.
29. Kennedy R., Celis E. Multiple roles for CD4+ T cells in anti-tumor immune responses // Immonol. Rev. - 2008. - Vol. 222. - P. 129-1441.
30. Knutson K., Disis M. Augmenting T helper cell immunity in cancer // Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord.
- 2005. - Vol. 5, N 4 - P. 365-371.
31. Knutson K., Disis M. Tumor antigen-specific T helper cells in cancer immunity and immunotherapy // Cancer Immunol. Immu-nother. - 2005. - Vol. 54, N 8. - P. 721-738.
32. Koscielniak E., Jurgens H., Winkler K. et al. Treatment of soft tissue sarcoma in childhood and adolescence. A report of the German Cooperative Soft Tissue Sarcoma Study // Cancer. - 1992.
- Vol. 70, N 10. - P. 2557-2567.
33. KoscielniakE., Morgan M., Jorn T. Soft tissue sarcoma in children: prognosis and management // Pediatr. Drugs. - 2002. - Vol. 4, N 1. - P. 21-28.
34. LanierL., SerafiniA., Ruitenberg J. et al. The gamma T-cell antigen receptor // J. Clin. Immunol. - 1987. - Vol. 7. - P. 429-440.
35. Leavey P., Mascarenhas L., Marina N. et al. Prognostic factors for patients with Ewing sarcoma (EWS) at ferst recurrence following multimodality therapy - a report from the children’s oncology group // Pediatr. Blood Cancer. - 2008 - Vol. 51, N 3. - P. 334-338.
36. Malempati S., Rodeberg D., Donaldson S. et al. Rhabdomyosarcoma in infants younger than 1 year: a report from the children’s oncology group // Cancer. - 2011doi: 10.1002/cncr. 25887 abstract.
37. McDowellH. P., Donfrancesco A., Milano G. M. et al. Detection
and clinical significance of disseminated tumour cells at diagnosis in bone marrow of children with localized rhabdomyosarcoma // Eur. J. Cancer. - 2005. - Vol. 41, N 15. - P. 2288-2296.
38. Nanno M., Seki H., Suzuki R. et al. Gamma/delta T cell antigen receptors expressed on tumor-infilrating lymphocytes from patients with solid tumors // Eur. J. Immunol. - 1992. - Vol. 22. - P. 679-687.
39. Oberlin O., Rey A., Lyden E. et al. Prognostic factors in rhabdomyosarcomas: resalts of a pooled analysis from United States and European cooperative groups // J. Clin. Oncol. - 2008. - Vol. 14. - P. 2384-2389.
40. Pappo A. Pediatric Bone and Soft Tissue Sarcomas. - Berlin; Heidelberg, 2006. - P. 104-127.
41. Philip P., Meyer W. Rhabdomyosarcoma: new windows of opportunity // Oncologist. - 2005. - Vol. 10, N 1. - P. 518-527.
42. Poggi A., Venturino C., Catellani S. et al. VД1 T-lymphocytes from B-CLL patients recognize ULBP3 expressed on leukemic В cells and up-regulated by trans-retinoic acid // Cancer Res. -
2004. - Vol. 64. - P. 9172-9179.
43. Riley R., Burchill S., Abrams К. et al. A systematic review of molecular and biological markers in tumors of the Ewing’s sarcoma family // Eur. J. Cancer. - 2003. - Vol. 39, N 1. - P. 19-28.
44. Rodeberg D., Nuss R., Heppelmann C. et al. Lack of effective T-lymphocyte response to the PAX3/FKHR translocation area in alveolar rhabdomyosarcoma // Cancer Immunol. Immunother. -
2005. - Vol. 54. - P. 526-534.
45. Rossi D., ZlotnikA. The biology of chemokines and their receptors // Annu. Rev. Immunol. - 2000. - Vol. 18. - P. 217-242.
46. Saeter G., Elomaa I., Wahlqvist Y. et al. Prognostic factors in bone sarcomas // Acta Orthop. Scand. - 1997. - Suppl. 273. - P. 156-160.
47. Salemo A., Dieli F. Role of gamma delta T lymphocytes in immune response in humans and mice // Crit. Rev. Immunol. - 1998
- Vol. 18, N 4. - P. 327-357.
48. Sartori F., Allaggio R., Zanazzo G. et al. Results of a prospective minimal disseminated disease study in human rhabdomyosarcoma using three different molecular markers // Cancer. - 2006.
- Vol. 106. - P. 1756-1776.
49. Shouman Т., El-Kest I., Zaza K. et al. Rhabdomyosarcoma in childhood: a retrospective analysis of 190 patients treated at a single institution // J. Egyptian Natl. Cancer Inst. - 2005. - Vol. 17, N 2. - P. 67-75.
50. Sultan I., Qaddoumi I., Yaser S. et al. Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and results program, 1973 to 2005: an analysis of 2,600 patients // J. Clin. Oncol. - 2009 - Vol. 27, N 20. - P. 3391-3397.
51. Tanzarella S., Lionello I., Valentines B. et al. Rhabdomyosarcomas are potential target of mage-specific immunotherapies // Cancer Immunol. Immunother. - 2004. - Vol. 53. - P. 519-524.
52. Verhoeven D., Hooge A., Mooiman E. et al. NK cells recognize and lyse Ewing sarcoma cells through NKG2D and DNAM-1 receptor dependent pathways // Mol. Immunol. - 2008 - Vol. 45, N 15. - P. 3917-1925.
53. Walterhouse D. Optimal management strategies for rhabdomyosarcoma in children // Pediatr. Drugs. - 2007. - Vol. 9, N 6. - P. 391-400.
54. Wieder T., BbraumullerH., KneillingM. et al. T cell-mdiated help against tumors // Cell Cycle. - 2008. - Vol. 7. - P. 2974-2977.
55. Zocchi M., Poggi A. Role of gammadelta T lymphocytes in tumor defense // Front Biosci. - 2004 - Vol. 9 - P. 2588-2604.
Поступила 16.06.11
- 44 -
