CC BY
16
Иванников А. Т. В кн.: Radiological Health and Sofety in Mining and Mining of Nuclear Materials (Proceedings of the Symposium). Vienna, 1964, v. 1, p. 275. — Ш у л я -т и к о в а А. Я- Бюлл. радиац. мед., 1957, № 1, с. 76. — Ю р ь е в В. А., Степанова M. М. .Набор, дело, 1961, № 3, с. 11. — Bíneosme S. A., S t о n е R. S. Latta H. et al. Arch. Path., 1960, v. 69, p. 470. — В o w d e n D., J. clin. Path., 1963, v. 16, p. 484. — Cl arkson T. W., Ken с h J. E., Biochem. J., 1956, v. 62, p. 361. — D e n t C. E., W a 1 с h e J. M., Brit. med. Bull., 1954, v. 10, p. 247. — F i n k K-, H e n d e r s о n R. В., F i n k R. M., Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.). 1951, v. 78, p. 135.—G e r b e г G. В., G e г b e r G., A 1 t m a n К- I. et al. Int. J. Radiat. Biol., 1963, v. 6, p. 17. — К i 1 1 m a n n S. A. et al. Fed. Proc., 1959, v. 18, p. 260. — V о e g t 1 i n C., Hodge H., Pharmacology and Toxicology of Uranium Compounds. New York, 1949. — Walche J. M., Quart. J. Med., 1953, v. 22, p. 494. - Wilson V. К., T h о m so n M. Z., D e n t С. E., Lancet, 1953, v. 2, p. 66.
Поступила 25/1X 1974 г.
УДК 616.163:1:577*153.9]*074
A. И. Тимошкин
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ АКТИВНОСТИ ХОЛИНЭСТЕРАЗ КРОВИ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ И МЕЛАНЖЕРНЫМ
МЕТОДАМИ
Калининский медицинский институт
В последние годы активность холинэстераз крови широко изучается в качестве теста в экспериментальных работах, посвященных гигиеническому нормированию вредных веществ во внешней среде.
Для определения активности холинэстераз крови рекомендованы колориметрический метод (Б. А. Кривоглаз; С. Н. Голиков) и микроэкспресс-метод в меланжерах (А. А. Покровский; В. Ф. Сташенко и соавт. Инструкция по определению активности холинэстераз крови микроэкспресс-методом. Главное управление по лечебно-профилакт. помощи Министерства здравоохранения СССР. М., 1965). В доступной нам литературе оценка чувствительности рекомендованных показателей и методов их определения при интоксикациях фосфорорганическими соединениями (ФОС) не обсуждалась. Нами предпринята попытка выяснить этот вопрос в эксперименте.
Опыты проводили на белых крысах-самцах весом 250—300 г. Интоксикацию вызывали внутримышечным введением армина (типичный представитель ФОС) в дозах, уменьшающихся от LDs0 при среднеэффективном времени 30 мин (22-10~2, 13,7-Ю-3, 3,4-10"3, 2,9-Ю"3, 1,7-10~3, 8,6-10"4, 8,1-Ю-4 и 7,1-Ю-4 мг/кг). Контрольные исследования проводили на ин-тактных животных, которым вводили физиологический раствор в том же объеме (0,5 мл). В опыте с применением каждой дозы и в контроле использовали по 10 животных. Животных забивали декапитацией через 30 мин после инъекции. Кровь собирали в гепаринизированные центрифужные пробирки. Определяли гематокритное число. Эритроциты отделяли седиментацией при 378 g и троекратным промыванием физиологическим раствором. Колориметрическим методом (Hestrin) определяли активность ацетил-холинэстеразы (АХЭ) в гемолизатах, плазме и лизатах эритроцитов. К пробе (1 мл V15 M фосфатного (буфера, рН 7,8 и 0,5 мл холинэстераз) добавляли 0,5 мл 0,4 Уо раствора ацетилхолинхлоридов (АХХ). Контролем служили пробы без холинэстераз (2 мл V18 M фосфатного буфера, рН 7,8 и 0,5 мл 0,5% раствора АХХ). Пробы термостатировали в аппарате Варбур-га при 38° в течение 60 мин. Колориметрирование проводили на ФЭК-М с зеленым светофильтром.
Активность АХЭ рассчитывали графической интерполяцией. Одновременно исследовали активность АХЭ крови меланжерным методом. Для сопоставления показателей АХЭ плазмы в 'меланжеры набирали плазму до метки 0,5. Пробы термостатировали при 38°. Активность АХЭ рас-
16 38•40
считывали по формулам: для крови —— мг раствора АХХ/мл/ч; для
1б 38•20
плазмы —'-у-— мг раствора АХХ/мл/ч
(Г — время расщепления АХХ в мин). Активность АХЭ эритроцитов рассчитывали по разработанной нами номограмме (см. рисунок). Номограмма представляет собой прямоугольник, внутри которого находится бинарное поле. Левая сторона прямоугольника — шкала активности АХЭ эритроцитов, правая и верхняя — сдвоенная шкала крови и плазмы, нижняя — гематокрит. Методику расчета активности АХЭ эритроцитов указы-вает]ключ. При необходимости цифровые значения шкал крови, плазмы и эритроцитов могут быть увеличены. Статистическую обработку проводили на ЭВМ «Минск-222». Статистическую достоверность различий оценивали по t тесту при Р<0,05 (Д. Сепетлиев). Из полученных данных следует, что средние арифметические значения активности АХЭ в биосубстратах как при колориметрическом, так и при меланжерном определении различны. Различие средних величин активности АХЭ крови составило 29,7%, плазмы — 15,5%. В качестве статистической характеристики рассеивания показателей активности АХЭ по сравнению со средним ее значением был определен коэффициент варианции. Завышение средних значений и коэффициентов вариации активности АХЭ крови и плазмы при использовании меланжерного метода по сравнению с величинами, полученными колориметрическим методом, может быть обусловлено субъективностью регистрации изменения окраски опытных проб. Следует отметить, что завышение показателей активности АХЭ крови и плазмы при применении меланжерного метода не имеет практического смысла, если результаты исследований сравнивать с нормами, установленными с помощью того же метода. Однако относительно низкая воспроизводимость результатов может влиять на чувствительность меланжерного метода.
Для сравнения чувствительности рекомендованных тестов (кровь, плазма, эритроциты) была предпринята попытка изучить обоими методами характер изменений этих показателей при экспериментальной интоксикации животных различными дозами ФОС. Данные о влиянии внутримышечного введения различных доз армина на показатели активности АХЭ и гематокрит представлены в таблице. У контрольной группы животных, которым внутримышечно вводили физиологический раствор, существенных различий по сравнению с соответствующими показателями интактных животных не выявлено (для крпви и эритроцитов Р>0,5; для плазмы Я> >0,25). Максимальное снижение активности АХЭ в крови наблюдалось при введении летальных доз армина, причем наибольшее снижение показателя отмечалось в эритроцитах (до 1,1%), наименьшее—в плазме (до 28,8%). Выявлено также значительное (Р<0,001) повышение гемато-крита. При уменьшении вводимых доз установлена экспоненциальная зависимость изменений активности АХЭ крови, плазмы и эритроцитов. Используя коэффициенты криволинейной корреляции, мы установили, что во всех случаях они свидетельствуют о высокой степени тесноты обратной связи. Вместе с тем не обнаружено и статистически достоверных различий при определении сравниваемыми методами.
Различия в степени угнетения активности АХЭ эритроцитов и плазмы обусловлены, вероятно, структурой действующего ФОС, но при этом не исключается возможность усиления синтеза АХЭ или существования в плазме устойчивых к ингибирующему влиянию армина изознмных форм
С16 0,5 0.4 0.3
Номограмма для расчета активности АХЭ эритроцитов.
Г0
Влияние в/м введения различных доз армина на показатели активности АХЭ крови (мг раствора АХХ/мл/ч) и гематокрит белых крыс т)
Контроль Доза (в мг/кг)
АХЭ Метод определения интактные животные физиологический раствор 7.1 -Ю-4 8,1-Ю-4 8,610~4 1,7■10-4 2.9-10~* 3,4-10—* 13.7-Ю-3 22-Ю-2
Крови Колориметрический Меланжер-ный 6,022:0,23 Р 10,66—0,77 6,12^=0,22 >0,5 5,82=2=0,15 >0,5 5,22=5:0,29 <0,05 5,18=5:0,20 <0,02 9,50=5:1,24 5,04=2=0,17 <0,01 8,62=5=0,51 8,25^=0,46 4,57:2:0,23 <0,001 7,53=5=0,40 3,67=5:0,17 <0,001 6,49=5=0,38 0,49=5= =5=0,09 <0,001
Плазмы Эритроцитов Гематокрит Колориметрический Р 3,82=^0,15 4,00^=0,18 3,74=5=0,12 3,69=2=0,11 >0,25 3,72=5=0,12 <0,05 3,38=5=0,13 <0,01 <0,001 3,28=2=0,12 <0,001 2,92=5=0,10 1,08=5: =5=0,11
Меланжер-ный Колориметрический Номограмма Р 7,12±0,43 Р 9,21=5:0,34 Р 16,15—1,20 Р 0,42=5=0,02 Р >0,25 8,99=5:0,32 >0,5 0,44±0,01 >0,25 >0,5 8,02=5=0,40 <0,05 >0,5 7,96:£0,27 <0,01 >0,5 6,69=5=0,41 >0,5 7,43—0,30 <0,001 14,43=5= 1,48 >0,25 0,43=5=0,02 >0,5 <0,05 6,14=5=0,45 >0,1 7,02=5=0,31 <0,001 12,78=5=0,87 <0,05 0,44—0,01 >0,5 5,66^0,37 <0,05 12,46^1,19 <0,05 0,43—0,02 >0,5 <0,02 5,61=2=0,38 <0,02 5,90=5:0,36 <0,001 10,29=5=0,81 <0,001 0,42=5=0,02 >0,5 <0,001 5,09=5=0,32 <0,002 4,82=5=0,32 <0,001 7,23=5=0,55 <0,001 0,43—0,03 >0,5 <0,001 0,10=5= —0,02 <0,001 0,57=5: ±0,03 <0,001
Сопоставления чувствительности методов определения активности АХЭ для каждого показателя по критерию t (при P<z0,05) отчетливо выявляют преимущество колориметрического метода. Так, чувствительность колориметрического метода при определении активности АХЭ крови (см. таблицу) составила V270 LD50, а меланжерного метода — Vm LD60.
Таким образом, сравнительное определение активности АХЭ в крови свидетельствует о том, что эти методы выявляют различные качества холин-эстераз крови, плазмы и эритроцитов. При выборе теста и метода определения необходимо учитывать их чувствительность.
Выводы
1. Чувствительность колориметрического метода значительно выше чувствительности микроэкспресс-метода в меланжерах.
2. Показана возможность использования номограммы для расчета активности АХЭ эритроцитов.
3. Из исследованных показателей активности холинэстераз крови белых крыс наибольшей чувствительностью при интоксикации армином обладает АХЭ эритроцитов, наименьшей — АХЭ плазмы. Суммарный показатель (АХЭ крови) занимает промежуточное положение.
ЛИТЕРАТУРА. Голиков С. Н. Профилактика и терапия отравлений фосфорорганическими инсектицидами. М., 1968, с. 77. — Кривоглаз Б. А. Клиника и лечение интоксикаций ядохимикатами. Л., 1965, с. 32. — Покровский А. А. Воен.-мед. ж., 1960, № 1, с. 34. — С е п е т л и е в Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. М., 1968. — Hestrin S., J. biol. ehem., 1949, v. 180, p. 249.
Поступила 5/VIII 1974 г.
УДК в13.вЗ-07:[в1в.З«+61в.ЗЗ]-091.8-07в.5
Канд. мед. наук Т. А. Кочеткова, Г. Я- Караулова
МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ГЕПАТОЦИТОВ И ОБКЛАДОЧНЫХ КЛЕТОК ЖЕЛУДКА ПРИ ГИГИЕНИЧЕСКОМ НОРМИРОВАНИИ НЕКОТОРЫХ ВЕЩЕСТВ
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Изучение морфо-функциональных и патологических изменений в органах при гигиеническом нормировании различных веществ неизбежно вызывает необходимость измерения размеров, площадей и объема различных тканевых структур. Измерение и подсчет количества клеточных элементов в структуре органа не только уточняют и дополняют наши знания о нем, но, кроме того, с новых позиций освещают связь между его структурой и функцией, приобретают особое значение при гигиеническом подходе к решению вопросов, касающихся характера, силы, длительности воздействия различных факторов производственной среды и окружающей человека атмосферы для обоснованного нормирования этих факторов. Поэтому количественное определение структурных элементов организма (органов, тканей) очень важно в патологии, так как помогает подойти к нахождению или выявлению определенных критических уровней компенсации функции исследуемых биологических систем.
Целью морфометрических измерений срезов ткани печени и срезов из области дна желудка контрольных и подопытных крыс-самцов разного возраста являлась выработка единых методических подходов к количественной морфо-функциональной оценке состояния этих органов и их реактивности, в частности по содержанию двухъядерных гепатоцитов печени, отражающих в какой-то степени и реактивность всего организма.
