CC BY
41
УДК616.857:615.217 ББК 56.13:52.81 Б-74
Богус Саида Казбековна, кандидат медицинских наук, врач-кардиолог Муниципального бюджетного учреждения здравоохранения городская больница №2 Краснодарского муниципального лечебно-диагностического объединения, т.: 79184686026, е-
mail:Sayda_777@mail. ru;
Галенко-Ярошевский Павел Александрович, член-кор. РАМН, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации, т.: (861)2623499, т. 79284292122, е-mail: [email protected];
Духанин Александр Сергеевич, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Национальный исследовательский медицинский университет" им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России, т.: 89161117929, е-mail: [email protected];
Шимановский Николай Львович, член-кор. РАМН, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой молекулярной фармакологии и радиобиологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Национальный исследовательский медицинский университет" им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России, т.: 89166503149, е-mail: [email protected].
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОИЗВОДНОГО ИНДОЛА SS-68, АМИОДАРОНА И ДРОНЕДАРОНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ РЕЦЕПТОРОВ ВЕНТРОЛАТЕРАЛЬНОЙ ПОВЕРХНОСТИ ПРОДОЛГОВАТОГО МОЗГА
(рецензирована)
Изучено влияние производного индола SS-68, обладающего антиаритмической активностью, амиодарона и дронедарона на функциональную активность различных типов рецепторов, сопряженных с ионными каналамии G-белками синаптосом вентролатеральной поверхности продолговатого мозга.
Показано, что SS-68 действует более избирательно на рецепторные структуры, особенно на в-адренорецепторы, чем амиодарон и дронедарон.
Ключевые слова: производное индола SS-68, амиодарон, дронедарон, продолговатый мозг, синаптосомы.
Bogus Saida Kazbekovna, Candidate of Medicine, a cardiologist of Municipal budget health care institution city hospital № 2 of the Krasnodar Municipal Medical Diagnostic Association, tel.: 79184686026, email: Sayda 777@,mail.ru;
Galenko-Yaroshevsky Pavel Alexandrovich, corresponding member of RAMS, Doctor of Medicine, professor, head of the Department of Pharmacology of the SBEIHPE "Kuban State Medical University” of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation, tel.: (861) 2623499, e-mail: kybfarma @ rambler.ru;
Dukhanin Alexander Sergeevich, Doctor of Medicine, professor, professor of the Department of Molecular Pharmacology and Radiobiology of the SBEI HPE "National Research Medical University" named after N.I. Pirogov of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation, tel: 89161117929, e-mail: [email protected];
Shimanovsky Nicholai Lvovich, corresponding member of RAMS, MD, professor, head of the Department of Molecular Pharmacology and Radiobiology of the SBEI HPE "National Research Medical University" named after N.I. Pirogov of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation, tel: 89166503149, e-mail: shiman@rsmu. ru.
COMPARATIVE RESEARCH OF THE INFLUENCE OF INDOLE DERIVATIVE SS-68, AMIODARONE AND DRONEDARONE ON FUNCTIONAL ACTIVITY OF VARIOUS TYPES OF THE MEDULLA VENTROLATERAL SURFACE RECEPTORS
(Reviewed)
The effects of indole derivatives SS-68, which has antiarrhythmic activity, amiodarone and dronedarone on functional activity of different types of receptors associated with ion canals G-proteins by the synaptosomes of ventrolateral surface of the medulla oblongata have been studied.
It has been shown that the SS-68 acts more selectively on the receptor structure, especially on the в-adrenergic receptors than amiodarone and dronedarone.
Keywords: indole derivative SS-68, amiodarone, dronedarone, medulla, synaptosomes.
Несмотря на успехи в разработке и применении новых антиаритмических препаратов, фармакотерапия нарушений ритма сердца (НРС) остается актуальной проблемой. Это связано со сложностью регуляции ритма сердца на различных уровнях. Действительно, нормализующее влияние на нарушенный ритм сердечных сокращений могут оказывать лекарственные средства (ЛС), относящиеся к разным классам химических соединений и принадлежащие к различным фармакологическим группам: анксиолитикам, холино- и адреноблокаторам, антиконвульсантам, препаратам, содержащим соли калия, антагонистам ионов кальция и др.
Изучение центральных свойств у антиаритмиков П-ГУ классов (согласно классификации Е.М. Уаи§;Ьап^1Шат8 [1]) - пропранолола, амиодарона и верапамила - показало, что при внутривенном введении с последующей электростимуляцией симпатоактивирующего центра вентролатеральной поверхности продолговатого мозга (ВЛППМ) кошек наиболее значимый превентивный эффект проявляет амиодарон, а при химической стимуляции - пропранолол и верапамил. При аппликации препаратов на область симпатоактивирующего центра с последующей его электростимуляцией наиболее выраженным действием обладает пропранолол, а при химической стимуляции - амиодарон. Все исследованные препараты повышают содержание тормозных нейроаминокислот (глицина и ГАМК), а верапамил интенсивно подавлет синтез, возбуждающих нейроаминокислот (аспартата и глутамата) [2, 3].
Исходя из того, что производное индола 88-68 обладает выраженными антиаритмическими (устраняет НРС как периферического, так и центрального генеза), а также антиангинальными свойствами, характерными, как правило, для антиаритмиков III класса [4], представляло интерес исследовать влияние 88-68 и взятых в качестве референтных препаратов амиодарона и дронедарона на основные рецепторные системы ВЛППМ, принимающие участие в центральных механизмах регуляции НРС.
Целью данной работы явилось сравнительное исследование влияния соединения SS-68, амиодарона и дронедарона на функциональную активность (ФА) различных типов рецепторов, сопряженных с ионными каналами (5-НТ3, ГАМКАи КМБЛ) и О-белками [5-НТ1, 5-НТ2, Ме1;-О1и, Р-адренорецепторы ф-АР)] синаптосом ВЛППМ.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Синаптосомы - везикулы плазматических мембран - из ВЛППМ кошек получали с помощью метода дифференциального центрифугирования в градиенте перколла [5]. Для оценки изменений внутриклеточной концентрации свободных Са2+ и №+ использовали специфические флуоресцентные индикаторы Иио-3 и SBFГ. Процедуры нагружения синаптосом флуоресцентными зондами, расчет концентрации ионов в везикулах проводили по методикам, описанным в работах [6, 7]. Конечная концентрация зондов во внутривезикулярной среде составляла 5-7 мкМ. Концентрацию везикулярного ионизированного кальция ([Са2]вн) рассчитывали по формуле [8]:
[Са2 ]вн = Кс1'( -^тах - -^53о) /( -^530- -^ттХ
где^530 - интенсивность флуоресценции образца при 530 нм; ^тах - флуоресценция в условиях насыщения зонда Са2+ и Ка+, определяемая после внесения 30 мкМ дигитонина и 1мМ СаС12; ^т1п -интенсивность флуоресценции при нулевой (в присутствии 5 мМ ЭГТА и 5 мкМ А23187) концентрации Са2 ;^^ - равновесная константа диссоциации комплекса Иио-Са, равная 0,42 мкМ. Перед измерением включения Са2+ пробы преинкубировали при 37°С в течение 30 мин. -времени, достаточном для достижения равновесия в системе среда-везикулы. Для вычисления количества Са2+, накопленного в везикулах, в предварительных экспериментах был определен внутривезикулярный объем (^), который составил 92 мкл/мг белка.
Для перерасчета интенсивности флуоресценции зонда SBFI в [Ка ]вн выполняли процедуру калибровки как описано в работе [9]. Концентрацию №+ в везикулах рассчитывали по формуле:
[Ка+]цит = Ы к (Я - Ят1п)/(Ятах - Я), где R - отношение флуоресцеции при длинах возбуждающего света 340 нм ^340) и 380 нм ^380); Ят1п и Итах - то же при нулевой и насыщающей концентрации [Ка+]цит (150 тМ); к -
отношение интенсивности флуоресценции при 380 нм для свободного и связанного зонда (2,1±0,1); Ы - равновесная константа диссоциации комплекса зонд-№, равная 20,8 +1,4 мМ.
Определение изменений содержания ионов хлора ([С1"]вн) в изолированных синаптосомах основано на использовании флуоресцентного индикатора С1", 6-метокси-К-этилхинолина йодида (MEQ). Условия нагружения зондом, проведения калибровочной процедуры были такие же, как в работе [10]. Флуоресценция образца везикул в среде, не содержащей хлор ([С1"]о = 0 мМ), была максимальной (^тах). Минимальное значение флуоресценции (^т1п) определяли после инкубации везикул в течение 10 мин в присутствии 150 мМК8СК и 25 мкМ валиномицина. Анион К8С№ вытесняет С1- из комплекса с красителем, валиномицин служит в качестве ионофора, переносящего К8С№ через плазматическую мембрану в везикулы. Для определения величины константы Штерна-Волмера экспериментальные данные представляли в координатах
№/^,; [СГ],
где ^о= ^тах - ^т1п, ^С1_ - значение флуоресценции при заданной концентрации СГв среде ([С1-]). Везикулярную концентрацию хлора в опытных образцах рассчитывали на основании построенной калибровочной кривой, подставляя экспериментальное значение флуоресценции образцов.
Для определения содержание цАМФ в синаптосомах использовали стандартные наборы фирмы "Ате^ат". Содержание инозитол-трифосфата (ИФ3) определяли радиометрически как описанов работе [11].
Активацию рецепторов осуществляли путем внесения в суспензию синаптосом, выделенных из ВЛППМ, селективных агонистов соответствующих типов рецепторов (табл. 1). Для оценки специфичности выявленных изменений в качестве контроля использовали избирательные антагонисты/ингибиторы изученных в работе рецепторных систем (табл. 1).
Расчет доверительных интервалов экспериментальных значений и оценку достоверности различий между ними проводили с помощью параметрического 1-критерия Стьюдента при уровне значимости, равном 0,05.
Сокращения: 8-Ьу^оху-2-(^-п-ргору1атто)1е1ха1т (8-ОН-БРЛТ); а1рЬа-те1Ьу1-5-
hydroxytryptamine (а-Ме-5НТ); СО819755 (8е1йэ1е1) = тетапйпе; Б-2-ат1по-4-рЬо8рЬопоЬи1апо1о ac1d (Б-ЛР4); methy1-4-carЬoxypheny1g1yc1ne (МСРО).
Таблица 1 - Использованные в работе специфические лиганды различных типов рецепторов
Тип рецептора Агонист Антагонист
5-НТ1 8-ОН-БРЛТ Спиперон
5-НТ2 а-Ме-5НТ Метисергид
5-НТ3 Хлорфенил-бигуанид Ондансетрон
ГАМКЛ Мусцимол Блокатор хлорного ионофора пикротоксин
КМБЛ N-метил-Б -аспартат Св8 19755
МеЮ1и Б-ЛР4 МСРв
Р-АР Изопротеренол Пропранолол
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В первой части работы было изучено влияние 88-68, амиодарона, и дронедаронана ФА рецепторов, сопряженных сионными каналами, ответ которых сопровождается изменением синаптосомальной концентрацией Са2+, Ка+ или С1". К ним относятся: 5-НТ3 тип рецепторов серотонина, ГАМКЛ тип рецепторов ГАМК, КМБЛ тип рецепторов глутамата.
Влияние 88-68, амиодарона и дронедарона на ФА5-НТ3 типа рецепторов серотонина оценивали по их действию на Са-ответ синаптосом, индуцированный селективным лигандом 5-НТ3 рецепторов хлорфенил-бигуанидом.
Обнаружено, что добавление к суспензии синапотосом хлорфенил-бигуанида в конечной концентрации 0,1 мкМ приводит к статистически достоверному 3-х кратному увеличению концентрации свободных Са2+. Базальная [Са2 ]вн в контрольных пробах составила 84,0±9,0нМ. Изби-рательный антагонист 5-НТ3типа рецепторов серотонина ондансетрон (1,0 мкМ) полностью устранял эффект селективного агониста хлорфенил-бигуанида (рис. 1). Результаты сравнительного анализа действия 88-68, амиодарона и дронедаронана Са-ответ синаптосом приведены на рисунке 2. Видно, что в этих условиях из исследуемых веществ только дронедарон статически значимо уменьшал подъем уровня Са2+, опосредованный активацией 5-НТ3 типа рецепторов серотонина.
Время, мин
Рис. 1. Зависимость [Са~+]ен от действия 0,1 мк&1 хлорфенил-бигустида в отсутствие (2) и в присутствии 1,0 мкМ ондансетрона (1)
250 -200 -150 100 50 0
А
1
2
3
Рис. 2. Влияние 88-68 50 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (3) на Са-ответ, вызванный агонистом 5-НТ3 типа рецепторов серотонина хлорфенил-бигуанидом (А)
Действие 88-68, амиодарона и дронедаронана ФА ГАМКа типа рецепторов ГАМК исследовали по их влиянию на изменения концентрации С1- в синаптосомах, вызванные специфическим лигандом этих рецепторов мусцимолом. Внесение в суспензию синапотосом мусцимола в конечной концентрации 10 мкМ приводило к повышению концентрации свободных С1-до максимального значения 36 мМ. [С1-]вн в контрольных пробах в отсутствие индуктора составляла 14,0 ±4,0мМ. Блокатор хлорного ионофора пикротоксин (50 мкМ) подавлял стимулирующий эффект мусцимола (рис. 3). Статистически значимого влияния 88-68, амиодарона и дронедаронана С1-ответ синаптосом не обнаружено (рис. 4).
Рис. 3. Зависимость [С1']вн от действия 10 мкМ мусцимола в отсутствие (А) и в присутствии 50 мкМпикротоксина (Ант). К - контрольные пробы
* - отмечены достоверные изменения (р< 0,05).
Рис. 4. Влияние 88-68 50 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (3) на С1-ответ, вызванный агонистом ГАМКа типа рецепторов ГАМК мусцимолом (А)
Исследование 88-68, амиодарона и дронедаронана ФАКМОА типа рецепторов глутамата включало определение их действия на содержание в синаптосомах свободных ионов Ка+ и Са2+. Избирательный лиганд этого типа рецепторов ^метил-О-аспартат (3 мкМ) достоверно увеличивал базальные значения концентрации катионов в 2,8 и 1,5 раза соответственно (рис. 5 и 7). Амиодарон и дронедарон в отличие от 88-68 значимо уменьшали выраженность Са-ответа на К-метил-О-аспартат (рис. 6). В присутствии всех исследованных веществ достоверно снижался Ка-ответ синаптосом, вызванный активацией КМОА рецепторов глутаматного типа (рис. 8).
Во второй части работы было изучено влияние 88-68, амиодарона и дронедаронана ФА рецепторов, сопряженных с О-белками, ответ которых сопровождается изменением синаптосомальной концентрации вторичных мессенджеров ИФ3 и циклического аденозинмонофосфата (цАМФ). К ним относятся: 5-ИТ1и 5-НТ2 типы рецепторов серотонина, метаботропный тип рецепторов глутаматаи Р-АР.
Влияние 88-68, амиодарона и дронедаронана ФА5-НТ типа рецепторов серотонина оценивали по их действию на цАМФ-ответ синаптосом, индуцированный селективным лигандом 5-НТ1 рецепторов соединением 8-ОН-БРАТ. Установлено, что добавление к суспензии синаптосом 8-ОН-БРАТ в конечной концентрации 0,5 мкМ приводит к значимому снижению базальной концентрации цАМФ в среднем на 38%. Базальная [цАМФ]вн в контрольных пробах составила 16,0±3,0пмоль/мг белка. Избирательный антагонист 5-НТ1 типа рецепторов серотонина спиперон (4 мкМ) нивелировал эффект селективного лиганда (рис. 9). Результаты сравнительного анализа действия 88-68, амиодарона и дронедаронана цАМФ-ответ синаптосом суммирован на рисунке 10. Видно, что в этих условиях исследуемые вещества не проявляют активности.
2+
[С
350 300 250 200 150 100 50 --
0
4
г\
0 1 2 3 4 5
Время, мин
Рис. 5. Зависимость изменения [Са2+]вн от действия 3 мкМЫ-метил-Б-аспартата в отсутствие (2) и в присутствии 10 мкМ CGS19755 (1)
350 -|
300 - т
250 -200 -150 -100 -50 0
1
1
2
3
А
Рис. 6. Влияние соединения ББ-68 50 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (3) на Са-ответ, вызванный агонистом ЫМБЛ рецепторов глутамата Ы-метил-Б-аспартатного типа (А)
9 і
4 -1
0
3
0,5 1 1,5 2 2,5
Время, мин
Рис. 7. Зависимость изменения [Ыа+]ен от действия 3 мкМЫ-метил-Б-аспартата в отсутствие (1) и в присутствии 10мкМCGS19755 (2)
Стрелкой обозначен момент внесения препаратов.
35 п
+
cg
со
30 25 -20 -15
10 -
5 0
А
1
2
3
Рис. 8. Влияние соединения SS-68 50 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (3)на Nа-ответ, вызванный агонистом NMDA рецепторов глутамата N-метил-D-аспартатного типа (А)
цАМФ
Время, мин
Рис. 9. Зависимость изменения [цАМФ]вн от действия 0,5 мкМ8-ОН-БРЛТ в отсутствие (1) и в присутствии 4,0 мкМ спиперона (2)
+
мг
пмоль
g S
§
lo
0)
7 б
S 5
С 4 $ 3
r
А
1
2
3
Рис. 10. Влияние соединения SS-68 50 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (1) на цАМФ-ответ, вызванный агонистом 5-HT¡ типа рецепторов серотонина 8-OH-DPAT (А).
Действие SS-68, aмиодaронa и дронедaронa та ФА5-ЛГ2 тит рецепторов серотонита и метaботропный тип рецепторов глyтaмaтa изу^ли по их влиянию та изменения концентрaции ИФ3 в синaптосомaх, индyцировaнные избирaтельными aгонистaми этих типов рецепторов - а-Me-5HT (30 мкМ) и D-AP4 (0,5 мкМ) соответственно. Из дaнных, приведенных та рисyнкaх 11 и
12, видно, что все исследовaнные веществ достоверно не изменяли содержaние этого вторичного мессенджерa в синaптосомaх. Ha основaнии полученных резyльтaтов можно предположить, что yкaзaнные типы рецепторов не принимaют yчaстия в центрaльном действии SS-68, aмиодaронa и дронедaронa та aктивность симпaтоaктивирyющего центрa ВЛППМ.
б
1
А
1
2
3
Рис. 11. Влияние соединения SS-6850 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (3) на ИФ3-ответ, вызванный агонистом 5-HT2 типа рецепторов серотонина веществом a-Me-5HT, 30 мкМ (А)
8 i
7
6 -
5 -
4
3
2 -
1 -
0
А
1
2
3
Рис. 12. Влияние SS-6850 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и дронедарона 50 мкМ (3) на ИФ3-ответ, вызванный агонистом метаботропного типа рецепторов глутамата соединением D-AP4, 0.5 мкМ (А)
О влиянии SS-68, амиодарона и дронедарона на ФАß-АР судили по данным определения их действия на содержание в синаптосомах вторичного мессенджера цАМФ. На фоне действия избирательного лиганда этого типа рецепторов изопротеронола (10 мкМ) дронедарон в концентрации 50 мкМ обладал способностью значимо подавлять цАМФ-ответ (рис. 13). Эффект дронедарона и SS-68 был достоверно более выраженным по сравнению с действием амиодарона (рис. 14).
0
Время, мин
Рис. 13. Изменение [цАМФ]]ен под действием 10 мкМ изопротеренола в отсутствие (1) и в присутствии 50 мкМ дронедарона (2)
со 50 ьс
с; 45 »О 40
2 35 | 30 с 25 €> 20 § 15 "§■ 10
5 0
А
1
2
3
Рис. 14. Влияние соединения 88-68 50 мкМ (1), амиодарона 50 мкМ (2) и
дронедарона 50 мкМ (3) на цАМФ-ответ, вызванный агонистом в-АР изопротеронолом (А)
Полученные данные свидетельствуют о вовлечении нескольких типов рецепторов, относящихся к различным семействам мембранных рецепторов нейромедиаторов ЦНС, в реализацию центрального действия 88-68, амиодарона и дронедарона. Вто же время трудно предположить, что все описанные эффекты этих веществ обусловлены их прямым взаимодействием с узнающими сайтами рецепторов. Не обладая прямым аффинитетом к NMDA-рецепторам глутаматаи различным типам рецепторов серотонина 88-68, амиодарон и дронедарон могут оказывать на них модифицирующее/аллостерическое действие, усиливая или ослабляя их способность к связыванию или передачу молекулярного сигнала на трансдуктор или эффектор[12, 13]. В свете современных представлений о веществах нового типа, не относящихся к прямым агонистам рецепторов, механизм действия исследованных нами веществ можно представить как эффект модулятора, аллостерически потенцирующего рецептор лиганда и активатора ионных каналов.
Можно полагать, что под влиянием 88-68, амиодарона и дронедарона происходят конформационные изменения мембранных рецепторов нейромедиаторов, сопряженных с ионными каналами, и их переход в конформацию открытого канала, что способствует ионным токам.
Механизм реализации центрального эффекта 88-68, амиодарона и дронедарона возможен также вследствие возникновения новых вариантов связывания эндогенных лигандов с наиболее оптимальными подтипами рецепторов, улучшения сопряжения мембранных рецепторов и G-белков, что влияет на ФА рецепторов, изменяющих систему вторичных внутриклеточных посредников.
Данные о влиянии 88-68, амиодарона и дронедаронана ФА различных типов рецепторов синаптосом ВЛППМ суммированы в таблице 2.
Исследованные вещества Рецепторы, сопряженные с ионными каналами Рецепторы, сопряженные с G-белками
5-HT3 ГАМКа NMDA 5-HT1 5-HT2 Met-Glu Р-ЛР
Са-ток Na-ток
Соединение SS-68 + ++
Амиодарон + + +
Дронедарон + + + ++
Таким образом, новое производное индола SS-68, обладающее высокой антиаритмической, а также антиангинальной активностью, по сравнению с амиодароном и дронедароном проявляетбольшую селективность в отношении центральных нейрохимических механизмов, которые могут быть вовлечены в регуляцию ритма сердечных сокращений. Соединение SS-68, в отличие от амиодарона и дронедарона, действует более избирательно на Р-АР ВЛППМ, что позволяет высказать предположение о наличии у этого вещества преимущества в аспекте развития меньшего числа побочных эффектов, связанных с изменением серотонинергической системы.
Литература:
1. Vaughan-Williams Е.М. Classification of antiarrhythmic drugs // J. Cardiovasc. Pharmacol.
1992. Suppl. 2. P. SI-S7.
2. Влияние пропранолола, амиодарона и верапамила на нарушения сердечного ритма центрального генеза / А.Х. Каде [и др.] // Фундаментальные исследования. 2010. №1. С. 51-56.
3. Влияние верапамила и амиодарона на состояние симпатико-адреналовой системы и соотношение возбуждающих и тормозных аминокислот в продолговатом мозге крыс / А.Ю. Туровая [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. Т. 139, №5. С. 525-527.
4. Антиаритмические средства: фармакотерапевтические аспекты, методы поиска и
доклинического изучения / П.А. Галенко-Ярошевский [и др.]. Краснодар: Просвещение-Юг, 2012. 431 с.
5. Dunkley P.R., Jarvie P.E., Robinson P.J. A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes // Nat. Protoc. 2008. Vol. 3, №11. P. 1718-1728.
6. Smith T.L. Regulation of intrasynaptosomal free calcium concentrations: studies with the fluorescent indicator, fluo-3 // Neurochem Int. 1990. Vol. 16, №1. P. 89-94.
7. Galvan E., Sitges M. Characterization of the participation of sodium channels on the rise in Na+ induced by 4-aminopyridine (4-AP) in synaptosomes // Neurochem. Res. 2004. Feb. Vol. 29, №2. P. 347-355.
8. Minta A., KaoJ.P.Y., Tsien R.Y. Fluorescent indicators for cytosolic calcium based on rhodamine and fluorescein chromophores // J. Biol. Chem. 1989. Vol. 264. P. 8171-8178.
9. Simultaneous measurement of intracellular Na+ and Ca2+ during K+-free perfusion in isolated myocytes / Hayashi H. [etc.] // Am. J. Physiol. 1994. Vol. 266, №2. Pt 1. P. C. 416-422.
10. Engblom A.C., Akerman K.E. Determination of the intracellular free chloride concentration in rat brain synaptoneurosomes using a chloride-sensitive fluorescent indicator // Biochim. Biophys. Acta.
1993. Dec 12. Vol. 1153, №2. P. 262- 266.
11. Griffin H.D., Hawthorne J.N. Calcium-activated hydrolysis of phosphatidyl-myo-inositol 4-phosphate and phosphatidyl-myo-inositol 4,5-bisphosphate in guinea-pig synaptosomes // Biochem. J. 1978. Nov.15. Vol. 176, №2. P. 541-552.
12. Presynaptic antisympathetic action of amiodarone and its metabolite desethylamiodarone / Haikerwal D. [etc.] // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1999. Feb. Vol. 33, №2. P. 309-315.
13. Chidlow G., Melena J., Osborne N.N. Betaxolol, a beta(1)-adrenoceptor antagonist, reduces Na(+) influx into cortical synaptosomes by direct interaction with Na(+) channels: comparison with other beta-adrenoceptor antagonists // Br. J. Pharmacol. 2000. Jun. Vol. 130, №4. P. 759-766.
References:
1. Vaughan-Williams E.M. Classification of antiarrhythmic drugs // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1992. Suppl. 2. P. SI S7.
2. Effect of propranolol, verapamil and amiodarone on the heart rhythm disorders of central genesis/Kade A.H. [and oth.] //Basic research. 2010. № 1. P.51-56.
3. Effect of verapamil and amidarone on the state of sympathetic-adrenal system and the ratio of excitatory and inhibitory amino acids in the medulla of rats / Turovaya A. Y. [and oth.] // Bull. Exper. biol. and medicine. 2005. V.139. № 5. P. 525-527.
4. Antiarrhythmic drugs: pharmacological aspects, methods of search and pre-clinical study / Galenko-Yaroshevsky P.A. [and oth.]. Krasnodar: Education-South, 2012. 431 p.
5. Dunkley P.R., Jarvie P.E., Robinson P.J. A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes // Nat. Protoc. 2008. Vol. 3, №11. P. 1718- 1728.
6. Smith T.L. Regulation of intrasynaptosomal free calcium concentrations: studies with the fluorescent indicator, fluo-3 //Neurochem Int. 1990. Vol. 16, №1. P. 89-94.
7. Galván E., Sitges M. Characterization of the participation of sodium channels on the rise in Na+ induced by 4-aminopyridine (4-AP) in synaptosomes // Neurochem. Res. 2004. Feb. Vol. 29, № 2. P. 347- 355.
8. Minta A., KaoJ.P.Y., Tsien R.Y. Fluorescent indicators for cytosolic calcium based on rhodamine and fluorescein chromophores // J. Biol. Chem. 1989. Vol. 264. P. 8171 - 8178.
9. Simultaneous measurement of intracellular Na+ and Ca2+ during K+-free perfusion in isolated myocytes /Hayashi H. [etc.] //Am. J. Physiol. 1994. Vol. 266, № 2. Pt 1. P. C. 416 - 422.
10. Engblom A.C., Akerman K.E. Determination of the intracellular free chloride concentration in rat brain synaptoneurosomes using a chloride-sensitive fluorescent indicator // Biochim. Biophys. Acta. 1993. Dec 12. Vol. 1153, №2. P. 262-266.
11. Griffin H.D., Hawthorne J.N. Calcium-activated hydrolysis of phosphatidyl-myo-inositol 4-phosphate and phosphatidyl-myo-inositol 4,5-bisphosphate in guinea-pig synaptosomes // Biochem. J. 1978. Nov.15. Vol. 176, № 2. P. 541- 552.
12. Presynaptic antisympathetic action of amiodarone and its metabolite desethylamiodarone / Haikerwal D. [etc.] // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1999. Feb. Vol. 33, №2. P. 309- 315.
13. Chidlow G., Melena J., Osborne N.N. Betaxolol, a beta(1)-adrenoceptor antagonist, reduces Na(+) influx into cortical synaptosomes by direct interaction with Na(+) channels: comparison with other beta-adrenoceptor antagonists // Br. J. Pharmacol. 2000. Jun. Vol. 130, №4. P. 759- 766.
