CC BY
20
Vestnik KazNMU №2-2019
40 Husebye E.S., Perheentupa J., Rautemaa R., Kämpe O. Clinical manifestations and management of patients with autoimmune polyendocrine syndrome type I //J. Intern. Med. - 2009. - Vol.265. - P.514-529.
41 Perheentupa J. Autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal dystrophy //J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2006. - Vol.91. -P.2843-2850.
42 Arstila T.P., Jarva H. Human APECED; a Sick Thymus Syndrome? //Front. Immunol. - 2013. - Vol.4. - P.313.
43 Merenmies L., Tarkkanen A. Chronic bilateral keratitis in autoimmune polyendocrinopathy-candidiadis-ectodermal dystrophy (APECED) //ActaOphthalmol.Scand. - 2000. - Vol.78. - P.532-535.
44 Bluestone J.A., Herold K., Eisenbarth G. Genetics, pathogenesis and clinical interventions in type 1 diabetes //Nature. - 2010. - Vol.464. -P.1293-1300.
45 Perheentupa J., Miettinen A. Autoimmune polyendocrine syndrome type I (APECED) //RG Landes Company; Austin, TX, USA. - 1999. -P.19-40.
46 Sneller M.C., Dale J.K., Straus S.E. Autoimmune lymphoproliferative syndrome //Curr. Opin. Rheumatol. - 2003.- Vol.15. - P.417-421.
47 Straus S.E. et al. An inherited disorder of lymphocyte apoptosis: the autoimmune lymphoproliferative syndrome //Ann. Intern. Med. -1999. -Vol.130. - P.591-601.
48 Rieux-Laucat F., Le Deist F., Fischer A. Autoimmunelymphoproliferative syndromes: genetic defects of apoptosis pathways //Cell Death Differ. - 2003. -Vol.10. - P.124-133.
49 Rao V.K., Oliveira J.B. How I treat autoimmune lymphoproliferative syndrome //Blood. - 2011.-Vol.118. - P.5741-5751.
50 Turbyville J.C., Rao V.K. The autoimmune lymphoproliferative syndrome: A rare disorder providing clues about normal tolerance //Autoimmun. Rev. - 2010. - P.488-493.
51 Madkaikar M., Mhatre S., Gupta M., Ghosh K. Advances in autoimmune lymphoproliferative syndromes //Eur. J. Haematol. - 2011. -Vol.87. - P.1-9.
О.П. Усенова, М.А. Моренко, Е.Ф. Ковзель, К.В. Шнайдер, К.Г. Влащенюк
БдеШШШГСП ИММУНДЫК; ТАПШЫЛЬЩ: ИММУНДЫК; ДИСРЕГУЛЯТОРЛЬЩ Б¥ЗЫЛУ АУРУЛАРЫНЬЩ KЛИНИKАЛЫrç ЖЭНЕ ГЕНЕТИВДЛЫК; ЕРЕ^ЕЛ^ТЕР!
Ty^^ Бул ма;алада иммунды; дисрегуляторлы; бузылудыц аурулары ретшде IPEX-синдромы, APECED, ALPS, олардыц таралуы, клиникалы; жэне генетикалы; ерекшелiктерi сия;ты бiрiншiлiктi иммундык; тапшыльщтыц 9 топтарыныц бiрiнiц негiзгi нозологиялы; формалары кврсетiлген. Эйткеш иммунды; дисрегуляторлы; бар нау;астардыц кепшшп диагноз уа;ытында ;ойылмайды немесе ете кеш аны;талады.
ТYЙiндi свздер: бiрiншiлiк иммунды; жетiспеушiлiк аурулары, иммунды; бузылу, IPEX-синдромы, APECED, АЛПС.
O.P. Ussenova, M.A. Morenko, E.F. Kovzel, K.V. Shnayder, K.G. Vlashenyuk
PRIMARY IMMUNODEFICIENCIES: CLINICAL AND GENETIC FEATURES OF DISEASES OF IMMUNE DYSREGULATION
Resume: This review article presents the main nosological forms of one of the 9 groups of primary immunodeficiencies, such as diseases of immune dysregulation: IPEX syndrome, APECED, ALPS, their prevalence, clinical and genetic features. Since most patients with diseases of immune dysregulation are not diagnosed or are diagnosed very late.
Keywords: primary immunodeficiency diseases, immune dysregulation, IPEX-syndrome, APECED, ALPS
УДК 616-08-039.32
К.В. Шнайдер1, М.А. Моренко1, О.П. Усенова1, Е.Ф. Ковзель2
1АО «Медицинский Университет Астана», кафедра детских болезней №1 2отдел клинической иммунологии, аллергологии, пульмонологии «Республиканский диагностический центр», КФ UMC
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ЗАМЕСТИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ИММУНОГЛОБУЛИНОМ G РАЗНЫМИ СПОСОБАМИ ВВЕДЕНИЯ У ПАЦИЕНТОВ С ОБЩЕЙ ВАРИАБЕЛЬНОЙ ИММУННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ
В данном исследовании изучены клиническо-эпидемиологические и иммунологические показатели общей вариабельной недостаточности у пациентов различного возраста в Республике Казахстан. Применение современных методов диагностики общей вариабельной недостаточности позволит на раннем этапе верифицировать диагноз, назначить заместительную терапию иммуноглобулинами, что позволит значительно снизить частоту осложнений, что в конечном итоге будет способствовать увеличению продолжительности жизни пациентов, снижению летальности и инвалидизации при данном заболевании. Ключевые слова: первичные иммунодефициты, общая вариабельная недостаточность, иммуноглобулин G.
Введение: Ранняя диагностика и своевременное назначение лечения позволяет значительно увеличить выживаемость пациентов с первичными иммунодефицитами (ПИД), предотвратить хронизацию тяжелых инфекций, значительно снизить число онкологических и
аутоиммунных осложнений данной патологии [1]. На сегодняшний день единственным методом лечения синдромов первичного иммунодефицита с дефектом антителообразования, является пожизненная
заместительная терапия препаратами иммуноглобулина G.
Вестник Ка^НЖУ №2-2019
Препарат вводится внутривенно либо подкожно с помощью специальной помпы [2]. Установлено, что 10-летняя выживаемость больного с ОВИН при регулярном внутривенном введении IgG в дозе 0,4 г/кг/мес составляет 78%, в общей популяции 97% [3]. Применение препаратов внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ) может сопровождаться развитием системных нежелательных явлений. Частота легких и умеренных системных нежелательных явлений (озноб, головная боль, лихорадка, миалгии, экзема, петехии, крапивница, боль в спине, тошнота, алопеция, изменения артериального давления, диарея) на одну инфузию составляет 5-15% [4]. Наиболее часто они встречаются у пациентов с врожденными нарушениями антителообразования при первых введениях препарата, а также у пациентов при наличии исходного хронического инфекционного процесса, и могут развиваться спустя несколько суток после инфузии ВВИГ [5]. Вследствие потенциальной опасности развития тяжелых системных нежелательных явлений препараты ВВИГ вводятся в условиях дневного стационара или в стационаре круглосуточного пребывания, что не только приводит к увеличению затрат на лечение данной категории пациентов (прямых медицинских, выплат из социальных фондов), но и осложняет качество жизни как самого пациента, так и его близких родственников. Также внутривенное введение препаратов иммуноглобулина может быть проблематичным и существенно ограниченным у некоторых пациентов из-за плохого венозного доступа, особенно в детском возрасте [6]. Применение препаратов иммуноглобулина G для подкожного введения (ПКИГ) позволяет преодолеть эти ограничения. Многочисленными исследованиями доказана одинаковая эффективность в предотвращении инфекций у пациентов с врожденным нарушением образования антител препаратов иммуноглобулина для подкожного и для внутривенного введения, так как подкожное введение позволяет поддерживать стабильные уровни иммуноглобулина в сыворотке крови пациента без «эффекта впадины» в конце интервала введения [7]. Кроме того, отсутствие необходимости каждые 3-4 недели посещать лечебное учреждение для проведения внутривенной инфузии существенно снижает риск инфицирования, что актуально для пациентов с дефектами иммунитета. Более высокая концентрация
иммуноглобулина в препарате (16,5%) по сравнению с препаратами ВВИГ (5-10%) позволяет уменьшить время проведения инфузии и сократить объем вводимой жидкости. [8].
Цель: изучить и оценить эффективность применения заместительной терапии иммуноглобулином G разными способами введения у пациентов с общей вариабельной иммунной недостаточностью.
Материалы и методы: в наше исследование были включены 31 пациент с установленным диагнозом ОВИН в
возрасте от 2 до 55 лет, 19 женского и 12 мужского пола. Общая вариабельная иммунная недостаточность составила 38,75% от общего числа первичных иммунодефицитов, зарегистрированных в республиканском регистре. Срок между первыми клиническими проявлениями заболевания и выставленным окончательным диагнозом колебался в диапазоне от 1 года до 16 лет.
Всем пациентам с диагнозом ОВИН показана заместительная терапия человеческими
иммуноглобулинами. Длительность наблюдения за пациентами продолжалась в течение года, пациенты получали Октагам (0с^ат10%, OCTAPHARMA PharmazeutikaProduktionsgesm.b.H.(Австрия)), из расчета 0,5 мг/кг каждые 3 недели весь период наблюдения.Затем пациенты этой группы были переведены на подкожное введение препарата иммуноглобулина
Гамманорм(OCTAPHARMA
PharmazeutikaProduktionsgesm.b.H.(Австрия)) из расчета 0,1 г/кг каждую неделю весь период наблюдения. Анализ эффективности терапии оценивали через 0, 6, 12 месяцев от начала терапии [9].
Результаты: при анализе распределения больных с ОВИН по половому признаку выявлено, что 38,7% пациентов, включенных в исследование мужского пола, 61,2% -женского пола. Из всех больных, находившихся под наблюдением, лица мужского пола составили 12 человек, женского пола - 19.
Анализируя структуру возрастного состава пациентов с ОВИН, получены следующие данные, ОВИН наиболее чаще встречался в возрасте от 2 до 18 лет у 17 пациентов (54,8%), 18-30 лет у 7 (22,5%) и у 7 больных (22,5%) в 30-55 лет (р<0,05).
Диагноз ОВИН был подтверждён клинически (поздний дебют заболевания, наличие часто рецидивирующих респираторных инфекций, а именно, пневмоний, осложнений со стороны органов желудочно-кишечного тракта, таких как НЯК и лабораторно, снижение содержания сывороточных IgG больше 2-х SDs, выраженное снижение уровней ^М и ^А, нарушение продукции специфических антител, исключение вторичного характера иммунодефицита.
Согласно, представленной таблице 1 основных заболеваний у пациентов с ОВИН, сделан вывод, что ведущим явился инфекционный синдром, т.к. частота встречаемости заболеваний органов верхних и нижних дыхательных путей составила от 10 до 90% (хронический синусит - 90,0%, хронические отиты -70,0%, хронический пансинусит -60,0%, хронический ринит - 73,3%, бронхоэктатическая болезнь - 33,3%) (р<0,05). Распространённость других клинических симптомов, как ОЛЛ, ревматоидный артрит, НЯК, диссеминированная форма туберкулеза легких составила от 3,33 до 30%. (р<0,05) (таблица 1).
Таблица 1 - Структура основных заболеваний и осложнений у пациентов с ОВИН
Заболевание Количество случаев %%
Хронический синусит 27 90,0*
Хронический отит 21 70,0*
Хронический пансинусит 18 60,0*
Хронический ринит 22 73,3*
Бронхоэктатическая болезнь 10 33,3*
Неспецифический язвенный колит 3 10,0
ХОБЛ 3 10,0
Бронхиальная астма 3 10,0
Атопический дерматит 1 3,3
Диссеминированная форма туберкулеза легких 5 16,6
Ревматоидный артрит 1 3,3
Аутоиммунная тромбоцитопения 2 6,7
*р<0,05 (уровень достоверности различия)
Наиболее распространенными осложнениями явились: пневмофиброз - 66,67%, плеврит - 40%, нейросенсорная тугоухость - 23,3%, ателектаз - 16,7%, гнойный
эндоофтальмит и кишечные кровотечения наблюдались реже, 3,3% и 6,7% соответственно(р<0,05) (таблица 2).
Vestntk КштММ №2-2019
Таблица 2
Осложнения Количество случаев %
Пневмофиброз 20 66,7*
Ателектаз 5 16,7*
Плеврит 12 40,08
Гнойный эндоофтальмит 1 3,3
Нейросенсорная тугоухость 7 23,3*
Кишечные кровотечения 2 6,7
*р<0,05 (уровень достоверности различия)
При анализе симптомов обострения инфекционного синдрома после проведения заместительной терапии ВВИГ через 12 месяцев у пациентов с ОВИН отмечается улучшение состояния пациентов, так потребность в длительной терапии антибактериальными препаратами снизилась в 2,8 раз (р<0,05), необходимость внутривенного введения антибиотиков для лечения инфекций снизилась на 2,8 раз (р<0,05), обострения хронических заболеваний уменьшились в 2,7 раз (р<0,05)., грибковые поражения кожи и слизистых и бактериальные инфекции кожи и п\ж клетчатки в 2,6 раз (р<0,05), ОРВИ более 6 раз в год сократились в 2,3 раза (р<0,05), вирусные рецидивирующие генерализованные инфекции в 3 раза (р<0,05), подтвержденные пневмонии (более 2 раз в год) снизились в 2,5 раза (р<0,05), частые отиты (6 и более раз в год) уменьшились в 2,5 раза (р<0,05).
Затем пациенты были переведены на заместительную терапию подкожными иммуноглоблинами с использованием портативной помпы, с введением
Таблица 3 - Анализ симптомов обострения инфекционного ОВИН
препарата 1 раз в неделю, через 12 месяцев отмечается стабильное улучшение состояния пациентов: потребность в длительной терапии антибактериальными препаратами снизилась в 7,01 раз (р<0,05), необходимость внутривенного введения антибиотиков для лечения инфекций снизилась в 7,01 раз (р<0,05), обострения хронических заболеваний уменьшились грибковые поражения кожи и слизистых и бактериальные инфекции кожи и п\ж клетчатки в 7,9 раз (р<0,05), ОРВИ более 6 раз в год сократились в 10 раз (р<0,05), вирусные рецидивирующие генерализованные инфекции в 5 раз (р<0,05), подтвержденные пневмонии (более 2 раз в год) снизились до 0 (р<0,05), частые отиты (6 и более раз в год) уменьшились в 4 раза (р<0,05) по сравнению с применением иммуноглобулина G для внутривенного применения, что связано с большей приверженностью пациентов к терапии, возможности применения без задержки в домашних условиях, без ожидания госпитализации (р<0,05) (таблица 3).
а после проведения заместительной терапии у пациентов с
Симптомы Группа 1 (терапия ВВИГ) Группа 2( терапия ПКИГ)
0 мес 12 мес 0 мес 12 мес
абс.ч % абс.ч. % абс.ч % абс.ч %
Потребность в длительной терапии антибактериальными препаратами 20 64,5* 7 22,6* 5 16,1 1 3,22*
Необходимость внутривенного введения антибиотиков для лечения инфекций 20 64,5* 7 22,6* 4 12,9 1 3,22*
Обострения хронических заболеваний 22 70,9* 8 25,8* 7 22,5 1 3,22*
Грибковые поражения кожи и слизистых 15 48,3* 6 19,4* 3 9,7 1 3,22*
Бактериальные инфекции кожи и п\ж клетчатки 13 41,9* 5 16,1* 2 6,5 1 3,22*
ОРВИ более 6 раз в год 23 74,3* 10 32,3* 5 16,1 1 3,22*
Вирусные рецидивирующие генерализованные инфекции 15 48,3* 5 16,1* 2 6,5 1 3,22*
Подтвержденные пневмонии (более 2 раз в год) 10 32,3* 4 12,9* 1 3,22 0 0*
Частые отиты (6 и более раз в год) 10 32,3* 4 12,9* 3 3,2 1 3,22*
*р<0,05 (достоверность по Фишеру)
Основным критерием эффективности заместительной терапии являлся уровень IgG в сыворотке крови и частота инфекционных эпизодов. Через 3 месяца терапии ПКИГ уровень IgG составил 6,8±0,5 г\л, в дальнейшем не отмечается снижение уровня IgG в сыворотке крови ниже
возрастных значений. Отмечается более высокий уровень IgG в 1,4 раза после терапии Гамманормом по сравнению с Октагамом (р<0,05), это объясняется регулярным введением препарата в домашних условиях (таблица 4).
Таблица 4 - Показатели содержания иммуноглобулинов у пациентов с установленным диагнозом ОВИН
Показатель Группа 1 (терапия ВВИГ) Группа 2(терапия ПКИГ)
0 мес 6 мес 12 мес 0 мес 3 мес 12 мес
^ б г\л 3,6±0,4* 5,6±0,5 6,5±0,7* 5,6±0,4 6,8±0,5 7,8±0,7*
*р<0,05 (абсолютный показатель различия)
Обсуждение и заключение: таким образом, использование препарата иммуноглобулина человека нормального для подкожного введения (Гамманорм) для заместительной терапии у пациентов с первичным иммунодефицитом
позволило добиться значительных результатов в лечении основного заболевания. Так, была отмечена высокая эффективность, выразившаяся в значительном снижении числа острых респираторных инфекций в 1,8 раз (р<0,05) и
Вестник Ка^НЖУ №2-2019
обострений хронического процесса в 2,2 раза (р<0,05), увеличилась концентрация сывороточного
иммуноглобулина в 1,4 раз по сравнению с применением внутривенных иммуноглобулинов (р<0,05). Легкость и простота использования позволили добиться высокого уровня комплаентности, обеспечить непрерывность лечебного процесса, что не могло не отразиться на результатах терапии. Высокий профиль безопасности и отличная переносимость также являются преимуществами подкожного введения иммуноглобулина. Подкожное введение - это удобный и безопасный путь введения, позволяющий родителям пациента или ему самому после обучения проводить инъекции в домашних условиях в удобное для всех время, таким образом значительно улучшая качество жизни больного и всей его семьи [10]. В Республике Казахстан зарегистрирован и разрешен к применению у детей только один препарат «Иммуноглобулин человека нормальный» для подкожного введения - Гамманорм, производства «Octapharma АВ» (Швеция). Это готовый к употреблению прозрачный или слегка опалесцирующий раствор, производится из пула плазмы не менее 1000 доноров и содержит широкий спектр антител против инфекционных агентов. Распределение подклассов IgG близко к таковым в плазме здорового
человека: ДО1 - 59%, ДО2 - 36%, ДОЗ - 4,9%, ДО4 - 0,5%, ^А - до 82,5 мкг/мл. 1 мл Гамманорма содержит 165 мг нормального человеческого иммуноглобулина, 20 мг глицина, 2,5 мг натрия (натрия ацетата, натрия хлорида), полисорбат 80, воду для инъекций [11]. Побочные реакции, как правило, локальные, мягкие и средние по тяжести и проявляются болью и эритемой, припухлостью, уплотнением, зудом, сыпью, побледнением, чувством ожога, синяком в области введения (животе, бедрах, плече), которые исчезают в течение 6-24 ч. Частота системных побочных реакций у пациентов с ПИД при введении ПКИГ реже, чем приведении ВВИГ (0,1-0,9 и 2,5-27% соответственно) [12].
Режим домашней терапии при применении ИГПК улучшает качество жизни пациентов, позволяет вести обычный образ жизни, не мешает качеству нормальной активности и путешествиям, позволяет не пропускать учебу и работу, снижаются семейные затраты на транспорт, улучшаются семейные отношения (меньше ограничений для других членов семьи). Появляется большая независимость и удовлетворенность лечением: самовосприятие улучшенного здоровья вследствие снижения посещения лечебного учреждения, что очень важно для отдаленных результатов выживаемости.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 Lipstein E.A., et al. Systematic evidence reviews of newborn screening and treatment of severe combined immunodeficiency // Pediatrics. - 2010. - Vol. 125. - P. 1226-1235.
2 Bonilla F.A., Bernstein I.L., Khan D.A. et al. Practice parameter for the diagnosis and management of primary immunodeficiency // J Allergy ClinImmunol. - 2015. - Vol 136, №5. - P. 1186-1205.
3 Al-Tamemi S., Elnour I., Dennison D. Primary immunodeficiency diseases in Oman: five years' experience at sultan qaboos university hospital // World Allergy Organ J. - 2012. - Vol. 5, №5. - P. 52-56.
4 Ehlayel M.S., Bener A., Laban M.A. Primary immunodeficiency diseases in children: 15-year experience in a tertiary care medical center in Qatar // J ClinImmunol. - 2013. - Vol. 33, №2. - P. 317-324.
5 Boyle J.M., Buckley R.H. Population prevalence of diagnosed primary immunodeficiency diseases in the United States // J ClinImmunol. -2007. - Vol. 27. - P. 497-502.
6 O'Sullivan M.D., Cant A.J. The 10 warning signs: a time for a change? // CurrOpin Allergy ClinImmunol. - 2012. - Vol. 12. - P. 588-594.
7 Verbsky J.W., Baker M.W., Grossman W.J. et al. Newborn screening for severe combined immunodeficiency: the Wisconsin experience (2008-2011) // J ClinImmunol. - 2012. - Vol. 32. - P. 82-88.
8 Bonilla F.A., Geha R.S. Primary immunodeficiency diseases // JAllergyClinImmunol. - 2003. - Vol. 111, Suppl. 2. - P. 571-581.
9 Routes J., Abinun M., Al-Herz W., Bustamante J. et al. ICON: The early diagnosis of congenital immunodeficiencies // J ClinImmunol. -2014. - Vol. 34, №4. - P. 398-424.
10 Leiva L.E., Bezrodnik L., Oleastro M. et al. Primary immunodeficiency diseases in Latin America: Proceedings of the Second Latin American Society for Immunodeficiencies (LASID) Advisory Board // AllergolImmunopathol (Madr). - 2011. - Vol. 39, №2. - P. 106-110.
11 Gathmann B., Mahlaoui N., Gérard L. et al. Clinical picture and treatment of 2212 patients with common variable immunodeficiency // J Allergy ClinImmunol. - 2014. - Vol. 134, №1. - P. 116-126.
12 Lee W.I., Huang J.L., Yeh K.W. et al The effects of prenatal genetic analysis on fetuses born to carrier mothers with primary immunodeficiency diseases // Ann Med. - 2016. - Vol. 48, №1-2. - P. 103-110.
К.В. Шнайдер, М.А. Моренко, О.П. Усенова, Е.Ф. Ковзель
ЖАЛПЫ ВАРИАБЕЛЬД1 ИММУНДЫ ТАПШЫЛЫГЫ БАР НАУЦАСТАРДА ОРЫН БАСУШЫ ТЕРАПИЯСЫНДА G ИММУНОГЛОБУЛИН1Н ЭР-ТУРЛ1 ЭД1СПЕН ЕНГ1ЗУДЩ ТИ1МД1Л1Г1Н БАГАЛАУ
Бул зерттеуде Цазак;стан Республикасындагы эр тYрлi жастагы жалпы вариабельд иммунды тапшылыгы бар нау;астарда клиникалы;-эпидемиологиялык; жэне иммунологиялы; керсеткiштерi зерттелген. Жалпы вариабельд иммунды тапшылы; диагностикасында заманауи эдiстердi ;олдану, диагнозды ерте кезеншде аны;тауга, иммуноглобулинмен алмастыру терапиясын тагайындауга мYмкiндiк береди бул ас;ынулардыц темендеуше экеледь сайып келгенде пациенттердщ eмiр CYPу уза;тыгын арттырады, бул мYгедектiк пен елiм-жiтiмдi азайтады.
ТYЙiндi сездер^ршшыж иммунды тапшылыгы, жалпы вариабельд иммунды тапшылыгы, иммуноглобулин G.
Vestnik KazNMU №2-2019
K.V. Shnayder, M.A. Morenko, O.P. Usenova, E.F. Kovzel
COMPARATIVE EVALUATION OF THE EFFECTIVENESS OF THE USE OF REPLACEMENT THERAPY WITH IMMUNOGLOBULIN G IN
DIFFERENT WAYS OF ADMINISTRATION IN PATIENTS WITH CVID
Resume: Clinical-epidemiological and immunological indicators of general variable insufficiency in patients of different age in the Republic of Kazakhstan were studied in this study. The use of modern methods of diagnosis of general variable insufficiency will allow us to verify the diagnosis at an early stage, prescribe replacement therapy with human immunoglobulins, which will reduce the incidence of complications, which ultimately will increase the life expectancy of patients, reduce the lethality and disability in this disease. Keywords: primary immunodeficiency, general variable insufficiency, immunoglobulin G
УДК 616-022.9-078
Ю.А. Кузьмин, Ж.Б. Испаева, З.М. Жанкалова, Г.Н. Маемгенова
Казахский Национальный медицинский университет имени С.Д. Асфендиярова
ОБНАРУЖЕНИЕ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИХ ЛИМФОЦИТОВ С ПОМОЩЬЮ ИФА И ВЫЯВЛЕНИЕ АУТОАНТИТЕЛ И АУТОЛИМФОЦИТОВ К АНТИГЕНУ КОЖИ У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ
Особое место в диагностике инфекционных заболеваний занимает реакция выявления АСЛ (антигенсвязывающие лимфоциты). Как известно, с внедрением в организм возбудителя какой-либо инфекции начинает формироваться иммунный ответ. Возникающая при этом иммунологическая перестройка характеризуется целым каскадом клеточных и гуморальных реакций, направленных против антигенов возбудителя. На ранних этапах развития болезни это проявляется преимущественно специфической клеточной сенсибилизацией [1]. Поэтому регистрация клеточных специфических реакций по выявлению АСЛ, может служить ранним диагностическим тестом в выявлении трихомониаза. С помощью других тестов (ИФА, РПГА, РИФ и др.) диагностика осуществляется по индикации специфических антител. В опытах иммунизации и заражения различных животных показано, что АСЛ можно обнаружить в крови уже через 12 часов - 4 суток после антигенного стимула, то есть значительно раньше антител. И напротив уже через 13-30 суток после введения нежизнеспособного иммуногена АСЛ в крови выявить не удается, хотя антитела сохраняются достаточно долго после этого. Если тот же иммуноген ввести повторно на фоне выявляемых АСЛ, длительность их циркуляции в крови не увеличивается. При повторном введении иммуногена животным спустя некоторое время после исчезновения АСЛ из крови, они вновь определяются в течение периода практически той же длительности, что и после первой инъекции. Полученные результаты показывают, что в механизмах формирования АСЛ имеет значение феномен иммунологической памяти. Тест АСЛ кроме ранней диагностики можно использовать для контроля эффективности лечения инфекционных заболеваний, так как АСЛ перестают обнаруживаться существенно быстрее, чем исчезают антитела и быстрее негативации ПЦР [2]. Ключевые слова: иммунодиагностика, АСЛ, экстрагирование, аутоантитела.
Актуальность: Выявление АСЛ с помощью микроскопирования мазков трудоемкий процесс. В одном образце должно быть подсчитано не менее 700 лимфоцитов, на что тратится в среднем 60 мин. В оценке результатов часто играют роль субъективные факторы и технические погрешности. Механическое наслоение лимфоцитов и эритроцитов без взаимодействия клеток дает эффект «розетки» (часто засчитываться как положительный результат), не активный
эритроцитарный диагностикум, гемолизированная кровь, неправильно выбранное время экспозиции мазка с ингредиентами, плохо обезжиренное предметное стекло, толстый и неравномерный мазок, плохое освещение - все эти факторы плохо контролируются в ходе постановки реакции. Наслоение ошибок ведет к неправильным выводам. Стандартизировать результаты выявления АСЛ под микроскопом фактически невозможно. Часто с одной и той же пробой получают совершенно разные результаты. Видимо по этой причине при диагностике сифилиса чувствительность теста у некоторых исследователей [1] достигала 97 %, а у А.К. Утегеновой [3] по сравнению с другими реакциями она была наихудшей и составляла всего около 60 %. Такие неоднозначные выводы по диагностической эффективности выявления АСЛ являются результатом ошибок на конечном этапе постановки реакции - при подсчете «розеток» под микроскопом.
Целью работы явилось совершенствование иммунодиагностики на основе выявления
антигенсвязывающих лимфоцитов.
Для этого были определены следующие задачи - 1. Разработать АСЛ с применением инструментального (ИФА) считывания результатов реакции 2.Применение
разработанного метода обнаружения АСЛ у больных псориазом.
Известно, что к хорошо стандартизированным тестам относится ИФА, так как результат реакции считывается на приборе и выдается в цифрах. В ИФА обычно выявляют антитела, находящиеся в растворе. Мы полагали, что, если специфические рецепторы АСЛ перевести в раствор, то с такой пробой можно проводить ИФА по классической схеме. Для этого предварительно выделенные на фиккол-верографине лимфоциты, необходимо лизировать. Все специфические рецепторы АСЛ, находящиеся в лимфоцитах или на их поверхности, перейдут в раствор. Затем такой лизат, подобно сыворотке крови, можно использовать в обычной постановке ИФА. Учет результатов будет проводиться по уровню оптической плотности, точно также как в ИФА. В качестве лизирующего раствора сравнивали 0,5 %, 1,5 % и 3 % растворы гидроокиси натрия и 1 %, 2 % растворы тритон-100. Так как буферная емкость сыворотки достаточна высокая, что могло исказить результаты опытов, использовали глобулин, выделенный с помощью этилового спирта. Затем его растворяли 0,85 % раствором хлорида натрия и доводили до исходного объема. Полный лизис лимфоцитов наблюдали при использовании 1,5, 0,75, 0,25 % раствора гидроокиси натрия в смеси при 5 и 7 минутной экспозиции. Клетки лизировались хуже при использовании раствора тритон-100. Поэтому в дальнейшей работе применяли 3 % раствор гидроокиси натрия (1,5 % в смеси) и 5-минутную экспозицию. Полная схема выявления АСЛ с помощью ИФА: выделяли лимфоциты- раствора фиккол-верографин (уд.вес. - 1,077). Пробирки центрифугировали 1500 об/мин. в течение 40 мин. Собирали лимфоцитарную взвесь (1,0 мл) находящуюся в надосадке и дважды отмывали от остатков фиккол-
