CC BY
7Сравнительная характеристика кинетики пролиферации анти-Сй19
CAR-T лимфоцитов в in vitro тесте хронической стимуляции с Сй19-позитивными клеточными линиями Raji, NALM6 и HeLA-CD19
Авторы:
(1) Маркелов Владислав Витальевич, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(2) Гапоненко Иван Николаевич, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(3) Потанин Артем Алексеевич, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(4) Сушенкова Дарья Вячеславовна, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(5) Сергеев Владислав Сергеевич, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(6) Шакирова Алёна Игоревна, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(7) Бабенко Елена Витальевна, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(8) Лепик Кирилл Викторович , [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
(9) Кулагин Александр Дмитриевич, [email protected], НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербург
Ключевые слова
CAR-T
Актуальность
Биологическое разнообразие опухолевых клеток, вероятно, может иметь ключевое значение в клинических исходах терапии CAR-T. Однако большинство исследований направлено на сравнение эффективности различных модификаций CAR-T, в то время как изучение биологических особенностей опухолевых клеток, определяющих результат контактов с CAR-T лимфоцитами, остается ограниченным.
Цель
Изучить кинетику пролиферации анти-CD19 CAR-T лимфоцитов в in vitro тесте хронической стимуляции с CD19-позитивными клеточными линиями Raji, NALM6 и HeLа-CD19.
Материалы и методы
In vitro тест хронической стимуляции — стимуляция aнти-СD19 CAR-T клетками СD19-позитивных клеточных линий, проводимая каждые 4 дня. Было создано 5 групп, которые включали комбинацию aнти-СD19 CAR-T c культурами Raji, NALM6, HeLa, экспрессирующей CD19 или BCMA, а также группу отрицательного контроля. Каждая группа была представлена тремя повторами. Соотношение эффекторных клеток и клеток-мишеней составляло 1:1 в начале эксперимента. При последующих раундах стимуляции данное соотношение поддерживалась во всех повторах, где это было возможно. Культивирование проводилось в среде RPMI-1640 + 5% сыворотка человека. Подсчет клеток осуществлялся на проточном цитометре BD FACSCanto II c пробирками TrueCount и подсчетом в камере Горяева (КГ). Оценивалось содержание CD45+CD3+7aad-клеток.
Результаты
Во всех случаях сокультивирование c CD-19 позитивными клетками приводило к признакам активации CAR-T (реакция бласттрансформации). Однако степень активации и пролиферации СAR-T между группами существенно различалась. Хроническая стимуляция CAR-T Raji или NALM6 привела к более значимой пролиферации в сравнении с HeLa-CD19, HeLa-BCMA и контролем на каждом этапе (p<0.05). Пролиферативный пик сформировался после 4-й стимуляции, составив 325,144 млн±78,932 в группе CAR-T + Raji и 137,769 млн±37,599 в группе CAR-T + NALM6. При сокультивировании c HeLa-CD19 пролиферативный пик CAR-T был зарегистрирован после 3-й стимуляции, составив 0,83 млн±0,684, что, однако, было статистически значимо меньше, чем в группах с адгезионными культурами (p<0.05). CAR-T в группах HeLa-BCMA и отрицательного контроля признаки бласттрансформации и пролиферации не продемонстрировали и погибли после
2-й стимуляции. Пул САЯ-Т после достижения пролиферативного пика, начал сокращаться во всех группах стимуляции с CD19-позитивными клеточными линиями. После 4-го раунда стимуляции в группе HeLa-CD19 произошла гибель эффекторных клеток. В группах Яя^ и NALM6 количество САЯ-Т также сократилось до 215,962 млн±40,03 и 73,666 млн±35,768 соответственно после 5-го раунда стимуляции.
Выводы
Биологические особенности CD19+ клеток использованных линий критически влияют на пролифератив-ную активность САЯ-Т. Среднее количество САЯ-Т клеток на пике пролиферации клеток при стимуляции Яя^ было в 2,4 раза и 392 раза больше, чем при стимуляции NALM6 и HeLa-CD19 соответственно.
Список литературы: -
Иммунологические характеристики крови у больных диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой
Авторы:
(1) Сагакянц А. Б., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(2) Лысенко И. Б., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(3) Бондаренко Е. С., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(4) Камаева И. А., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(5) Шульгина О. Г., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(6) Ульянова Е. П., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(7) Новикова И. А., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(8) Златник Е. Ю., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Ключевые слова
В-клеточные лимфомы, иммунный статус, диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома
Актуальность
Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (ДВККЛ) является гетерогенной группой лимфатических опухолей с различными клиническими, морфологическими, иммунофенотипическими, цитогенети-ческими проявлениями и с разным ответом на терапию. ДВККЛ — наиболее распространенный вариант лимфопролиферативных заболеваний взрослых (30-40% всех неходжкинских лимфом), при этом сведений об особенностях иммунологических параметров крови в условиях развития данного заболевания немного [1-4].
Цель
Изучить особенности иммунного профиля у больных ДВККЛ и на фоне противоопухолевой терапии.
Материалы и методы
В исследование включены 24 пациента с ДВККЛ 1-1У стадии, обоего пола, средний возраст 50±5,5 года и 19 условно здоровых доноров. Всем пациентам проведена химиотерапия (ХТ) по схеме ЯСНОР. В образцах КЗ ЭДТА крови, полученной до и после 3-4 курсов ХТ, проводили определение основных и минорных популяций иммунокомпетентных клеток (ИКК) методом проточной цитометрии на FACSCanto (BD, США).
Результаты
Показано, что процентное содержание у5Т-клеток и ЦТЛ, экспрессирующих CD28, у больных практически не отличалось от значений доноров, составив соответственно 41,9 (26,5; 54,2) против 36,5 (31; 37,5) и 50,6 (31,2;61,8) против 56,8 (41,1;65). При этом количество у5+ CD8+ ЦТЛ у больных ДВККЛ было значимо выше (на 31%), составив 4,6 (4,4;6,2) против 3,5 (2,5;4,3). Количество клеток с фенотипом у5+ CD8+, экспрессирующих CD28, у больных с ДВККЛ оказалось выше на 123% по сравнению с показателями доноров — 6,7 (4,5;10,1) против 3 (2,5;4,2). Проведение 4 курсов ИТ сопровождается увеличением на 27% количества CD4+-лимфоцитов, причем в данной популяции ИКК выявлено увеличение 43% Т^-клеток (р <0,05). Значимо увеличивалось (на 44%) содержание ККТ-лимфоцитов. Несмотря на отсутствие изменения количества основных популяций лимфоцитов — CD3+, CD3+CD4+ и CD3+CD8+, выявлено увеличение по сравнению с исходными значениями содержания указанных популяций клеток, имеющих активационный
