CC BY
37
микробиология
12. Honjo s., srivatanakul p., sriplung H. et al. Genetic and environmental determinants of risk for cholangiocarcinoma via opisthorchis viverrini in a densely infested area in Nakhon phanom, northeast Thailand. Int. J. Cancer. 2005; 117: 854—60.
13. IARc. Infection with liver flukes (opisthorchis viverrini, opisthorchis felineus and clonorchis sinensis). IARC Monogr. Eval. Car-cinog. Risks Hum. 1994; 61: 121—75.
14. Keiser J., utzinger J. Food-borne trematodiases. Clin. Microbiol. Rev. 2009; 22: 466—83.
15. Keiser J., utzinger J. Emerging foodborne trematodiasis. Emerg. Infect. Dis. 2005; 11: 1507—14.
16. Lippincott's Guide to Infectious Disease. Lippincott William&Wil-kins; 2011: 222—3.
17. lim M.K., Ju Y.H., Franceschi s. et al. clonorchis sinensis infection and increasing risk of cholangiocarcinoma in the Republic of Korea. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2006; 75: 93—6.
18. Mairiang E., Laha T., Bethony J.M. et al. ultrasonography assessment of hepatobiliary abnormalities in 3359 subjects with opisthorchis viverrini infection in endemic areas of Thailand. Parasitol. Int. 2012; 61: 208—11.
19. pungpak s., Riganti M., Bunnag D. et al. clinical features in severe opisthorchiasis viverrini. Southeast Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 1985; 16: 405—9.
20. Rim H.-J. The current pathobiology and chemotherapy of c1onor-chiasis. Korean J. Parasitol. 1986; 24 (suppl.): 1—141.
21. shin H.R., Lee C.U., park H.J. et al. hepatitis В and c virus, clo-norchis sinensis for the risk of liver cancer: a case-control study in pusan, Korea. Int. J. Epidemiol. 1996; 25: 933—40.
22. sripa в., Kaewkes s., Intapan p.M. et al. Food-borne trematodiases in southeast Asia: epidemiology, pathology, clinical manifestation and control. Adv. Parasitol. 2010; 72: 305—50.
23. upatham E.s., viyanant v., Kurathong s. et al. relationship between prevalence and intensity of opisthorchis viverrini infection, and clinical symptoms and signs in a rural community in north-east Thailand. Bull. World. Health Organ. 1984; 62: 451—61.
24. WHo. Report of the WHO informal meeting on use of triclabenda-zole in fascioliasis control. Geneva Switzerland): WHo; 2006.
25. Wood i.B., Amaral N.K., Bairden K. et al. World association for the advancement of veterinary parasitology (W.A.A.v.p.) second edition of guidelines for evaluating the efficacy of anthelmintics in ruminants (bovine, ovine, caprine). Vet. Parasitol. 1995; 58: 181—213.
26. Wykoff D.E., Ariyaprakai, K. Opisthorchis viverrini in Thailand-egg production in man and laboratory animais (Research note). J. Para-sitol. 1966; 52: 631.
Поступила 15.05.14 Received 15.05.14
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 616.64-002-022.7-078.55
Михайлова Е.А.1, Миронов А.Ю.2, Харсеева Г.Г.3, Сетко Н.П.1, Воронина Л.Г.1, Жеребятьева О.О.1
CРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО СТАТУСА МУЖЧИН г. ОРЕНБУРГА С БАКТЕРИАЛЬНОЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ
1ГБОУ ВПО "Оренбургская государственная медицинская академия" Минздрава Российской Федерации, 460000, г. Оренбург; 2ФБУН "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Роспотребнадзора, 125212, г. Москва; 3ГБОУ ВПО "Ростовский государственный медицинский университет" Минздрава Российской Федерации, 344002, г. Ростов-на-Дону
Обсуждается наличие характерных особенностей параметров системного иммунитета при гонококковых и неспецифических уретропростатитах и диагностическая значимость этих показателей. Установлены достоверные различия иммунологических показателей у больных гонореей по сравнению с таковыми у больных неспецифическими бактериальными уретропростатитами. Выявлено достоверное снижение в периферической крови уровня лейкоцитов, относительного количества моноцитов, фагоцитарного индекса, функционального резерва лейкоцитов за счет спонтанного и стимулированного НСТ-теста, IgА, sIgА и, напротив, увеличение уровня IgM и лактоферрина у больных гонореей по сравнению с соответствующими показателями у больных с неспецифическими инфекциями. Наибольшее отклонение от нормы показателей при гонорее определено для лактоферрина. Обнаруженные различия иммунологических параметров могут использоваться как дифференцирующие маркеры неспецифических и гонококковыхуретропростатитов и критерии эффективности иммунокоррекции.
Ключевые слова: мужчины; иммунитет; уретропростатит; бактерии; гонококки; иммунологические параметры.
E.A. Mikhaiylova1, A.Yu. Mironov2, G.G. Kharseyeva3, N.P. Setko1, L.G. Voronina1, O.O. Jerebiyatiyeva1
THE COMPARATIVE CHARACTERisTIC OF IMMUNE sTATUs OF MALEs WITH BACTERIAL INFLAMMATORY UROGENITAL PATHOLOGY OF DIFFERENT ETIOLOGY IN THE CITY OF ORENBURG
1The Orenburg state medical academy of Minzdrav of Russia, 460000 Orenburg, Russia; 2The G.N. Gabritchevskiy Moscow research institute of epidemiology and microbiology of Rospotrebnadzor, 125212 Moscow, Russia; 3The Rostov state medical university of Minzdrav of Russia, 344002 Rostov-on-Don, Russia
The article discusses presence of typical characteristics of parameters of system immunity under gonococcal and nonspecific uretroprostatitis and diagnostic value of these indicators. The reliable differences of immunologic indicators in patients with gonorrhea are established as compared to patients with nonspecific bacterial uretroprostatitis. The study established in peripheral blood the reliable decrease of level of leukocytes, relative amount of monocytes, phagocyte index, functional reserve of leukocytes at the expense of .spontaneous and .stimulated NBT test, IgA, sIgA. On the contrary, the study detected increasing of level ofIgM and lactoferrin in patients with gonorrhea as compared to corresponding indicators in patients nonspecific infections. Under gonorrhea, the largest deviation of indicators from standard values was established for lactoferrin. The detected differences of immunologic parameters can be used as differentiating markers of nonspecific and gonococcal uretroprostatitis and criteria of effectiveness of immune correction.
Keywords: males; immunity; uretroprostatitis; bacteria; gonococci; immunologic parameters Для корреспонденции:
Михайлова Елена Алексеевна, науч. сотр. Адрес: 460058, Оренбург, ул. Чкалова, 3/140. E-mail: [email protected]
клиническая лабораторная диагностика, № 8, 2014
Введение. По данным ВОЗ, в настоящее время особенностью состояния здоровья населения в мире является снижение иммунореактивности. До 50—70% людей имеют нарушения иммунитета. Это обусловливает повышение частоты заболеваний, вызываемых патогенной и условно-патогенной микро-биотой [1]. Неполноценность функционирования иммунитета в целом или мукозальных защитных факторов является причиной усиления патогенности условно-патогенной микрофлоры. Это определяет развитие инфекционных процессов чаще всего в слизистых оболочках. Прежде всего страдают пищеварительная, респираторная, урогенитальная системы [2]. Особенностями данных воспалительных процессов являются полиэтиологичность и длительное малосимптомное течение.
Возбудителями уретропростатитов могут быть уреаплаз-мы, микоплазмы, энтеробактерии, условно-патогенные кокки [3]. Постоянное изменение спектра указанных микроорганизмов в ходе воспалительного процесса урогенитальной сферы, неэффективность и нестабильность результатов терапии, несмотря на массивное этиотропное лечение с учетом чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, показывают, что при длительно текущих малосимптом-ных инфекциях необходимо обратить внимание на состояние иммунной системы [4]. Часто под видом неспецифических заболеваний мочеполовых органов на фоне иммунокомпро-метированного организма развивается латентная гонококковая инфекция [5]. Поскольку характер и качество иммунного реагирования играют решающую роль на всех стадиях воспалительной реакции, представляется целесообразным исследовать состояние системного иммунитета у лиц с гонококковой и неспецифической уретропростатической патологией.
Цель исследования — оценить информативность изменений параметров системного иммунитета при гонококковых и негонококковых бактериальных уретропростатитах.
Материалы и методы. Общий иммунитет исследован у 123 мужчин, 44 из них поставлен диагноз неспецифический, негонококковый уретропростатит (2-я группа), 51 пациенту — гонококковая инфекция (3-я группа). Контрольную группу составили 28 здоровых мужчин (1-я группа).
Лимфоциты выделяли из гепаринизированной крови на градиенте плотности фиколла (Pharmaciafine chemicals, Швеция) — верографина ("Spofa"), d = 1,078 г/см3. Подсчет числа лимфоцитов проводили в камере Горяева. Иммуно-фенотипирование субпопуляций клеток периферической крови (CD3+, CD4+, CD8+, CD19+) осуществляли с применением моноклональных антител ("Сорбент", Москва). Содержание сывороточных иммуноглобулинов (Ig) классов А, М, G определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, а циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови — в реакции преципитации с раствором полиэтиленгликоля [6, 7]. Количество секреторного IgA (sIgA), лактоферрина в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих ИФА-наборов производства фирмы "Вектор-Бест", Новосибирск. Определяли также метаболическую активность нейтрофилов [8] (тест восстановления нитроси-него тетразолия — НСТ-тест).
Результаты и обсуждение. При неспецифическом уро-генитальном воспалении происходило достоверное снижение содержания зрелых форм лейкоцитов периферической крови (44,60±1,68% по сравнению с 56,90±0,51% у здоровых). Различий в числе моноцитарных клеток не выявлено (3,13±0,31% во 2-й группе против 3,19±0,28% в 1-й).
Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов выражались в усилении метаболической активности нейтро-филов. Вместе с тем значения стимулированного НСТ-теста снижены (27,20±1,74%) по сравнению со здоровыми (37,20±4,53%), что определяло достоверное ослабление функционального резерва нейтрофилов. Анализ популяци-онного и субпопуляционного состава клеток периферической крови показал, что при воспалении происходило достоверное снижение относительного (до 48,00±1,36%) и абсолют-
ного (до 1,01±0,04) количества общего пула Т-лимфоцитов (СБ3-клеток) по сравнению с соответствующими показателями у здоровых в основном за счет хелперно-индукторных лимфоцитов (CD4). Существенных изменений в количестве В-лимфоцитов не выявлено.
Исследование гуморальных факторов иммунитета у больных 2-й группы показало, что по сравнению с нормой в периферической крови отмечалось существенное снижение содержания IgG (9,32±0,43%), IgA (1,64±0,09%). Выявлено повышение sIgA (2,40±0,14%). Тенденция к увеличению концентрации острофазового белка лактоферрина (935±77 нг/мл) недостоверна.
У больных с гонококковой инфекцией изменения клеточного состава крови и показателей фагоцитоза по сравнению с нормой сходны с изменениями при неспецифическом процессе, но более выражены по уровню количественных значений. Достоверные различия по сравнению со здоровыми выявлены для количественных значений лейкоцитов, лимфоцитов, функционального резерва лейкоцитов за счет спонтанного и сти-мутированного НСТ-теста, который составил у этих больных 6,90±0,13% спонтанный и 8,0±0,47% стимулированный.
Среди показателей гуморального иммунитета и факторов врожденного иммунитета изменения уровня IgA, IgG, sIgA у больных 3-й группы имели направленность, подобную таковой при неспецифических уретропростатитах, но, как и в случае с клеточными показателями, они более выражены. Содержание IgA составило при гонорее 1,19±0,04 г/л (у здоровых 1,91±0,03 г/л), IgG — 8,40±0,05 г/л (против 12,80±0,42 г/л у здоровых), sIgA — 2,98±0,16 мкг/мл (против 1,40±0,07 мкг/мл у здоровых). Концентрация же лактоферри-на у больных гонореей значительно превышала показатели у здоровых пациентов 1-й группы, достигая 2038±73 нг/мл. В отличие от больных 2-й группы при гонорее отмечалось достоверное увеличение уровня ЦИК и IgM.
Заключение. Установлены достоверные различия иммунологических показателей у больных гонококковой инфекцией по сравнению с больными неспецифическими бактериальными уретропростатитами. У больных 3-й группы по сравнению с обследуемыми 2-й группы наблюдалось достоверное снижение в периферической крови уровня лейкоцитов, относительного количества моноцитов, фагоцитарного индекса, функционального резерва лейкоцитов за счет спонтанного и стимулированного НСТ-теста, IgA, sIgA и увеличение количественных значений IgM и лактоферрина.
Сравнительный анализ показал, что изменения показателей периферической крови и фагоцитоза у больных уроге-нитальными воспалительными процессами по отношению к уровню у здоровых во всех случаях, кроме уровня палочко-ядерных лейкоцитов и моноцитов, были однонаправленными, причем при гонорее отклонения выражены сильнее. Что касается показателей клеточного, гуморального иммунитета и факторов естественной резистентности в периферической крови у обследуемых обеих групп, то наибольшее отклонение от нормы выявлено для содержания sIgA, общего IgA, изменений субпопуляционного состава лимфоцитов. Наибольшее отклонение от нормы показателей при гонорее определено также для лактоферрина.
Различия иммунологических параметров могут рассматриваться в качестве дифференцирующих маркеров неспецифических и гонококковых уретропростатитов и критериев эффективности иммунокоррекции.
Л И Т Е PAT У PA
1. World Health Organization. Laboratory manual for the examination of human semen andsperm-cervical mucus interaction. Cambridge: Cambridge University Press; 2000.
2. Долгушин И.И., Тизингер O.A., Летяева О.И., Зиганшина ТА. Состояние факторов антимикробной защиты репродуктивного тракта у женщин с хламидийной инфекцией до и после терапии с использованием локальных магнитолазерных воздействий. Вестник восстановительной медицины. 2011; (5): 50—4.
микробиология
3. Михайлова Е.А., Воронина Л.Г., Сетко Н.П., Миронов А.Ю., Харсеева Г.Г., Жеребятьева О.О. Инфектологические аспекты урогенитальных микробных заболеваний. Оренбург: ГБОУ ВПО ОрГМа МЗ РФ; 2012.
4. Бобков Ю.А., Аль-Шукри С.Х., Горбачев А.Г., Галкина О.В., Козлов В.В., Тотолян А.А. Информативность показателей местного иммунитета при хроническом простатите. Медицинская иммунология. 2000; 2 (4): 401—8.
5. Воронина Л.Г., Михайлова Е.А., Сетко Н.П., Жеребятьева О.О., Миронов А.Ю., Харсеева Г.Г. Диагностика и лечение урогени-тальной бактериальной патологии. Методические рекомендации для врачей и слушателей факультета последипломного образования. — Оренбург: ГБОУ ВПО ОрГМА; 2012.
6. Карпищенко А.И., ред. Медицинская лабораторная диагностика. СПб: Интермедиа; 2002.
7. Меньшиков В.В., ред. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие. T. 3. Клиническая микробиология. М.: Лабора; 2009.
8. Меньшиков В.В., ред. Клиническая лабораторная аналитика. T. 4. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. М.: Агат-Мед; 2003.
REFERENCES
1. World Health Organization. Laboratory manual for the examination of human .semen and sperm-cervical mucus interaction. Cambridge: Cambridge University Press; 2000.
2. Dolgushin I.I., Tizinger O.A., Letyaeva O.I., Ziganshina T.A. Condition factors antimicrobial protection reproductive tract of women with chlamydial infection before and after therapy with local magneto effects. Vestnik vosstanovitel'noy meditsiny. 2011; 5: 50—4. (in Russian)
3. Mihaylova E.A., Voronina L.G., Setko N.P., Mironov A.Ju., Harse-eva G.G., Zherebyat'eva O.O. Infectology aspects of urogenital microbial diseases. Orenburg; 2012. (in Russian)
4. Bobkov Ju. A., Al'-Shukri S.H., Gorbachev A.G., Galkina O.V., Kozlov V.V., Totolyan A.A. Informativeness of local immunity in chronic prostatitis. Meditsinskaya immunologiya. 2008; 2 (4): 4018. (in Russian)
5. Voronina L.G., Mihajlova E.A., Setko N.P., Zherebyat'eva O.O., Mironov A.Yu., Harseeva G.G. Diagnosis and treatment of urogenital bacterial pathologies. Guidelines for doctors and Postgraduate students of the faculty of education. orenburg; 2012. (in Russian)
6. Karpishhenko A.I., ed. Medical laboratory services. St. Petersburg: Intermedia Publ.; 2002. (in Russian)
7. Men'shikov V.V., ed. The techniques of clinical laboratory tests: A guidebook. Vol. 3. Clinical microbiology. Moscow: Labora; 2009. (in Russian)
8. Men'shikov V.V., ed. Clinical laboratory analyst. Vol. 4. Private Analytical Technologies in the clinical laboratory. Moscow: Agat-Med. Publ.; 2003. (in Russian)
Поступила 15.05.14 Received 15.05.14
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 579.842.1.083.18:543.42.062.08
Телесманич Н.Р., Чайка С.О., Водяницкая С.Ю., Чемисова О.С., Чайка И.А.
ПРИМЕНЕНИЕ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО МЕТОДА MALDI-TOF ДЛЯ МЕЖВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БЛИЗКОРОДСТВЕННЫХ ВИБРИОНОВ
ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора, 344002, Ростов-на-Дону; Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 127994, Москва
Цель работы — использование масс-спектрометрического анализа для межвидовой дифференциации коллекционных штаммов представителей рода Vibrio и идентификация холерных вибрионов, выделенных из проб судовых балластных вод. Исследовали 207 музейных штаммов культур и 347 микроорганизмов из проб судовых балластных вод. Идентификацию микроорганизмов проводили с использованием MALDI-TOF-масс-спектрометрии. Использование MALDI-биотипирования позволило выявить неточности в видовых и родовых характеристиках коллекционных штаммов V. alginolyticus, V. parahaemolyticus, Shewanella, V. mimicus, усовершенствовать характеристику и качество коллекций микроорганизмов. Показано эффективное применение MALDI для мониторинга судовых балластных вод, что позволяет выявить полный вибриопейзаж патогенных и непатогенных видов. Показана возможность выявления штаммов холерных вибрионов и возбудителей холеры, ориентируясь на V. albensis на этапе отбора подозрительных колоний.
Ключевые слова: Vibrio; масс-спектрометрия; MALDI-TOF; биотипирование; score; Biotyper.
N.R. Telesmanitch, S.O. Tchaiyka, S.Yu. Vodiyanitskaya, O.S. Tchemisova, I.A. Tchaiyka
THE APPLICATION OF MAss sPECTROMETRY TECHNIQUE MALDI-TOF FOR INTER-sPECIFIC
DIFFERENTIATION OF CLOsELY-RELATED VIBRIO
The Rostov-on-Don anti-plague institute of Rospotrebnadzor, Rostov-on-Don, Russia
The study was targeted to apply mass spectrometry analysis for inter-specific differentiation of collection strains of representatives of genus vibrio and identification of comma bacilli extracted from samples of boat ballast waters. The samples consisted of 207 museum strains of cultures and 347 microorganisms from samples of boat ballast waters. The identification ofmicroorganisms was implemented using MALDI-TOF mass spectrometers. The application of MALDI biotyping made it possible to detect inaccuracies in specific and generic characteristics of collection strains V. alginolyticus, V. parahaemolyticus, Shewanella, V. mimicus and to enhance characteristic and quality of collections of microorganisms. The effective application ofMALDI to monitor boat ballast waters is demonstrated. This technique allows detecting of complete vibrio landscape of pathogenic and non pathogenic genus. The possibility to detect strains of comma bacillus and cholera agents is demonstrated. The mode of orientation on V. albensis at the stage of selection of suspicious colonies is proposed.
Keywords: Vibrio; mass spectrometry; MALDI-TOF; biotyping; score; biotyper
Для корреспонденции: Телесманич Наталья Робертовна, науч. сотр.
Адрес: 344002, г. Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40/ E-mail: [email protected]
