CC BY
83
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СРАВНЕНИЕ ЦНТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ... | 49
УДК 577.352.2:547.495.4:615.2/.3-099
Н.В. Грищенко, Б. Алъбассит, М.А. Барышникова, Л.В. Ланцова, А.П. Полозкова, H.A. Оборотова, В.П. Краснов, А.Ю. Барышников СРАВНЕНИЕ ЦНТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КЛАССА НИТРОЗОМОЧЕВИНЫ
ФГБУ «РОНЦим. H.H. Блохина» РАМН, Москва
Контактная информация
Грищенко Наталия Викторовна, младший научный сотрудник лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО
адрес: 115478 Москва, Каширское шоссе, 24; тел. +7(495)324-10-65 e-mail: natali-2712@mail.ru
Статья поступила 15.01.2014, принята к печати 27.01.2014
Резюме
В работе проведено сравнение цитотоксической активности лекарственных форм (липосомальной и лио-филизата для приготовления раствора для инъекций) трех препаратов из группы производных нитрозомочеви-ны - аранозы, лизомустина и 0R-2011 - на линии клеток меланомы человека Mel Z.
Ключевые слова: цитотоксический тест, липосомы, производные нитрозомочевины.
N.V. Grischenko, B. Albassit, M.A. Baryshnikova,A.V. Lantsova, A.P. Polozkova, N.A. Oborotova, V.P. Krasnov, A.Yu. Baryshnikov CYTOTOXIC EFFECT OF ANTICANCER DRUG FORMULATIONS BELONGING TO NITROSOUREA SUBCLASS
FSBI «N.N. Blokhin RCRC» RAMS, Moscow
Abstract
In this study we have compared the cytotoxic effect of three derivatives of nitrosourea including aranoza, lizomustin and OR-2011 on melanoma cell line Mel Z. All the derivatives were used as liposomal or liophilised form of drug.
Key words: cytotoxic test, liposomes, nitroseurea derivatives.
Введение
Противоопухолевые препараты отличаются от других лекарств высокой агрессивностью, химической нестабильностью во внешней среде и сильным местнораздражающим действием. В связи с этим большинство препаратов выпускаются в виде жидких растворов или лиофилизированных порошков для приготовления растворов и применяются в виде внутривенных инфузий. Новые подходы к совершенствованию химиотерапии рака сфокусированы на разработке новых систем доставки лекарств непосредственно к злокачественной клетке без повреждения нормальной ткани [3; 5; 6; 9; 12; 21; 22; 23; 32; 34; 35; 36; 37; 39].
На протяжении последних 20 лет в практике мировой фармакологии интенсивно используются препараты различной направленности на основе липосом и липидов. Эти препараты нашли широкое применение в диагностике и химиотерапии опухолевых заболеваний. [6; 17; 18; 25]. За сравнительно короткий срок липосомы превратились из простой модели, имитирующей клеточные мембраны, в объект активных научных исследований и практического применения. [1; 2; 6; 20; 27].
Главная цель использования липосом в качестве носителей лекарственных препаратов заключается в селективном накоплении действующих веществ в патологических очагах (опухолях, воспаленных тканях). Включение лекарства в липосомы может изменить фармакокинетику и биораспределение препарата, приводящее к повышению эффективности противоопухолевой терапии и снижению
№ 1/том 13/2014
токсичности [28; 29]. Важную роль в этом процессе играет измененная неоваскуляризации опухоли, способствующая проникновению и накоплению липосом в опухоли [5; 6; 42; 43]. Специфическую доставку липосом в опухоль могут обеспечить МКА к опу-холе-ассоциированным антигенам [4; 6; 30]
Для достижения необходимого терапевтического эффекта инкапсулированный в везикулы препарат должен быть доступным для клеток-мишеней [7; 8; 16; 31; 32; 33]. Далее липосомы интернализу-ются клетками-мишенями или разрушаются различными способами (ферментативным гидролизом либо воздействием извне - например, ультразвуком, температурой) возле поверхности клеток с последующим высвобождением препарата и его захватом этими клетками. Кроме того, липосомы преодолевают МЛУ [40] .Производные нитрозомочевины являются активно используемым классом противоопухолевых соединений. Они обладают широким спектром противоопухолевой активности. В условиях организма соединения этого класса гидролитически распадаются с образованием алки-лирующих и карбамоилирующих частиц, что обусловливает их биологическое действие. В клинической практике применяются лекарственные формы аранозы и лизомустина в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций. В лаборатории лекарственных форм НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» РАМН были разработаны липосомальные лекарственные формы этих соединений [10; 11; 13-15; 24; 26; 38].
В настоящее время все еще ведется поиск новых соединений из класса нитрозомочевин, свя-
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
СРАВНЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ...
занныи с попытками расширить спектр их противоопухолевого действия, снизить побочные и токсические эффекты, увеличить избирательность противоопухолевого действия, а также обусловленный тем, что опухоли не обладают перекрестной резистентностью к различным представителям этой группы препаратов.
Одним из таких соединений является OR-2011, синтезированный в Институте органической химии им. И.Я. Постовского.
Цель нашей работы - сравнение цитоток-сического действия липосомальных форм противоопухолевых препаратов из класса нитрозомочеви-ны: аранозы, лизомустина и OR-2011.
Материалы и методы
Сравнение цитотоксичности липосомальных препаратов проводили с помощью МТТ-теста, основанного на восстановлении дегидрогеназами живых метаболически-активных клеток желтой соли 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ) с образованием фиолетовых кристаллов формазана.
Количество полученного формазана зависит от числа клеток и их жизнеспособности и определяется фотометрически. Цитотоксический эффект характеризует ИК50 - концентрация вещества, вызывающая гибель 50 % клеток
Араноза - 3-а-Ь-арабинопиранозил-1-метил-нитрозомочевина
- метильное производное мочевины, носителем цитотоксической группы в котором является L-арабиноза.
Липосомальную лекарственную форму аранозы изучали в концентрациях 0,9 мг/мл; 0,45 мг/мл; 0,225 мг/мл; 0,112 мг/мл; 0,056 мг/мл.
Лизомустин - 2-хлорэтилнитрозоуреидопроизводное
аминокислоты лизина - относится к группе нитро-зоалкилмочевин и представляет собой смесь двух изомеров.
Исследовали его липосомальную лекарственную форму в концентрациях 1 мг/мл; 0,5 мг/мл; 0,25 мг/мл; 0,125 мг/мл; 0,062 мг/мл и 0,031 мг/мл.
0R-2011 - нитрозопроизводное аминокислоты орнитина из группы нитрозоалкилмочевин, представляет собой смесь двух изомеров.
Липосомальную форму 0R-2011 исследовали в концентрациях 1 мг/мл; 0,5 мг/мл; 0,25 мг/мл; 0,125 мг/мл; 0,062 мг/мл; 0,031 мг/мл и 0,015 мг/мл.
МТТ-тест проводили на клеточной линии диссеминированной меланомы человека Mel Z[19].
Клеточные линии культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10 % ТЭС, 10мМ HEPES (Sigma, США), 2мМ L-глутамина (Sigma, США), 40 нг/мл гента-мицина (ICN, США), 0,1% 1000-кратного р-ра аминокислот и 0,1% 1000-кратного р-ра витаминов (ПанЭ-ко, Россия) при 37 °С в атмосфере 5 % С02. и 0,1% 1000-кратного р-ра витаминов (ПанЭко, Россия), при 37 °С в атмосфере 5% С02.
Клетки поддерживали в логарифмической фазе роста постоянным пересевом культуры через 3-4 дня.
Для открепления клеток с пластика использовали р-р Версена.
Клетки отмывались чистой бессывороточной средой RPMI-1640 и пересаживались в 96-луночные плоскодонные планшеты (Costar, USA) по 4* 103 клеток в 180 мкл полной среды RpMI-1640 на лунку.
Для оценки цитотоксического действия липосомальных препаратов в каждую лунку добавляли по 20 мкл препарата в разных концентрациях, и
инкубировали с клетками в течение 24; 48 и 72 ч в 5 %-ном С02-инкубаторе при 37 °С.
Через 24; 48 и 72 часа в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора МТТ[3-(4,5 диметилтиазо-лин-2)-2,5 дифенилтетразолий бромид] (маточный раствор 5мг/мл, конечная концентрация 1 мг/мл), и инкубировали 4 ч при 37 °С в 5 %-ном С02-инкубаторе.
После образования формазана надосадочную жидкость удаляли. Осадок растворяли, добавляя в лунки по 200 мкл ДМСО.
Планшеты помещали на 5-7 мин в термостат при температуре 37°С, после чего встряхивали на шейкере в течение 10 минут. Затем измеряли интенсивность окрашивания среды на фотометрическом анализаторе иммуноферментных реакций «АИФР-01 Униплан» (ЗАО «Пикон») при ^=530 нм. Величина поглощения прямо пропорциональна числу живых клеток.
Выживаемость клеток рассчитывалась по формуле:
Выживаемостъ(%) =
Оптическая плотностьь клеток в опыте Оптическаяпотностьь контрольных клеток
■х 100%
Результаты
Проведено сравнение цитотоксической активности трех производных нитрозометилмочеви-ны на линии клеток меланомы человека Mel Z, полученной в НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина» РАМН [19; 41]. Все три препарата оказывали цито-токсическое действие на клетки дозозависимым образом (рис. 1-3). Липосомальная араноза через 24 ч инкубации была более эффективна. IC50 для липосомальной аранозы составила 0,45 мг/мл, а для аранозы-лио - 0,9 мг/мл (рис. 1А).
После инкубации клеток с аранозой в течение 48 и 72 ч эффект обеих форм аранозы был практически одинаковым (рис. 1Б-В)
Лизомустин оказался эффективнее аранозы. IC50 для обеих лекарственный форм лизомустина составила около 0,125 мг/мл после инкубации в течение 24 и 48 ч (рис. 2А-Б) и 0,062 мг/мл через 72 ч инкубации (рис. 2В).
Лизомустин-лио оказывал более сильное ци-тотоксическое действие при использовании тех же самых концентраций. Более выражено токсическое действие лизомустина-лио в отличие от его липосомальной формы было также показано ранее A.B. Ланцовой и соавт. [13-15; 34].
Цитотоксическое действие 0R-2011 было наиболее выраженным, особенно его липосомальной формы. После инкубации клеток с препаратом в течение 24 ч ИК50 для липосомальной формы было 0,025 мг/мл, для OR-2011-лио - 0,125. Далее при инкубации 48 и 72 ч ИК50 для липосомальной формы оставалась на тех же значениях, а для 0R-2011-лио достигла 0,062 мг/мл.
Заключение
Таким образом, сравнение цитотоксического действия известных препаратов из класса производных нитрозомочевины - аранозы и лизомустина, а также нового препарата 0R-2011 показало, что наиболее эффективным является 0R-2011. Особенно выраженным цитотоксическим действием обладает липосомальная лекарственная форма 0R-2011.
№ 1/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СРАВНЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ... 1 51
120 100 80 60 40 20 0
-Араноза-лио
Липосомапьная араноза
0,112 0,225 0,45 0,9 Концентрация, мг/мл
120 100 80 60 40 20 0
0,056 0,112 0,225 0,45 0,9 Концентрация, мг/мл
0,056
Концентрация, мг/мл
В
—♦— Араноза-лио
—■—Липосомапьная араноза
Рис. 1. Влияние аранозы на клетки линии Mel Z:
А - 24 ч; Б - 48 ч; В - 72 ч
Ф
Ф
Рис. 2. Влияние лизомустина на клетки линии Mel Z: А - 24 ч; Б - 48 ч; В - 72 ч
100 80 60 40 20
-QR-2011 лио
Липосомальный QR-2011
0,015 0,031 0,062 0,125 0,25 0,5 Концентрация, мгТмл
100 80 60 40 20 0
Липосомальный QR-2011
0,015 0,031 0,062 0,125 0,25 0,5 Концентрация, мгТмл
№ 1/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
0
52 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СРАВНЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ...
Рис. 3. Влияние 0R-2011 на клетки линии Mel Z:
А - 24 ч; Б - 48 ч; В - 72 ч
Концентрация, мг/мл
Литература
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
Алъбассит Б., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка липосомальной лекарственной формы нового соединения из класса нитрозоалкилмочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т.12, №2. - С.5.
Афанасьева Д.А., Барышникова М.А., Соколова З.А., Косорукое B.C. Разработка липосомальной конструкции, содержащей лизат опухолевых клеток // Российский биотерапевтический журнал. -2013. - Т. 12, № 2. - С. 5.
Барсуков Л.И. Липосомы // Соровский образовательный журнал. - 1998. - 10. - С. 2-9. Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека // Гематология и трансфузиология. - 1990. - №8. - С. 4.
Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов // Вестник РАМН. - 2012. - № 3. - С. 23-30.
Барышников А.Ю., Барышникова М.А. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И.Менделеева 2012. - T.LVI, № 3-4. - C. 60-7
Барышникова М.А., Зангиева M.T., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных нанокапсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5. Гуревич Д.Г., И.Г. Меерович И.Г., Г.А. Меерович Г.А. и др. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. -Т. 6, № 2. - С. 45-9.
Дмитриева М.В., Оборотова H.A., Санарова Е.В. и др. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. -С. 21-7.
Казеев С.Г., Барышникова М.А., Полозкова А.П., Оборотова H.A. Разработка наноструктурирован-ной лекарственной формы аранозы //Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2.
- С. 24.
Казеев С.Г., Барышникова М.А., Афанасьева Д. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. -С. 24.
Кортава М.А., Рябова А.З., Игнатьева Е.В. и др. Изучение эффективности включения фотосенса в пространственно стабилизированные липосомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2005.
- Т. 4, №4. - С. 96-101.
Ланиова A.B. Создание и биофармацевтическое изучение липосомальных лекарственных Форм противоопухолевых препаратов производных нитрозомочевины. Автореф. дис. ... канд. фарм. наук. - М., 2006. - 24 с.
Ланиова A.B., Оборотова H.A., Перетолчина Н.М. и др. Разработка и изучение стерически стабилизированной липосомальной формы лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2004.
- Т. 3, № 4. - С. 19-23.
Ланиова A.B., Оборотова H.A., Перетолчина Н.М. и др. Сравнительное изучение противоопухолевой активности липосомальных лекарственных Форм препаратов производных нитрозоалкилмочевины // Сибирский онкологический журнал. - 2005. - 2(14). - С. 25-9.
Левачева И.С., Барышникова М.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов липосо-мами // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 32.
Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: 1. Липосомы в ФДТ // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 3-8.
Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: 2. Липосомальные формы для создания фотоактивируемых липосомальных препаратов в фотобиологических исследованиях // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 6-12. Михайлова И.Н., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланоиы - основа для создания противоопухолевых вакцин // Вестник РАМН. - 2005. - № 7. - С. 37-40. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Клименко О.В. и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 62-6. Оборотова H.A. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 5. - С. 30.
Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.
№ 1/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
СРАВНЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ...
23.
Оборотова H.A. Основные проблемы создания лекарственных форм противоопухолевых препаратов для внутривенного введения // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 2. - С. 27-31.
Оборотова H.A., Лопатин П.В. 30 лет лаборатории разработки лекарственных форм ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 4. - С. 3-7. Оборотова H.A., Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов // Российский химический журнал. - 2012. - № 3-4. С. 33-40.
Преображенская М.Н., Лопатин П.В., Переводчикова Н.И. и др. Новое противоопухолевое лекарственное средство араноза // II Российский конгресс Человек и лекарство. - М.,1995. - С. 203. Смирнова З.С., Меерович И.Г., Лукъянец Е.А. и др. Фенилтиозамещенные фталоцианины - новые фотосенсибилизаторы ближнего инфрокрасного диапозона // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 54-60.
Саквина О.И.. Бапышников А.Ю. Липосомы в направленной доставке противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. - Т. 7, № 4. - С. 80-5.
Смирнова З.С., Оборотова H.A., Макарова O.A. и др. Эффективность и фармакокинетика липосо-мальной лекарственной формы фотосенсибилизатора «Фотосенс» на основе сульфафталоцианина // Химико-фармацевтический журнал. - 2005. - Т. 39, № 7. - С. 3-7.
Соколова Д.В., Тазина Е.В., Kopmaea М.А. и др. Анти-MUC-l иммунолопосомальная конструкция доксорубицина для направленной доставки в опухоль // Российкий биотерапевтический журнал. -2011. - Т. 10, № 3. - С. 99-103.
Тазина Е.В., Оборотова H.A. Селективная доставка препаратов в опухоль с помощью термочувствительных липосом и локальной гипертермии // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. -Т. 7, № 3. - С. 4-12.
Тазина Е.В., Костин КВ., Оборотова H.A. Особенности инкапсулирования лекарственных препаратов в липосомы // Химико-фармацевтический журнал. - 2011. - Т. 45, № 8. - С. 30-40. Тазина Е.В., Мещерякова В.В., Игнатьева Е.В. и др. Биофармацевтические исследования термочувствительной липосомальной лекарственной формы доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8, № 1. - С. 40-7.
Толчева Е.В., Оборотова H.A. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 1. - С. 54-61. Толчева Е.В., Барышников А.Ю., Оборотова H.A. и др. Анти-СБ5-иммунолипосомы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к СБ5+клеткам // Российский биотерапевтический журнал. - 2005. - Т. 4, № 4. - С. 38-43. 36. Хугаева О.В., Яворская Н.П., Голубева И.С. и др. Сравнительное изучение противоопухолевой активности различных лекарственных форм метаксантрона // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 3. - С. 51-4.
Чан Тхи Хай Иен, Поздеев В.И., Меерович Г.А. и др. Липосомальная лекарственная форма фотоди-тазина // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 2. - С. 105-7. Шадрина A.B., Перетолчина Н.М., Полозкова А.П. и др. Биофармацевтические исследования липо-сомального лизомустина // Российский биотегапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 49-53. Швеи В.И., Краснопольский Ю.М. Липосомы в фармации. Продукты нанотехнологии // Провизор. -2008. - № 3. - С. 18-24.
Шоуа И.Б., Полозкова А.П., Оборотова H.A. и др. Действие липосомального доксорубицина на клетки линии, экспрессирующие активный pgp170 // Российский биотерапевтический журнал. -2004. - Т. 3, № 1. - С. 20-3.
Mikhailova I.N., Morozova L.Ph.,Golubeva V.A. et al. Cancer/testis genes expression in human melanoma cell lines // Melanoma Research. - 2008. - № 5. - P. 303-13.
Vartanian A.A., Stepanova E.V., Grigorjeva I. et al. VEGFR1 and PKCa signaling control melanoma vas-culogenic mimicry in a VGFR2 kinasa-idependent manner // Melanoma Resorch. - 2011. - 21(2). - P. 91-
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43. Vartanian A.A., Stepanova E.V., Gutorov S.V. et al. Prognostic significance of periodic acid-schiff-positive patterns in clear cell renal carcinoma // The Canadian Journal of Urology. - 2009. - 16(4). - P. 4726-32.
№ 1/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
При ссылке на главу из книги, написанной коллективом авторов, указывают авторов главы и ее название, затем авторов или редакторов книги, название книги, номер издания (может отсутствовать), место издания, издательство (может отсутствовать), год и страницы, например:
Кэйн Д. Этические и правовые основы медицинской помощи. Берек Д., Адаши И., Хил-лард П. (ред.). Гинекология по Эмилю Новаку: Пер. с англ. - М.: Практика, 2002. - С. 14-18.
При ссылке на журнал указывают авторов, затем название статьи, названию периодического издания или сборника предшествует символ //. После названия журнала указывается год, том, номер выпуска, первая и последняя страницы работы, например:
Поддубная И. В., Дёмина Е. А. Диагностика и определение распространенности (стади-рование) неходжкинских лимфом // Практическая онкология. - 2004. - № 3. - С. 176-184.
При ссылке на сборник статей указывают авторов, затем название статьи, сборника, место издания, год, страницы, например:
Коненко Г. А. Решение уравнений движения однофазного вязкого закрученного потока в длинной трубе. Отопление и вентиляция. - Иркутск, 1994. - С. 34-36.
При ссылке на тезисы докладов указывают авторов, затем название тезисов конференции, страницы. При ссылке на диссертации или авторефераты указывают автора, затем название диссертации, место и дату написания, страницы. При этом используются следующие сокращения: Дис... канд. мед. наук, Дис... д-ра мед. наук, Авторефер. дис... канд. мед. наук, Авторефер. дис. д-ра мед. наук. Ссылки на интернет-документы следует оформлять так:
Официальные периодические издания: электронный путеводитель / Рос. нац. б-ка, Центр правовой информации. [СПб.], 2005 - 2007. URL: http://www.nlr.ru/lawcenter/izd/index.html (дата обращения: 18.01.2007).
Логинова Л.Г. Сущность результата дополнительного образования детей // Образование: исследовано в мире: междунар. науч. пед. интернет-журн. 21.10.03. URL: http://www.oim.ru/reader.asp?nomer= 366 (дата обращения: 17.04.07).
Рынок тренингов Новосибирска: своя игра [Электронный ресурс]. - Режим доступа: Ф http://nsk.adme.ru/news/2006/07/03/2121.html ф
В тексте рекомендуется использовать международные названия лекарственных средств, которые пишутся с маленькой буквы. Торговые названия препаратов пишутся с большой буквы.
В конце статьи должны стоять подписи всех авторов. На отдельном листе авторам следует указать почтовый адрес для переписки, включающий почтовый индекс, телефон(ы), факс и адрес электронной почты. Все статьи, поступившие в редакцию, подлежат рецензированию. Рецензенты для каждой статьи назначаются редакционной коллегией. Если рецензенты и редакторы предлагают исправить работу, то копия с таким предложением отправляется автору. Эта копия возвращается вместе с переработанным экземпляром, который представляется на бумаге и в электронном виде.
Редакция оставляет за собой право отклонить работу из-за несоответствия профилю и требованиям журнала, достоверности и объективности данных, наличия ошибок или непод-крепленных достоверными фактами деклараций, противоречащих современным научным представлениям и опыту.
Редакция журнала осуществляет научное и литературное редактирование статей, обязуется информировать авторов обо всех смысловых изменениях, возникающих при редактировании их работ (это не касается литературной правки).
Статьи, ранее опубликованные в других журналах или сборниках, не будут приняты к публикации.
С уважением,
главный редактор А.Ю. Барышников
