CC BY
64
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ-СБ20... 1 15
УДК 577.115.088:616-097.31-092.4
1 J 2 j 12
A.A. Матюшин , O.B. Хугаева , М.А. Барышникова , И.И. Краснюк , А.Ю. Барышников ' ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20 ИММУНОЛИПОСОМ МИТОКСАНТРОНА IN VITRO
1 Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Москва 2ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина» ФАНО, Москва
Контактная информация
Матюшин Алексей Аркадьевич, к. фарм. н., доцент кафедры общей химии адрес: 105043, Москва, 4-я Парковая ул., д.31/8; тел. +7(906)705-75-52 e-mail: foralan79@mail.ru
Статья поступила 21.05.2014, принята к печати 08.09.2014.
Резюме
Разработана иммнолипосомальная конструкция митоксантрона, направленная против CD20+ В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Для получения иммунолипосомальной конструкции митоксантрона за основу взяли липосомальную модель, в которой липидное соотношение ®X:XO.n:mPEG2000-DSPE:pNP-PEG3000-lipid составило 11 : 9 : 0,95 : 0,05. Очистку иммунолипосомальной конструкции митоксантрона от «свободного» митоксантрона и не связавшихся МКА проводили методом гель-фильтрации. В среднем на одну липосому приходилось ~ 18 молекул конъюгированных антител. После инкубации клеток B-клеточных линий Raji и Namalwa с иммуно-липосомальным митоксантроном регистрировали 98 %-ное связывание с клетками-мишенями, однако иммуноли-посомы не реагировали с CD20- Т-клеточной линией Jurkat. В МТТ-тесте показали, что иммунолипосомы, нагруженные митоксантроном, убивают антиген-положительные клетки-мишени.
Ключевые слова: иммунолипосомы, МКА, митоксантрон, CD20.
A.A. Matyushin1, O.V. Khugaeva1, M.A. Baryshnikova2, I.I. Krasnyuk1, A.Yu. Baryshnikov1'2 DEVELOPMENT AND INVESTIGATION OF ANTI-CD20-IMMUNOLIPOSOME IN VITRO
1I.M. Sechenov First Moscow State Medical University
2FSBSI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center» FASO, Moscow
Abstract
The article describes immunoliposomal mitoxantrone-loaded construction targeted against CD20+ B-cell LPDs. The immunoliposomes were obtained using liposomal model with 11 : 9 : 0,95 : 0,05 phosphatidylcholine : cholesterol : mPEG2000-DSPE : pNP-PEG3000-lipid lipid ratio. Purification of liposomal constructions from non-encapsulated mi-toxantrone and free mAbs was performed by gel filtration. Mean number of conjugated mAbs per liposome was ~ 18. 98% binding to target cells was demonstrated after incubation of immunoliposomal mitoxantrone with cells from Raji and Namalwa B-cell lines; however, immunoliposomes didn't interact with CD20-negative Jurkat T-cell line. Results of MTT-test showed, that mitoxantrone-loaded immunoliposomes are able to kill antigen-positive target cells.
Key words: immunoliposomes, monoclonal antibodies, mitoxantrone, CD20.
Введение
Актуальной проблемой онкологии является создание новых средств терапии злокачественных заболеваний [52; 54-57]. Идет интенсивный поиск веществ с противоопухолевой активностью среди химических соединений, препаратов биологической природы и экстрактов растений [2-5; 10; 36; 47-49; 64]. Активно создаются препараты для фотодинамической терапии злокачественных заболеваний [25; 26; 45; 46; 58-63; 76; 83]. Успехи в молекулярной биологии и генной инженерии создали возможность конструирования новых веществ с ранее неизвестными свойствами. Все это вселяет надежду на будущие успехи в лечении рака.
Наряду с этим идет совершенствование лекарственных форм уже известных хорошо зарекомендовавших себя противоопухолевых препаратов [10-12; 15; 16; 21; 31; 32; 34; 35; 40]. Большие надежды возлагаются на наноструктурированные лекарственные формы противоопухолевых препаратов [7; 14; 24; 29; 44; 53; 70; 73; 82]. Наноформы лекарственных препаратов меняют фармакокинетику лекарственного вещества [42; 62; 68], увеличивают время циркуляции в крови,
№ 3/том 13/2014
способствуют селективному накоплению препарата в опухолевой ткани.[37; 38; 41; 69]. Среди них предпочтение отдается липосомальным лекарственным формам [22; 26; 29; 50; 51; 79; 84; 86; 88; 90; 92]. Мембрана липосом не отличается от поверхностной клеточной мембраны. Липосомы биосовместимы и биодегради-руемы, они не вызывают побочных токсических эффектов [34; 39]. Липосомальные препараты преодолевают лекарственную устойчивость, связанную с отсутствием СБ95-рецептора [13; 20] или гиперэкспрессией гена множественной лекарственной устойчивости [77].
Липосомы предохраняют агрессивные противоопухолевые вещества от разрушения. В лио-фильно высушенной форме они сохраняются на протяжении долгого времени. В липосомы можно включать как водорастворимые, так и водонерас-творимые субстанции. Благодаря этому свойству удалось создать инъекционные лекарственные формы многих препаратов.
Главное преимущество липосомальных препаратов - специфическое накопление в опухоли. Избирательность накопления липосом в опухоли связана с особенностями неоангиогенеза опухоли [17; 19; 67; 72; 93-96]. Вновь образованные крове-
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
носные сосуды имеют дефект в выстилающем эндотелии - поры размером от 50 до 700 нм. Липосо-мы проникают через эти поры в опухолевую стро-му и там остаются. Кровеносные сосуды нормальных тканей не имеют таких больших пор и наноча-стицы в них не попадают [23].
Эффект «проницаемости и накопления» обеспечивает пассивное накопление липосом в опухолевой ткани [7; 14; 92]. Для активного транспорта противоопухолевых веществ в опухоль используют иммунолипосомы [1; 8; 9; 27; 28; 33; 43; 71; 80; 89].
С этой целью к липосомам прикрепляют различные лиганды или МКА, которые специфически связываются с антигенами на мембране опухолевых клеток и не взаимодействуют с нормальными клетками [12; 30; 65; 66; 78; 81; 87; 88; 91].
При создании иммунолипосом используют целые молекулы иммуноглобулинов или их фрагменты. Предпочтение отдается гуманизированным МКА, т.к. на них не вырабатывается иммунный ответ. В РОНЦ им. Н.Н. Блохина созданы МКА, которые пригодны для конструирования иммунолипосом [6; 18; 74].
Целью настоящей работы стало создание иммунолипосом, нагруженных митоксантроном, которые специфически связываются с клетками, экспрессирующими В-клеточный антиген СБ20.
Материалы и методы
Метод получения иммунолипосом
Основой для создания иммунолипосом послужили МКА, созданные в РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Для приготовления липосом использовали метод обращения фаз.
Точные навески яичного фосфатидилхолина, холестерина, Б8РЕ-РЕ02000и pNp-PEG3000-lipid растворяли в 7 мл хлороформа. Смесь переносили в круглодонную колбу вместимостью 150 мл и упаривали органический растворитель на роторном испарителе под вакуумом при температуре не выше 32±2 °С до образования липидной пленки.
Пленку сушили под вакуумом в течение 4050 мин, далее гидратировали 1,5 мл 125 мМ раствора сульфата аммония при постоянном перемешивании до полного ее исчезновения со стенок колбы и образования белой эмульсии (дисперсия многослойных липосом).
Для получения малых однослойных липосом использовали экструзионный метод, который основывается на последовательном продавливании дис-перссии липосом через мембранные фильтры «№с1ероге» с 0 пор 400; 200 и 100 нм, применяя ручной мини-экструдер.
Инкапсулирование препарата в иммунолипосомы осуществляли по принципу активной загрузки с помощью ионного градиента (ЫН4)2804, рН 5,5 [85], для чего 0,4 мл полученных пустых липосом помещали во флакон вместимостью 10 мл и добавляли МКА 1С0-180, исходя из мольного соотношения белок: pNP-PEG3000-1ipid 1:40.
Смесь перемешивали и добавляли 2,6 мл буфера, содержащего 10мМ НЕРЕ8 и 145мМ шС1 (рН 8,2-8,4) и 3 мл раствора митоксантрона (концентрация 2 мг/мл).
Конечный объем дисперсии 6 мл. Далее доводили pH в дисперсии 3М раствором №0Н до значения 8,5-8,6 и инкубировали в течение 12 ч при 4 °С и постоянном перемешивании. Весовое соотношение препарат : липиды 0,12:1.
Измерение диаметра везикул
Анализ среднего диаметра полученных везикул и оценку их распределения по размерам проводили с использованием метода корреляционной спектроскопии светорассеяния (динамического лазерного светорассеяния) на приборе Nicomp 380 SubmicronParticleSizer.
Получение чистой фракции дисперсий
с митоксантроном методом гель-фильтрации
Очистку дисперсий от не включившегося в везикулы препарата и не присоединившихся МКА проводили методом гель-фильтрации с целью количественного определения содержания препарата в везикулах, оценки эффективности его включения и определения количества связавшихся МКА.
На хроматографическую колонку C10/20, заполненную сефадексом G-50 и предварительно уравновешенную 0,15М раствором хлорида натрия в течение 1 ч (при скорости 0,3-0,4 мл/мин), наносили 1 мл иммунолипосомальной дисперсии с митоксантроном. В качестве элюента использовали 0,15М раствор хлорида натрия, скорость элюции составляла 0,5 мл/мин и регулировалась перистальтическим насосом Liposomat. Процесс очистки контролировали с помощью детектора UVis-920 с длиной волны 215 нм и рекордера REC 111, фиксировавшего разделение в виде пиков.
Метод
стерилизующей фильтрации везикул
с митоксантроном
Для возможности постановки тестов в системе in vitro свежеприготовленную дисперсию липосом или иммунолипосом с митоксантроном в условиях стерильности пропускали через мембранные фильтры фирмы «Millipore» 0 13 мм, с размером пор 0,1 мкм. Фильтрат собирали в стерильный флакон.
Количественное определение
инкапсулированного митоксантрона
Для определения митоксантрона в липосо-мальной или иммунолипосомальной дисперсии применяли стандартную спектрофотометрическую методику количественного определения вещества с использованием PCO митоксантрона при А, 242±2нм. Исследование влияния вспомогательных веществ на спектральные характеристики митоксантрона показало, что присутствие фосфатидилхолина, холестерина, PEG2000DSPE, pNp-PEG3000-lipid и криопротек-торов (сахарозы, глюкозы) не изменяет положения характеристического максимума. Измерение оптической плотности спиртовых растворов проводили относительно 95 %-ного этилового спирта в кюветах с толщиной оптического слоя 10 мм.
Содержание митоксантрона (X, мг) рассчитывали по формуле:
D х a х C X —-, где
D0 х C0
D - оптическая плотность раствора образца; D0 - оптическая плотность PCO Мит; C - величина разбавления образца; C0 - величина разбавления PCO Мит; а - навеска PCO Мит, мг.
Эффективность включения митоксантрона в липосомы (B, %) рассчитывали по формуле:
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
B =
Dl х C х у D x C x V
x 100%, где
Dj - оптическая плотность раствора фракции с очищенными липосомальным Мит;
D - оптическая плотность раствора исходной липосо-мальной дисперсии;
Cj - величина разбавления фракции с очищенным липосомальным Мит;
C - величина разбавления исходной липосомальной дисперсии;
Vj - объем фракции с очищенным липосомальным Мит, мл;
V - объем исходной липосомальной дисперсии, нанесенной на колонку, мл.
Митоксантрон, холестерин и фосфатидилхо-лин в составе липосомального препарата определяли хроматографически.
Непрямая РИФ
Способность антител, связанных с поверхностью иммунолипосом, специфически связываться c антигеном-мишенью, проверяли на клетках линий Raji, Namalwa и Jurkat.
Для проведения реакции 5*10 дважды отмытых в PBS клеток инкубировали с 20 мкл немеченых МКА, иммунолипосомальным митоксантро-ном, а также пустыми иммунолипосомами, в течение 30 мин при комнатной температуре, после чего клетки отмывали PBS центрифугированием в течение 7 мин при 1200 об/мин.
Затем их инкубировали в течение 30 мин при 4 °С с 10 мкл Р(аЪ)2фрагментов против иммуноглобулинов мыши (рабочее разведение 1 : 200), меченых FITC, после чего дважды отмывали PBS и ре-суспендировали в PBS, содержащем 1%-ный формалин и 0,1%-ный азид натрия.
Результаты реакции анализировали методом проточной цитофлуориметрии.
Оценка
цитотоксической активности
лекарственных форм митоксантрона
МТТ-тестом
Для оценки способности иммунолипосом, загруженных митоксантроном, избирательно доставлять лекарственный препарат к клеткам-мишеням, исследуемые образцы инкубировали с ними в течение 1 часа при 4 °C.
После этого клетки отмывали и оставляли в С02-инкубаторе при 37 °C и 5 % С02. Контролем служили интактные клетки, которые инкубировали в тех же условиях. Общее время инкубации составило 24; 48 и 72 ч. За 6 ч до окончания инкубации в каждую лунку вносили раствор МТТ (концентрация 5 мг/мл).
По окончании инкубации планшеты центрифугировали при 1500 об/мин 10 мин, надосадочную жидкость удаляли. Осадок растворяли в 150 мкл ДМСО и помещали планшеты на 5-7 мин в термостат при температуре 37 °С.
Далее планшеты встряхивали на шейкере, после чего интенсивность окрашивания измеряли на спектрофотометре «Titertek Multiscan MCC/340» при ^=530 нм.
Величина поглощения при этом прямо пропорциональна числу живых клеток.
Процент живых клеток вычисляли по формуле:
N0 = 1-— = х100%, где
N->
N0 - процент живых клеток;
N1 - средняя оптическая плотность лунок, содержащих клетки и препарат;
N2 - средняя оптическая плотность контрольных лунок, содержащих только клетки;
n - оптическая плотность лунок, содержащих только митоксантрон.
Для каждого препарата строили график зависимости «доза-эффект» и определяли IC50.
Статистический анализ полученных результатов
Статистический анализ проводили с использованием программ "BIOSTAT" (Version 3.2), Microsoft Excel, Statisticav.5.0. Различия считали статистически достоверными при p<0,02 и p<0,05, использовали t-критерий Стьюдента, односторонний и двусторонний точный критерий Фишера.
Результаты и обсуждение
Получение
иммунолипосомальной конструкции митоксантрона
ИЛМ получали согласно методу обращения описанному ранее [65]. Для получения ИЛМ за основу взяли липосомальную ЛИПИДНОе соотношение ФХ : ХОЛ : mPEG-
составило 11 : 9 : 0,95 : 0,05.
Липидный состав иммунолипосом представлен в табл. 1.
Очистку ИЛМ от «свободного» митоксантрона и не связавшихся МКА проводили методом гель-фильтрации. Контроль разделения фракций осуществляли с помощью проточного спектрофотометра UVis-920. На выходе (рис. 1) регистрировали четкое разделение на три пика, соответствующие чистой фракции ИЛМ (I), не связавшимся МКА (II) и буферу HEPES с NaCl (III). Сошедшие фракции собирали в стерильные флаконы и подвергали спекторофотометрическому анализу.
фаз,
модель в которой
2000-DSPE : pNP-PEG3000-lipid
Рис. 1. Хроматограмма очистки ICO-180-ИЛКМ от не связавшихся МКА и препарата. Скорость движения бумаги в рекордере - 2 мм/мин. Обозначения: I - фракция очищенных ИЛКМ; II - МКА IC0-180; Ш-.буфер HEPES с NaCl. Условия хроматографии: колонка: C 10/20 (Amersham Biosciences); элюент: 0,15М NaCl; скорость элюции: 0,5 мл/мин; детектор: UVis-920 при 215 нм (Amersham Biosciences); температура колонки: комнатная.
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ-СБ20...
Спектрофотометрическое определение содержания митоксантрона в иммунолипосомалъной конструкции
Первоначально определяли максимумы поглощения спиртовых растворов субстанции митоксантрона и препарата в исследуемых образцах с целью выбора рабочей длины волны.
В случае ИЛМ исследовали также влияние МКА на спектрофотометрическое определение препарата в везикулах. В качестве растворителя использовали 95% этиловый спирт.
Оптическую плотность спиртовых растворов субстанции митоксантрона, липосомальной формы митоксантрона, ИЛМ измеряли в диапазоне 1 от 200 до 700 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 10 мм (относительно 95 %-ного этилового спирта). Полученный спектр поглощения спиртового раствора субстанции митоксантрона представлен на рис. 2.
400 500 бОО
Wavelength (nm)
Рис. 2. Спектрограмма спиртового раствора субстанции митоксантрона.
На полученной спектрограмме наблюдается четыре максимума при 242 нм, 280 нм, 620 нм и 673 нм. Спектры поглощения спиртовых растворов липосомальной формы и иммунолипосомальной конструкции митоксантрона по положению максимумов и форме кривой были идентичны спектру спиртового раствора субстанции митоксантрона (рис. 3-4).
300
400 500 600
Wavelength (nm)
Рис. 3. Спектрограмма спиртового раствора липосомальной формы митоксантрона.
В качестве аналитической выбрали А 242 нм, на которой пик митоксантрона был наиболее выраженным и узким. Для исследования потенциального влияния МКА ICO-180, используемых в качестве векторов, и компонентов липосом на спектральные характеристики митоксантрона, пропи-
сывали максимумы поглощения спиртовых растворов 1С0-180, а также пустых липосом в диапазоне А 200-700 нм.
Пустые липосомы получали из фосфатидил-холина, холестерина, mPEG2000-DSPEи pNP-PEG3000-1ipid в молярном соотношении 11 : 9 : 0,95 : 0,05. Затем их разбавляли в 20 раз буфером из 10 мМ HEPES и 145 мМ ШС1 фН 8,4). Оптическую плотность спиртовых растворов МКА и липосом измеряли в кюветах с толщиной оптического слоя 10 мм относительно спирта. Полученные спектрограммы представлены на рис. 5-6.
Степень включения митоксантрона в имму-нолипосомы составила 95±5%.
400 500 600
Wavelength (nm)
Рис. 4. Спектрограмма спиртового раствора ICO-180-ИЛКМ.
0.4 0.3 0.2 0.1 0.0
400 SOO 600
Wavelength {nm)
Рис. 5. Спектрограмма спиртового раствора пустых липосом.
0.6
0.4
<л 0.3-<
300
400 500 600
Wavelength (nm)
700
Рис. 6. Спектрограмма спиртового раствора ICO-180.
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
Липидный состав анти-СР20 иммунолипосомального митоксантрона
Таблица 1
Состав Молярное соотношение Мол. Вес, г/моль Конц., мг/мл % мол.
Фосфатидилхолин 11 760,09 57 52,38
Холестерин 9 386,70 23,7 42,86
mPEG2000-DSPE 0,95 2805,05 18,2 4,52
pNP-PEG3000-lipid 0,05 3400 1,1 0,24
I =16,65
Таблица 2
Влияние различных лекарственных формы митоксантрона на жизнеспособность клеток линии №та1ша_
Лекарственная форма
Митоксантрон, субстанция
ЛФМ
ИЛМ (ICÜ-180-ИЛКМ)
Митоксантрон-ЛЭНС
Концентрация митоксантрона, мг/мл
0,3
0,075
0,019
0,0045
0,0011
0,00029
Количество живых клеток, %
33±6
40±7
16±6*,
30±14
33±6
51±6*
30±12**
32±2
39±1
45±6
39±6
32±2*
50±9
85±7*
60±18
41±4
81±12
80±14
75±5
50±12*
84±9
86±8
89±18
87±14*
* - P<0,02 по отношению к субстанции митоксантрона ** - Р<0,02для ЛФМ по отношению к ИЛКМ_
Определение количества МКА, связанных с поверхностью липосом
Определение белка в препаратах с инкапсулированным митоксантроном было затруднено присутствием препарата, образующего окрашенные комплексы с бицинхониновой кислотой.
Поэтому определение общего белка проводили в препаратах пустых пегилированных имму-нолипосом, очищенных от несвязавшихся МКА, по методу с бицинхониновой кислотой.
Среднее количество белка во всей очищенной фракции пустых 1С0-180 ИЛМ составило 0,107 мг. Из литературных данных известно, что одну липосому диаметром 100 нм составляют 100 000 молекул липидов, соответственно, на липосому 0 150 нм приходится 150 000 молекул липидов [75].
Если учесть, что средняя молекулярная масса липидов 760, количество липидов в препарате составило в среднем 4,66 мг, а молекулярная масса иммуноглобулинов IgGl - 146000 Да, то, зная соотношение фосфолипидов и белка в полученном препарате, можно вычислить, сколько молекул антител приходилось на одну липосому:
N = m х Na
M
где
N - число молекул,
т - масса вещества, взятого согласно методике приготовления ИЛМ,
М - молекулярная масса вещества.
Таким образом, в среднем на одну 1С0-180-ИЛМ приходилась ~ 18 молекул конъюгированных антител.
Оценка специфического связывания иммунолипосом с клетками-мишенями
Для создания aнти-CD20 иммунолипосомального митоксантрона использовали МКА 1С0-180 против В-клеточного антигена CD20. Эти МКА специфически реагировали с CD20+ клеточными линиями, В-лимфоцитами периферической крови
здоровых доноров и В-клеточными лимфопролифе-ративными новообразованиями.
Для оценки способности полученных иммунолипосом селективно связываться с клетками-мишенями были использованы клеточные линии Raji, Namalwa и Jurkat.
Оценку специфического связывания проводили непрямой РИФ. На рис. 7 (см. цветной блок) показано, что в популяции В-клеточной линии Raji с помощью МКА ICÜ-180 выявлено 97% клеток, позитивных по экспрессии антигена CD20 (рис. 7 Б).
При инкубации (рис. 7 В) клеток с липосо-мальным митоксантроном, не конъюгированным с МКА, связывание было не значительным (0,5% неспецифически связавшихся клеток).
После инкубации клеток с иммунолипосо-мальным митоксантроном регистрировали 98 %-ное связывание с клетками Raji (рис. 7 Г). Аналогичные результаты получили при использовании в качестве клеток-мишеней В-клеточной линии Na-malwa.
Однако ИЛМ не реагировали с CD20- Т-кле-точной линией Jurkat.
Оценка цитотоксической активности
иммунолипосомальной конструкции
митоксантрона in vitro
Оценку цитотоксического действия полученных иммунолипосом в отношении клеток линии Raji, Namalwa и Jurkat проводили в МТТ-тесте.
В исследовании использовали очищенную иммунолипосомальную конструкцию митоксантрона, липосомальную лекарственную форму митоксантрона, митоксантрон в традиционной лекарственной форме, субстанцию митоксантрона, а также пустые иммунолипосомы.
Разведения пустых иммунолипосом готовили исходя из концентрации липидов в ИЛМ. Перед проведением теста все образцы подвергали стерилизующей фильтрации через мембранные фильтры с низкой сорбцией белка.
Каждый препарат исследовали в 6 концентрациях, каждое разведение ставили в триплете.
В контрольные лунки с клетками добавляли по 20 мкл чистой среды RPMI-1640. По результа-
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
19
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ-СБ20...
там теста строили кривые выживаемости клеток.
Для исключения неспецифического цитоток-сического действия липосомальных препаратов в связи с сорбцией липосом к клеткам, проводили инкубацию клеток с липосомальными препаратами на льду в течение 1 ч, а затем клетки отмывали от не связавшихся липосом.
В табл. 2 и на рис. 3 представлена зависимость жизнеспособности В-клеточной линии шаЫа от лекарственных форм митоксантрона после 72 ч инкубации.
Наихудший цитотоксический эффект проявила липосомальная форма митоксантрона, тогда как иммунолипосомальная конструкция митоксантрона в концентрациях 0,075 мг/мл и 0,3 мг/мл показала самый высокий цитотоксический эффект, который составил 30 и 16 % соответственно.
Литература
Иммунолипосомы 1С0-180-ИЛМ не оказывали цитотоксического действия на клетки Т-клеточного лейкоза 1игка1, не экспрессирующие антиген СБ20.
Заключение
Таким образом, были получены анти-СБ20 иммунолипосомы, содержащие 98 % митоксантрона и 18 молекул антител на одну липосому. Иммунолипосомы специфически соединялись с СБ20+ клетками и не реагировали с СБ20-. Иммунолипосомы оказывали цито-токсическое действие на антиген клетки-мишени после инкубации в течение 72 ч.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Алексеева A.C., Апкаева М.Р., Щегловитова О.Н. и др. Специфическое связывание и накопление в эндотелиальных клетках цитотоксических липосом с лигандом селектинов сиалил-Люис-Х // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 58.
Алъбассит Б., Зангиева М.Т., Барышникова М.А. и др. Липосомальный противоопухолевый препарат 0Р-2011 из класса нитрозомочевины для лечения меланомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 59.
Алъбассит Б., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка липосомальной лекарственной формы нового соединения из класса нитрозоалкилмочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, №2. - С. 5.
Афанасьева Д.А., Барышникова М.А., Соколова З.А., Косорукое B.C. Разработка липосомальной конструкции, содержащей лизат опухолевых клеток // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. -Т. 12, № 2. - С. 5.
Балаев А.Н., Осипов В.Н., Федоров В.Е. и др. Синтез и изучение цитотоксической активности анала-гов гипоталамического гормона соматостатина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. -Т. 11, № 4. - С. 47-53.
Барышников А.Ю. МКАональные антитела серии ИКО к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека // Гематология и трансфузиология. - 1990. - № 8. - С. 4.
Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов // Вестник РАМН. - 2012. - №3. - С. 23-30.
Барышников А.Ю., Барышникова М.А. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И.Менделеева 2012. - T.LVI, № 34. - C .60-7.
Барышников А.Ю., Оборотова H.A. Иммунолипосомы - новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 4. 10. Барышникова М.А., Алъбассит Б., Сапрыкина Н.С. и др. Противоопухолевая активность нового соединения из класса нитрозометилмочевин // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 8.
Барышникова М.А., Ахматова Н.К., Карамзин A.M. Иммуномодулирующая активность сублингваль-ной формы галавита // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 2. - С. 55-8. Барышникова М.А., Доненко Ф.В., Шубина И.Ж. и др. Влияние сублингвальной формы галавита на иммунофенотип и функциональную активность иммунокомпетентных клеток мышей // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 4. - С. 43-6.
Барышникова М.А., Грищенко Н.В., Полозкова А.П. Влияние лекарственных форм аранозы на индукцию апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 64. Барышникова М.А., Зангиева М.Т., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных капсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
Барышникова М.А., Орлова О.Л., Полозкова А.П. и др. Разработка лекарственной формы цифелина для перорального применения // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 2. - С. 12.
16. Барышникова М.А., Орлова О.Л., Шпрах З.С. и др. Разработка лекарственной формы галавита в виде сублингвальных таблеток // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 1. - С. 86-90.
17. Блохин Д.Ю., Чмутин Е.Ф., Иванов П.К. Молекулярные мишени для противоопухолевой терапии: факторы роста, ангиогенеза и апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, №
9.
11.
12.
13.
14.
15.
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
3. - С. 17-24.
18. Боценовский В.А., Барышников А.Ю. Молекулы клеточной адгезии // Успехи современной биологии.
- 1994. - Т. 114, № 6. - С. 741.
19. Григорьева И.Н., Харатешвили Т.К., Барышников А.Ю. Васкулогенная мимикрия: альтернативный механизм кровоснабжения опухоли? // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3.
- С. 25-30.
20. Грищенко Н.В., Барышникова М.А., Полозкова А.П. и др. Липосомальные противоопухолевые препараты не используют СБ95-зависимый сигнальный путь апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
21. Грищенко Н.В., Алъбассит Б., Барышникова М.А. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм противоопухолевых препаратов из класса нитрозомочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 49-54.
22. Гулякина Н.Д., Санарова Е.В., Ланцова A.B. и др. Разработка наноструктурированной модели лекарственной формы производного индолкарбазола - ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 78.
23. Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г.А. и др. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 2.
- С. 45-9.
24. Дмитриева М.В., Оборотова H.A., Санарова Е.В. и др. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, №4. - С. 21-7.
25. Дмитриева М.В., Оборотова H.A., Орлова О.Л. и др. Липосомальная лекарственная форма борхло-рина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
26. Дмитриева М.В., Полозкова А.П., Оборотова H.A. и др. Качественный анализ липосомальной лекарственной формы борхлорина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 81.
27. Зангиева М.Т., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка состава пространственно стабилизированных иммунолипосом направленных против Her-2 рецептора // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 85.
28. Зангиева М.Т., Игнатьева Е.В., Косорукое B.C. Оценка эффективности включения доксорубмцина в иммунолипосомы, направленные против Her-2 рецептора // Российский биотерапевтический журнал.
- 2013. - Т. 12, № 2. - С. 31.
29. Зангиева М.Т., Игнатьева Е.В., Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Разработка оптимального состава пространственно стабилизированных липосом, нагруженных доксорубицином // Россиский биотерапевтический журнал - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 18.
30. Зангиева М.Т., Матюшин A.A., Соколова Д.В. и др. Разработка и исследование иммунолипосомаль-ных конструкций in vitro // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, №2. - С. 19-27.
31. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Полозкова А.П., Оборотова H.A. Разработка наноструктурированной лекарственной формы аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 24.
32. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Афанасьева Д. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 24.
33. Кортава М.А., Палкина Т.Н., Толчева Е.В. и др. Подходы к созданию иммунолипосом на примере доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 1. - С. 6.
34. Коняева О.И., Кульбачевская Н.Ю., Ермакова Н.П. и др. Доклиническое изучение общетоксического действия лиофилизированной липосомальной формы тиосенса (ЛЛЛФТ) // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 43.
35. Komoea Е.А., Смирнова З.С., Краснюк И.И. и др. Противоопухолевое действие липосомальной формы цифелина на лейкоз Р-388 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 46.
36. Краснов В.П., Левит Г.Л., Барышникова М.А. и др. Нитрозомочевины на основе аминокислот: оригинальный противоопухолевый препарат лизомустин // Российский биотерапевтический журнал. -2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
37. Краснопольский Ю.М., Балабаньян В.Ю., Шаболов Д.Л., Швец В.И. Липосомальные лекарственные препараты в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 48.
38. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Щвец В.И., Шахмаев А.Е. Липосомальные препараты для вспомогательной терапии в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 3. - С. 29.
39. Кульбачевская Н.Ю., Коняева О.И., Ермакова Н.П. и др. Изучение «хронической» токсичности лиофилизированной липосомальной лекарственной формы тиосенса на крысах // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 30.
40. Ланцова A.B., Барышникова М.А., Санарова Е.В. и др. Изучение в системе in vitro наноструктурированной лекарственной формы лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 31.
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
41. Ланцова A.B., Оборотова H.A., Перетолчина Н.М. и др. Сравнительное изучение противоопухолевой активности липосомальных лекарственных форм препаратов производных нитрозоалкилмочевины // Сибирский онкологический журнал. - 2005. - №2. - С. 25-9.
42. Ланцова A.B., Сапрыкина Н.С., Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Противоопухолевая активность наноструктурированной формы лизомустина на мышах с солидной опухолью меланома В-16 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 52.
43. Левачева И. С., Барышникова М.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов липосо-мами // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 32.
44. Матюшин A.A., Барышникова М.А., Барышников А.Ю., Караулов A.B. Липосомы: организм, опухоль, клетка // Физиология и патология иммунной системы. Иммунофармакогеномика. - 2013. - Т. 17, № 6. - С. 3-10.
45. Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: 1. Липосомы в ФДТ // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 3-8.
46. Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: 2. Липосомальные формы для создания фотоактивируемых липосомальных препаратов в фотобиологических исследованиях // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 6-12.
47. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Клименко О.В., и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 62-6.
48. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Багирова Н. С. и др. Стерилизация многослойных протеолипосом // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 1. - С. 9-12.
49. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Бурова О.С. и др. Сравнение экспрессии HSP70 на клеточных линиях меланомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 1. - С. 43-8.
50. Моисеева Е.В., Кузнецова Н.Р., Аронов Д.А. и др. Противоопухолевое действие липосом с липофиль-ным пролекарством комбретастатина A4 на модели острого Т-клеточного лейкоза мышей // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 3-10.
51. Моисеева Е.В., Кузнецова Н.Р., Ситников Н.С. и др. Противоопухолевый эффект наноразмерных липосом с липофильным пролекарством комбретастатина A4 на мышиной модели острого Т-лейкоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, №2. - С. 36.
52. Оборотова H.A. Направленная доставка противоопухолевых препаратов // Антибиотики и химиотерапия. - 1991. - Т. 36, № 10. - С. 47.
53. Оборотова H.A. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 5. - С. 30.
54. Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.
55. Оборотова H.A. Основные проблемы создания лекарственных форм противоопухолевых препаратов для внутривенного введения // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - № 2. - С. 27-31.
56. Оборотова H.A., Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов // Российский химический журнал. - 2012. - № 3-4. - С. 33-40.
57. Оборотова H.A., Смирнова 3. С., Полозкова А.П., Барышников А.Ю. Фармацевтические аспекты разработки липосомальных лекарственных форм для внутривенного введения гидрофобных цитостати-ков // Вестник РАМН. - 2002. - № 1. - С. 42-5.
58. Осипчук Ю.С., Дрожжина B.C. Фотодинамическая терапия саркомы М-1 крыс с использованием нового фотосенсибилизатора борхлорин липосомальный лиофилизат // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 4. - С. 47-50.
59. Санарова Е.В., Оборотова H.A., Смирнова З.С.. и др. Применение липосомальных систем доставки для создания нового эффективного противоопухолевого фотосенсибилизатора // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 72.
60. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Макарова O.A. и др. Доклиническое изучение липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 40-5.
61. Смирнова З.С., Меерович И.Г., Лукъянец Е.А. и др. Фенилтиозамещенные фталоцианины - новые фотосенсибилизаторы ближнего инфракрасного диапазона // Российский биотерапевтический журнал. -2004. - Т. 3, № 1. - С. 54-60.
62. Смирнова З.С., Оборотова H.A., Макарова O.A. и др. Эффективность и фармакокинетика липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора «Фотосенс» на основе сульфафталоцианина // Химико-фармацевтический журнал. - 2005. - Т. 39, № 7. - С. 3-7.
63. Смирнова З.С., Санарова Е.В., Борисова Л.М. и др. Противоопухолевая активность фотодинамической терапии с липосомальной лекарственной формой тиосенса на перевиваемых опухолях мышей // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 56-60.
64. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Абрамов М.В. и др. Ингибиторы ангиогенеза растительного происхождения: перспективы использования в клинической онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 4. - С. 3-10.
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
65.
66.
67.
68.
69.
70.
71.
72.
Соколова Д.В., Тазина Е.В., Kopmaea М.А. и др. Анти-MUC-l иммунолипосомальная конструкция доксорубицина для направленной доставки в опухоль // Российский биотерапевтический журнал. -2011. - Т. 10, № 3. - С. 99-103.
Соколова Д.В., Трещалина Е.М., Андронова Н.В. и др. Модели для доклинического изучения in vivo противоопухолевой активности таргетных препаратов против антигена MUC-1 // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 3. - С. 55-60.
Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии. - Т.120, №6. - С. 599.
Тазина Е.В., Оборотова Н.А. Селективная доставка препаратов в опухоль с помощью термочувствительных липосом и локальной гипертермии // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. - Т. 7, № 3. - С. 4-12.
Тазина Е.В., Мещерякова В.В., Игнатьева Е.В. и др. Биофармацевтические исследования термочувствительной липосомальной лекарственной формы доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8, № 1. - С. 40-7.
Толчева Е.В., Оборотова Н.А. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 1. - С. 54-61. Толчева Е.Н., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-СБ5-иммунолипосомы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к СБ5+клеткам // Российский биотерапевтический журнал. - 2005. - Т. 4, № 4. - С. 38-43.
Франциянц Е.М., Комарова Е.Ф., Верескунова М.И. Состояние некоторых маркеров ангиогенеза и пролиферации в ткани опухолей репродуктивной системы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 58.
73. Хугаева О.В., Kopmaea М.А., Зангиева М.Т. и др. Химико-фармацевтические исследования липосомальной формы митоксантрона // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. - С. 41-6.
74. Хугаева О.В., Яворская Н.П., Голубева И.С. и др. Сравнительное изучение противоопухолевой активности различных лекарственных форм метаксантрона // Российский биотерапевтический журнал. -2010. - Т. 9, № 3. - С. 51-4.
Цибулькина Е.А. Иммунолипосомальные системы направленного транспорта малых интерферирующих РНК в клетки-мишени: Автореф. дис. ... канд. хим. наук, 2008. - 24 с.
Чан Тхи Хай Иен, Поздеев В.И., Меерович Г.А. и др. Липосомальная лекарственная форма фотодита-зина // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 2. - С. 105-7.
Шоуа И.Б., Полозкова А.П., Оборотова Н.А. и др. Действие липосомального доксорубицина на клетки линии, экспрессирующие активный pgp170 // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. -Т. 3, № 1. - С. 20-3.
78. Allen T., Brandeis E. Hansen C.B. et al .A new strategy for attachment of antibodies to sterically stabilized liposomes resulting in efficient targeting to cancer cells // Biochim. Biophis. Acta. - 1995. - 1237. - P. 99108.
79. Aragnol D., Leserman L.D. Immune clirence of liposomes inhibited by an anti-Fc receptor antibody in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1986. - 83. - P. 2699-703.
Baryshnikov A.Yu., BaryshnikovaM.A. Immunoliposomes and their targets // Russian J. General Chemistry. - 2013. - 83(12). - P. 2565-70.
Bogdanov A.A., KlibanovvA.L., Torchilin V.P. Protein immobilization on the surface of liposomes via car-bodiimide // FEBS Lett. - 1988. - 231(2). - P. 381-4.
Chikinewa N.A., Smirnova Z.S., Orlova O.L. et al. Creation and characterizationof a liposomal form the antitumor drug ciphelin // Pharmaceutical chemistry Journal. - 2001. - 35(8). - P. 439-41. Derkacheva V.M., Meerovich G.A., Meerovich I.G. et al. Heterooxyaluminium tetra-3-phenyl thiophta-locianin is a new effective photosentizer for phodinamic therapy and fluorescent diagnosis // Bulleten Experimental Biology and Medicine. - 2005. - 139(4). - P. 422-30.
Dua J.S., Rana A.C., Bhandari A.K. Liposome: methods of preparation and applications // International J. of Pharmaceutical Studies and Research. - 2012. - III(II). - P. 14-20.
85. Haran G., Cohen R., Bar L.K. et al. Transmembrane ammonium sulfate gradients in liposome produce efficient and stable entrapment of amphipathic weak bases // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1993. - 1151(2). -P.201-15.
Kaur K., Kaur P., Khan M.U. Liposome as a drug carrier - a revive // International J. of research in pharmacy and chemistry. - 2013. - 3(1). - P. 121-8.
Kirpotin D., Pasrk J.W., Hong K. et al. Sterically stabilized anti-HER2 immunoliposomes: design and tar-getting to human breast cancer cells in vitro // Biochemistry. - 1997. - 36. - P. 66-75. Lukyanov A.N., Elbayoumi T.A., Torchilin V.P. et al Tumor-targed lipisomes: doxrorubicin-loaded long-circulating liposomes modified with anti-cancer antibody // J. Control. Reliase. - 2004. - 100. - P. 135-44.
89. Marujama K., Holmerg E., Kennel S.J. et al. Characterization of in vivo immunoliposome targeting to pulmonary endothelium // J. Pharm. Sci. - 1990. - 79. - P. 978-84.
75.
76.
77.
80.
81.
82.
83.
84.
86.
87.
88.
№ 3/tom 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ AHTH-CD20...
90.
91.
92.
93.
94.
95.
96.
Prabhakara P., Zenia T., Marina K. et al. Preparation and evaluation of lipid vesicles of camptothecin as targeted drug delivery system // Pak. J. Pharm. Sci. - 2013. - 26(4). - P. 779-86.
Torchilin V.P., Levchenko T.S., Lukyanov A.N. et al. p-Nitrophenilcarbonil-PEG-OE-liposomes: fast and simple attachment oof specific ligands, including monoclonal antibodies, to distal ends of PEG chains via p-nitrophenilcarbonil groups // Biochem. Biophis. Acta. - 2001. - 1511. - P. 397-411. Torchilin V.P., Weissig V. Liposomes. A patyikal approach. - Oxford University Press, 2003. - 424 p. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. The involement of apoptosis in melanoma vasculogenic mimicry // Melanoma Research. - 2007. - 17(1). - P. 1-8.
Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. Melanoma vasculogenic mimicry is strongly related to reactive oxygen species level // Melanoma Research. - 2007. - 17(6). - P. 370-9.
Vartanian A.A., Stepanova E.V., Gutorov S.V. et al. Prognostic significance of periodic acid-schiff-positive patterns in clear cell renal carcinoma // The Canadian Journal of Urology. - 2009. - 16(4). - P. 4726-32. Vartanian A.A., Stepanova E.V., Grigorjeva I. et al. VEGFR1 and PKCa signaling control melanoma vasculogenic mimicry in a VGFR2 kinasa-idependent manner // Melanoma Resorch. - 2011. - 21(2). - P. 91-8.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИИ
MKA ЛФМ ИЛМ
- моноканальные антитела
- липосомальная форма митоксантрона
- иммунолипосомальная конструкция митоксантрона
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
24
