CC BY
50
УДК 577.352.2:616-097.3:615.3.014.2
1 1 2 1,2 1' 2
А.А. Матюшин , О.В. Хугаева , М.А. Барышникова , А.О.Райков ' , А.Ю. Барышников ' ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ^5 ИММУНОЛИПОСОМ МИТОКСАНТРОНА IN VITRO
1 Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, Москва
2ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина», Москва Контактная информация
Матюшин Алексей Аркадьевич, к. фарм. н., доцент кафедры общей химии адрес: 105043 Москва, 4 Парковая ул., д.31/8; тел. +7(906)705-75-52 e-mail: foralan79@mail.ru
Статья поступила 21.10.2014, принята к печати 09.02.2015.
Резюме
Разработана иммунолипосомальная конструкция митоксантрона, направленная против CD5+ Т-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Для получения иммунолипосомальной конструкции митоксантрона за основу взяли липосомальную модель, в которой липидное соотношение ФХ : ХОЛ : mPEG2000-DSPE : pNP-PEG3000-lipid составило11 : 9 : 0,95 : 0,05. Очистку иммунолипосомальной конструкции митоксантрона от «свободного» митоксантрона и не связавшихся моноклональных антител проводили методом гель-фильтрации. В среднем на одну липосому приходилось ~16 молекул конъюгированных антител. Иммунолипо-сомы связывались с 88 % антиген+ клеток. В МТТ-тесте показали, что иммунолипосомы, нагруженные миток-сантроном, убивают антиген+ клетки-мишени.
Ключевые слова: иммунолипосомы, моноклональные антитела, митоксантрон, СD5.
1 1 2 1' 2 1' 2 A.A. Matyushin , O.V. Khugaeva , M.A. Baryshnikova , A.O. Raykov ' , A.Yu. Baryshnikov '
DEVELOPMENT AND STUDY OF MITOXANTRONE ANTI-CD5-IMMUNOLIPOSOME IN VITRO
1First Moscow State Medical University
2FSBI "N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center", Moscow Abstract
Immunoliposomal Mitoxantrone against CD5+ T-cell limphoproliferative diseases was developed. Liposomal model with lipid proportion PhCh : Chol : mPEG2ooo-DSPE : pNP-PEGsooo-lipid 11 : 9 : 0,95 : 0,05 was used for immu-noliposome development. We used gel-filtration to remove free Mitoxantrone and unconjugated monoclonal antibody from immunoloposomal construction. One liposome was conjugated with ~16 antibody molecules. Immunoliposomes linked with 8o% of antigen+ cells. Immunoloposomal Mitoxantrone killed antigen+ target cells in MTT-assay.
Key words: immunoliposome, monoclonal antibody, Mitoxantrone, CD5.
Введение
В последнее десятилетие в онкологических клиниках появился новый класс противоопухолевых препаратов - таргетные препараты [29; 73; 74; 87]. Под понятием «таргетные» подразумеваются препараты, нацеленные на определенную молекулу или рецептор, взаимодействие с которым приводит к гибели клеток. К таким препаратам относятся моноклональные антитела (МКА). Последние похожи на чистейшие химические реагенты, т.к. они специфически связываются только с одной молекулой. Первыми МКА, которые можно назвать тар-гетными, были МКА АРО-1, анти-Fas, 1СО-160, 1РО-4 [11; 87; 88; 90-92]. Эти МКА связывались с CD95/Fas рецептором и индуцировали апоптоз. Потом появились таргетные гуманизированные МКА, такие как герцептин, мабтера, авастин и др. [29; 73; 85].
МКА сделали таргетными липосомальные препараты [6]. Если к липосомам присоединить МКА, они доставят загруженный в липосомы препарат непосредственно к молекуле, против которой они направлены [8-10]. Наличие большого разнообразия МКА делает иммунолипосомы уникальным инструментом терапии онкологических заболеваний [6; 17]. В качестве мишеней действия им-мунолипосомальных препаратов могут выступать
любые молекулы и рецепторы, локализованные на поверхностной цитоплазматической мембране опухолевой клетки [16; 86]. Предпочтение отдается антигенам, которые при соединении с МКА пино-цитируются, доставляя липосомы в цитоплазму клетки [37; 77; 78].
Иммунолипосомы осуществляют направленную доставку препаратов к опухолевой клетке. Однако простые пегилированные липосомы сами по себе способны накапливаться в опухолевой ткани [1; 5; 56; 57; 61]. Это обусловлено феноменом «проницаемости и накопления». Суть его в том, что в неоплазме нарушена васкуляризация, вновь образующиеся кровеносные сосуды в опухолевом узле не успевают за ростом самой опухоли [18; 24; 69; 72; 79]. В эндотелии кровеносных сосудов образуются поры размером до 700 нм. В них проникают липосомы и застревают в опухоли [23]. Они накапливаются в основном в окружающей строме, тогда как иммунолипосомы соединяются непосредственно с опухолевой клеткой. Кроме того, для опухоли характерна васкулогенная мимикрия, при которой кровеносные сосуды образуются из опухолевых клеток [93-96].
Липосомы в клетке попадают в лизосомы, в которых высвобождают противоопухолевое вещество [9; 15; 47]. Хороший терапевтический эффект получается при быстром высвобождении препарата
34 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ-СБ5...
в опухоли. Существует множество способов повы- активной загрузки с помощью ионного градиента сить выброс препаратов в опухоль. Среди таких сульфата аммония, рН 5,5 [81]. Для этого 0,4 мл новых препаратов наиболее популярны термолипо- полученных пустых липосом помещали во флакон сомы и рН-зависимые липосомы [75; 76]. вместимостью 10 мл и добавляли МКА ICO-80, Преимущество липосомальных препаратов исходя из мольного соотношения белок/pNP-перед другими заключается в том, что они неток- PEG3000-lipid 1 : 40. Смесь перемешивали и добав-сичны, биодеградируемы и повышают биодоступ- ляли 2,6 мл буфера, содержащего 10 мМ HEPES и ность [2-4; 12; 22; 33-38; 42; 43; 45; 60]. Липосомы 145 мМ NaCl (pH 8,2-8,4) и 3 мл раствора миток-преодолевают лекарственную устойчивость, обу- сантрона (концентрация 2 мг/мл). Конечный объем словленную гиперэкспрессией гена МЛУ [84] или дисперсии составил 6 мл. Далее доводили pH в отсутствием СБ95/Ба8-рецептора [13; 14; 19; 20]. дисперсии 3 М раствором NaOH до значения 8,5-Кроме того, в липосомы можно включать водоне- 8,6 и инкубировали в течение 12 ч при +4 °С и по-растворимые вещества [25; 28; 61]. Этим определя- стоянном перемешивании. Весовое соотношение ется появление большого количества препаратов препарат : липиды составило 0,12 : 1. для ФДТ [26-28; 34; 49; 50; 62-68; 82; 89]. Липосо- мальные препараты изменяют фармакокинетику Измерение диаметра везикул лекарственного вещества и активируют другие ме- Анализ среднего диаметра полученных вези-ханизмы клеточной гибели [21; 39; 44; 54; 55; 81]. кул и оценку их распределения по размерам прово-Липосомальные препараты уже используют- дили с использованием метода корреляционной ся в клинике, однако иммунолипосомальные пре- спектроскопии светорассеяния с помощью прибора параты находятся на стадии доклинического изуче- Nicomp 380 Submicron Particle Sizer. ния [30-33; 40; 41; 46; 48; 58; 70]. Главным препятствием для разработки иммунолипосомальных пре- Получение чистой фракции паратов является отсутствие экспериментальной иммунолипосом модели [71]. Все мишени действия МКА являются Очистку дисперсии от не включившегося в гликопротеидами человеческой природы, и они не везикулы препарата и не присоединившихся МКА реагируют с мышиными аналогами этих антигенов. проводили методом гель-фильтрации. На хромато-Использование ксенографтов человеческих опухо- графическую колонку С10/20, заполненную сефа-лей на голых бестимусных мышах ограничено в дексом G-50 и предварительно уравновешенную связи с тем, что многие антигены утрачиваются на 0,15М р-ром хлорида натрия в течение 1 ч (при клеточной поверхности при росте опухоли у таких скорости 0,3-0,4 мл/мин), наносили 1 мл иммуно-животных. Это является примером одного из спо- липосомальной дисперсии с митоксантроном. В собов ухода опухоли от иммунологического надзо- качестве элюента использовали 0,15М раствор хлора [7]. Учитывая изложенное, многие разработки рида натрия, скорость элюции составляла иммунолипосом заканчиваются экспериментами in 0,5мл/мин и регулировалась перистальтическим vitro [10; 31; 59; 80]. насосом Liposomal Процесс очистки контролиро-Новым направлением использования липо- вали с помощью детектора UVis-920 с длиной вол-сом и иммунолипосом является их применение для ны 215 нм и рекордера REC 111, фиксировавшего создания противоопухолевых вакцин [4; 51-53]. разделение в виде пиков. Захват липосом дендритными клетками или доставка к иммунокомпетентым клеткам позволят уси- Количественное определение лить иммунный ответ на опухолевые антигены [83]. инкапсулированного митоксантрона Целью настоящей работы стало создание Для определения митоксантрона в липосо-иммунолипосом, нагруженных митоксантроном, мальной или иммунолипосомальной дисперсиях которые специфически связываются с клетками, применяли стандартную спектрофотометрическую экспрессирующими Т-клеточный антиген CD5. методику количественного определения вещества с использованием РСО митоксантрона при длине Материалы и методы волны 242±2нм. Исследование влияния вспомогательных веществ на спектральные характеристики Метод получения иммунолипосом митоксантрона показало, что присутствие фосфа-В работе использовали МКА IC0-80, соз- тидилхолина, холестерина, PEG2000DSPE, pNp-данные в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина». Для PEG3000-lipid и криопротекторов (сахарозы, глюко-приготовления липосом использовали метод обра- зы) не изменяет положения характеристического щения фаз. Точные навески яичного фосфатидил- максимума. Измерение оптической плотности холина, холестерина, DSPE-PEG200^ pNp-PEG3000- спиртовых растворов проводили относительно 95% lipid растворяли в 7 мл хлороформа. Смесь перено- этилового спирта в кюветах с толщиной оптическо-сили в круглодонную колбу и упаривали органиче- го слоя 10 мм. ский растворитель на роторном испарителе под Содержание митоксантрона (Х, мг) рассчи-вакуумом при температуре не выше 37±2 °С до об- тывали по формуле: разования липидной пленки. Пленку сушили под вакуумом в течение 40-50 мин. Далее ее гидрати- D х a х C ровали 1,5 мл 125 мМ раствора сульфата аммония X =-, где при постоянном перемешивании до полного исчез- D0 х C0 новения пленки со стенок колбы. Для получения малых однослойных липосом использовали экстру- зионный метод, который основывается на послед^ D - оптическая плотность раств°ра °бразвд; вательном продавливании дисперсии липосом че- D - ^тичесжая птош^тъ ^то^штртш; рез мембранные фильтры «Nuclepore» 0 пор 400; C - величина ^шмения образца; 200 и 100 нм с применением ручного мини- C» ^еличшир^адления рСО шлтгантртна экструдера. Присоединение антител к липосомам и а - навеска РСО ^токжштртш, ш\ включение препарата осуществляли по принципу
№ 1/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ-СБ5... 35
Эффективность включения митоксантрона в гn — n] х 100% липосомы (B, %) рассчитывали по формуле: N0 = —1-, где N2 D1 х C1 Х V1 B = D с V Х 100%' где N0 - процент живых клеток; D х с х у N1 - средняя оптическая плотность лунок, содержащих клетки и препарат; D1 - оптическая плотность раствора фракции с очищен- n2 - средняя оптическая плотность контрольных лунок, ным липосомальн^1м митоксантроном; содержащих только клетки; D - оптическая плотность раствора исходной липосо- п - оптическая плотность лунок, содержащих только мальной дисперсии; митоксантрон. C1 - величина разбавления фракции с очищенным липо- сомальн^1м митоксантроном; Для каждого препарата строили график зави-C - 1иеличина разбавления исходной липосомальной дис- симости «доза - эффект» и определяли ИК50. персии; Статистический анализ проводили с ис-V1 - объем фракции с очищенн^1м липосомальным ми- пользованием программ «BIOSTAT» (Version 3.2), токсантроном, мл; Microsoft Excel, Statisticav.5.0. Различия считали V - объем исходной липосомальной дисперсии, нанесен- статистически достоверными при p<0 02 и p<0 05 ной на колонку, мл. Митоксантрон, холестерин и фосфа- использовали t-критерий Стьюдента, односторон-тидилхолин в составе липосомального препарата опреде- ний и двусторонний точный критерий Фишера ляли хроматографически. Результаты и обсуждение Непрямая РИФ Специфическое связывание иммунолипосом Получение с клетками определяли в непрямой реакции по- иммунолипосомальной конструкции верхностной иммунофлуоресценции. 4 митоксантрона Для проведения реакции 5х10 дважды от- ИЛМ получали согласно методу обращения мытых в pBS клеток инкубировали с 20 мкл неме- фаз, описанному ранее [48]. Для получения иммуно-ченых МКА, иммунолипосомальным митоксантро- липосомальной конструкции митоксантрона за ос- ном, а также пустыми иммунолипосомами, в тече- нову взяли липосомальную модель, в которой ли- ние 30 мин при комнатной те^рэтуре после чего пидное соотношение ФХ : ХОЛ : mPEG2000-DSPE : клетки отмывали PBS цен1..рифугированием в тече- pNP-PEG3000-lipid составило11 : 9: 0,95 : 0,05. Липид-ние 7 мин при I200 об/мин. ный состав иммунолипосом представлен в табл. 1. Затем клетки инкубировали в течение 30 мин Очистку ИЛМ от «свободного» митоксан-при +4 °С с I0 мкл Р(аЬ)2фрагментов кроличьих трона и не связавшихся МКА IC0-80 проводили антител неотш? тшушгаю^отш» мыши (рабочее методом гель-фильтрации. Контроль разделения разведение 1 : 200), меченных FTTC. фракций осуществляли с помощью проточного Посж чего клетки дваскды отмывали %BS й спектрофотометра UVis-920. На выходе регистри-ресуспендировали в pBS, содержащем 1%-ный ровали четкое разделение на три пика, соответст-формалин и 0,1%-ный азид натрия. Результаты ре- вующие чистой фракции ИЛМ (I), не связавшимся акции жшпвпровали на проточном цитофлуори- МКА (II) и буфера HEPES с NaCl (III; рис. 1). Со-метре FACScan. шедшие фракции собирали в стерильные флаконы и подвергали спекторофотометрическому анализу. Оценка Условия хроматографии: колонка: C 10/20 цитотоксической активности (Amersham Biosciences); элюент: 0,15М NaCl; скорость ЛФ митоксантрона ШТ-тестом элюции 0,5 мл/мин; детектор: UVis-920 при 215 нм Для оценки способности иммунолипосом, (Amersham Biosciences); температура колонки - комнат-загруженных митоксактроном, избирательно дос- ная. Скорость движения бумаги в рекордере - 2 мм/мин. тавлять лекарственный препарат к клеткам- ^га^м исследуемые образцы инкубировали с Спектрофотометрическое клетками в течение I часа при +4 C. определение содержания митоксантрона Шок этого ^0™%*™ и оставляли в в иммунолипосомальной конструкции СО2-инкубаторе при +37 C и 5% СО2. Первоначально определяли максимумы по-Контролем служили интактные клетки, ко- глощения спиртовых растворов субстанции СМ и торые инкубировали в тех же условиях. Общее препарата в исследуемых образцах с целью выбора время инкубации составило 24; 48 и 72 ч. За 6 ч до рабочей длины волны. В случае ИЛМ исследовали сжошкшия гшку&щш в кажмую лунку вносили также влияние МКА на спектрофотометрическое раствор МТТ (концентрация 5 мг/мл). определение препарата в везикулах. В качестве По окончании инкубации планшеты центри- растворителя использовали 95 %-ный этиловый фугировали при угловой скорости 1500 об/мин 10 спирт. Оптическую плотность спиртовых растворов мин вд^адот^ жидкость удаляли. СМ, ICO-80-ИЛМ, ЛМ измеряли в диапазоне длин Осадок растворяли в 150 мкл ДМСЮ и по- волн от 200 нм до 700 нм в кюветах с толщиной мещали минеты на 5-7 минут в термостат при оптического слоя 10 мм (относительно 95 %-ного температуре +37 °С. этилового спирта). Полученный спектр поглощения Далее, планшеты встряхивали на шейкере, спиртового раствора СМ, представлен на рис. 2. после чего интенсивность окрашивания измеряли На полученной спектрограмме наблюдается M стжтр^о—шет^ «Titertek Multiscan четыре максимума при 242 нм, 280 нм, 620 нм и MCC/340» при л-530 нм. 673 нм. Спектры поглощения спиртовых растворов Величина поглоЩения прямо лрсшорцгю- ЛМ и ИЛМ по положению максимумов и форме нальна числу живых клеток. Процент живых кле- кривой были идентичны спектру спиртового рас- ток вычисляли по формуле: твора СМ (рис. 3 и 4).
№ 1/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
Таблица 1
Липидный состав анти-С'Р5 иммунолипосомального митоксантрона
Состав Молярное соотношение Молекулярный вес, г/моль Концентрация, мг/мл % мол.
Фосфатидилхолин 11 76o,o9 57 52,38
Холестерин 9 386,7o 23,7 42,86
mPEG2ooo-DSPE o,95 28o5,o5 18,2 4,52
pNP-PEG^ooo-lipid o,o5 34oo 1,1 o,24
Е =16,65
Таблица 2
Влияние липосомальной формы, иммунолипосомальной конструкции и субстанции митоксантрона на жизнеспособность клеток линии .Гигка1
ЛФ Концент рация митоксантрона, мг/мл
o,1 | o,o25 o,oo6 | o,oo156 | o,ooo39 | o,oooo97
Количество живых клеток, %
СМ 2o±3 22±1 22±3 23±2 34±5 51±4
ЛМ 48±2* *** 49±4* *** 53±4* 79±5* 86±8* 98±3*
ГСО^-ИЛМ 35±2** *** 36±1** *** 5o±7** 73±8** 86±14** 87±12**
*р<0,02 по отношению к СМ; **р<0,02 для ИЛМ по отношению к СМ; ***р<0,02 для ЛМ по отношению к ИЛМ
Рис. 1. Хроматограмма очистки 1СО-80-ИЛМ от не свя- Рис. 2.Спектрограмма спиртового раствора СМ. завшихся МКА и препарата:
I - фракция очищенных ИЛМ; II - МКА 1С0-80; III - буфер НЕРЕБ с №С1.
о.е
0.5
0.4
и
< 0.3 о.г 0.1 о.о
Wavelength (rim)
Рис. З.Спектрограмма спиртового раствора J1M.
Рис. 4.Спекгрограмма спиртового раствора 1С080-ИЛМ.
о.е
Ч
400 500 600
Wavelength <nm>
400 GOO GOD
WdveTonoth ;nm)
Рис. 5. Спектрограмма спиртового раствора пустых липосом.
700 800
Рис. 6. Спектрограмма спиртового раствора 1СО-80.
10° 101 10а 10э
Рис. 7. Анализ специфического связывания 1С0-80-ИЛМ с клетками линии 1игка1 методом проточной цитоф-луориметрии:
А - неокрашенные клетки; Б - клетки, инкубированные с МКА 1С0-80; В - клетки, инкубированные с ЛМ;
Г - клетки, инкубированные с ИМЛ и Б(аЬ)2, меченными Б1ТС.
100
0,02
0,04 0,06 , 0,08
концентрация митоксантрона, мг/мл
ОД
-субстанция мнтоксантрона,72ч лнпосомальный мнтоксантрон, 72ч
-пустые липосомы, 72ч
-нммунолипосомальный мнтоксантрон, 72ч
Рис. 8. Цитотоксический эффект различных лекарственных форм митоксантрона в отношении клеток 1игка1;.
Рис. 9. Сравнение значений ИК50 субстанции митоксантрона, липосомального и иммунолипосомального митоксантрона на клеточной линии 1игка1
38 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ АНТИ-СВ5...
В качестве аналитической выбрали длину Оценка волны, на которой пик митоксантрона был наибо- цитотоксической активности лее выраженным и узким. иммунолипосомальной конструкции Такой пик отмечали при длине волны 242 митоксантрона in vitro нм. Для исследования потенциального влияния Оценку цитотоксического действия полу-МКА ICO-80, используемых в качестве векторов, и ченных иммунолипосом проводили в МТТ-тесте. В компонентов липосом на спектральные характери- исследовании использовали очищенную ИЛМ, ЛМ, стики митоксантрона, прописывали максимумы СМ, а также пустые иммунолипосомы. поглощения спиртовых растворов ICO-80, а также Разведения пустых иммунолипосом готови-пустых липосом в диапазоне длин волн от 200 нм ли исходя из концентрации липидов в ИЛМ. до 700 нм. Перед проведением теста все образцы под-Пустые липосомы получали из фосфатидил- вергали стерилизующей фильтрации через мем-холина, холестерина, тРЕ02000-Б8РБи pNP- бранные фильтры с низкой сорбцией белка. PEG3000-lipid в молярном соотношении 11 : 9 : Каждый препарат исследовали в 6 концен-0,95 : 0,05. Затем их разбавляли в 20 раз буфером из трациях, каждое разведение ставили в триплете. В 10мМ HEPES и 145мМ NaCl (pH 8,4). контрольные лунки с клетками добавляли по 20 Оптическую плотность спиртовых растворов мкл чистой среды RPMI-1640. МКА и липосом измеряли в кюветах с толщиной По результатам теста строили кривые выжи-оптического слоя 10 мм относительно спирта. ваемости клеток и определяли концентрацию, при Полученные спектрограммы представлены которой происходит гибель 50 % клеток (ИК50). на рис. 5 и 6. Степень включения митоксантрона в В таблю 2 представлена зависимость количе-иммунолипосомы составила 95±5 %. ства живых клеток от концентрации митоксантрона в культуре клеток Jurkat после 72-часового инку-Определение количества МКА ICO-80, бирования. связанных с поверхностью липосом Субстанция митоксантрона и обе липосо-Среднее количество белка во всей очищен- мальные лекарственные формы оказывали дозо-ной фракции пустых ICO-80-ИЛМ составило 0,107 зависимый эффект. мг. Из литературных данных известно, что одну Однако липосомальные препараты убивали липосому 0100 нм составляют 100 000 молекул ли- меньшее количество клеток по сравнению с суб-пидов [48; 70], то на липосому 0 150 нм приходится станцией. 150 000 молекул липидов. На рис. 8 представлены результаты 72 часов Если учесть, что средняя молекулярная мас- инкубации ICO-80-ИЛМ, ЛМ, СМ и пустых липосом са липидов составляет 760 Да, а молекулярная мас- с клетками линии Jurkat. са иммуноглобулинов IgG3 - 170 000 Да, то, зная Нижняя кривая, которая соответствовала соотношение фосфолипидов и белка в полученном группе клеток, инкубированных с субстанцией ми-препарате, можно вычислить, сколько молекул ан- токсантрона, показала самый низкий процент вы-тител приходилось на одну липосому: живших клеток. Верхняя кривая соответствует пустым липо-т х n сомам, которые в исследованном диапазоне кон- N =-—, где центраций не проявляют цитотоксический эффект. M ICO-80-ИЛМ проявила более высокий цитотокси- ческий эффект, чем ЛМ, в концентрациях N - число молекул, 0,025мг/мл и 0,1мг/мл он составил 36 и 35 %, а для m - масса вещества, взятого согласно методике приго- ЛМ - 49 и 48 % соответственно. товления ИЛМ, Средняя величина ИК50 в группе клеток, инку-М - молекулярная масса вещества. бированных с ICO-80-ИЛМ, составила 0,006±0,002 мг/мл, с ЛМ - 0,02±0,004 мг/мл и с СМ - 9х10-Таким образом, в среднем на одну ICO-80- 5±0,2х10-5 мг/мл (рис. 9). ИЛМ приходилось ~ 16 молекул конъюгированных Были выявлены достоверные различия зна-антител чений ИК50 в группах ICO-80-ИЛМ, ЛМ и СМ (р<0,05). Оценка специфического связывания Таким образом, иммунолипосомы более эф-иммунолипосом с клетками-мишенями фективны по сравнению с липосомальным миток-При создании анти-CD5-ИМЛ использовали сантроном. МКА ICO-80 против Т-клеточного антигена CD5 [6]. Эти МКА специфически реагировали с CD5- положительными клеточными линиями, Т-лимфо- Заключение цитами периферической крови здоровых доноров и Т-клеточными лейкозами и лимфомами. Разработана иммунолипосомальная конст-Для оценки способности иммунолипосом из- рукция митоксантрона, направленная против CD5+ бирательно связываться с клетками-мишенями бы- Т-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. ла использована Т-клеточная линия Jurkat. Оценку Соотношение липидов в данной конструкции со-специфического связывания проводили с помощью ставило ФХ : ХОЛ : mPEG2000-DSPE : PNP-PEG3000-непрямой РИФ. lipid составило11 : 9 : 0,95 : 0,05. В популяции клеток линии Jurkat выявлено На одну липосому в среднем приходилось 16 98 % CD5+ клеток-мишеней (рис. 7). При инкуба- молекул антител ICO-80. ции с липосомальной формой митоксантрона спе- Иммунолипосомы связывались с антиген-цифическое связывание не отмечали. положительными клетками, и в МТТ тесте было После инкубации клеток с иммунолипосо- показано, что иммунолипосомальный митокснтрон мальной конструкцией митоксантрона регистриро- обладал большей цитотоксичностью по сравнению вали связывание с 88 % клеток (рис. 7). с липосомальной формой.
№ 1/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
Литература
1. Алексеева А.С., Апкаева М.Р., Щегловитова О.Н. и др. Специфическое связывание и накопление в эндотелиальных клетках цитотоксических липосом с лигандом селектинов сиалил-Люис-Х // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, №1. - С. 58.
2. Альбассит Б., ЗангиеваМ.Т., БарышниковаМ.А. и др. Липосомальный противоопухолевый препарат ОР-2011 из класса нитрозомочевины для лечения меланомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 59.
3. Альбассит Б., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка липосомальной лекарственной формы нового соединения из класса нитрозоалкилмочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т.12, №2. - С. 5.
4. Афанасьева Д.А., Барышникова М.А., Соколова З.А., Косоруков В. С. Разработка липосомальной конструкции, содержащей лизат опухолевых клеток // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. -Т. 12, № 2. - С. 5.
5. Балаев А.Н., Осипов В.Н., Федоров В.Е. и др. Синтез и изучение цитотоксической активности аналогов гипоталамического гормона соматостатина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. -Т. 11, № 4. - С. 47-53.
6. Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека // Гематология и трансфузиология. - 1990. - № 8. - С. 4.
7. Барышников А.Ю. Взаимодействие опухоли и иммунной системы организма // Практическая онкология. - 2003. - Т. 4, № 3. - С. 127-30.
8. Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов// Вестник РАМН. - 2012. - № 3. - С. 23-30.
9. Барышников А.Ю., Барышникова М.А. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И.Менделеева 2012. - Т.ЬУ1, № 34. - С. 60-7.
10. Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. Иммунолипосомы - новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 4.
11. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Программированная клеточная смерть (апоптоз) // Российский онкологический журнал. - 1996. - № 1. - С. 58.
12. Барышникова М.А., Альбассит Б., Сапрыкина Н.С. и др. Противоопухолевая активность нового соединения из класса нитрозомочевин // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2.
- С. 8.
13. Барышникова М.А., Грищенко Н.В., Бурова О.С. и др. Роль СБ95/Ра5 рецептора в индукции апоптоза противоопухолевыми препаратами // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. -С. 3-8.
14. Барышникова М.А., Грищенко Н.В., Полозкова А.П. Влияние лекарственных форм аранозы на индукцию апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 64.
15. Барышникова М.А., Зангиева М., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных капсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
16. Блохин Д.Ю., Чмутин Е.Ф., Иванов П.К. Молекулярные мишени для противоопухолевой терапии: факторы роста, ангиогенеза и апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3. - С. 25-30.
17. Боценовский В.А., Барышников А.Ю. Молекулы клеточной адгезии // Успехи современной биологии.
- 1994. - Т. 114, № 6. - С. 741.
18. Григорьева И.Н., Харатешвили Т.К., Барышников А.Ю. Васкулогенная мимикрия: альтернативный механизм кровоснабжения опухоли? // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3.
- С. 25-30.
19. Грищенко Н.В., Барышникова М.А., Полозкова А.П. и др. Липосомальные противоопухолевые препараты не используют СБ95-зависимый сигнальный путь апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
20. Грищенко Н.В., Альбассит Б., Барышникова М.А.,и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм противоопухолевых препаратов из класса нитрозомочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 49-54.
21. Гулякин И.Д., Санарова Е.В., Ланцова А.В. и др. Разработка наноструктурированной модели лекарственной формы производного индолкарбазола - ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал.
- 2014. - Т. 13, № 1. - С. 78.
22. Гулякин И.Д., Николаева Л.Л., Санарова Е.В. и др. Применение фармацевтической технологии для повышения биодоступности лекарственных веществ // Российский биотерапевтический журнал. -2014. - Т. 13, № 3. - С. 101-8.
23. Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г.А. и др. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 2.
- С. 45-9.
24. Дедов И.И., Шестакова М.В., Кочемасова Т.В. и др. Дисфункция эндотелия в развитии сосудистых осложнений сахарного диабета (проблемная статья) // Российский физиологический журнал. им. И.М. Сеченова. - 2001. - Т. 87, № 8. - С. 1073-84.
25. Дмитриева М.В., Оборотова Н.А., Санарова Е.В. и др. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. - С. 21-7.
26. Дмитриева М.В., Оборотова Н.А., Орлова О.Л. и др. Липосомальная лекарственная форма борхло-рина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
27. Дмитриева М.В., Полозкова А.П., Оборотова Н.А. и др. Качественный анализ липосомальной лекарственной формы борхлорина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 81.
28. Дрожжина В.В., Осипчук Ю.С. Сравнительный анализ противоопухолевой активности фотосенсибилизаторов боринового хлорина и «борхлорина липосомального лиофилизата» после фотодинамической терапии саркома М-1 крыс // Российский биотерапевтический журнал. -2014. -Т. 13, № 3. - С. 45-50.
29. Зейналова К.Р., Вишневская Я.В., Ганьшина И.П. Транстузумаб в комбинации с доцетакселом и кар-боплатином в неоадъюваниной терапии местнораспространенного рака молочной железы (клинико-морфологическое исследование) // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8, № 3. - С. 103-6.
30. Зангиева М.Т., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка состава пространственно стабилизированных иммунолипосом, направленных против Her-2 рецептора // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 85.
31. Зангиева М.Т., Игнатьева Е.В., Косоруков В. С. Оценка эффективности включения доксорубмцина в иммунолипосомы, направленные против Her-2 рецептора // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 31.
32. Зангиева М.Т., Игнатьева Е.В., Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Разработка оптимального состава пространственно стабилизированных липосом, нагруженных доксорубицином // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 18.
33. Зангиева М.Т., Матюшин А.А., Соколова Д.В. и др. Разработка и исследование иммунолипосомаль-ных конструкций in vitro // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 2. - С. 19-28.
34. Истомин Ю.К., Артемьева Т.П., Александров Е.Н., Церковский Д.А. Сонодинамическая и соно-фотодинамическая терапия злокачественных опухолей с использованием фотосенсибилизаторов // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 119-28.
35. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Полозкова А.П., Оборотова Н.А. Разработка наноструктурирован-ной лекарственной формы аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. -С. 24.
36. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Афанасьева Д. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 24.
37. Кортава М.А., Палкина Т.Н., Толчева Е.В. и др. Подходы к созданию иммунолипосом на примере доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 1. - С. 6.
38. Коняева О.И., Кульбачевская Н.Ю., Ермакова Н.П. и др. Доклиническое изучение общетоксического действия лиофилизированной липосомальной формы тиосенса (ЛЛЛФТ) // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 43.
39. Котова Е.А., Смирнова З.С., Краснюк И.И. и др. Противоопухолевое действие липосомальной формы цифелина на лейкоз Р-388 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 46.
40. Краснопольский Ю.М., Балабаньян В.Ю., Шаболов Д.Л., Швец В.И. Липосомальные лекарственные препараты в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 48.
41. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Щвец В.И., Щахмаев А.Е. Липосомальные препараты для вспомогательной терапии в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 3. - С. 29.
42. Кульбачевская Н.Ю., Коняева О.И., Дмитриева М.В., Оборотова Н.А. Изучение «острой» токсичности липосомальной лекарственной формы борхлорина // Российский биотерапевтический журнал. -2014. - Т. 13, № 3. - С. 51-6.
43. Кульбачевская Н.Ю., Коняева О.И., Ермакова Н.П. и др. Изучение «хронической» токсичности лио-филизированной липосомальной лекарственной формы тиосенса на крысах // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 30.
44. Ланцова А.В., Барышникова М.А., Санарова Е.В. и др. Изучение в системе in vitro наноструктуриро-ванной лекарственной формы лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 31.
45. Ланцова А.В., Сапрыкина Н.С., Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Противоопухолевая активность наноструктурированной формы лизомустина на мышах с солидной опухолью меланома В-16 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 52.
46. Левачева И.С., Барышникова М.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов липосо-мами // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 32.
47. Матюшин А.А., Барышникова М.А., Барышников А.Ю., Караулов А.В. Липосомы: организм, опухоль, клетка // Физиология и патология иммунной системы. Иммунофармакогеномика. - 2013. - Т. 17, № 6. - С. 3-10.
48. Матюшин А.А., Хугева О.В., Барышникова М.А. и др. Получение и изучение анти-CD20 иммунлипо-сомального митоксантрона in vitro // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 2. -С.15-24.
49. Меерович И.Г., Оборотова Н.А. Применение липосом в фотохимиотерапии: 1. Липосомы в ФДТ // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 3-8.
50. Меерович И.Г. Мицеллярный фотосенсибилизатор на основе 4,5-октакис(децилио)-3,6-октахлоррофталоцианина цинка Октосенс // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 41-44.
51. Михайлова Т.В, Барышникова М.А., Клименко О.В. и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 62-6.
52. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Багирова Н.С. и др. Стерилизация многослойных протеолипосом // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 1. - С. 9-12.
53. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Бурова О.С. и др. Сравнение экспрессии hsp70 на клеточных линиях меланомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 1. - С. 43-8.
54. Моисеева Е.В., Кузнецова Н.Р., Аронов Д.А. и др. Противоопухолевое действие липосом с липофиль-ным пролекарством комбретастатина A4 на модели острого Т-клеточного лейкоза мышей // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 3-10.
55. Моисеева Е.В., Кузнецова Н.Р, Ситников Н.С. и др. Противоопухолевый эффект наноразмерных ли-посом с липофильным пролекарством комбретастатина А4 на мышиной модели острого Т-лейкоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 36.
56. Оборотова Н.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов // Антибиотики и химиотерапия. - 1991. - Т. 36, № 10. - С. 47.
57. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 5. - С. 30.
58. Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.
59. Оборотова Н.А. Основные проблемы создания лекарственных форм противоопухолевых препаратов для внутривенного введения // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - № 2. - С. 27-31.
60. Оборотова Н.А., Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов // Российский химический журнал. - 2012. - № 3-4. - С. 33-40.
61. Оборотова Н.А., Смирнова З.С., Полозкова А.П., Барышников А.Ю. Фармацевтические аспекты разработки липосомальных лекарственных форм для внутривенного введения гидрофобных цитостати-ков // Вестник РАМН. - 2002. - № 1. - С. 42-5.
62. Осипчук Ю.С., Дрожжина В.С. Фотодинамическая терапия саркомы М-1 крыс с использованием нового фотосенсибилизатора борхлорин липосомальный лиофилизат // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 4. - С. 47-50.
63. Санарова Е.В., Оборотова Н.А., Смирнова З.С. и др. Применение липосомальных систем доставки для создания нового эффективного противоопухолевого фотосенсибилизатора // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 72.
64. Санарова Е.В., Ланцова А.В., Дмитриева М.В. и др. Фотодинамическая терапия - способ повышения селективности и эффективности лечения опухолей // Российский биотерапевтический журнал. -2014. - Т. 13, № 3. - С. 109-18.
65. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Макарова О.А. и др. Доклиническое изучение липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 40-45.
66. Смирнова З.С., Меерович И.Г., Лукьянец Е.А. и др. Фенилтиозамещенные фталоцианины - новые фотосенсибилизаторы ближнего инфракрасного диапазона // Российский биотерапевтический журнал. -2004. - Т. 3, № 1. - С. 54-60.
67. Смирнова З.С., Оборотова Н.А., Макарова О.А. и др. Эффективность и фармакокинетика липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора «Фотосенс» на основе сульфафталоцианина // Химико-фармацевтический журнал. - 2005. - Т. 39, № 7. - С. 3-7.
68. Смирнова З.С., Санарова Е.В., Борисова Л.М. и др. Противоопухолевая активность фотодинамической терапии с липосомальной лекарственной формой тиосенса на перевиваемых опухолях мышей // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, №4. - С. 56-60.
69. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Абрамов М.В. и др. Ингибиторы ангиогенеза растительного происхождения: перспективы использования в клинической онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 4. - С. 3-10.
70. Соколова Д.В., Тазина Е.В., Кортава М.А. и др. Анти-МиС-1 иммунолопосомальная конструкция доксорубицина для направленной доставки в опухоль // Российский биотерапевтический журнал. -2011. - Т. 10, № 3. - С. 99-103.
71. Соколова Д.В., Трещалина Е.М., Андронова Н.В. и др. Модели для доклинического изучения in vivo противоопухолевой активности таргетных препаратов против антигена MUC-1 // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 3. - С. 55-60.
72. Степанова Е.В., Абрамов М.Е., Личиницер М.Р. Перспективы использования ингибиторов NFKB в клинической практике // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 4. - С. 27-30.
73. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии. - Т. 120, № 6. - С. 599.
74. Степанова Е.В., Зейналова К.Р. Механизм резистентности к транстузумабу // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3. - С. 3-8.
75. Тазина Е.В., Оборотова НА. Селективная доставка препаратов в опухоль с помощью термочувствительных липосом и локальной гипертермии // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. - Т. 7, № 3. - С. 4-12.
76. Тазина Е.В., Мещерякова В.В., Игнатьева Е.В. и др. Биофармацевтические исследования термочувствительной липосомальной лекарственной формы доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8, № 1. - С. 40-7.
77. Толчева Е.В., Оборотова Н.А. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 1. - С. 54-61.
78. Толчева Е.В., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-СБ5-иммунолипосомы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к СБ5+клеткам // Российский биотерапевтический журнал. - 2005. - Т. 4, № 4.- С. 38-43.
79. Франциянц Е.М., Комарова Е.Ф., Верескунова М.И. Состояние некоторых маркеров ангиогенеза и пролиферации в ткани опухолей репродуктивной системы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 58.
80. Хугаева О.В., Кортава М.А., Зангиева М.Т. и др. Химико-фармацевтические исследования липосомальной формы митоксантрона // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. - С. 41-6.
81. Хугаева О.В., Яворская Н.П., Голубева И.С. и др. Сравнительное изучение противоопухолевой активности различных лекарственных форм митоксантрона // Российский биотерапевтический журнал. -2010. - Т. 9, № 3. - С. 51-4.
82. Чан Тхи Хай Иен, Поздеев В.И., Меерович Г.А. и др. Липосомальная лекарственная форма фотодита-зина // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. -Т. 9, № 2. - С. 105-7.
83. Чкадуа Г.З., Заботина Т.Н., Буркова А.А. и др. Адаптирование методики культивирования дендритных клеток человека из моноцитов периферической крови для клинического применения // Российский биотерапевтический журнал. - 2002. - Т. 1, № 3. - С. 55-61.
84. Шоуа И.Б., Полозкова А.П., Оборотова Н.А. и др. Действие липосомального доксорубицина на клетки линии, экспрессирующие активный pgp170 // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. -Т. 3, № 1. - С. 20-3.
85. Якушева Т.А., Когония Л.М., Федотов А.И. и др. Авастин в лечении метастатического колоректаль-ного рака // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 4. - С. 35-9.
86. Baryshnikov A. Yu., Baryshnikova M.A. Immunoliposomes and their targets // Russian J. General Chemistry. - 2013. - 83(12). - P. 2565-70.
87. Baryshnikov A.Yu., Polosukhina E.R. Tupitsin N.N. et al. CD95 (Fas/APO-1) antigen is a new prognostic marker of blast cells of acute lymphoblastic leukaemia patients / Book Editor(s): Kaspers, GJL; Pieters, R; Veerman, AJP. Drug Resistence in Leukemia and Lymphoma III Book Series: Advances in Experimental Medicine and Biology. 1999. - Vol.: 457. - P. 251-8.
88. Baryshnikov A.Yu., Polosukhina E.R., Zabotina T.N. et al. FAS(APO-1/CD95) antigen: new activation marker for evaluation of the immune status // Russian Immunological J. - 1997. - 2(2). - P. 115.
89. Derkacheva V.M., Meerovich G.A., Meerovich I.G. et al. Heterooxyaluminium tetra-3-phenyl thiophta-locianin is a new effective photosentizer for phodinamic therapy and fluorescent diagnosis // Bulleten Experimental Biology and Medicine. - 2005. - 139(4). - P. 422-30.
90. Polosukhina E.R., Zabotina T.N., Shishkin Yu.V. et al. Studing of Fas(APO-1/CD95) antigen expression by flow cytometry with monoclonal antibodies IPO-4 // Experimental Oncology. - 1997. - 19(3). - P. 206-11.
91. Polosukhina E.R., Baryshnikov A.Yu., Shishkin Yu.V. et al. Expression of antigen CD95(Fas/APO-1) mediating apoptosis in hemoblastosis using monoclonal antibodies ICO-160 // Hematology and transfusiology. -2000. - 45(4). - Р. 3-6.
92. Sokolovskaya A.A., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu. et al. Comparative analysis of apoptosis induced by various anticancer drugs in Jurkat cells // Experimental Oncology. - 2000. 23(1). - P. 46-50.
93. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. The involvement of apoptosis in melanoma vasculogenic mimicry // Melanoma Research. - 2007. - 17(1). - P. 1-8.
94. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. Melanoma vasculogenic mimicry is strongly related to reactive oxygen species level // Melanoma Research. - 2007. - 17(6). - P. 370-9.
95. Vartanian A.A., Stepanova E. V., Gutorov S. V. et al. Prognostic significance of periodic acid-schiff-positive patterns in clear cell renal carcinoma // The Canadian Journal of Urology. - 2009. - 16(4). - P. 4726-32.
96. Vartanian A.A., Stepanova E.V., Grigorjeva I. et al. VEGFR1 and PKCa signaling control melanoma vasculogenic mimicry in a VGFR2 kinasa-idependent manner // Melanoma Research. - 2011. - 21(2). - P. 91-8.
