CC BY
44Описание инновационной разработки
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ХЛАМИДИЙНЫХ ИНФЕКЦИЙ У СВИНЕЙ С ПОМОЩЬЮ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО МЕТОДА
Авторы разработки: Коваленко А.М., Сапегин В.М., Жабина.,
Писаренко В. Ф., Левицкая И. Л.
Дифференцировать хламидиозы можно с помощью серологических реакций, иммуноферментного анализа и молекулярно-генетических методов, но невозможно только лишь с помощью культурального, серодиагностики и аллергологического методов своевременно и точно выявить инфицированных возбудителями хламидиозов животных.
Генетические исследования связаны с анализом полиморфизма длины рестрикционных фрагментов хромосомной ДНК хламидий, ДНК - гибридизации, наличию и свойствами плазмид.
Современная классификация основывается на генетическом анализе (секвенировании ДНК хламидий). Согласно современным подходам геносистематики для описания бактериальных таксонов на уровне видов, родов, классификация хамидий и хламидиоподобных микроорганизмов базируется на наличии >95% гомологии в нуклеотидной последовательности генов 16S и 23S рРНК для всех представителей рода и >90% семейства.
Разработанная нами ПЦР тест-система (Хлами-суис БелГСХА) предназначена для диагностики хламидиозов свиней с помощью молекулярно-генетического метода позволяет детектировать Chlamydiaceae и дифференцировать возбудителей хламидиозов свиней до вида (Chl. psittaci, Chl. pneumoniae, Chl. suis, Chl. pecorum). Существующие аналогичные тест-системы для ПЦР-диагностики позволяют детектировать возбудителей хламидиозов только до семейства (Хла-ком пр-ва ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) или детектировать лишь один вид (Chlamydophila psittaci Хла-псит пр-ва ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Chlamydophila pneumoniae АмплиСенс ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора и т. д.).
Разработанные схемы семейсвенно- и видоспецифической диагностики хламидиозов на основе собственных (оригинальных) праймеров позволила идентифицировать соответственно до семейства и вида принадлежность хламидий, сенсибилизирующих у свиней. В первом раунде амплификации получали семейсвенноспецифический продукт. Во втором раунде амплификации использовали этот продукт в качестве матрицы и получали видоспецифические продукты, которые разделяли в агарозном геле.
Разработанная нами ПЦР тест-система позволяет:
• проводить быструю детекцию возбудителей хламидиозов свиней.
• обладает высокой специфичностью (позволяет детектировать возбудителей до вида).
• имеет высокую чувствительность (позволяет обнаружить единичные молекулы или обрывки ДНК хламидий).
Сравнительная характеристика с существующими отечественными и зарубежными аналогами
Сравнительное изучение специфичности и чувствительности ПЦР тест-системы «Хлами-суис БелГСХА» в сравнении с существующими аналогами производства ФГУ ЦНИИЭ Хла-ком, Хла-псит, АмплиСенс, а также ИФА производства ЗАО Вектор-Бест ХламиБест-1§0 и ИФА-Хламидия-1§0 представлены в таблице 1. Пробы клинического материала отбирали со слизистых оболочек влагалища, конъюнктивы глаз от маточного свинопоголовья с клиническими признаками хламидиоза (длительные перегулы, аборты, эндометриты) в ООО «Белгранкорм» пр-во «Шебекинская свинина». Исследования проб проводили совместно с сотрудниками Белгородской межобластной ветеринарной лаборатории.
Таблица 1. Результаты специфичности и чувствительности исследуемых тест-систем для выявления свиней инфицированных возбудителями хламидиозов
№ пробы/ ИН свиноматки ПЦР тест-системы ИФА тест-системы
Авторская ПЦР тест-система «Хлами-суис БелГСХА» ХЛА-КОМ ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора ХЛА-ПСИТ ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора АмплиСенс ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора ХламиБест- IgG ЗАО Вектор-Бест ИФА- Хламидия- IgG ЗАО Вектор- Бест
Chlamydiaceae Chl. psittaci и 'В 0 1 ё о hl C Chl. sius С u iu s. hl C Chlamydiaceae (семейственно- специфическая) Chl. psittaci Chl. pneumoniae Chl. psitt aci Chl. pneum oniae Chl. suis-trachomatis
1/4817 + + - - - + + - - - -
2/4852 + - + - - + - + - + -
3/4515 + - + - - + - + - + -
4/4361 + - + - - + - + - + -
5/3265 + - + - - + - + - - -
6/5286 + - + - - + - + - - -
7/4596 + - + - - + - + - - -
8/6028 - - - - - -
9/6011 + + - - - + + - - - -
10/4851 + - + - - + - + - + -
11/3987 - - - - - -
12/4486 + - + - - + - + - + -
13/4313 + - + - - + - + - + -
14/4789 + - + - - + - + - - -
15/4956 + - - + - + - - - - +
16/4555 - - - - - -
17/3989 - - - - - -
18/5997 + + - - - + + - + - -
19/4861 + - + - - + - + - + -
20/5223 + - - - + + - - - - -
Разработанная нами ПЦР тест-система «Хлами-суис БелГСХА» позволяет выявить животных инфицированных Chl. suis. По остальным показателям были получены идентичные результаты в сравнении с коммерческими ПЦР тест-системами ХЛА-КОМ (16 положительных и 4 отрицательных пробы), ХЛА-ПСИТ (3 положительных и 17 отрицательных проб) и АмплиСенс (11 положительных и 9 отрицательных проб) производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора. Однако, ИФА тест-система ХламиБест-IgG ЗАО Вектор-Бест в сравнении с ПЦР тест-системами показала несколько ложноотрицательных результатов (2) при детекции Chl. psittaci (1 положительная проба и 19
отрицательных) и Chl. pneumoniae (7 положительных и 13 отрицательных результатов). ИФА тест-система ИФА-Хламидия-IgG ЗАО Вектор-Бест показала одинаковые результаты с существующими ПЦР тест-системами (1 положительная и 19 отрицательных проб).
Таким образом, только разработанная нами ПЦР тест-система «Хлами-суис БелГСХА» позволяет выявить животных, инфицированных возбудителями Chl. suis.
