CC BY
84
СРАВНЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ РАЗРАБОТАННОЙ ПЦР-ТЕСТ-СИСТЕМЫ С КОММЕРЧЕСКИ ДОСТУПНЫМИ АНАЛОГАМИ
В.М. Сапегин, А.М. Коваленко
Аннотация. Приведено сравнение чувствительности и специфичности разработанной ПЦР-тест-системы «Хлами-суис» для семейственно- и видоспецифической детекции возбудителей хламидийных инфекций свиней с коммерчески доступными аналогами «Хла-ком» и «Хла-псит» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора).
Ключевые слова: ПЦР, тест-система, хламидии, хламидиозы, свиньи.
Борьба с хламидийными инфекциями (хламидиоза-ми) свиней является одной из наиболее актуальных проблем современного промышленного свиноводства. В настоящее время хламидиозы свиней широко распространены как в России, так и в странах ближнего и дальнего зарубежья. В большинстве свиноводческих хозяйств наличие хламидийных инфекций связано с невозможностью своевременного диагностирования и, как результат, отсутствием своевременного применения надежных профилактических средств.
В настоящее время наиболее перспективным методом прямой диагностики хламидиозов считается метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Однако разработаны ПЦР-тест-системы только для семейственноспецифической диагностики возбудителей хламидийных инфекций, в то время как зачастую возникает необходимость в видоспецифической индикации возбудителей хламидиозов. Данный факт послужил основанием для разработки ПЦР-тест-системы для дифференциальной детекции возбудителей хламидиозов свиней (Chlamydophila psittaci, Chlamydophila pecorum, Chlamydophila abortus, Chlamydia suis). Данные исследования являются завершающим этапом разработки ПЦР-тест-системы «Хлами-суис».
Проводили исследования по изучению чувствительности и специфичности разработанной нами ПЦР-тест-системы «Хлами-суис» (ФГБОУ ВПО Белгородская ГСХА) в сравнении с коммерчески доступными аналогами — «Хла-ком» и «Хла-псит» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) на клиническом материале, полученном от свиноматок с клиническими признаками присущими хламидийным инфекциям ООО «Белгран-корм» производство «Томаровская свинина». Для исследования методом ПЦР использовали совмещенные образцы (влагалищные смывы и конъюнктивальные соскобы). Исследования проводили в ПЦР-лаборатории НПК Синтол (г. Москва).
Семейственноспецифическая амплификация образцов выделенной ДНК с помощью ПЦР-тест-системы «Хлами-суис» выявила ДНК хламидий в 21 (46%) пробе, в то время как с помощью «Хла-ком» — в 16 (36%) пробах, что на 5 (10%) проб меньше. При визуализации продуктов амплификации, полученных с помощью ПЦР-тест-системы «Хлами-суис», наблюдали более яркие полосы, чем при визуализации ампликонов, полученных с помощью ПЦР-тест-системы «Хла-ком». Результаты визуализации гель-электрофорезом полученных ампликонов свидетельствуют о более высоком накоплении целевой последовательности ДНК при использовании ПЦР-тест-системы «Хлами-суис». Полученные результаты свидетельствуют о более высокой чувствительности разработанной нами ПЦР-тест-системы «Хлами-суис».
ПЦР-анализ образцов клинического материала как с помощью «Хла-псит», так и «Хлами-суис» позволил выявить 6 (13%) проб с нуклеотидными последовательностями специфичными Chlamydophila psittaci. Полу-
ченные результаты совпадали с результатами семейственноспецифических амплификаций, полученных с помощью «Хлами-суис» и «Хла-ком».
Результаты видоспецифической амплификации с использованием ПЦР-тест-системы «Хлами-суис» позволили обнаружить генетический материал Chlamydophila pecorum в 5 (11%) и Chlamydophila suis — в 13 (29%) пробах. Соответственно,
Chlamydophila abortus был детектирован в 6 (13%) проб. Результаты видоспецифической амплификации Chlamydophila pecorum, Chlamydophila suis и Chlamydophila abortus совпадали с результатами семейственноспецифической амплификации, полученными в первом раунде гнездовой ПЦР, что свидетельствует о высокой чувствительности и специфичности разработанной нами ПЦР-тест-системы.
При выявлении Chlamydophila psittaci с использованием ПЦР-тест-систем «Хлами-суис» и «Хла-псит» было установлено, что обе тест-системы выявляли по 5 (11%) проб с нуклеотидными последовательностями специфичными Chlamydophila psittaci. Проведенные исследования свидетельствуют о том, что разработанная нами ПЦР-тест-система «Хлами-суис» превосходит по чувствительности и специфичности коммерческие аналоги («Хла-ком» и «Хла-псит»).
Информация об авторах
Сапегин Виктор Михайлович, аспирант ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА», тел. 8-920-585-85-74, e-mail: [email protected]
Коваленко Анатолий Михайлович, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры инфекционной и инвазионной патологии ФГБОУ ВпО «Белгородская ГСХА», тел. 8-960-628-3307, e-mail: [email protected]
