СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В ГЕМОЛИЗАТАХ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ П-ХЛОРМЕРКУРИБЕНЗОАТА НАТРИЯ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

полированными поверхностями и закругленными краями, соединенных между собой телескопической штангой 7: верхний диск 8 имеет диаметр 0,15 м, нижний диск 9 того же диаметра, однако его масса за счет толщины существенно больше массы верхнего диска, что обеспечивает хорошую устойчивость платформы при размещении на верхнем диске 8 животных с массой тела до 300 г. Телескопическая штанга 7 позволяет изменять высоту расположения площадок 4, 5 в пределах от 0,33 до 0,55 м и фиксировать ее. На площади 4 м2 нижней заземленной пластины 2 можно разместить при условии соблюдения минимального расстояния 36 платформ. С целью предотвращения соскальзывания животных с платформ их края окантованы резиновым ободом 18.

Вмонтировав в верхнюю площадку 8 датчик 10 измерителя напряженности ЭСП ИНЭП-1М 11, мы имели возможность, заменяя подставку с животными на подставку с датчиком, измерять напряженность ЭСП.

В хроническом эксперименте при 6-часовой экспозиции отдельные животные уходят с площадок 4, 5. Предварительная адаптация животных к условиям экспозиции и отбраковка их исключают подобные явления..

Разработанная установка была испытана при экспозиции 80 крыс в ЭСП напряженностью 20, 65, 100 кВ/м по 6 ч ежедневно (кроме выходных) в течение 3 мес [1].

Выполненные исследования позволили создать устройство для одновременной индивидуальной экспозиции в подостром и хроническом экспериментах большой группы животных в ЭСП с

УДК 616.153.269.1-074:543.42.062

Наиболее простым, чувствительным и точным методом определения ЭН-групп является их спектрофотометрическое титрование я-хлормер-курибензоатом [4]. Метод основан на образовании меркаптида при взаимодействии л-хлормер-курибензоата (ПХМБ) с сульфгидрильными группами, что сопровождается резким возрастанием оптической плотности при 250—255 им.

Целью работы явилось создание модификации ранее описанного метода [1] с учетом особенностей применения методики дл'я определения ЭН-групп в малых объемах крови человека и животных.

возможностью контроля уровней напряженности, воздействующих непосредственно на каждый биологический объект.

Литература

1. Акименко В. Я., Бариляк И. Р.. Нсумержицкая Л. В. // Докл. АН УССР. Сер. Б. — 1987. — № 4. — С. 63—65.

2. Арцруни Г. Г. // Научная конф. молодых ученых Ере* ванск. гос. мед. нн-та, ноевящ. XXV съезду КПСС: Материалы. — Ереван, 1975. — С. 32—33.

3. А. с. 1228813 СССР, МКИ3 А 61 Б 5/05. Устройство \ для определения степени воздействия электрических нолей на биологические объекты / В. Я. Акименко,

B. П. Пакета, П. А. Базарное 3584478/28—14; заявлено 25.04.83; опубл. 07.05.86, Бюл. № 17,

4. Гигиеническое нормирование факторов производственной среды и трудовых процессов / Под ред. Н. Ф. Из-мерова, А. А. Каспарова.—М., 1986.

5. Гольдштейн. Н. И., Феоктистова Р. П., Чеботарснок И. H. // Проблемы клинической биофизики. — Рига, 1972. — С. 37.

6. ГОСТ 12.1.045—84. Электростатические поля. Допустимые уровни на рабочих местах и требования к проведению контроля.—М., 1984.

7. Ландсберг Г. С. Элементарный учебник физики. Т. 2.— М„ 1969.

8. Методические указания по санитарно-гигиеническому контролю полимерных строительных материалов, пред- ц назначенных для применения в строительстве жилых н щ общественных зданий: Метод, указания. — М., 1980.

9. Санитарно-гигиенические нормы допустимой напряженности ЭСП. СН № 1757—77/Минздрав СССР: Введ. 25.06.78. — М„ 1978.

10. Скоробогатова А. М. // Гиг. и сан. — 1976. —№ 6. —

C. 20—24.

11. Шандала М. Г. Ионизация воздуха как неблагоприятный фактор окружающей среды. — Киев, 1974.

12. Ce г elli P.. Mologuti С.// Ref. J. Electricity. — 1977.— P. 67—70.

13. Effects of electric fields on large animals: A feasibility study EPRI. E. C. 131, Final report, Febr., 1976. — P. 111-25—40.

Поступила 18.08.87

Реакция связывания БН-групп осуществляется посредством титрования исследуемого образца крови раствором ПХМБ в одной пробе, объем которой не превышает объема спектрофотомет-рической кюветы. Концом титрования считается момент, с которого оптическая плотность становится постоянной.

Описание методики. Реактивы: 1) я-хлор-меркурибензоат натрия (ПХМБ) («СЬетароЬ, ЧССР), дополнительно перекристаллизованная: 10 г ПХМБ растворяют в 130 мл 1 н. едкого натра, фильтруют через стекловату и добавляют равный объем 1 н. соляной кислоты. Выпавший

В. Д. Алешина, Л. А. Иванова, Ю. Н. Талакин

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИИ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В ГЕМОЛИЗАТАХ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ П-ХЛОРМЕРКУРИБЕНЗОАТА НАТРИЯ

Донецкий медицинский институт пм.М.Горького

Объект исследований

Число определен II и

Количество гемолизата в опыте, мл

Количество ПХМБ, пошедшее на титрование, мл

SH-группы, ммоль/л

Гемоглобин, ммоль/л

14

100

0,1 0,1

0,123±0,007 0,108+0,002

18,8+1,29 16,3+0,30

2,11 ±0,061 1,90±0,070

Человек Белые крысы

белый осадок ПХМБ промывают бидистиллиро-ванной водой на воронке Бюхнера до нейтральной реакции. Сушат на воздухе, хранят в эксикаторе в плотно закрытой склянке; для приготовления 5-Ю-4 М раствора ПХМБ 0,01896 г растворяют в небольшом количестве бидистил-лированной воды, добавляют 3—5 капель 1 н. едкого натра, доводят до 100 мл бидистиллированной водой; 2) 5-Ю-4 М раствор глутатиона: 0,01536 г глутатиона («Реапа1», ВНР) доводят до 100 мл бидистиллированной водой; 3) ацетатный буфер 0,5 М, рН 4,6; готовят смешиванием 490 мл 0,5 М ацетата натрия и 510 мл 0,5 М ^уксусной кислоты; 4) гемолизат крови 1:30; 0,1 мл цельной крови гемолизируют добавлением 2,9 мл бидистиллированной воды.

Оборудование: спектрофотометр, автоматические дозаторы на 20 и 200 мкл, стеклянная палочка.

Ход определения: в кювету спектрофотометра наливают 2,7 мл ацетатного буфера и 0,1 мл гемолизата крови. Измеряют экстинкцию при 250 им против контрольной пробы (2,7 мл ацетатного буфера и 0,1 мл бидистиллированной воды). Добавляют в обе кюветы по 0,02 мл раствора ПХМБ. После тщательного размешивания стеклянной палочкой измеряют приращение оптической плотности опытной пробы по отношению к контрольной. Приливают раствор ПХМБ в 1юбе кюветы до тех пор, пока оптическая плотность опытной пробы не станет постоянной. Записывают общий объем раствора ПХМБ, пошед-$ шего на титрование.

Расчет производят по формуле:

А = К-а-150,

где А — концентрация БН-групп в гемолизате (в ммоль/л); К—поправочный коэффициент ПХМБ; а — количество ПХМБ, пошедшее на титрование (в мл).

За 1 ч можно обработать 16 образцов.

Установление титра ПХМБ производят по глу-татиону следующим образом. В спектрофотомет-рическую кювету наливают 0,5 мл раствора глутатиона с концентрацией 5-Ю-4 М и 2,5 мл ацетатного буфера. Измеряют оптическую плотность этой пробы относительно контроля (2, 3 мл ацетатного буфера и 0,5 мл воды). Затем в обе пробы добавляют по 0,05 мл раствора ПХМБ до установления постоянной оптической плотности пробы. Строят кривую титрования. Точка перегиба кривой соответствует количеству ПХМБ, при котором все сульфгидрильные группы глутатиона оказались в связанном состоянии. Величину поправочного коэффициента (К) находят по формуле:

где m — количество ПХМБ, пошедшее на титрование (в мл); обычно значение К близко к 1.

Чувствительность метода составляет 0,25 мкмоль/мл, ошибка определения 4—6%.

Полученные нами данные о содержании SH-групп в гемолизатах крови человека и животных (см. таблицу) согласуются с результатами ранее проведенных исследований [1] и несколько ниже данных, полученных методом амперометрическо-го титрования [2, 3].

Литература

1. Рубина X. М., Романчук Л. А. // Вопр. мед. химии. — 1961, —Т. 7, вып. 6.— С. 652—655.

2. Селюжицкий Г. В., Тимофеев А. М., Никон А. А/. // Гнн. и сан.— 1971, —№ 9. — С. 73—75.

3. Соколовский В. А. Ц Лаб. дело. — 1962. — № 8. — С з_5

4. Boyer P. D./J J. Amer. Chem. Soc. — 1954. — Vol. 76,— P. 4331.

Поступила 03.06.87

»