CC BY
8
За рубежом
удк 616.154.95 + 616.631.951:546.268.51-074:543.42.062
А. А. Алексиев, Б. Ф. Стефанов, М. Г. Ангелова
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИОЦИАНИДНЫХ ИОНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И МОЧЕ
Медицинская академия, Высший медицинский институт, Плевен (НРБ)
Тиоцианиды широко применяются в различных областях народного хозяйства — фотографии, агрохимии, в качестве ингибиторов коррозии, в производстве тиокарбамида и др. Находясь в промышленных отходах, тиоцианиды могут уничтожать обитателей водных бассейнов
Нормальные концентрации тиоцианидных ионов (SCN) в сыворотке крови и моче составляют соответственно 0,44—1,14 и 0—6 мг/л SCN- [4, 9]. Повышенные концентрации обнаруживаются у активных курильщиков и при некоторых заболеваниях [7]. Имеются данные о роли тиоцианидов в этиологии эндемического зоба [8, 101.
Для определения тиоцианидных ионов в биосредах предложены различные методы: гравиметрические, тктриметрические, электрохимические, хроматографические, кинетические, атом-но-абсорбционные, рентгенофлюоресцентные, спектрофотометрические и др. [1, 3, 6]. В лабораторной практике применяются главным образом фото- и спектрофотометрические методы, что обусловлено их большей селективностью, чувствительностью и доступностью. Метод W. N. А1-dridge [2], имеющий преимущества перед остальными, принят в качестве основного в практике токсикологических лабораторий гигиенической службы НРБ. Однако и он не лишен недостатков. Данный метод предназначен для определения тиоцианидов только в моче и требует применения высокотоксичных реактивов.
Новый автоматический метод, разработанный G. Giraudi и С. Grillo [5], позволяет определить тиоцианиды в обеих биосредах.
Нами разработана модификация этого метода, дающая возможность проводить анализ вручную при отсутствии автоматических систем с использованием менее токсичных и доступных реактивов.
Для проведения анализа необходимы следующие реактивы.
Исходный стандартный раствор тиоцианида калия готовят растворением 0,167 г тиоцианида калия в 100 см3 бидистиллированной воды, стандартные растворы с концентрацией от 2 до 20 мг/л, приготовленные разведением исходного раствора тиоцианида калия. Ацетатный буфер с
рН 4,1 готовят растворением 10,8 г СНзС00№-ЗН20 в 24 мл ледяной уксусной кислоты и разбавлением до 1 л бидистиллированной водой. Реагент К — прозрачный фильтрат смеси растворов (1:1) хлорамина Т (1 %) и РеС13 (0,1 %), который используют через 12 ч после смешивания растворов. Реагент Р получают растворением 6 г барбитуровой кислоты в смеси, состоящей из 30 мл 7-пиколина и 64 мл бидистиллированной воды с последующим добавлением 6 мл концентрированной НС1 (с1 1,18). Срок хранения реагентов К и Р при 0—4°С около 1 мес.А.-Используемые концентрации раствора перхлората натрия — 0,08 М, раствора трихлоруксусной кислоты — 20 %, раствора едкого натра — 1 М.
Перед анализом проводят предварительную обработку проб. Для этого смешивают в сухой пробирке со стеклянной пробкой 0,25 мл мочи и 1 мл ацетатного буфера, затем смесь доводят бидистиллированной водой до объема 5 мл и хорошо перемешивают.
В сухой центрифужной пробирке смешивают 0,50 мл сыворотки крови, 0,25 мл раствора перхлората натрия и 0,25 мл трихлоруксусной кислоты. Через 15 мин смесь центрифугируют в лабораторной центрифуге «Янецкий» в течение 20 мин при 2000 об/мин и переносят в сухую пробирку 0,5 мл прозрачного раствора, а затем последовательно добавляют 0,05 мл 1 М едкого натра и до 5 мл бидистиллированной воды. Просвирку закрывают и содержимое хорошо перемешивают.
Для определения тиоцианидных ионов к 1 мл разбавленной пробы (мочи или сыворотки крови) добавляют 1 мл реагента К. Пробирку закрывают и перемешивают содержимое 20—30 с. Добавляют 0,4 мл реагента Р и снова перемешивают. Через 2—5 мин измеряют оптическую плотность растворов при 605 нм при толщине слоя 1 см относительно бидистиллированной воды с помощью спектрофотометра.
Содержание БСЫ- в пробе определяют по калибровочному графику, который строят на основании данных анализа стандартных растворов тиоцианида калия с концентрацией 2—20 мг/л. Калибровочный график желательно проверять для каждой серии анализов.
й
"•у
Таблица 1
Содержание SCN- (в мг/л) в пробах мочи некурящих (I) и F курящих (II) людей
Таблица 2 Содержание SCN- в сыворотке крови
¿ й э* та = S Метод W. N. Aldridge Предлагаемая модификация
о с Ps= л 2 = 4 л * ® О о ь I II I II
J±S_ X п t р 0,54 + 0,04 15 0,68±0,06 19 1,94 >0,05 1,49 + 0,07 12 6,71 ±0,91 19 5,73 <0,001
Группа обследованных п X мг/л, SCN-
Курящие:
до 10 сигарет в сутки (I) 15 3,78+0,42
более 10 сигарет в сутки (II) 16 8,36+0,92
Некурящие (III) 35 1,41+0,12
Для сравнительной оценки метода W. N. Ald-ridge и предлагаемой модификации метода G. Giraudi и С. Grillo проведены параллельные анализы проб мочи курящих и некурящих людей на содержание тиоцианидов. Результаты обработаны по методу Стьюдента — Фишера (табл. 1).
Из табл. 1 видно, что предлагаемая модификация метода G. Giraudi и С. Grillo обладает бо-£ лее высокой чувствительностью. Различия содер-^ жания тиоцианидов в моче курящих и некурящих людей статистически значимы по сравнению с определенными по методу W. N. Aldridge.
Из-за отсутствия сравнительного метода определения тиоцианидов в сыворотке крови нами определено их содержание только по предлагаемой нами методике в пробах, взятых у 67 курящих и некурящих людей в возрасте 20—25 лет (табл. 2).
Показатели табл. 2 свидетельствуют о статистически значимых различиях, которые хорошо коррелируют с данными литературы.
Предлагаемая нами модификация метода G. Giraudi и С. Grillo позволяет определять тио-цианидные ионы в моче и сыворотке крови, что ее выгодно отличает от других методов. После предварительной подготовки проб аналитическое определение одинаково для обеих сред. Новая -^модификация имеет и другие преимущества: "низкий предел обнаружения — 0,3 мг/л SCN-в нативной моче и сыворотке крови, что позео-
Примечание. Pi-ц и Яц_т<0,001.
ляет проводить анализ малых объемов (0,5 мл сыворотки и 0,25 мл мочи); хорошая воспроизводимость (коэффициент вариации 2,04—6,10%); быстрота и легкость технического выполнения (требуется добавление только 2 реагентов к предварительно подготовленной пробе), что важно при серийных анализах; не требуется применение высокотоксичных и вредных для здоровья человека реактивов. Кроме того, малый объем используемых реактивов снижает расходы, а доступность реактивов и аппаратов позволяет применять метод и в лабораториях с ограниченными возможностями.
Литература
1. Уильяме У. Дж. Определение анионов: Пер. с англ. М„ 1982.
2. Aldridge W. N. — Analyst (Lond.), 1945, vol. 70, p. 474.
3. De Brabander H. F., Verbelle R. — J. Chromatogr., 1977, vol. 138, p. 131.
4. Geigy Scientific Tabbs. Basel, 1981, vol. 1, p. 57.
5. Giraudi G„ Grillo С. — Analyt. chim. Acta, 1981, vol. 128, p. 169.
6. Landis ]., Rebec В. M., Pardue H. L. — Analyt. Chem., 1977, vol. 29, p. 785.
7. Petigreu A. K., Fell <?. S. — Clin. Chem., 1972, vol. 18, p. 996.
8. Vanderlaan J. E., Vanderlaan W. P. — Endocrinology, 1947, vol. 40, n. 403.
9. Wissenschaftliche Tabellen / Hrsg. J. R. Geigy. Basel, 1979, S. 81.
10. Wolman S. H. — Amer. J. Physiol., 1962, vol. 203, p. 517.
Поступила 04.11.85
