Спектрофотометрический способ раздельного определения тиоцианатов и циани дов в сыворотке крови и роданидов в моче Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 543.42.062:616-074 (546.267)

Л.А. Дедкова

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ РАЗДЕЛЬНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИОЦИАНАТОВ И ЦИАНИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И РОДАНИДОВ В МОЧЕ

АФ-НИИ Медицины труда и экологии человека ГУ НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН (Ангарск)

Предложена методика спектрофотометрического раздельного определения тиоцианатов и цианидов в сыворотке крови, и. роданидов в моче.

Ключевые слова: cпектрофотометрия, тиоцианаты, цианиды, биологическая среда

SPECTROPHOTOMETRIK METHOD OF SEPARATE DETERMINATION OF THIOCYANATES AND CYANIDES IN BLOOD SERUM AND OF RODANIDES IN URINE

L.A. Dedkova Research Institute of Industrial Medicine and Human Ecology, SC ME, ESSC of RAМS, Angarsk

The procedure of spectrophotometric separate determination of thiocyanates and cyanides in blood serum and of rodanides in urine is offered, in this paper.

Key words: spektrophotometry, thiocyanates, cyanides, biological material

Цианистые соединения широко применяются в различных областях народного хозяйства, в частности на золотоизвлекательных фабриках. Поступая в организм работающих, они подвергаются биотрансформации. Исследование скорости биотрансформации цианистых соединений невозможно без удобных, быстрых в исполнении, селективных методов определения тиоцианатов и цианидов в биологических средах (сыворотка крови, моча).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Была разработана модификация метода раздельного определения тиоцианатов и цианидов в сыворотке крови и определения роданидов в моче. В качестве основного реагента использовали пи-ридин-барбитуровый реактив: 1 грамм барбитуровой кислоты растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды в мерной колбе на 100 см3, добавляют 15,0 см3 свежеперегнанного пиридина и 3,0 см3 концентрированной соляной кислоты. Объем доводят до метки дистиллированной водой. Реактив хранят в холодильнике в течение месяца.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При разработке спектрофотометрического способа раздельного определения тиоцианатов и цианидов в сыворотке крови и роданидов в моче за основу были взяты описанные в литературе методы определения содержания роданидов в биологическом материале [1, 2]. Методы основаны на известной химической реакции Кенига. Пиридин, взаимодействуя с хлористым цианом, образует глутаконовый альдегид, который с вводимыми в реакционную смесь ароматическими аминами синтезирует окрашенные в желтый, оранжевый, красный цвет дианилы [3]. В центрифужные пробирки берут 0,1 см3 сыворотки крови, доводят до 0,5 см3 дистиллированной водой,

добавляют 0,5 см3 10% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) [4]. При определении тиоцианатов разбавленную сыворотку с кислотой нагревают на водяной бане при 35 — 37 °С в течение 10 минут. Далее пробу центрифугируют 15 минут при 2000 об./мин.

0,1 см3 прозрачного центрифугата доводят дистиллированной водой до 1,0 см3, добавляют 0,2 см3 1% раствора хлорамина Б и 1,0 см3 пиридин-барби-турового реактива. Через 10 мин. оптическую плотность растворов замеряют на спектрофотометре при 586 нм. Окраска растворов устойчива в течение 30 минут. Раствором сравнения служит 0,1 см3 дистиллированной воды, к которому добавляют все вышеописанные реактивы в том же порядке.

Количество тиоцианатов находят с помощью градуировочного графика, который строится согласно шкале стандартов (табл. 1).

Основной раствор готовят растворением навески 0,167 г роданистого калия в 100 см3 дистиллированной воды. Этот раствор используют и для определения роданидов в моче. Из основного раствора готовят рабочие растворы с концентрацией роданистого иона от 10 до 100 мг/дм3. Диапазон измеряемых концентраций тиоцианатов — от 1,0 до 10,0 мг/дм3. Погрешность метода — 14 %.

Количество цианидов находят с помощью вычитания найденного количества тиоционатов из суммы цианистых соединений в пробе. Для определения суммы цианистых соединений в сыворотке крови стадию термостатирования исключают.

По литературным данным, в сыворотке крови в основном присутствуют тиоционаты, а цианиды в основном находятся в эритроцитах крови [5], поэтому мы строили шкалу стандартов по роданистому иону.

Для определения роданидов в моче 0,1 см3 пробы доводят до 3,0 см3 дистиллированной водой, до-

Эксперигаентальные исследования в медицине и биологии

91

Таблица 1

Шкала стандартов для определения тиоцианатов в сыворотке крови

№ Рабочий р-р с содержанием роданистого иона от 1O до 1OO мкг/см3 Кол-во раб. 3 раствора, см Вода дист., см3 1O% р-р ТХУ, см3 Прозрачный центрифугат, см3 Вода дист., см3 1% р-р хлорамина Б, см 3 Пиридин-барбит. р-в, см3 Содержание роданистого иона в пробе, мкг

1 10 0,1 0,4 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 1,0

2 20 0,1 0,4 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 2,0

3 40 0,1 0,4 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 4,0

4 S0 0,1 0,4 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 6,0

б SO 0,1 0,4 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 S,0

S 100 0,1 0,4 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 10

7 - - 0,5 0,5 0,1 0,9 0,2 1,0 -

Таблица 2

Шкала стандартов для определения роданидов в моче

№ Рабочий раствор с содержанием роданистого иона от 1O до 1OO мкг/см3 Количество рабочего раствора, см3 Вода дист., см3 1% раствор хлорамина Б, см 3 Пиридин- барбит. 3 реактив, см Содержание роданистого иона в пробе, мкг

1 4 0,1 2,9 0,2 1,0 0,4

2 S 0,1 2,9 0,2 1,0 0,6

3 S 0,1 2,9 0,2 1,0 0,S

4 10 0,1 2,9 0,2 1,0 1,0

5 20 0,1 2,9 0,2 1,0 2,0

S 40 0,1 2,9 0,2 1,0 4,0

7 - - 3,0 0,2 1,0 -

бавляют 0,2 см3 1% раствора хлорамина Б и 1,0 см3 пиридин-барбитурового реактива. Через 10 мин. оптическую плотность растворов замеряют на спектрофотометре при 586 нм. Раствором сравнения служит дистиллированная вода с добавлением всех реактивов.

Количество роданидов находят с помощью градуировочного графика, который строится согласно шкале стандартов (табл.2). Из основного раствора готовят рабочие растворы с концентрацией роданистого иона от 4 до 40,0 мг/дм3. Диапазон измеряемых концентраций — 0,13—1,33 мг/дм3. Погрешность метода — 12 %.

ВЫВОДЫ

1. Разработанные спектрофотометрические методы раздельного определения тиоцианатов и цианидов в сыворотке крови и роданидов в моче просты в исполнении, обладают высокой чувствительностью, селективны.

2. Методы дают возможность раздельного определения тиоцианатов и цианидов в биологических средах (сыворотка крови, эритроциты, плаз-

ма, моча). Могут быть использованы для изучения биотрансформации цианистых соединений в эксперименте и для гигиенических обследований работающих на предприятиях с применением различных цианистых соединений.

ЛИТЕРАТУРА

1. Метод определения содержания роданидов в биологическом материале / О.В. Шехтер и др. // Гигиена и санитария. — 1994. — № 2. — С. 54 — 55.

2. Алексиев А.А. Спектрофотометрическое определение тиоцианидных ионов в сыворотке крови и моче / А.А. Алексиев, Б.Ф. Стефанов, М.Г. Ангелова // Гигиена и санитария. — 1986. — № 6. - С. 68-69.

3. Коренман И.М. Фотометрический анализ / И.М. Коренман. — М.: Химия, 1975. — С. 102- 108.

4. Справочник биохимика / Р. Доссон и др. — М.: Мир, 1991. — С. 473.

5. Lundguist P. Determination of cyanide by a highly sensitive indirect spectrophotometrik method / P. Lundguist, B. Sorbo // Clin. Chem. — 1989. — Vol. 35, N4. — P. 617 — 619.

Поступила в редакцию 27.11.2006 г

92

Экcпepиraeнтaльныe иccлeдoвaния в мєднцннє н бію^™»!