CC BY
40
В 6-6 - месячном возрасте, что соответствует периоду формирования половой функции, содержание тирео-идных гормонов оставалось ещё на относительно высоком уровне: Т3 - 2,02±0,14 - 2,4±0,15 нмоль/л и Т4 -114,0±7,23 - 120,5±9,0 нмоль/л. У 7- месячных свинок содержание гормонов резко снижалось: Т3 до уровня 1,65±0,23 нмоль/л, а Т4 до 98,0±5,15 нмоль/л. В последующие возрастные периоды уровень тиреоидных гормонов в крови свинок также продо жа снижаться, достигая минима ьного значения в 10- месячном возрасте (Т3 - 0,90±0,16; Т4 - 68,0±7,0 нмоль/л).
Содержание кортизола в крови свинок имело проти-вопо ожную динамику, по сравнению с тиреоидными гормонами. До полового созревания его уровень в крови животных бы наименьшим и колебался в границах 53,5±4,03 - 54,0±4,88 нмоль/л. В период становления по овой функции содержание кортизо а значите ьно повыси ось и достига о у 5- месячных животных 68,8±5,61 нмо ь/ , и у 6- месячных - 98,7±6,97 нмо ь/ . В дальнейшем концентрация кортизола в крови свинок продо жа а постепенно повышаться вп оть до окончания эксперимента, достигая в 10- месячном возрасте 132,0±7,07 нмо ь/ .
Результаты исследований
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что станов ение по овой функции у самок животных характеризуется каскадом функциона ьных и поведенческих процессов. При этом некоторые био огические изменения протекают в этой фазе развития животного дискретно и могут быть оценены ко ичественно, другие
- менее очевидны и их оценка более сложна. Тем не
менее, можно с уверенностью констатировать, что станов ение по овой функции у самок - это весьма с ож-ный процесс, в основе которого ежит перестройка функционирования гипота амо-гипофизарно-
овариа ьного комп екса, обеспечивающая формирование качественно новых отношений между отде ьными его звеньями.
Результаты исследований гормональной активности гипофиза, эпифиза, надпочечников, яичников и щитовидной же езы существенно допо няют представ ения об интерьерных перестройках, происходящих в репродуктивной системе самок в период станов ения по овой функции. Установленные взаимосвязи между функцио-на ьным состоянием же ез внутренней секреции носят сложный характер, что необходимо учитывать при разработке новых средств и методов регу яции воспроизводите ьной функции у свиней.
Литература
1. Сеин О.Б. Способ подготовки хряка-пробника / О.Б. Сеин, Н.А. Бабанин// Ветеринария. - 1990. - №7.- с. 50-51.
2. Хантер Р. Физиология и технология воспроизводства домашних животных / Р. Хантер// - М.: Колос, 1984.- 319 с.
3. Evans F. Development of the circadian rhythm of cortisol in the gilt from weaning until puberty / Evans F., R. Christopherson, F. Aherne //Canad. J. Anim. Sc., - 1988. -V.68. - №4. - P. 1105-1111.
4. Li P. Catercholamine inhibition of luteinizing hormone secretion in isolated pig pituitary cells / P. Li // Biol. Reprod.
- 1989. - V.40. - №5. - Р. 914-919.
УДК 636.22 / 28
ОДНОВРЕМЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЖЕЛЕЗА И МЕДИ В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦЫ
A.К. Джавадов, д.б.н., ФГОУ ВПО Орел ГАУ
B.А. Мещерякова, ФГОУ ВПО Орел ГАУ
Жел езо и медь являются важными эл ементами для организма животных и человека. Железо входит в состав гемоглобина, миоглобина и некоторых клеточных ферментов (каталазы, перок-сидазы и цитохромы). Медь принимает непосредственное участие в гемопоэзе, катал изирует включение железа в структуру гемма, способствует созреванию эритроцитов. [1,2].
При недостатке железа и меди в организме развивается анемия, сопровождаемая снижением в крови гемог обина, же еза и меди. Поэтому д я диагностики раз ичных форм анемии необходимо опреде ение содержания их в периферической крови.
Учитывая с ожности известных способов [3,4] определения жел еза и меди в крови животных, нами бы а разработана методика одновременного опреде ения этих э ементов.
Целью наших исследований было изучение возможности уменьшения кол ичества крови, необходимой для проведения анализа, упрощение процедуры подготовки проб, повышение точности результатов, а также разработка метода оп-редел ения содержания жел еза и меди в цел ьной крови с испол ьзованием 40 мг% раствора жел еза сернокислого закисного 7-водного и 100 мкг/%-ного раствора сернокислой меди минуя процесс построения кал ибровочных кривых.
Принцип: Медь дифинил карбазоном, а железо с о-фенантролином при определ енном рН образуют соединения, придающие растворам определенную окраску, интенсивность которой измеряют на фотоэ етрока ориметре.
Реактивы: смесь концентрированной азотной (НК03) и хл орной (НС104) кисл от в соотношении 3:1; 1 н. раствор соляной кисл оты (НС1) (82 мл концентрированной НС1 доводят в мерной ко бе объемом 1 л бидистиллированной водой до метки),
для определения железа: 2 н. раствор НС1 (164 мл концентрированной НС1 доводят в мерной ко бе объемом 1 бидисти ированной водой до метки);
10 % раствор аммиака (40 мл 25 % раствора аммиака доводят в мерной колбе на 100 мл биди-сти ированной водой до метки);
0,1 % водный раствор паранитрофенола;
1 % раствор аскорбиновой кис оты (хранится око о 2 нед в хо оди ьнике в темной ск янке);
1 % раствор солянокислого о-фенантрол ина (1 г о-фенантро ина смачивают 1 м концентрированной НС1 и доводят бидисти ированной водой до 100 мл, хранится около 2 нед в холодил ь-нике в темной ск янке);
основной стандартный раствор железа — 40 мг% (196 мг же еза сернокис ого закисного 7-водного (х.ч.), содержащего 20,4 % же еза, растворяют в 100 мл 2 н. раствора НС1, хранится до 2 нед. в хо оди ьнике;
рабочий стандартный раствор же еза (10 м основного раствора же еза доводят в мерной колбе на 100 мл бидистиллированной водой до метки, готовится в день исс едования);
для определения меди: 10 % раствор аммиака (40 м 25 % раствора аммиака доводят в мерной колбе на 100 мл бидистиллированной водой до метки);
0,1 ммол ь/л ацетатный буфер, рН 4. В мерной ко бе на 1 растворяют 13,608 г натрия ацетата (СН3С00Ка 3Н20, х.ч.), прил ивают 25 мл л едя-ной уксусной кислоты (х.ч.) и доводят объём дисти ированной водой до метки. Да ее буфер фильтруют и определяют рН. Хранят в тёмной ск янке 2 неде и;
0,01% раствор дифини корбазона в бензо е. 10 мг реактива вносят в мерную колбу на 100 мл, добавляют 40-50 мл бензола (х.ч.) и нагревают в стакане с горячей водой до растворения реактива. Ко бу ох аждают и доводят объём бензо ом до метки. Раствор хранят в тёмной склянке 2 неде и;
0,1% - ный спиртовой раствор фено фта еи-
на;
2 н. раствор со яной кис оты;
основной стандартный раствор меди (100 мкг/м ) 0,3928 свежеперекриста изованной меди сульфата (Си804 . 5Н20) растворяют в 1 л 2 н. раствором со яной кис оты;
рабочий стандартный раствор меди (1 м основного стандартного раствора меди доводят бидистиллированой водой в мерной колбе на 100 м до метки)
Описание методики. В огнеупорную пробирку вносят 0,6 мл цельной крови, высушивают и сжигают на песочной бане в течение 10 мин. Добавляют 1 мл смеси НК03 и НС104 в соотношении 3:1 и сжигают (не допуская разбрызгивания раствора в начал е) 6-8 ч при температуре 180-190 оС до пол ного просветл ения раствора. Затем содержимое пробирки высушивают досуха. После этого золу растворяют в 3 мл 2 н. раствора НС1.
Определение железа. Для определения железа в химическую пробирку вносят 0,5 мл раствора золы прибавляют 0,5 мл бидистиллированной воды и перемешивают.
В пробирку с меткой на 5 мл вносят 0,2 мл приготовл енного раствора зол ы, 0,5 мл 2 н. раствора НС1 и 1,5 мл бидистил л ированной воды. Затем добавл яют 1 капл ю 0,1 % пара-
нитрофенола и нейтрализуют (титруют по кап-л ям) 10 % раствором аммиака до появл ения жел -той окраски. Далее содержимое пробирки титруют 1 н. раствором НС1 до исчезновения окраски. Посл е титрования добавляют 5 капел ь 1 % раствора аскорбиновой кислоты, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,2 мл 1 % раствора солянокислого о-фенантролина. Объем доводят до метки бидистиллированной водой и через 30 мин. измеряют интенсивность окраски на ФЭК при 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с тол щиной 1 см против контроля.
Одновременно готовят контрольные и стандартные пробы.
Контроль. В три мерные пробирки вносят 0,7 мл 2 н. раствора НС1, по 1,5 мл бидистил л ированной воды и затем 1 капл ю 0,1 % раствора па-^а-нитрофенола и далее проводят вышеописанную процедуру.
Стандарт. Стандартные пробы (три) готовят так же, как и опытные, но вместо раствора золы берут 0,2 мл рабочего стандартного раствора же-л еза.
Расчет проводят по формул е X = А/Кх40, где X — содержание жел еза, мг%; А — интенсивность окраски пробы; К — интенсивность окраски стандарта; 40 — коэффициент для пересчета в мг%.
Определение меди. В пробирки, где остал ись 2,5 мл раствора золы добавляют 2,5 мл бидистилл ированной воды. Затем перемешивают прибавляют 1 каплю 0,1%-ного раствора фенолфта-л еина и титруют 10%-ным раствором аммиака до появл ения светло-розовой окраски. В случае пе-ретитрования добавляют несколько капель 2 н. раствора НС1 до получения нужной окраски. Дал ее для установления рН в пробирку прибавляют 1 мл ацетатного буфера. При этом розовая окраска исчезает. Затем в пробирку вносят 5 мл
0,01%-ного раствора дифинил карбазона и встряхивают в течение 1 минуты. После расслоения раствор дифинилкарбазона (верхний слой) приобретает красную окраску. Интенсивность окраски верхнего сл оя измеряют на ФЭК при 540 нм (зел еный светофил ьтр) в кювете с тол щиной 1 см против контроля.
Одновременно готовят контрольные и стандартные пробы
Контроль. В три химические пробирки вносят по 2,5 мл 2 н. раствора НС1, и 2,5 мл бидистил -л ированной воды. После перемешивания добав-л яют 1 капл ю 0,1%-ного раствора фенолфтал еина и дал ее проводят вышеописанную процедуру.
Стандарт. В химические пробирки (три) вносят по 0,5 мл рабочего раствора сернокисл ой меди, 2,0 мл 2 н. раствора НС1, и 2,5 мл биди-стиллированной воды. Перемешивают и добавляют 1 каплю 0,1%-ного раствора фенолфталеина, а затем обрабатывают как опытные пробы.
Расчет проводят по формуле X = А/Кх100, где X — содержание меди, мкг%; А — интенсивность окраски пробы; К — интенсивность окраски стандарта; 100 — коэффициент для пересчета в мкг%.
Таким образом, определ ение содержания же-л еза и меди в крови животных по предлагаемому способу дает возможность уменьшить объем проб крови, необходимой для проведения анал и-за, в 3,2 раза, а испол ьзование мокрого озоления для предварительной подготовки проб к анализу
— упростить процесс и уменьшить расход эл ек-троэнергии. При добавл ении 1 % раствора солянокисл ого о-фенантрол ина (от кол ичества которого зависит интенсивность окраски и результаты проводимых иссл едований) не по каплям (5 капел ь), а по 0,2 мл повышается точность проводимых анализов. Использование 40 мг% рабочего раствора железа сернокислого закисного 7-водного и 100 мкг% раствора сернокисл ой меди в качестве стандарта позволяет определить содержание жел еза и меди в крови животных, минуя процесс построения калибровочных графиков.
Литература
1. Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных.- М.: Агропромиздат,
1990.-512 с.
2.Уша Б.В., Беляков И.М., Пушкарев Р.П. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных.- М.: КолосС, 2003.487с.
3. К иническая абораторная диагностика в ветеринарии: Справочник/сост.: Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и др. - М.: Агро-промиздат, 1986.-287с.
4. Лабораторные иссл едования в ветеринарии: биохимические и микологические. Справочник /сост.: Антонов Б.И., Яковлева Т.И., Дерябина В.И. и др.- М.: Агропромиздат, 1991.-286с.
УДК 619:61819
ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННОГО МАСТИТА КОРОВ
Л А. Черепахина, к.в.н., ФГОУ ВПО ОрелГАУ
Мастит - воспа ение мо очной же езы, первично причиной которого чаще всего яв яется инфицирование органа микроф орой.
Экономический ущерб, наносимый этим забо е-ванием, ск адывается из-за снижения продуктивности, преждевременной выбраковке животных, ухудшения техно огических свойств и снижения сортности молока, недополучения телят, затрат на диагностику и ечение коров и др.
Изучение этиологии, течения, механизма передачи забо евания подтверждает, что мастит это многофакторное забо евание с по игенным характером предраспо оженности и, с едовате ьно, меры борьбы с ним до жны быть комп ексными.
Многие исс едовате и профи актические мероприятия при мастите у коров де ят на общие и специальные.
Общие профил актические мероприятия (подбор животных при формировании мо очного стада, гигиена доения, ус овия корм ения и содержания, се екция животных, устойчивых к маститу и др.) выпо няются с участием агрономической, инженерной, се екционной, генетической и других с ужб. Вопросы специфической профил актики мастита решаются, как прави о, ветеринарными специа истами.
Несмотря на то, что, как утверждает ряд исс е-дователей, активная иммунизация при мастите коров возможна, создать эффективную вакцину против данного заболевания весьма сложно. Этому препятствует многочисл енность (более 120) возбудите ей мастита, породные раз ичия в восприимчивости коров к забо еванию и крайне непродо жите ь-ный иммунитет, индуцированный основными возбудите ями мастита (патогенные стафи ококки и стрептококки).
К специа ьным мерам профи актики мастита относят антисептическую обработку сосков вымени, позво яющую уничтожить патогенную микроф ору на коже сосков и не допустить ее проникновение в сосковый кана .
При этом испо ьзуются такие препараты как асепур, дезмо , весан, хиносепт, тиг ин и др., д я преддои ьного обмывания и дезинфицирования сосков вымени посл е доения с помощью «сосковых ванночек».
Эффективным способом профи актики инфекционного мастита коров яв яется дезинфекция дои ьных стаканов пос е доения каждой коровы такими препаратами как 1%-ный осветл енный раствор хл орной извести, 0,5%-ный раствор дезмола, дипал и др.
